RU2083164C1

RU2083164C1 - Method of visna-mady diagnosis in sheep

Info

Publication number: RU2083164C1
Application number: RU94023184A
Authority: RU
Inventors: В.В. Исаев; К.Н. Слинина; Н.Н. Ахова
Original assignee: Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны Российской Федерации
Priority date: 1994-06-17
Filing date: 1994-06-17
Publication date: 1997-07-10

Abstract

FIELD: veterinary science. SUBSTANCE: blood is examined using hematological analyzing device and indices of discriminators were recorded in histogram. Diagnosis of visna-mady is made at the following ratio of lymphocytes: cells ≅ 7 mcm: from 0 to 1.2% and cells from > 7 mcm to < 9 mcm < 21.9%. EFFECT: improved method of diagnosis. 3 tbl

Description

Изобретение относится к ветеринарии, в частности, к диагностике инфекционных болезней животных и может быть использовано для диагностики висна-мэди у овец. The invention relates to veterinary medicine, in particular, to the diagnosis of infectious diseases of animals and can be used to diagnose visna-medi in sheep.

Висна вирусная безлихорадочная болезнь центральной нервной системы овец, характеризующаяся развитием атаксии, параличей и сопровождающаяся разрушением белого вещества головного мозга, мозжечка и демиелизацией нервных волокон (Sigurdsson, 1957). Visna virus is a febrile illness of the central nervous system of sheep, characterized by the development of ataxia, paralysis and accompanied by the destruction of the white matter of the brain, cerebellum and demyelization of nerve fibers (Sigurdsson, 1957).

Мэди медленно прогрессирующая интерстициальная пневмония овец. Возбудители висна-мэди вирусы, выделенные в 1957 году из мозга в культуре клеток сосудистого сплетения мозга (при висна) и легких (при мэди) больных овец. (H. Thormar, 1967). Физико-химические и биологические свойства возбудителя сходны с онкогенными РНК-содержащими вирусами. В естественных условиях болеют козы и овцы старше 2 лет. Процент пораженности возрастает с увеличением возраста. (M. Gudnattoir et al. 1968). Исход болезни летальный. Наибольший пик достигается через 10-15 лет после заноса возбудителя. Число пораженных может составлять 20-30 поголовья. Возбудитель выделяется из крови и различных органов: легких, селезенки, сосудистого сплетения головного мозга, медиастинальных лимфатических узлов (M. Gudnattoir et al. 1967, 1968) и церебральной жидкости. В крови вирус выявляется, начиная с первого месяца заражения и до гибели животного. У естественно инфицированных и экспериментально зараженных животных вирус в крови определяется за несколько месяцев (иногда более, чем за год) до выявления каких-либо патоморфологических изменений. Гистологические изменения обнаруживаются раньше, чем первые клинические признаки болезни. (M. Gudnattoir, 1968). Madie is a slowly progressive interstitial pneumonia of sheep. The causative agents of visna-madi viruses isolated in 1957 from the brain in the culture of cells of the vascular plexus of the brain (with visna) and lungs (with madi) of sick sheep. (H. Thormar, 1967). The physicochemical and biological properties of the pathogen are similar to oncogenic RNA-containing viruses. In natural conditions, goats and sheep older than 2 years are sick. The prevalence rate increases with age. (M. Gudnattoir et al. 1968). The outcome of the disease is fatal. The highest peak is achieved 10-15 years after the pathogen has drifted. The number of affected can be 20-30 livestock. The causative agent is secreted from the blood and various organs: lungs, spleen, vascular plexus of the brain, mediastinal lymph nodes (M. Gudnattoir et al. 1967, 1968) and cerebral fluid. The virus is detected in the blood starting from the first month of infection until the death of the animal. In naturally infected and experimentally infected animals, the virus in the blood is determined several months (sometimes more than a year) before any pathological changes are detected. Histological changes are detected earlier than the first clinical signs of the disease. (M. Gudnattoir, 1968).

Глубокие поражения в легких и мозге, проявляющиеся клиническими симптомами болезни, могут наблюдаться как при высоком титре нейтрализующих антител в сыворотке, так и в их отсутствии. (H. Thornar et al. 1966; M. Gudnattoir, 1968). Вирус выделяется из крови несмотря на высокую концентрацию нейтрализующих антител. Deep lesions in the lungs and brain, manifested by clinical symptoms of the disease, can be observed both with a high titer of neutralizing antibodies in serum, and in their absence. (H. Thornar et al. 1966; M. Gudnattoir, 1968). The virus is released from the blood despite a high concentration of neutralizing antibodies.

Предварительный диагноз ставят на основании анализа эпизоотической обстановки, характерных клинических признаков, выявляемых при патологоанатомическом и патоморфологическом исследованиях, изменений в легких, мозгу, результатов исследования спинномозговой жидкости /1/. A preliminary diagnosis is made on the basis of an analysis of the epizootic situation, characteristic clinical signs detected during pathological and pathological studies, changes in the lungs, brain, and results of the study of cerebrospinal fluid / 1 /.

Для выявления скрытых вирусоносителей и подтверждения диагноза у клинически больных применяют серологические реакции. Определяемый реакциями уровень антител у отдельных овец может быть обнаружен в разные сроки инфицирования. Антитела выявляют через несколько недель или несколько месяцев после заражения, но в исключительных случаях через 2 года и более /2/. У овец, инфицированных в естественных условиях, антитела, вероятно, продуцируются позднее, чем при экспериментальном заражении. Известно несколько серологических методов для определения антител к вирусу висна-мэди: реакция нейтрализации (PH), реакция связывания комплемента (PCK), иммуноферментный анализ (ИМФА), реакция диффузионной преципитации (РВП) /3/. При относительно высокой эффективности серологической диагностики (60-90) возможности ее применения ограничиваются тем, что у до 30 животных антитела не улавливаются. Это объясняется тем, что длительная персистенция вируса висна-мэди в присутствии антител приводит к антигенной изменчивости. (G. Georgason, 1978; Шуляк, 1984). To identify hidden virus carriers and confirm the diagnosis in clinically ill patients, serological reactions are used. Reaction-determined antibody levels in individual sheep can be detected at different times of infection. Antibodies are detected a few weeks or several months after infection, but in exceptional cases after 2 years or more / 2 /. In sheep infected in vivo, antibodies are likely to be produced later than during experimental infection. Several serological methods are known for determining antibodies to the vis-madi virus: neutralization reaction (PH), complement fixation reaction (PCK), enzyme-linked immunosorbent assay (IMFA), diffusion precipitation reaction (RVP) / 3 /. With a relatively high efficiency of serological diagnostics (60-90), the possibilities of its use are limited by the fact that up to 30 animals do not capture antibodies. This is explained by the fact that the prolonged persistence of visna-Madi virus in the presence of antibodies leads to antigenic variation. (G. Georgason, 1978; Shuljak, 1984).

Известен способ диагностики висна-мэди у овец по индексу соотношения малых и больших лимфоцитов /4/. Этот способ доступен и может быть успешно использован как дополнение к серологическим исследованиям при проведении оздоровительных мероприятий, преимущественно в хозяйствах, неблагополучных по висна-мэди, и для экспресс-диагностики на поголовье овец при необходимости срочной проверки. К недостаткам способа можно отнести многоэтапность при учете и интерпретации результатов (измерение диаметра лимфоцитов; подсчет больших лимфоцитов; подсчет малых лимфоцитов; определение индекса соотношения больших и малых лимфоцитов). A known method for the diagnosis of visna-madi in sheep according to the index of the ratio of small and large lymphocytes / 4 /. This method is available and can be successfully used as an addition to serological studies during health-improving measures, mainly in farms that are not well-functioning on visna-madi, and for express diagnostics on the number of sheep if urgent check is necessary. The disadvantages of the method include multi-stage accounting and interpretation of the results (measuring the diameter of lymphocytes; counting large lymphocytes; counting small lymphocytes; determining the index of the ratio of large and small lymphocytes).

Анализ технических решений, проведенный для определения уровня развития в области диагностики висна-мэди овец, выявил основную тенденцию - автоматизация, что обеспечивает точность диагностики из-за исключения возможных субъективных ошибок и высокую производительность при проведении массовых обследований животных. An analysis of technical solutions carried out to determine the level of development in the field of diagnostics of visna-madi sheep revealed the main trend - automation, which ensures the accuracy of diagnosis due to the exclusion of possible subjective errors and high performance in conducting mass examinations of animals.

Выявленная тенденция реализуется использованием современных технических средств, для чего необходим выбор соответствующих параметров патогенеза висна-мэди, фиксируемых приборами. The identified trend is implemented using modern technical means, for which it is necessary to select the appropriate parameters of the pathology of visna-medi, fixed by devices.

Нами проведены предварительные исследования по изучению морфологической картины крови овец, инфицированных и неинфицированных вирусом висна-мэди. Инфицированность овец вирусом висна-мэди определяли в РДП антигеном к вирусу висна-мэди, изготовленным научным отделом НИВИ НЗ РФ (г. Йошкар-Ола) серия N 6, 17.06.93 г. Исследования показали, что гематологические показатели у инфицированных и неинфицированных овец не имели достоверных различий за исключением субпопуляций лимфоцитов малых размеров (≅9 мкн), процент которых у инфицированных овец достоверно снижался. We carried out preliminary studies to study the morphological picture of the blood of sheep infected and uninfected with visna-madi virus. The infection of sheep with Visna Madi virus was determined in the RDP by the antigen for Visna Madi virus manufactured by the Scientific Department of the NIVI NZ RF (Yoshkar-Ola), series No. 6, 06/17/93. Studies showed that hematological parameters in infected and uninfected sheep did not had significant differences with the exception of subpopulations of small lymphocytes (≅9 micron), the percentage of which in infected sheep significantly decreased.

Предлагается способ диагностики висна-мэди у овец на основе выявленного параметра снижения субпопуляции лимфоцитов малых размеров (≅9 мкн), точность и упрощение которого обеспечиваются использованием гематологического анализатора System 9000 Ditt. Модель Serino-Diagnostica Inc. A method for diagnosing visna-madi in sheep is proposed based on the identified parameter for reducing the subpopulation of small lymphocytes (≅9 microns), the accuracy and simplification of which are provided by using the System 9000 Ditt hematology analyzer. Model Serino-Diagnostica Inc.

Выбор этого прибора для морфологических исследований крови не является случайным. Прибор представляет собой полностью автоматизированный 18-параметрический гематологический счетчик клеток, используемый для in vitro анализа клеток крови. Производительность прибора составляет 60 образцов в час. Продолжительность одного анализа включает время загрузки, время собственно анализа и время распечатки результатов исследований. Принцип работы системы электронного счета и определения размеров основан на разнице проводимости клеток крови и жидкости, в которой они содержатся. Для выделения эритроцитов и тромбоцитов используется электронная схема сортировки импульсов. Выводимая кривая распределения лейкоцитов по размерам рассчитывается на основе всего подсчитанного количества лейкоцитов крови. Лейкоциты дифференцируются на три группы: лимфоциты, моноциты с эозинофилами и базофилами и гранулоциты, т.е. нейтрофилы. Характеристика указанных групп обеспечивается фиксированными дискриминаторами L₁, L₂, L₃, L₄.The choice of this device for morphological blood tests is not accidental. The device is a fully automated 18-parameter hematological cell counter used for in vitro analysis of blood cells. Productivity is 60 samples per hour. The duration of one analysis includes the load time, the time of the actual analysis, and the time it takes to print the test results. The principle of operation of the electronic metering and sizing system is based on the difference in the conductivity of the blood cells and the fluid in which they are contained. To isolate red blood cells and platelets, an electronic pulse sorting circuit is used. The output white blood cell size distribution curve is calculated based on the total count of the white blood cell count. White blood cells differentiate into three groups: lymphocytes, monocytes with eosinophils and basophils and granulocytes, i.e. neutrophils. The characteristics of these groups are provided by fixed discriminators L ₁ , L ₂ , L ₃ , L ₄ .

Дискриминатор L₁ указывает процент клеток в нижней области зоны лимфоцитов. Дискриминатор L₂ указывает процент клеток между пиками лимфоцитов и моноцитов с эозинофилами. Дискриминатор L₃ указывает процент клеток между пиками лимфоцитов и моноцитов с эозинофилами. Дискриминатор L₄ указывает процент клеток в верхней части кривой популяции нейтрофилов.The discriminator L ₁ indicates the percentage of cells in the lower region of the lymphocyte zone. The discriminator L ₂ indicates the percentage of cells between the peaks of lymphocytes and monocytes with eosinophils. The discriminator L ₃ indicates the percentage of cells between the peaks of lymphocytes and monocytes with eosinophils. The discriminator L ₄ indicates the percentage of cells at the top of the neutrophil population curve.

В табл. 1 приведены результаты морфологических исследований крови инфицированных и неинфицированных вирусом висна-мэди овец, проведенных на гематологическом анализаторе, причем с учетом результатов предварительных исследований определяли количество лимфоцитов в зависимости от размеров. In the table. Figure 1 shows the results of morphological studies of blood of sheep infected and uninfected with Visna-Madi virus performed on a hematological analyzer, and taking into account the results of preliminary studies, the number of lymphocytes was determined depending on the size.

Из табл. 1 видно, что у инфицированных вирусом висна-мэди овец по сравнению с неинфицированными вирусом висна-мэди овцами происходит достоверное снижение субпопуляций лейкоцитов, дифференцируемых дискриминаторами
Способ осуществляется следующим образом.From the table. Figure 1 shows that in infected with visna-Madi virus sheep, compared with uninfected visna-Madi virus, there is a significant decrease in leukocyte subpopulations differentiated by discriminators
The method is as follows.

Кровь из яремной вены исследуют на гематологическом анализаторе System-9000 по программе анализа лейкоцитов. На гистограмме учитывают показания дискриминаторов L₁ и L₂ и при величине L₁ 0-1,2 и величине L₂ 21,9 диагностируют висна-мэди.Blood from the jugular vein is examined on a System-9000 hematology analyzer using a white blood cell analysis program. The histogram takes into account the readings of discriminators L ₁ and L ₂ and with a value of L ₁ 0-1.2 and a value of L ₂ 21.9 diagnosed visna-madi.

Пример 1. У овцы N 321 из яремной вены берут кровь. 0,5 мл с антикоагулянтом триланон-6 микропипеткой заправляют в специальную кювету и включают программу анализа лейкоцитов. На гистограмме учитывают показания дискриминаторов L₁ и L₂, которые составляют соответственно 1,7 и 29,7 Животное здоровое. Диагноз подтвержден в реакции диффузионной преципитации с антигеном к вирусу висна-мэди производства ВИЭВ.Example 1. The sheep N 321 from the jugular vein take blood. 0.5 ml with the anticoagulant trilanon-6 micropipette is filled into a special cuvette and a white blood cell analysis program is included. The histogram takes into account the readings of discriminators L ₁ and L ₂ , which are respectively 1.7 and 29.7. The animal is healthy. The diagnosis was confirmed in the reaction of diffusion precipitation with antigen to the visna-Madi virus produced by VIEV.

Пример 2. В совхозе фирмы "Родина" Шахунского района Нижегородской области проводят морфологические исследования крови на гематологическом анализаторе System-9000, как в примере 1 и серологические исследования в РДП с антигеном к вирусу висна-мэди, изготовленным научным отделом НИВИ НЗ РФ (г. Йошкар-Ола) серия N 6, 17.06.93 г. Результаты представлены в табл. 2. Example 2. At the state farm of the Rodina company in the Shakhunsky district of the Nizhny Novgorod region, blood morphological studies are performed on a System-9000 hematology analyzer, as in Example 1, and serological tests in the RPD with Visna-Madi virus antigen manufactured by the scientific department of the NIVI NZ RF (g. Yoshkar-Ola) series N 6, 06/17/93. The results are presented in table. 2.

Пример 3. Определяют точность способа в сравнении с известными. РДП ставят с антигеном к вирусу висна-мэди производства ВИЭВ. Гематологический способ: в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза, подсчитывают количество лимфоцитов. Диаметр измеряют окулярмикрометром МОВ-1-15х. Морфологические исследования проводят, как в примере 1. Результаты представлены в табл. 3. Example 3. Determine the accuracy of the method in comparison with the known. RDP is placed with antigen for the Visna-Medi virus produced by VIEV. Hematological method: in blood smears stained according to Romanovsky-Giemsa, the number of lymphocytes is counted. The diameter is measured with an MOV-1-15x ocular micrometer. Morphological studies are carried out, as in example 1. The results are presented in table. 3.

Как видно из табл. 3, все три способа обладают одинаковой точностью, совпадающие результаты зарегистрированы во всех случаях, т.е. отмечена полная корреляция, что позволяет использовать предлагаемый способ для обследования животных в хозяйствах, подозрительных на неблагополучие по висна-мэди, для своевременного принятия мер по предупреждению распространения инфекции. As can be seen from the table. 3, all three methods have the same accuracy, matching results were recorded in all cases, i.e. full correlation was noted, which allows using the proposed method for examining animals in farms suspicious of visna-Madi's troubles, for timely adoption of measures to prevent the spread of infection.

Claims

A method for diagnosing visna-madi in sheep by examining blood cells, characterized in that they determine the content of small and partially medium lymphocytes and when the content of small lymphocytes is not more than 7 μm in size 0 1.2% and medium lymphocytes in size is 7 9 μm 21.9% they diagnose visna-madi in sheep.