RU2072867C1

RU2072867C1 - Method of immunotropic modification of thymic origin preparation

Info

Publication number: RU2072867C1
Authority: RU
Inventors: Валерий Эммануилович Орел; Сергей Борисович Алексеев; Феодосий Викторович Фильчаков; Светлана Викторовна Мартыненко; Юрий Акимович Гриневич; Александра Михайловна Дубинская; Наталья Николаевна Дзятковская
Original assignee: Валерий Эммануилович Орел; Сергей Борисович Алексеев; Феодосий Викторович Фильчаков; Светлана Викторовна Мартыненко; Юрий Акимович Гриневич; Александра Михайловна Дубинская; Наталья Николаевна Дзятковская
Priority date: 1992-07-28
Filing date: 1992-07-28
Publication date: 1997-02-10

Abstract

FIELD: medicine, immunology. SUBSTANCE: method involves mechano-chemical dispersion of 20 mg preparation sealed in vessel at +25 C and relative humidity 30% by seven balls (diameter is 6 mm) made of molybdenum glass for 2-5 min at vibration amplitude 9 mm at frequency 60 Hz. Invention can be used for immunity modulation at different diseases. EFFECT: increased biological activity and stability, decreased dose of preparation used and by-side effects.

Description

Изобретение относится к медицине, а именно к фармации иммуноактивных лекарственных средств, и может быть использовано в технологиях изготовления модуляторов иммунитета, применяемых при различных заболеваниях. The invention relates to medicine, namely to the pharmacy of immunoactive drugs, and can be used in the manufacture of immunity modulators used in various diseases.

В современной медицине, при лечении различных заболеваний иммунной системы организма применяют полипептидные гормоны тимуса. Технология изготовления и модификации препаратов включает в себя получение их из ткани зобной железы телят с применением уксусной реакции с последующей гель-фильтрацией. Этот препарата относится к полипептидам с низкой молекулярной массой (Морозов В. Г. Хавинсон В.Х. Выделение из тимуса и изучение природы фактора, стимулирующего иммуногенез. Доклады АН СССР, 1977, т. 233, N 3, с. 491 494). In modern medicine, in the treatment of various diseases of the body’s immune system, thymic polypeptide hormones are used. The technology for the manufacture and modification of preparations includes the preparation of them from the calf’s goiter gland using an acetic reaction followed by gel filtration. This preparation refers to polypeptides with low molecular weight (Morozov V.G. Havinson V.Kh. Isolation from the thymus and study of the nature of the factor stimulating immunogenesis. Reports of the USSR Academy of Sciences, 1977, v. 233, No. 3, p. 491 494).

Известный способ из-за того, что получение препарата основано на экстрагировании с помощью кислот и ионообменной хроматографии, не позволяет извлечь из исходного сырья лекарство с высокой биологической активностью, что обуславливает необходимость применения достаточно больших доз лекарственных средств. The known method due to the fact that the preparation is based on extraction using acids and ion exchange chromatography does not allow extracting a drug with high biological activity from the feedstock, which necessitates the use of sufficiently large doses of drugs.

Известен также способ модификации биологически активных веществ, основанный на принципе механического диспергирования высокомолекулярных веществ, в частности, при температурах 80 150 К, в стальном барабане лабораторной микромельницы со стальными шарами до 12 мин (Дубинская А.М. и др. Изменение структуры коллагена под влиянием механического диспергирования, Биофизика, 1980, т. XXV, вып. 4, с. 610 614). There is also known a method for modifying biologically active substances, based on the principle of mechanical dispersion of high molecular weight substances, in particular, at temperatures of 80-150 K, in a steel drum of a laboratory micro-mill with steel balls up to 12 min (A. Dubinskaya et al. Changing the structure of collagen under the influence of mechanical dispersion, Biophysics, 1980, v. XXV, issue 4, p. 610 614).

Однако существующий способ модификации вызывает в иммунотропных препаратах полиморфные переходы с неактивной реакционной формой, денатурацию белка, инактивацию ферментативной активности и нестабильность в результате гидролитического разложения. However, the existing modification method induces polymorphic transitions with an inactive reaction form in immunotropic preparations, protein denaturation, inactivation of enzymatic activity and instability as a result of hydrolytic decomposition.

Целью изобретения является предание иммунотропным препаратам большей биологической активности и стабильности. The aim of the invention is to provide immunotropic drugs with greater biological activity and stability.

Поставленная цель достигается тем, что в известном способе модификации иммунотропных препаратов, включающем механохимическое диспергирование 20 мг препарата в запаянном сосуде из молибденового стекла, имеющего объем 20 см ³, в воздушной среде с 30% относительной влажности и температурой +25^o C с помощью 7-ми стеклянных шаров из молибденового стекла массой 7 г и диаметром 6 мм в течение 2 5 мин с амплитудой вибрации 9 мм и частотой 60 Гц.This goal is achieved by the fact that in the known method of modifying immunotropic drugs, including mechanochemical dispersion of 20 mg of the drug in a sealed vessel of molybdenum glass having a volume of 20 cm ³ in air with 30% relative humidity and a temperature of +25 ^o C using 7- mi glass balls of molybdenum glass weighing 7 g and a diameter of 6 mm for 2 5 min with a vibration amplitude of 9 mm and a frequency of 60 Hz.

Принципиальное отличие предлагаемого способа модификации заключается в том, что основные механохимические изменения при заявляемых режимах диспергирования вызывают специфическую модификацию молекулярных связей полипептидов гормона тимуса с образованием свободных радикалов, а поскольку диспергирование проводили в присутствие воздуха с 30% относительной влажности, то основную массу свободных радикалов составляли радикалы перекисного типа, которые образуются при окислении первичных свободнорадикальных продуктов механодеструкции кислородом воздуха. The principal difference of the proposed modification method is that the main mechanochemical changes under the claimed dispersion regimes cause a specific modification of the molecular bonds of the thymus hormone polypeptides with the formation of free radicals, and since the dispersion was carried out in the presence of air with 30% relative humidity, the bulk of the free radicals were radicals peroxide type, which are formed during the oxidation of primary free radical mechanical degradation products Air islorodom.

Известно, что иммунизация организма сопровождается, на определенных стадиях, активацией процессов перекисного окисления (Лукашова Р.Г. и др. Влияние гормонов тимуса на активацию перекисного окисления липидов в лимфоидных органах крыс в процессе развития гуморального иммунного ответа. Докл. АН УССР. Сер. Б, 1989, N 9, с. 63 67). Поэтому введение в организм предварительно механохимически модифицированных полипептидных гормонов тимуса приводит к процессам активации иммунологических реакций. При этом образуется стабильная топохимическая форма препарата со значительно более высокими биологически активными свойствами, без загрязнения продуктами износа мелящих его стеклянных продуктов, т.к. модифицируемые природные пептидные гормоны значительно мягче стекла. It is known that immunization of an organism is accompanied, at certain stages, by the activation of peroxidation processes (Lukashova R.G. et al. The influence of thymus hormones on the activation of lipid peroxidation in rat lymphoid organs during the development of a humoral immune response. Report of the Ukrainian Academy of Sciences. Ser. B, 1989, N 9, p. 63 67). Therefore, the introduction into the body of previously mechanochemically modified polypeptide hormones of the thymus leads to the activation processes of immunological reactions. In this case, a stable topochemical form of the drug is formed with significantly higher biologically active properties, without contamination by wear products of glass products grinding it, since modifiable natural peptide hormones are significantly softer than glass.

Пример. Проводили механохимическое вибрационное модифицирование 20 мг официального препарата "Тималин" (серия 250690, год выпуска 1992, г. Санкт-Петербург), помещенного в запаянный сосуд из молибденового стекла, имеющего объема 20 cм³ в воздушной среде при температуре +25^o C и 30% относительной влажности с помощью 7 стеклянных шаров массой 7 г из молибденового стекла диаметром 6 мм в течение 2 и 5 мин с амплитудой вибрации 9 мм и частотой 60 гц в лабораторной микромельнице.Example. Carried out mechanochemical vibrational modification of 20 mg of the official drug "Timalin" (series 250690, 1992, St. Petersburg), placed in a sealed vessel of molybdenum glass, having a volume of 20 cm ³ in air at a temperature of +25 ^o C and 30 % relative humidity using 7 glass balls weighing 7 g of molybdenum glass with a diameter of 6 mm for 2 and 5 minutes with a vibration amplitude of 9 mm and a frequency of 60 Hz in a laboratory micro-mill.

Биологическую активность препаратов после механохимического модифицирования, а также содержание веществ с тимозиноподобной сывороточной активностью (ТСА) в сыворотке крови тимэктомированных мышей определяли в тесте (Bach J.F. Dardenne M. Bach M.A. Demonstration and characteeization of a circulating thymic hormones in mouse and in man. Transplant. Proc. 1973, v. 1, N 1, p. 99 104). Механохимическую модификацию биопроб оценивали методом исследования перекисного окисления механолюминесценции (Орел В.Э. Алексеев С.Б. Гриневич Ю.А. Изучение механолюминесценции лимфоцитов при опухолевом процессе. Эксперим. онкология, 1991, т. 13, N 6, с. 71 73). The biological activity of the preparations after mechanochemical modification, as well as the content of substances with thymosin-like serum activity (TCA) in the blood serum of thymectomized mice was determined in the test (Bach JF Dardenne M. Bach MA Demonstration and characteeization of a circulating thymic hormones in mouse and in man. Transplant. Proc. 1973, v. 1, N 1, p. 99 104). The mechanochemical modification of the bioassay was evaluated by the method of studying the peroxidation of mechanoluminescence (Orel V.E. Alekseev SB, Grinevich Yu.A. Study of the mechanoluminescence of lymphocytes in the tumor process. Experimental Oncology, 1991, v. 13, No. 6, p. 71 73) .

Исследования проведены на 100 мышах-самцах линии СВА массой 16 18 г, полученных из питомника "Столбовая" АМН РФ. The studies were conducted on 100 male mice of the CBA line weighing 16–18 g, obtained from the Stolbovaya nursery of the Russian Academy of Medical Sciences.

Результаты проведенных исследований приведены в табл. 1 и 2. The results of the studies are shown in table. 1 and 2.

Представленные в таблице 1 данные характеризуют непосредственно свойства тималина в системе in vitro и свидетельствуют о том, что модифицированные препараты обладают большей биологической активностью и, соответственно, большей интенсивностью перекисного окисления (по параметру механолюминесценции) по сравнению с контрольным официальным препаратом, полученным известным способом. The data presented in table 1 directly characterize the properties of thymalin in the in vitro system and indicate that the modified preparations have a higher biological activity and, accordingly, a higher peroxidation rate (according to the mechanoluminescence parameter) in comparison with the official control drug obtained in a known manner.

Анализ данных представленных в таблице 2 свидетельствует, что способностью повышать уровень тимозиноподобной сывороточной активности у тимэктомированных мышей до уровня и выше тимической сывороточной активности интактных мышей обладали только механохимически модифицированные препараты. Введение модифицированных препаратов также восстанавливало механолюминесценцию спленоцитов тимэктомированных мышей до значений, наблюдаемых у интактных мышей. В то же время, введение официального тималина лишь частично восстанавливало исследуемые показатели. Отмеченные свойства механохимически модифицированных препаратов пи хранении их в лиофилизированном виде в запальных стеклянных ампулах в темноте при температуре +4^oC сохраняются более 6 месяцев.An analysis of the data presented in table 2 indicates that only mechanochemically modified preparations were able to increase the level of thymosin-like serum activity in thymectomized mice to a level higher than the thymic serum activity of intact mice. The introduction of modified drugs also restored the mechanoluminescence of splenocytes from thimectomized mice to the values observed in intact mice. At the same time, the introduction of official thymalin only partially restored the studied parameters. The noted properties of mechanochemically modified preparations and their storage in lyophilized form in glowing glass ampoules in the dark at a temperature of +4 ^o C are stored for more than 6 months.

использование предлагаемого способа модификации иммунотропных препаратов обеспечивает, по сравнению с существующими способами, следующие преимущества:
существенное сокращение расхода исходного лекарственного сырья, уменьшение доза используемого препарата при одновременном уменьшении вероятности побочных явлений;
надежное сохранение полученного уровня свойств при общепринятых условиях хранения.the use of the proposed method for the modification of immunotropic drugs provides, in comparison with existing methods, the following advantages:
a significant reduction in the consumption of the initial medicinal raw materials, a reduction in the dose of the drug used, while reducing the likelihood of side effects;
reliable preservation of the obtained level of properties under generally accepted storage conditions.

Claims

A method of immunotropic modification of a preparation of thymic origin, characterized in that a mechanochemical dispersion of 20 mg of the preparation sealed in a molybdenum glass vessel having a volume of 20 cm ³ in air at 25 ^{° C.} and 30% relative humidity is carried out with seven balls with a diameter of 6 mm from molybdenum glass for 2 5 min, with a vibration amplitude of 9 mm and a frequency of 60 Hz.