RU2086648C1

RU2086648C1 - Nutrient medium for campylobacteria isolation

Info

Publication number: RU2086648C1
Application number: RU9595111814A
Authority: RU
Inventors: В.М. Карташова; А.Г. Демченко
Original assignee: Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии
Priority date: 1995-07-10
Filing date: 1995-07-10
Publication date: 1997-08-10
Also published as: RU95111814A

Abstract

FIELD: biotechnology, microbiology. SUBSTANCE: medium has campylobacter-agar, inhibitor, activated carbon, aminopeptide and water taken at the definite ratio of components. Sulfanol and rifampicin were used as inhibitors at mass ratio = (50-20):1. Medium is used for detection of Campylobacter in milk, for mastitis diagnosis. EFFECT: enhanced effectiveness of medium. 2 cl, 1 tbl

Description

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для обнаружения в молоке микроорганизмов рода Campylobacter с целью диагностики мастита и при ветеринарно-санитарной экспертизе молока в случае расследования пищевых токсикоинфекций молочного происхождения. The invention relates to agriculture and can be used to detect Campylobacter microorganisms in milk for the purpose of diagnosing mastitis and during veterinary and sanitary examination of milk in the case of investigation of foodborne diseases of milk origin.

Молоко, являясь по своему составу высокопитательной средой для развития микроорганизмов, требует индивидуального подхода при исследовании. Это непрозрачная среда, содержащая белки, жиры и обильную постороннюю микрофлору. Поэтому единственным доказательством наличия микроорганизмов рода Campylobacter в молоке является создание высокочувствительной селективной среды. До настоящего времени специальной среды для выделения кампилобактерий из молока не существует. Milk, being in its composition a highly nutritious environment for the development of microorganisms, requires an individual approach to research. This is an opaque medium containing proteins, fats and abundant extraneous microflora. Therefore, the only evidence of the presence of Campylobacter microorganisms in milk is the creation of a highly sensitive selective medium. To date, there is no special medium for the isolation of campylobacteria from milk.

Известна питательная среда для выделения кампилобактерий, содержащая кампилобактер-агар, ингибитор и воду, используемая при исследовании фекалий человека в медицинской практике. Среда выпускается НПО "Питательные среды", г. Махачкала. В качестве ингибитора сопутствующей микрофлоры известная среда содержит смесь антибиотиков: иолимиксин B 2 мг/л, рифампицин 10 мг/л, амфотерицин B 3 мг/л, ристомицин 10 мг/л, фузидин 2 мг/л. Также для обогащения в среду вносят 5% дефибринированной крови или эритроцитарной массы. Known nutrient medium for the isolation of campylobacter, containing campylobacter agar, an inhibitor and water, used in the study of human feces in medical practice. The environment is produced by the NGO "Nutrient media", the city of Makhachkala. As an inhibitor of concomitant microflora, the known medium contains a mixture of antibiotics: iolimixin B 2 mg / l, rifampicin 10 mg / l, amphotericin B 3 mg / l, ristomycin 10 mg / l, fusidine 2 mg / l. Also, for enrichment, 5% of defibrinated blood or erythrocyte mass is added to the medium.

Целью изобретения является повышение чувствительности селективной среды для выделения кампилобактерий из молока. The aim of the invention is to increase the sensitivity of the selective medium for the isolation of campylobacteria from milk.

Цель достигается в питательной среде для выделения кампилобактерий, содержащий кампилобактер-агар, ингибитор и воду, тем, что дополнительно содержит активированный уголь и аминопептид при следующем соотношении компонентов, мас. The goal is achieved in a nutrient medium for the isolation of campylobacter, containing campylobacter agar, an inhibitor and water, in that it additionally contains activated charcoal and aminopeptide in the following ratio, wt.

Кампилобактер-агар 3,7-3,8
Ингибитор 0,8-1,2
Активированный уголь 0,4-0,6
Аминопептид 4,8-5,2
Вода До 100
Причем ингибитор представляет собой смесь сульфонола и рифампицина при массовом соотношении 50-20:1.Campylobacter agar 3.7-3.8
Inhibitor 0.8-1.2
Activated Carbon 0.4-0.6
Aminopeptide 4.8-5.2
Water Up to 100
Moreover, the inhibitor is a mixture of sulfonol and rifampicin in a mass ratio of 50-20: 1.

Активированный уголь адсорбирующее средство. Применяют внутрь для адсорбции ядов типа алкалоидов, гликозидов, солей тяжелых металлов, а также для адсорбции токсинов в пищеварительном тракте (Мозгов И.Е. Фармакология. Изд. 6-е, доп. М. "Колос", 1974). Activated carbon adsorbent. It is used internally for adsorption of poisons such as alkaloids, glycosides, salts of heavy metals, as well as for adsorption of toxins in the digestive tract (Mozgov IE Pharmacology. Ed. 6th, add. M. Kolos, 1974).

Сульфонол (алкиларилсульфонат) поверхностно-активное вещество с длинноцепочечными радикалами. В настоящее время широко применяют в бактериологии: добавляют в качестве детергента к растворам красителей, а также с целью дезинфекции для обработки поверхностей (Справочник. Поверхностно-активные вещества. Под ред. д.т.н. А.А. Амбрамзона и к.т.н. Г.М. Гаевского. Ленинград. "Химия", 1979). Sulfonol (alkylaryl sulfonate) is a surfactant with long chain radicals. Currently widely used in bacteriology: they are added as a detergent to dye solutions, as well as for the purpose of disinfection for surface treatment (Reference. Surfactants. Edited by Doctor of Technical Sciences A.A. Ambramzon and Ph.D. G.M.Gaevsky. Leningrad. "Chemistry", 1979).

Аминопептид препарат, получаемый путем ферментативного гидролиза белков крови крупного рогатого скота. Применяют для парентэрального белкового питания. (М. Д. Машковский. Лекарственные средства. Ч.2, изд. "Медицина", 1977). Aminopeptide is a preparation obtained by enzymatic hydrolysis of cattle blood proteins. Used for parenteral protein nutrition. (M. D. Mashkovsky. Medicines. Part 2, ed. "Medicine", 1977).

Рифампицин полусинтетический антибиотик. Спектр действия включает грамположительные микроорганизмы, минимальная подавляющая концентрация 0,002-0,5 мкг/мл; грамотрицательные бактерии с пределом колебания чувствительности 1-50 мкг/мл (Навашин С.М. Фомина И.П. Справочник по антибиотикам. Москва, "Медицина", 1974). Rifampicin is a semi-synthetic antibiotic. The spectrum of action includes gram-positive microorganisms, the minimum inhibitory concentration of 0.002-0.5 μg / ml; gram-negative bacteria with a limit of sensitivity fluctuation of 1-50 μg / ml (Navashin S.M. Fomina I.P. Handbook of antibiotics. Moscow, "Medicine", 1974).

В патентной и научно-технической литературе не известны технические решения поставленной цели, аналогичные заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения "новизна". In the patent and scientific and technical literature, technical solutions to the goal, similar to the claimed, are not known, i.e. the proposal meets the criteria of the invention of "novelty."

Повышение чувствительности выделения кампилобактерий на заявляемой питательной среде очевидно не следует из свойств составляющих среду компонентов, следовательно, предложение соответствует критерию "изобретательский уровень". The increased sensitivity of the isolation of campylobacter on the claimed nutrient medium obviously does not follow from the properties of the components of the medium, therefore, the proposal meets the criterion of "inventive step".

Пример 1. К навеске кампилобактер-агара 3,7 г добавить ингибитор 0,8 г (сульфонол 7,843 и рифампицин 0,0157 г), активированный уголь 0,4 г и воду до 100 мл. Полученную смесь тщательно размешать в воде и кипятить 2-3 мин. Охладить до 48-50^oC и внести аминопептид 4,8 г. Перемешать и разлить в стерильные чашки Петри по 15-20 мл. После застывания агара чашки с питательной средой подсушить в термостате при температуре 37^oC в течение 4-5 ч.Example 1. To a sample of campylobacter agar 3.7 g add an inhibitor of 0.8 g (sulfonol 7.843 and rifampicin 0.0157 g), activated carbon 0.4 g and water up to 100 ml. Stir the resulting mixture thoroughly in water and boil for 2-3 minutes. Cool to 48-50 ^o C and add 4.8 g of aminopeptide. Stir and pour 15-20 ml into sterile Petri dishes. After solidification of the agar, dry the plates with the nutrient medium in a thermostat at a temperature of 37 ^o C for 4-5 hours.

Таким образом, получают состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас. Thus, get the composition 1 in the following ratio of components, wt.

Кампилобактер-агар 3,7
Ингибитор 0,8
Активированный уголь 0,4
Аминопептид 4,8
Вода До 100
Причем ингибитор представляет собой смесь сульфонола и рифампицина, взятых при массовом соотношении 50:1.Campylobacter agar 3.7
Inhibitor 0.8
Activated Carbon 0.4
Aminopeptide 4.8
Water Up to 100
Moreover, the inhibitor is a mixture of sulfonol and rifampicin taken in a mass ratio of 50: 1.

Пример 2. К навеске кампилобактер-агара 3,75 г добавить ингибитор 1,0 г (сульфонол 0,973 г и рифампицин 0,027 г), активированный уголь 0,5 г и воду до 100 мл. Полученную смесь тщательно размешать в воде, кипятить 2-3 мин. Охладить до 48-50^oC и внести аминопептид 5,0 г. Перемешать и разлить в стерильные чашки Петри по 15-20 мл. После застывания агара чашки с питательной средой подсушить в термостате при температуре 37^oC в течение 4-5 ч.Example 2. To a sample of campylobacter agar 3.75 g add an inhibitor of 1.0 g (sulfonol 0.973 g and rifampicin 0.027 g), activated carbon 0.5 g and water up to 100 ml. Stir the resulting mixture thoroughly in water, boil for 2-3 minutes. Cool to 48-50 ^o C and add the aminopeptide 5.0 g. Stir and pour 15-20 ml into sterile Petri dishes. After solidification of the agar, dry the plates with the nutrient medium in a thermostat at a temperature of 37 ^o C for 4-5 hours.

Таким образом, получают состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас. Thus, get the composition 2 in the following ratio of components, wt.

Кампилобактер-агар 3,75
Ингибитор 1,0
Активированный уголь 0,5
Аминопептид 5,0
Вода До 100
Причем ингибитор представляет собой смесь сульфонола и рифампицина, взятых при массовом соотношении 35:1.Campylobacter agar 3.75
Inhibitor 1.0
Activated Carbon 0.5
Aminopeptide 5.0
Water Up to 100
Moreover, the inhibitor is a mixture of sulfonol and rifampicin taken in a mass ratio of 35: 1.

Пример 3. К навеске кампилобактер-агара 3,8 г добавить ингибитор 1,2 г (сульфонол 1,143 г и рифампицин 0,057 г), активированный уголь 0,6 г и воду до 100 мл. Полученную смесь тщательно размешать в воде и кипятить 2-3 мин. Охладить до 48-50^oC и внести аминопептид 5,2 г. Перемешать и разлить в стерильные чашки Петри по 15-20 мл. После застывания агара чашки с питательной средой подсушить в термостате при температуре 37^oC в течение 4-5 ч.Example 3. To a sample of campylobacter agar 3.8 g add an inhibitor of 1.2 g (sulfonol 1.143 g and rifampicin 0.057 g), activated carbon 0.6 g and water up to 100 ml. Stir the resulting mixture thoroughly in water and boil for 2-3 minutes. Cool to 48-50 ^o C and add the aminopeptide 5.2 g. Stir and pour 15-20 ml into sterile Petri dishes. After solidification of the agar, dry the plates with the nutrient medium in a thermostat at a temperature of 37 ^o C for 4-5 hours.

Таким образом, получают состав 3 при следующем соотношении компонентов, мас. Thus, get the composition 3 in the following ratio of components, wt.

Кампилобактер-агар 3,8
Ингибитор 1,2
Активированный уголь 0,6
Аминопептид 5,2
Вода До 100
Причем ингибитор представляет собой смесь сульфонола и рифампицина, взятых при массовом соотношении 20:1.Campylobacter agar 3.8
Inhibitor 1,2
Activated Carbon 0.6
Aminopeptide 5.2
Water Up to 100
Moreover, the inhibitor is a mixture of sulfonol and rifampicin taken in a mass ratio of 20: 1.

Пример 4. Посевы молока производить микропипеткой в количестве 0,5 мл на поверхность среды. Тщательно растереть стеклянным стерильным шпателем. Инкубируют пробы в атмосфере 5% кислорода, 10% CO₂ и 85% азота или в эксикаторе с атмосферой "сгоревшей свечи" в термостате при температуре 42±1^oC. Учет проводить через 24, 36 и 48 ч. Кампилобактерии растут на среде в виде характерных серебристо-серых колоний с ровными краями диаметром 1-2 мм.Example 4. Sowing milk to produce a micropipette in an amount of 0.5 ml on the surface of the medium. Rub thoroughly with a sterile glass spatula. Samples are incubated in an atmosphere of 5% oxygen, 10% CO ₂ and 85% nitrogen or in a desiccator with a burnt candle atmosphere in a thermostat at a temperature of 42 ± 1 ^o C. Accounting should be carried out after 24, 36 and 48 hours. Campylobacteria grow on medium in in the form of characteristic silver-gray colonies with smooth edges with a diameter of 1-2 mm.

Стандартные культуры в разведениях высевали на питательные среды как заявляемые (полученные согласно примерам 1-3), так и известную среду (по прототипу). Результаты чувствительности, скорости роста и селективности среды приведены в таблице. Standard cultures in dilutions were seeded on nutrient media as claimed (obtained according to examples 1-3), and the known medium (prototype). The results of sensitivity, growth rate and selectivity of the medium are shown in the table.

Представленные в таблице данные свидетельствуют о высокой чувствительности модифицированной среды по выделению кампилобактерий из молока, простоте приготовления и не уступающей по селективным свойствам известной среде. The data presented in the table indicate a high sensitivity of the modified medium for the isolation of campylobacteria from milk, ease of preparation and not inferior to the known medium in terms of selective properties.

Claims

1. Nutrient medium for the isolation of campylobacter, containing campylobacter agar, an inhibitor from a mixture of antibiotics and water, characterized in that it additionally contains activated charcoal and aminopeptide in the following ratios of components, wt.

Campylobacter agar 3.7-3.8
Inhibitor 0.8-1.2
Activated Carbon 0.4-0.6
Aminopeptide 4.8-5.2
Water Up to 100
2. The nutrient medium according to claim 1, characterized in that the inhibitor contains sulfonol and rifampicin in a mass ratio of components of 50-20: 1.