RU2081168C1 - Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый как референс-штамм при определении гемолизинов энтеробактерий - Google Patents

Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый как референс-штамм при определении гемолизинов энтеробактерий Download PDF

Info

Publication number
RU2081168C1
RU2081168C1 RU94030872A RU94030872A RU2081168C1 RU 2081168 C1 RU2081168 C1 RU 2081168C1 RU 94030872 A RU94030872 A RU 94030872A RU 94030872 A RU94030872 A RU 94030872A RU 2081168 C1 RU2081168 C1 RU 2081168C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
strain
hemolysins
assay
klebsiella pneumoniae
enterobacterium
Prior art date
Application number
RU94030872A
Other languages
English (en)
Other versions
RU94030872A (ru
Inventor
Л.Д. Мартыненко
А.М. Мазнева
Original Assignee
Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии filed Critical Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии
Priority to RU94030872A priority Critical patent/RU2081168C1/ru
Publication of RU94030872A publication Critical patent/RU94030872A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2081168C1 publication Critical patent/RU2081168C1/ru

Links

Images

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Использование: микробиология, биотехнология, референс-штамм, гемолизин, энтеробактерии. Сущность изобретения: предложен штамм Klebsiella pneumonike ГИСК N 233 для определения гемолитической активности энтеробактерий. Штамм обладает стабильной способностью продуцировать α- и β- гемолизины, вызывая лизис эритроцитов барана и кролика. Гемолитическую активность определяют путем посева штамма на питательную среду, содержащую эритроциты барана и кролика с последующей инкубацией при температуре 36-38oC в течение 18-24 ч. Наличие зон лизиса свидетельствует о продукции гемолизинов. Штамм может быть использован в качестве реферанс-штамма при излучении гемолитической активности штаммов, выделенных от больных, объектах окружающей среды и других источников, когда необходима дифференциация патогенных и непатогенных штаммов. 1 табл.

Description

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в качестве референс-штамма при определении признаков патогенности энтеробактерий, когда необходимо обоснование этиологической значимости культур, выделенных от больных ОКИ и объектов окружающей среды.
Известен штамм Staphylococcus aureus N 201050, одномоментно продуцирующий α- и β- гемолизины, наиболее часто используемый в лабораторных условиях для получения α-, β- гемолизинов и в качестве реферанс-штамма при изучении гемолитической активности микроорганизмов и выбранный нами за прототип (Каталог штаммов Всесоюзного музея патогенных бактерий/- М. 1982, c. 197).
Для получения целевого продукта штамм культивируют на жидких питательных средах, биомассу осаждают центрифугированием, а из надсадочной жидкости извлекают гемолизины. При изучении гемолитической активности штамм засевают на плотные питательные среды, содержащие эритроциты барана и кролика.
Недостатком известного штамма является то, что он относится к группе грамположительных микроорганизмов, что затрудняет его использование при изучении гемолитической активности штаммов грамотрицательных микроорганизмов и их гемолизинов.
Целью изобретения является получение нового высокоактивного штамма, продуцирующего одновременно α- и β- гемолизины.
Штамм Clebsielle pneuworiae выделен из клинического материала больного ОКИ, депонирован в коллекции Российского Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинский биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под N 233.
Свойства штамма К.preumokiae-233.
Морфологические признаки. Грамотрицательные короткие палочки, неподвижные, жгутиков и спор не образуют. При окраске и тушевом препарате по Бурри выявлена капсула, диаметр которой составляет 1/2 диаметра тела бактериальной клетки.
Культуральные признаки. На мясопептонном бульоне через 3 ч дает легкое гомогенное помутнение, через 18-24 ч диффузный рост, с выраженными муаровыми волнами.
На мясопептонном агаре: светлые полупрозрачные колонии, с ровными гладкими краями, легко снимаются, диаметр 1,0-1,5 мм, признаков диссоциации нет. На среде Эндо: колонии бледно-розового цвета с более яркой точкой в центре при просмотре на свет, куполообразные, маслянистые, диаметр колоний 1,5-2,0 мм. Признаков диссоциации нет. На среде K2: светлые полупрозрачные колонии, с легким желтоватым оттенком, маслянистые, диаметр колоний 1,0-1,5 мм. Признаков диссоциации нет.
Физиолого-биохимические признаки. Оптимум температурного роста (37±1)oC; pH среды 7,0-7,2. Оптимальные условия аэробные. Активно расщепляет глюкозу и глицерин с образованием кислоты и газа, а также маннит, сахарозу, мальтозу, арабинозу, адонит, инозит, дульцит, ксилозу, сорбит, рамнозу, замедленно лактозу. Декарбоксилирует лизин, утилизирует малонат натрия и цитрат Козара, а также Симонса, обладает замедленной уреазной активностью, дает положительную реакцию Фогес-Проскауэра, т.е. ферментирует глюкозу с образованием ацетил- метилкарбинола (ацетоина). Не образует сероводород и индол, в реакции метил-рот отрицательна. Орнигиндекарбоксилаза, эргининдегидролаза и фенилаланиндезаминаза отсутствует. Штамм неподвижен.
Антигенная структура штамма при серотипировании набором сывороток ЦНИИВиС им. Мечникова не установлена.
Чувствительность к антибактериальным препаратам. Исследованиями методом серийных разведений установлена чувствительность и следующим препаратам: неомицину (10 мг/мл), канамицину (5 мгк/мл), гентамицину 82,5 (мгк/мл), сизомицину (1 мкг/мл), кефзолу (5 мкг/мл), клафорану (25 мкг/мл), левомицетину (10 мгк/мм), полимиксину В (5 мгк/мл), налидиксовой кислоте (10 мгк/мм). Устойчив к бензилпенициллину (10 мгк/мм), ампициллину (1,5 мгк/мм), ампиоксу (1,5 мгк/мм), тетрациклину (50 мгк/мм), эритромицину (250 мгк/мм.).
Биологические свойства. Штамм обладает способностью стабильно продуцировать α- и β- гемолизины.
Вирулентные свойства: LD50 для белых мышей 2 • 109 м.т.
Штамм используют следующим образом:
Пример 1. Суточную культуру штамма К. precruoniae 233 рассеивают методом истощения петли на чашки Петри с мясопептонным агаром, содержащим 5%-ную дефибринированную кровь барана и выдерживают при температуре (37±)oC в течение 18-24 ч. По истечении указанного срока производят учет. Зона лизиса вокруг колоний составляет 2-3 мм. Чашки выдерживают при температуре (6±4)oC в течение 2-6 ч и вновь измеряют зону лизиса, которая составляет 4-6 мм. Таким образом штамм продуцирует β гемолизины.
Пример 2. Суточную культуру штамма К.preuruopicie 233 рассеивают методом истощения петли на чашки Петри с мясопептонным агаром, содержащим 5%-ную дефибринированную кровь кролика и выдерживают при температуре (37±1)oC в течение 18-24ч, затем учитывают. Зона лизиса вокруг колоний составляет 2-3 мм. Чашки выдерживают при температуре (6±4)oC 2-6 ч. После чего вновь измеряют зону лизиса, она составляет 5-6 мм, что свидетельствует о продукции a гемолизина.
Пример 3. Культуру штамма К.preuworicee 233 засевают в пробирку с 5 мл мясопептонного бульона, pH 7,0-7,2 и выращивают при температуре (37 ±1)oC в течение 6 ч при непрерывном перемешивании на шуттель-аппарате. Полученный таким образом инокулят вносят во флаконы объемом 0,5 л со 100 мл мясопептонного бульона. Флаконы помещают в шуттель-аппарате роторного типа (60 циклов в мин, шаг платформы 40-45 мин) и культивируют при температуре (37 ±1)oC в течение 18-20 ч. По окончании культивирования культуру инактивируют азидом натрия 1:10000. Биомассу осаждают центрифугированием при 5000 об/мин в течении 25-30 мин, осадок ресуспендируют в 25 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия и дезинтегрируют на УЗДН при 5 мА в течение 10 мин. Обломки осаждают центрифугирвоанием при 12000 об/мл в течение 30-40 мин. Супернатант, представляющий собой лизат бактериальных клеток, подвергают исследованию.
В один ряд лунок титровальных планшетов вносят по 1 мл 3%-ной взвеси отмытых в 0,9%-ном растворе хлорида натрия нативных эритроцитов кролика, во второй ряд эритроциты барана. Затем вносят по 0,1 мл, предварительно раститрованного двушаговым разведением в 0,9%-ном растворе хлорида натрия лизата бактериальных клеток (1:2-1-256). Планшет закрывают стеклом и выдерживают при температуре (37 ±)oC 1 ч, затем при температуре 2-10oC в течение 2-4 ч. Учитывает результаты. Полный гемолиз эритроцитов барана наблюдали при внесении в лунки лизата бактериальных клеток в разведении 1:128; полный гемолиз эритроцитов кролика при разведении супернатанта 1:64.
Таким образом, штамм интенсивно продуцирует a- и β гемолизины.
Пример 4. Культуру штамма К. preuruoniae 233 выращивают и получают лизат бактериальных клеток, как описано в примере 3.
В агаре, содержащем 5%-ную взвесь эритроцитов кролика и барана, пробивают ряд лунок диаметром 4 мм и вносят по 25 мкл лизата бактериальных клеток, раститрованных двушаговым разведением, как описано в примере 3, и помещают во влажную камеру при температуре (37± 1)oC на 4-6 ч, затем на 2-4 ч при температуре 2-10oC. Вокруг лунок наблюдают гемолиз эритроцитов. Диаметр зоны эритроцитов барана и кролика 6-8 мм наблюдают при разведении лизата бактериальных клеток 1:16-1:32, что свидетельствует о наличии a- и β - гемолизина.
Пример 5. Изучение способности штамма К.prueruorisee 233 стабильно продуцировать a- и β -гемолизацин проводят следующим образом: штамм хранят на полужидком голодном агаре под слоем вазелинового масла при температуре (6± 4)oC и лиофилизированный. Через каждые 4-8 мес подвергают исследованию, как описано в примере 1 и 2.
Данные, представленные в таблице, свидетельствуют о том, что штамм К. preuruoricee не утратил свойства к продукции a- и β- гемолизинов при различных условиях хранения в течение 2,5 лет.
Штамм К. preuruoricee 233 обладает стабильной способностью к продукции α- и β- гемолизина и может быть использован в качестве референс-штамма при изучении гемолитической активности штаммов, выделенных от больных, объектах окружающей среды и других источников, когда необходима дифференциация патогенных и непатогенных штаммов.

Claims (1)

  1. Штамм бактерий Klebsiella pneumoniae ГИСК N 233, используемый в качестве рефененс-штамма при определении альфа-, бета- гемолитической активности штаммов энтеробактерий.
RU94030872A 1994-08-05 1994-08-05 Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый как референс-штамм при определении гемолизинов энтеробактерий RU2081168C1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU94030872A RU2081168C1 (ru) 1994-08-05 1994-08-05 Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый как референс-штамм при определении гемолизинов энтеробактерий

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU94030872A RU2081168C1 (ru) 1994-08-05 1994-08-05 Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый как референс-штамм при определении гемолизинов энтеробактерий

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU94030872A RU94030872A (ru) 1997-05-20
RU2081168C1 true RU2081168C1 (ru) 1997-06-10

Family

ID=20159879

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU94030872A RU2081168C1 (ru) 1994-08-05 1994-08-05 Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый как референс-штамм при определении гемолизинов энтеробактерий

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2081168C1 (ru)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Каталог штаммов Всесоюзного музея патогенных бактерий.- М.: 1982, с.197. *

Also Published As

Publication number Publication date
RU94030872A (ru) 1997-05-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2015503345A (ja) サルモネラ微生物の検出方法
Kitano et al. Escherichia coli mutants tolerant to beta-lactam antibiotics
Luechtefeld et al. Campylobacter fetus subsp. jejuni: background and laboratory diagnosis
Owen et al. A comparison of strains of King's group IIb of Flavobacterium with Flavobacterium meningosepticum
Omura et al. Studies on bacterial cell wall inhibitors VI. Screening method for the specific inhibitors of peptidoglycan synthesis
RU2081168C1 (ru) Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый как референс-штамм при определении гемолизинов энтеробактерий
Digranes et al. Characterization of Micrococcaceae from the urinary tract
Schneierson et al. Erwinia infections in man
Kurasz et al. In vitro studies of growth and competition between S. salivarius TOVE-R and mutans streptococci
RU2083663C1 (ru) ШТАММ БАКТЕРИЙ KLEBSIELLA PNEUMONIAE 232 - ПРОДУЦЕНТ β -ГЕМОЛИЗИНА
Lundbäck et al. Effect of R-factor-mediated drug-metabolizing enzymes on survival of Escherichia coli K-12 in presence of ampicillin, chloramphenicol, or streptomycin
RU2085584C1 (ru) Способ получения рекомбинантных туляремийных микроорганизмов - продуцентов факторов вирулентности, рекомбинантный штамм francisella tularensis subspecies, holarctica r5s - продуцент фактора вирулентности francisella tularensis nearctica shu, рекомбинантный штамм francisella tularensis holarctica rn4 - продуцент фактора вирулентности pseudomonas pseudomallei c 141, рекомбинантный штамм francisella tularensis subspecies holarctica r1a - продуцент фактора вирулентности francisella tularensis nearctica b 399 a cole
Gray et al. Manner and meaning of susceptibility testing of ampicillin-resistant Haemophilus influenzae
L'Ecuyer Exudative epidermitis in pigs. Bacteriological studies on the causative agent Staphylococcus hyicus
US4444883A (en) Method for the isolation and presumptive diagnosis of Bacillus cereus and tellurite medium therefor
Fountain et al. Studies on the mode of action of some cephalosporin derivatives
CN114540238B (zh) 一种用于分离肠道微生物中艰难梭状芽孢杆菌的培养基及制备方法
RU2070923C1 (ru) Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый в качестве референс-штамма для определения каталазной активности микроорганизмов при дифференциации патогенных и непатогенных микроорганизмов
RU2070922C1 (ru) Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, используемый в качестве референс-штамма при определении интенсивности дыхания микроорганизмов
RU2221864C2 (ru) Штамм бактерий klebsiella pneumoniae, депонированный в вгнки под № 23 мгавмиб-деп, для производства вакцины против клебсиеллеза молодняка сельскохозяйственных животных
SU1158582A1 (ru) Штамм @ @ 37,используемый в качестве эталона дл контрол наличи антигена В в кишечных бактери х
Piffaretti et al. Chloramphenicol acetylation in whole cells of Escherichia coli carrying R-factors characterization and kinetic studies
KR920000115B1 (ko) 신규 유산균
Fitriani et al. Isolation and Identification Of Penicillin Acylase Producing Bacteria Originated From Cow Intestine
RU2200195C2 (ru) Штамм staphylococcus warneri iegm kl-1 - продуцент низкомолекулярного пептидного соединения, ингибирующего рост клеток грампозитивных бактерий