RU2082168C1 - Способ обнаружения и количественного определения экдистероидов в растительных объектах - Google Patents
Способ обнаружения и количественного определения экдистероидов в растительных объектах Download PDFInfo
- Publication number
- RU2082168C1 RU2082168C1 RU94002629/13A RU94002629A RU2082168C1 RU 2082168 C1 RU2082168 C1 RU 2082168C1 RU 94002629/13 A RU94002629/13 A RU 94002629/13A RU 94002629 A RU94002629 A RU 94002629A RU 2082168 C1 RU2082168 C1 RU 2082168C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- detection
- ecdysteroids
- ecdisteroids
- analysis
- quantitative determination
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Использование: изобретение относится к биоорганической химии и химии природных и физиологически активных веществ и может быть использовано при поиске новых перспективных источников экдистероидов среди объектов растительного мира для получения необходимых количеств чистых гормонов при исследованиях в различных областях медицины. Сущность изобретения: предложенный способ позволяет сделать заключение о присутствии экдистероидов в целых растениях на основании предварительного обнаружения в семенах путем тонкослойной, высокоэффективной жидкостной или газожидкостной хроматографии. 2 табл.
Description
Изобретение относится к биоорганической химии и химии природных и физиологически активных веществ и может быть использовано при поиске новых перспективных источников экдистероидов среди объектов растительного мира для получения необходимых количеств чистых гормонов при исследовании в различных областях медицины.
Известен способ количественного определения экдистероидов с применением реакции Чугаева [1] Недостатком способа является то, что после хроматографического разделения на стеклянных пластинках с нанесенным силикагелем ЛС 5/40 необходимо проведение реакции элюированных экдистероидов с хлористым цинком в "ледяной" уксусной кислоте с добавлением ацетилхлорида, с последующим нагреванием и спектрофотометрированием.
Наиболее близким к предполагаемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является хроматоспектрофотометрический способ определения экдистерона в сухом растительном сырье (листья, стебли, корни) [2] в котором разделение спиртовых экстрактов осуществляется на стеклянных пластинах с закрепленным слоем алусила в системе растворителей хлороформ-метанол-ацетон в соотношении 6:2:1 с последующим спектрофотометрированием элюатов, содержащих экдистероиды.
Недостатками этого способа являются: трудоемкость сбора, сушки, подготовки сырья к анализу; необходимость приготовления стеклянных пластинок и трудности воспроизведения однородности слоя, что сказывается на результатах анализа; выявление этанола раствором ванилина в серной кислоте; большой расход растворителей при хроматографировании и элюировании.
В основу настоящего изобретения поставлена задача сокращения времени качественного обнаружения и количественного определения экдистероидов.
Поставленная задача решается тем, что в предлагаемом способе обнаружения и количественного определения экдистероидов в растительных объектах путем хроматографического анализа в качестве исходного сырья используют семена цветковых растений, а хроматографический анализ осуществляют одним из методов: тонкослойной хроматографии (ТСХ), газожидкостной хроматографии (ГЖХ), высокоэффективной хроматографии (ВЭЖХ).
Причем, применяя метод ТСХ, экстракт анализируют на стандартных пластинах Силуфол УФ-254 в системе растворителей хлороформэтанол (3:1) и детектируют экдистероиды в УФ-свете; применяя метод ВЭЖХ, экстракт анализируют с использованием октадецилпривитых силикагелей (С-18) в качестве насадок разделительных колонок в водно-этанольных элюирующих системах, а детектирование осуществляют УФ-детектором при 254 нм; ГЖХ предполагает анализ экстракта на кварцевых капиллярных колонках с силиконовой фазой типа OV-101, а детектирование осуществляют электронно-захватным детектором.
Введение вышеуказанных отличительных признаков позволяет получить технический результат, который невозможно достичь в прототипе.
Известно, что многолетние растения в первый год жизни синтезируют малое количество экдистероидов, иногда меньше предела обнаружения инструментальных методов, а максимальное накопление наблюдается на 2-3 году [3] Кроме того, большую долю в пробу надземной части вносят стебли и листья, отличающиеся, как правило, малым содержанием исследуемых соединений. Наибольшее накопление их свойственно репродуктивным органам (бутонам, цветам и семенам) [3, 4] но вклад их в общую массу растений очень мал. Так на первом году жизни содержание экдистерона в надземной части лихниса халкедонского составляет 0,15, на втором и третьем 0,41 и 0,36% соответственно, тогда как в семенах второго года 0,76% Качественное обнаружение и количественное определение экдистероидов в предлагаемом способе проводится любым хроматографическим методом: ТСХ, ВЭЖХ или ГЖХ. В предлагаемом способе разделение экстрактов при ТСХ определении осуществляется на стандартных пластинках Силуфол УФ-254 с тонким слоем сорбента, что значительно улучшает воспроизводимость результатов и сокращает время анализа. Наличие же люминесцентного индикатора на этих пластинках упрощает детектирование экдистероидов, исключая применения реактива обнаружения. А поскольку слой сорбента на стандартных пластинках значительно тоньше, чем на препаративных, то расход растворителей меньше, кроме того, спиртовые экстракты семян не требуют дополнительной очистки органическими растворителями и добавки к силикагелю окиси алюминия, как в прототипе, вследствие малого содержания пигментов и других сопутствующих веществ.
Технический результат, который достигается применением заявляемого решения, выражается в сокращении времени качественного и количественного определения экдистероидов в растительных объектах с одновременным улучшением точности и воспроизводимости результатов анализа. Это в конечном итоге, обеспечит прогресс в поиске перспективных источников экдистероидов среди объектов растительного мира, что особенно актуально, учитывая широкий спектр фармакологического действия этих стероидов.
Пример 1. 0,2-0,1 г семян рода Смолевка (Silene) экстрагируют 70% этанолом дважды, концентрируют. Экстракт наносят на активированную пластинку Силуфол и хроматографируют в системе растворителей хлороформ-этанол (3:1). Для качественного обнаружения экдистероиды детектируют в УФ-свете. Для количественного определения обозначенную в УФ-свете зону пятен на уровне эталонов экдистероидов снимают и элюируют 96% этанолом в течение 4-х часов. Затем элюат фильтруют и спектрофотометрируют при 242 нм. Время подготовки сырья, подготовки к анализу, анализа и расход растворителей приведены в таблице 1. Результаты определения экдистероидов сведены в таблицу 2.
Пример 2. Экстракты семян рода Смолевка приготовляют, как описано в примере 1, а определение экдистероидов ведут методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на приборе "Милихром" с использованием колонки с октадецилпривитым силикагелем (C-18) Лихросорб RP-18 в системе метанол-вода (8: 2). Детектирование осуществляют УФ-детектором при длине волны 254 нм. Качественное определение экдистероидов проводят по временам удерживания этанолов в идентичных условиях, а количественное по предварительно полученным на эталонах калибровочным зависимостям. Результаты приведены в таблицах 1, 2.
Пример 3. Экстракты семян готовят, как описано в примере 1, затем добавляют N-(триметилсилил)имидазол в количестве 1 мл на 10 мл экстракта и встряхивают в течение 30-45 минут. Анализ экдистероидов в виде триметилсилильных эфиров осуществляют методом газо-жидкостной хроматографии на приборе модель "3700" на кварцевой капиллярной колонке (25 м x 0,22 мм) с силиконовой иммобилизованной фазой OV-101 (толщина слоя 0,1 мкм) и электронно-захватным детектором. Условия разделения: газ-носитель азот (в.ч.) 0,8-1,0 см3/мин, температура колонки 270-310oC. Качественный анализ проводят по временам удерживания ТМС-эфиров экдистероидов-эталонов, количественный по предварительно полученным калибровочным зависимостям в идентичных условиях анализа.
Результаты приведены в таблицах 1 и 2.
Как видно из данных, приведенных в таблице 1, использование предлагаемого способа по примерам 1-3 позволяет существенно ускорить проведение всех стадий подготовки и анализа экстрактов и заметно снизить расход используемых растворителей.
Как видно из данных, приведенных в таблице 2, использование предлагаемого способа позволяет не только быстрее обнаружить, но и определить экдистероиды количественно с большей точностью, чем у прототипа.
Таким образом, использование предложенного способа позволяет сделать заключение о присутствии экдистероидов в целых растениях в любую фазу развития на основании предварительного обнаружения и количественного определения в семенах. Применение этого способа к поиску экдистероидов в растительных объектах ускоряет химический скрининг, повышает вероятность обнаружения, упрощает способ определения, повышает точность и воспроизводимость количественного определения. За 15-20 лет активного изучения фитоэкдистероидов исследователями было обнаружено их присутствие в 18 видах рода Silene а использование же предлагаемого решения позволило за 1 год проанализировать 60 видов и выявить 20 новых продуцентов экдистероидов из указанного рода.
Техническая осуществимость предлагаемого изобретения очевидна, поскольку используется серийно выпускаемая отечественная аппаратура, товарно-производимые пластины и органические растворители.
Источники информации
1. Холодова Ю. Д. Применение реакции Чугаева для количественного определения экдизонов //Химия природ. соедин. 1977. с. 227-230.
1. Холодова Ю. Д. Применение реакции Чугаева для количественного определения экдизонов //Химия природ. соедин. 1977. с. 227-230.
2. Хроматоспектрофотометрический метод определения экдистерона в растительном сырье /М.Р. Якубова, Г.Л. Генкина, Т.Т. Шакиров, Н.К. Абубакиров //Химия природ. соедин. 1978. с. 737-740 (прототип).
3. Зибарева Л. Н. Фитоэкдистероиды и другие химические компоненты растений рода Lychnis: Автореф. дис. канд. хим. наук. Новосибирск, 1991. 19 с.
4. Вересковский В. В. Чекалинская И.И. Пашина Г.В. Динамика содержания экдистерона у видов рода Rhaponticum Ludw. //Растительн. ресурсы. 1983. - Вып.1 с. 60-65.
Claims (1)
- Способ обнаружения и количественного определения экдистероидов в растительных объектах путем хроматографического анализа исходного сырья, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья используют семена цветковых растений, а анализ осуществляют путем тонкослойной высокоэффективной жидкостной или газожидкостной хроматографии.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU94002629/13A RU2082168C1 (ru) | 1994-01-26 | 1994-01-26 | Способ обнаружения и количественного определения экдистероидов в растительных объектах |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU94002629/13A RU2082168C1 (ru) | 1994-01-26 | 1994-01-26 | Способ обнаружения и количественного определения экдистероидов в растительных объектах |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU94002629A RU94002629A (ru) | 1995-09-20 |
RU2082168C1 true RU2082168C1 (ru) | 1997-06-20 |
Family
ID=20151766
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU94002629/13A RU2082168C1 (ru) | 1994-01-26 | 1994-01-26 | Способ обнаружения и количественного определения экдистероидов в растительных объектах |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2082168C1 (ru) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD2823G2 (ru) * | 2004-02-12 | 2006-05-31 | Институт Химии Академии Наук Молдовы | Способ количественного определения склареола в экстрактах, полученных из шалфея мускатного |
RU2445110C1 (ru) * | 2010-12-07 | 2012-03-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Томский государственный университет" (ТГУ) | Способ получения 26-гидроксиинтегристерона а из растительного сырья |
RU2769094C1 (ru) * | 2021-05-21 | 2022-03-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи" | Способ идентификации и количественного определения 20Е-экдистероидов в пищевом сырье и экстрактах из него |
-
1994
- 1994-01-26 RU RU94002629/13A patent/RU2082168C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
М.Т. Якубова, Г.Л. Генкина, Т.Т. Шакиров, Н.К. Абубакиров. Хроматоспектрофотометрический метод определения экдистерона в растительном сырье. Химия природ. соедин.- 1978, с.737 - 740. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD2823G2 (ru) * | 2004-02-12 | 2006-05-31 | Институт Химии Академии Наук Молдовы | Способ количественного определения склареола в экстрактах, полученных из шалфея мускатного |
RU2445110C1 (ru) * | 2010-12-07 | 2012-03-20 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Томский государственный университет" (ТГУ) | Способ получения 26-гидроксиинтегристерона а из растительного сырья |
RU2769094C1 (ru) * | 2021-05-21 | 2022-03-28 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный исследовательский центр питания, биотехнологии и безопасности пищи" | Способ идентификации и количественного определения 20Е-экдистероидов в пищевом сырье и экстрактах из него |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Tarkowská et al. | The determination of 22 natural brassinosteroids in a minute sample of plant tissue by UHPLC–ESI–MS/MS | |
Dobrev et al. | Purification and determination of plant hormones auxin and abscisic acid using solid phase extraction and two-dimensional high performance liquid chromatography | |
Urbanová et al. | Analysis of gibberellins as free acids by ultra performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry | |
Kingman et al. | Isolation, purification and quantitation of several growth regulating substances in Ascophyllum nodosum (Phaeophyta) | |
Lenton et al. | The identification and quantitative analysis of abscisic acid in plant extracts by gas-liquid chromatography | |
Fu et al. | Progress in quantitative analysis of plant hormones | |
Jones et al. | Fractionation of gibberellins in plant extracts by reverse phase high performance liquid chromatography | |
Halouzka et al. | Analytical methods in strigolactone research | |
Báthori | Purification and characterization of plant ecdysteroids of Silene species | |
Alpi et al. | Identification of gibberellin A1 in the embryo suspensor of Phaseolus coccineus | |
Deyoe et al. | Indole-3-acetic acid in Douglas fir: Analysis by gas-liquid chromatography and mass spectrometry | |
Nicholls | The isolation of indole-3-acetyl-2-O-myo-inositol from Zea mays | |
HORGAN | MODER NM ETH ODS FOR PLANT H ORM ONE ANALYSIS | |
Cartoni et al. | Capillary gas chromatographic—mass spectrometric detection of anabolic steroids | |
RU2082168C1 (ru) | Способ обнаружения и количественного определения экдистероидов в растительных объектах | |
Wilson et al. | Regulators of Cell Division in Plant Tissues1: XIX. THE METABOLISM OF 6-BENZYLAMINOPURINE IN RADISH COTYLEDONS AND SEEDLINGS | |
Frommherz et al. | Quantitative determination of taxine B in body fluids by LC–MS–MS | |
CN109374765B (zh) | 一种全自动在线spe-lc-ms/ms定量分析植物样品中内源性独脚金内酯的方法 | |
Taylor et al. | The effect of light on the endogenous levels of cytokinins and gibberellins in seeds of sitka spruce (Picea sitchensis Carriere) | |
Wen et al. | Bioassay-and liquid chromatography/mass spectrometry-guided acetylcholinesterase inhibitors from Picriafel-terrae | |
Berry et al. | Qualitative and quantitative separation of a series of phorbol-ester tumor promoters by high-pressure liquid chromatography | |
Yamada | Determination of endogenous gibberellins in germinating barley by combined gas chromatography-mass spectrometry | |
Hulme | Methods for the determination of organic acids | |
Doumas et al. | Evidence of cytokinin bases, ribosides and glucosides in roots of Douglas-fir, Pseudotsuga menziesii | |
Crozier et al. | Characterization of gibberellins from dark-grown Phaseolus coccineus seedlings by gas-liquid chromatography and combined gas chromatography-mass spectrometry |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20040127 |