RU2054484C1 - Method of preparing biologically active substances - Google Patents
Method of preparing biologically active substances Download PDFInfo
- Publication number
- RU2054484C1 RU2054484C1 SU5055932A RU2054484C1 RU 2054484 C1 RU2054484 C1 RU 2054484C1 SU 5055932 A SU5055932 A SU 5055932A RU 2054484 C1 RU2054484 C1 RU 2054484C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- esters
- prostaglandin
- biologically active
- active substances
- phospholipids
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинской и пищевой промышленности и может быть использовано для получения биологически активных веществ, таких как фосфолипиды, ферменты, простагландины и витамины. The invention relates to the medical and food industries and can be used to obtain biologically active substances, such as phospholipids, enzymes, prostaglandins and vitamins.
Получаемые данным способом биологически активные вещества могут быть использованы в косметической промышленности для приготовления косметических средств (кремы, шампуни и т.д.). The biologically active substances obtained by this method can be used in the cosmetic industry for the preparation of cosmetics (creams, shampoos, etc.).
В медицине указанные биологически активные вещества могут быть использованы в качестве субстанции для приготовления лекарственных средств, которые применяются при лечении язвы желудочно-кишечного тракта и ран различной этиологии. In medicine, these biologically active substances can be used as a substance for the preparation of medicines that are used in the treatment of gastrointestinal ulcers and wounds of various etiologies.
В ветеринарии простагландины используют для синхронизации охоты у сельскохозяйственных животных, для ликвидации яловости и для пересадки социтов с целью создания высокопородистого скота. In veterinary medicine, prostaglandins are used to synchronize hunting in farm animals, to eliminate barrels, and to transplant socites in order to create highly pedigree cattle.
Известен способ получения фосфолипидов микробиологическим методом путем культивирования дрожжей на жидкой питательной среде [1]
Однако этот способ не позволяет одновременно получить другие биологически активные вещества, такие как простагландины, ферменты и витамины.A known method of producing phospholipids by the microbiological method by culturing yeast in a liquid nutrient medium [1]
However, this method does not allow the simultaneous production of other biologically active substances, such as prostaglandins, enzymes and vitamins.
Известен способ получения простагландинов методом инкубирования арахидоновой кислоты с гомогенатом пузырьковых желез баранов [2]
Недостатком указанного способа является ограниченность сырьевой базы фермента, и способ не является промышленным.A known method of producing prostaglandins by incubation of arachidonic acid with a homogenate of the vesicle glands of sheep [2]
The disadvantage of this method is the limited raw material base of the enzyme, and the method is not industrial.
Также известен способ получения простагландинов из кораллов Карибского моря Plexawra Homomalla, но выделяют этим способом только производные простагландина А2, которые не получили широкого применения в медицине и ветеринарии, и поэтому необходима переработка их в ПГЕ2 и F2α[3]
Известен способ получения коллагеназы микробиологическим методом. В качестве продуцента используют Clostridium histolyticum, единственным недостатком которого является продукция летального α-токсина и гемолизина, что требует тщательной и дорогой очистки продукта или использования нетоксичных специально выведенных штаммов [4]
Известен способ получения липидов, обладающих хемотаксическим действием, состоящий в культивировании гриба Fusarium sambucinum штамма BKMF-842 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и фосфора, при аэрации воздухом, составляющей 0,8-1,2 л/л/мин, с последующим отделением биомассы и выделением целевого продукта [5]
Недостатком указанного способа является то, что культуральная жидкость, содержащая биологически активные вещества, не используется, что значительно снижает выход целевого продукта.Also known is a method of producing prostaglandins from corals of the Caribbean Plexawra Homomalla, but only derivatives of prostaglandin A 2 , which are not widely used in medicine and veterinary medicine, are isolated by this method, and therefore their processing in PGE 2 and F 2α is necessary [3]
A known method of producing collagenase microbiological method. As a producer, Clostridium histolyticum is used, the only drawback of which is the production of lethal α-toxin and hemolysin, which requires careful and expensive cleaning of the product or the use of non-toxic specially derived strains [4]
A known method of producing lipids with a chemotactic effect, consisting in the cultivation of the fungus Fusarium sambucinum strain BKMF-842 in a nutrient medium containing sources of carbon, nitrogen and phosphorus, with aeration by air, comprising 0.8-1.2 l / l / min, s subsequent separation of biomass and the selection of the target product [5]
The disadvantage of this method is that the culture fluid containing biologically active substances is not used, which significantly reduces the yield of the target product.
Целью изобретения является увеличение выхода целевых продуктов. The aim of the invention is to increase the yield of target products.
Это достигается тем, что в качестве продуцента используют гриб Fusarium sambucinum штамм BKMF 3051 D, который выращивают на питательной среде следующего состава, г/л: меласса 20-30; сахароза 20-25; аммоний азотнокислый 3-4; калий фосфорнокислый однозамещенный 2-5, при температуре 26оС с перемешиванием мешалкой со скоростью 210 об/мин, аэрацией 1 л/л/мин в течение 32-72 ч. По окончании роста гриба биомассу отделяют от культуральной жидкости, которую стабилизируют добавлением 7% по объему этилового спирта и получают продукт следующего состава, мг/л: фермент с коллагеназной активностью 100-300; фосфолипиды 8-12; простагландин Е2 и его эфиры 2-5; простагландин F2α и его эфиры 1-6.This is achieved by the fact that the producer uses the fungus Fusarium sambucinum strain BKMF 3051 D, which is grown on a nutrient medium of the following composition, g / l: molasses 20-30; sucrose 20-25; ammonium nitrate 3-4; potassium dihydrogen phosphate 2.5, at 26 ° C with stirring with a stirrer at a speed of 210 rev / min, aeration 1 l / l / min for 32-72 hours. After completion of growth of the fungus biomass is separated from the culture liquid, which is stabilized by the addition of 7 % by volume of ethyl alcohol and get a product of the following composition, mg / l: enzyme with collagenase activity of 100-300; phospholipids 8-12; prostaglandin E 2 and its esters 2-5; prostaglandin F 2α and its esters 1-6.
Биомассу инкубируют в среде с этанолом четыре раза последовательно, извлекая биологически активные вещества органическими растворителями. Биологически активные вещества, извлеченные из биомассы, растворяют в этиловом спирте или масле (парфюмерном, подсолнечном и т.д.) до следующей концентрации биологически активных веществ, простагландин Е2 и его эфиры 0,04-0,1; простагландин F2α и его эфиры 0,03-0,07; фосфолипиды 1,5-3; каротиноиды 0,01-0,03.Biomass is incubated in an environment with ethanol four times in a row, extracting biologically active substances with organic solvents. Biologically active substances extracted from biomass are dissolved in ethanol or oil (perfume, sunflower, etc.) to the next concentration of biologically active substances, prostaglandin E 2 and its esters 0.04-0.1; prostaglandin F 2α and its esters 0.03-0.07; phospholipids 1.5-3; carotenoids 0.01-0.03.
Гриб Fusarium sambucin штамм BKMF 3051 D депонирован Всесоюзной коллекцией микроорганизмов ИБФМ АН СССР. The fungus Fusarium sambucin strain BKMF 3051 D was deposited by the All-Union Collection of Microorganisms IBPM AS USSR.
Использование штамма BKMF 3051 D гриба Fusarium sambucinum и использование не только биомассы гриба, но и культуральной жидкости для получения биологически активных веществ позволяет значительно увеличить выход целевого продукта. Это позволяет сделать вывод, что заявленное техническое решение является новым, соответствует изобретательскому уровню, а значит, и критерию "Существенные отличия". The use of strain BKMF 3051 D of the fungus Fusarium sambucinum and the use of not only the biomass of the fungus, but also the culture fluid to obtain biologically active substances can significantly increase the yield of the target product. This allows us to conclude that the claimed technical solution is new, meets the inventive step, and therefore the criterion of "Significant differences".
Сущность изобретения состоит в том, что гриб Fusarium sambuc. BKMF 3051 D выращивают в ферментере на среде с мелассой, сахарозой, аммонием азотнокислым, калием фосфорнокислым однозамещенным при температуре 26оС с перемешиванием мешалкой со скоростью 210 об/мин, аэрацией 1 л/л/мин в течение 32-72 ч. Затем биомассу и культуральную жидкость разделяют путем фильтрования на нутч-фильтре. Культуральную жидкость водный экстракт стабилизируют добавлением 7% по объему этилового спирта и получают продукт, содержащий коллагеназу, фосфолипиды, простагландины Е2 и F2α.The essence of the invention lies in the fact that the fungus Fusarium sambuc. BKMF D 3051 is grown in a fermentor on a medium containing molasses, saccharose, ammonium nitrate, potassium phosphate monosubstituted at 26 ° C with stirring with a stirrer at a speed of 210 rev / min, aeration 1 l / l / min for 32-72 h. The biomass and the culture liquid is separated by filtration on a suction filter. The culture fluid aqueous extract is stabilized by adding 7% by volume of ethyl alcohol to obtain a product containing collagenase, phospholipids, prostaglandins E 2 and F 2α .
Биомассу смешивают с 96% -ным этиловым спиртом в соотношении 1:1,5 (масса/объем) и выдерживают при комнатной температуре в течение 48 ч. Смесь фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме до 1/7 от начального объема при температуре не выше 45оС. Водно-спиртовый остаток подкисляют 2 н. соляной кислотой до рН 4,0-4,5 и экстрагируют хлороформом 3 раза. Хлороформные экстракты объединяют и упаривают в вакууме досуха при температуре 40-45оС. Остаток, содержащий БАВ, растворяют в 96%-ном этиловом спирте в соотношении 1:5 (масса/объем) и хранят в холодильнике от 0 до 5оС. Биомассу после первой экстракции еще три раза последовательно инкубируют в среде с 82%-ным этанолом в соотношении 1:2 в течение 7 сут. извлекая БАВ органическими растворителями, как описано выше. Спиртовые растворы БАВ объединяют и анализируют на их количественное содержание.The biomass is mixed with 96% ethanol in a ratio of 1: 1.5 (mass / volume) and kept at room temperature for 48 hours. The mixture is filtered, the filtrate is evaporated in vacuo to 1/7 of the initial volume at a temperature not exceeding 45 about C. The water-alcohol residue is acidified with 2 N. hydrochloric acid to a pH of 4.0-4.5 and extracted with chloroform 3 times. The chloroform extracts were combined and evaporated to dryness in vacuo at 40-45 C. The residue, containing biologically active substances, dissolved in 96% ethyl alcohol in a ratio of 1: 5 (w / v) and stored in a refrigerator of 0 to 5 o C. After the first extraction, the biomass is further three times sequentially incubated in a medium with 82% ethanol in a ratio of 1: 2 for 7 days. removing biologically active substances with organic solvents, as described above. Alcohol solutions of biologically active substances are combined and analyzed for their quantitative content.
Методом газожидкостной хроматографии качественно и количественно определяют содержание простагландинов Е2 и F2α. Анализ проводят на хроматографе Газхром 1109 с модифицированным детектором электронного захвата (ионизационно-резонансным). Используют стеклянную колонку длиной 2 м, диаметром 3 мм, заполненную силанизированным сорбентом хроматоном NAW-DMCS c нанесенной жидкой фазой 1% SE-30. Условия анализа: температура колонки 210оС, температура детектора 230оС, температура испарителя 275оС, скорость газа-носителя (азот особой чистоты) 30-35 мл/мин. Время удерживания для ПГF2α 23 мин и для ПГВ2 7,5 мин. Количество простагландинов Е2 и F2α рассчитывают по площади пиков по сравнению со стандартными образцами (Тимофеев Ю.М. Брагинцева Л.М. Устынюк Т.К. Степанов С.В. Фармация, 1983, N 2, с. 28).The method of gas-liquid chromatography qualitatively and quantitatively determine the content of prostaglandins E 2 and F 2α . The analysis is carried out on a Gaschrome 1109 chromatograph with a modified electron capture detector (ion resonance). Use a glass column 2 m long, 3 mm in diameter, filled with silanized sorbent chromaton NAW-DMCS with applied liquid phase 1% SE-30. The analysis conditions: column temperature 210 ° C, detector temperature 230 ° C, vaporizer temperature of 275 ° C, carrier gas speed (high purity nitrogen) of 30-35 ml / min. The retention time for PGF 2α is 23 min and for PGV 2 7.5 min. The number of prostaglandins E 2 and F 2α is calculated by peak area compared to standard samples (Timofeev Yu.M. Bragintseva L.M. Ustynyuk T.K. Stepanov S.V. Pharmacy, 1983, No. 2, p. 28).
Определение количества ПГЕ2 проводят также по методу Bygdeman путем щелочной изомеризации в ПГВ2 и измерением оптической плотности методом УФ-спектрофотометрии на спектрофотометре при длине волны 278 нм и расчете по калибровочной кривой (M.Bygdeman, B.Samuels son. Clin. Chim. Acta, 1964, v. 10, p. 566).The determination of the amount of PGE 2 is also carried out by the Bygdeman method by alkaline isomerization in PGV 2 and by measuring the optical density by UV spectrophotometry on a spectrophotometer at a wavelength of 278 nm and calculated by a calibration curve (M. Bygdeman, B. Samuels son. Clin. Chim. Acta , 1964, v. 10, p. 566).
Строение простагландинов подтверждают методом хромато-масс-спектрометрии на масс-спектрометре "Hewlett Packard 5985 B" c квадрупольным масс-анализатором в режиме непрерывного сканирования при ионизации электронным ударом с энергией 20 эВ. Условия хроматографии: стеклянная капиллярная колонка длиной 25 м, диаметром 0,25 мм, покрытая неподвижной метилсиликоновой фазой СР-СИЛ-5. Температура 180-320оС, 5оС/мин. Скорость газа-носителя (гелия) 36 мл/мин. Идентификацию хроматографических пиков осуществляют по времени удерживания и характерным фрагментам в масс-спектрах, используя каталог (ESA/BXK Mase Spectral Date Base, Washington). ПГЕ2 время удерживания 16,7 мин; ПГF2α 16,3 мин.The structure of prostaglandins is confirmed by chromatography-mass spectrometry on a Hewlett Packard 5985 B mass spectrometer with a quadrupole mass analyzer in the continuous scanning mode by electron impact ionization with an energy of 20 eV. Chromatography conditions: a glass capillary column 25 m long, 0.25 mm in diameter, coated with a fixed methylsilicone phase SR-SIL-5. Temperature 180-320 о С, 5 о С / min. The speed of the carrier gas (helium) 36 ml / min. Chromatographic peaks are identified by retention time and representative fragments in the mass spectra using a catalog (ESA / BXK Mase Spectral Date Base, Washington). PGE 2 retention time 16.7 min; PGF 2α 16.3 min.
Масс-спектры: ПГЕ2 m/e: 510 M+, 495 (M-15), 439 (M-71), 420 (M-90), 349 (M-71-90), 225, 205, 199, 173.Mass spectra: PGE 2 m / e: 510 M + , 495 (M-15), 439 (M-71), 420 (M-90), 349 (M-71-90), 225, 205, 199, 173.
ПГF2α m/e: 584 M+, 569 (М-15), 513 (М-71), 494 (М-90), 423 (М-71-90), 333 (М-2х90), 243, 217, 191, 173.PGF 2α m / e: 584 M + , 569 (M-15), 513 (M-71), 494 (M-90), 423 (M-71-90), 333 (M-2x90), 243, 217 , 191, 173.
Количество фермента с коллагеназной активностью определяют спектрофотометрическим методом по поглощению при длине волны 590 нм, расчет проводят по калибровочной кривой (Anal. Biochem. 1986, v. 159, N 2, р. 390-395). The amount of enzyme with collagenase activity is determined spectrophotometrically by absorption at a wavelength of 590 nm, the calculation is carried out according to a calibration curve (Anal. Biochem. 1986, v. 159, N 2, p. 390-395).
Количественное определение фосфолипидов проводят методом УФ-спектрофотометрии, измеряя величину оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 820 нм, расчет проводят по калибровочной кривой и формуле
X 
А количество фосфора, найденное по графику, для стандартного образца, г;
В навеска препарата, г;
100, 100, 20 коэффициенты, учитывающие степень разведения образца.Quantitative determination of phospholipids is carried out by UV spectrophotometry, measuring the optical density on a spectrophotometer at a wavelength of 820 nm, the calculation is carried out according to the calibration curve and the formula
X
And the amount of phosphorus found according to the schedule for a standard sample, g;
In the sample, g;
100, 100, 20 coefficients taking into account the degree of dilution of the sample.
Для определения содержания фосфолипидов значение содержания фосфора умножают на 25. Коэффициент 25 учитывает соотношение атомного веса фосфора и молекулярного веса фосфолипидов (Еремин В.А. Позняков С.П. Быстрый колориметрический метод количественного определения фосфолипидов. Прикладная биохимия и микробиология, 1989, N 6, с. 832-842). To determine the phospholipid content, the phosphorus content is multiplied by 25. A coefficient of 25 takes into account the ratio of the atomic weight of phosphorus and the molecular weight of phospholipids (Eremin V.A. Poznyakov S.P. Fast colorimetric method for the quantitative determination of phospholipids. Applied Biochemistry and Microbiology, 1989, N 6, p. 832-842).
Каротиноиды определяют после выделения их из целевого продукта препаративной ТСХ на силикагеле в системе: петролейный эфир-диэтиловый эфир-уксусная кислота 80: 20:1. Зону с Р 0,78-0,80 элюируют 2 мл хлороформа. К элюату добавляют 2 мл 33%-ного раствора хлорида сурьмы, 0,3 мл уксусного ангидрида и определяют оптическую плотность полученного окрашенного раствора при длине волны 620 нм (Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. М. Медицина, 1976, с. 114). Carotenoids are determined after isolating them from the target product by preparative TLC on silica gel in the system: petroleum ether-diethyl ether-acetic acid 80: 20: 1. A zone with P 0.78-0.80 was eluted with 2 ml of chloroform. To the eluate add 2 ml of a 33% solution of antimony chloride, 0.3 ml of acetic anhydride and determine the optical density of the obtained colored solution at a wavelength of 620 nm (Guide to laboratory studies in biological chemistry. M. Medicine, 1976, p. 114) .
Для выращивания гриба Fusarium sambucinum были использованы питательные среды следующих составов, г/л: среда 1: меласса 20; глицерин 2,0; аммоний азотнокислый 3,5; магний сернокислый 0,2; калий хлористый 0,3; натрий фосфорнокислый однозамещенный 0,8; кобальт хлористый 0,02; среда 2: cахароза 20; пептон 3,0; калий фосфорнокислый однозамещенный 0,6; калия фосфат двузамещенный 0,4; натрия хлорид 0,5; магния сульфат 0,5; тиамин 0,001; среда 3: крахмал 10; глицерин 3,5; мочевина 2,5; натрий фосфорнокислый однозамещенный 0,7; калий хлористый 0,5; кобальт хлористый 0,03; среда 4: меласса 20; сахароза 20; аммоний азотнокислый 3,0; калий фосфорнокислый однозамещенный 2,0. For the cultivation of the fungus Fusarium sambucinum, the following nutrient media were used, g / l: medium 1: molasses 20; glycerol 2.0; ammonium nitrate 3.5; magnesium sulfate 0.2; potassium chloride 0.3; monosubstituted sodium phosphate 0.8; cobalt chloride 0.02; Wednesday 2: sucrose 20; peptone 3.0; monosubstituted potassium phosphate 0.6; potassium phosphate disubstituted 0.4; sodium chloride 0.5; magnesium sulfate 0.5; thiamine 0.001; Wednesday 3: starch 10; glycerin 3,5; urea 2.5; monosubstituted sodium phosphate 0.7; potassium chloride 0.5; cobalt chloride 0.03; Wednesday 4: molasses 20; sucrose 20; ammonium nitrate 3.0; potassium phosphate monosubstituted 2.0.
П р и м е р 1 (прототип). PRI me R 1 (prototype).
Гриб Fusarium sambucinum штамм BKMF 842 выращивают в ферментаторе объемом 100 л на среде 4 при температуре 26оС с перемешиванием мешалкой со скоростью 210 об/мин и при аэрации 1 л/л/мин в течение 72 ч. По окончании роста гриба биомассу отделяют от водного раствора на нутч-фильтре. Получают 7 кг биомассы влажности 85% и 60 кг водного экстракта.The fungus Fusarium sambucinum strain BKMF 842 are grown in a fermenter volume of 100 l medium 4 at 26 ° C with the agitator stirring at 210 rev / min and aeration of 1 liter / liter / min for 72 hours. At the end of growth fungal biomass was separated from water solution on the suction filter. Get 7 kg of biomass moisture content of 85% and 60 kg of water extract.
К 60 кг водного экстракта добавляют для стабилизации 4,2 кг этилового спирта. Проводят анализ на содержание БАВ. Получают, мг/л: фермент с коллагеназной актив- ностью 89 ± 16; фосфолипиды 13,2 ± 2,3; простагландин Е2 и его эфиры 0,3 ± 0,06; простагландин F2α и его эфиры 0,21 ± 0,04. Общий выход БАВ 102,71 мг/л х 60 л6162,6 мг.To 60 kg of the aqueous extract, 4.2 kg of ethyl alcohol are added to stabilize. Analyze the content of biologically active substances. Receive, mg / l: enzyme with collagenase activity 89 ± 16; phospholipids 13.2 ± 2.3; prostaglandin E 2 and its esters 0.3 ± 0.06; prostaglandin F 2α and its esters 0.21 ± 0.04. The total yield of biologically active substances is 102.71 mg / L x 60 L, 6162.6 mg.
7 кг измельченной биомассы заливают 70,5 кг этанола 96% перемешивают и оставляют на сутки, затем отфильтровывают на нутч-фильтре. Биомассу заливают 82% -ным этанолом в соотношении 1:2 и оставляют настаиваться при комнатной температуре в течение 7 сут. затем отфильтровывают на нутч-фильтре. Эту операцию повторяют три раза. Все полученные четыре экстракта последовательно обрабатывают следующим образом: упаривают в вакууме при температуре 40оС до 1/7 первоначального объема, водно-спиртовый остаток подкисляют 2 н. соляной кислотой до рН 4,0-4,2 и экстрагируют хлороформом три раза по 1/10 от объема, хлороформные экстракты объединяют, упаривают в вакууме досуха при температуре 40оС, остаток растворяют в 1 л этанола и анализируют на содержание БАВ. Получают раствор со следующим содержанием БАВ, мг/л: простагландин Е2 и его эфиры 3,15 ± 0,26; простагландин F2α и его эфиры 1,6 ± 0,31; фосфолипиды 205 ± 51; каротиноиды 3,21 ± 0,17. Общий выход БАВ 212,96 мг. Суммарный выход БАВ в примере 1 составил 6,37 г.7 kg of crushed biomass is poured into 70.5 kg of ethanol, 96% is stirred and left for a day, then filtered on a suction filter. The biomass is poured with 82% ethanol in a ratio of 1: 2 and left to infuse at room temperature for 7 days. then filtered on a suction filter. This operation is repeated three times. All four resulting extract is treated sequentially as follows: evaporate in vacuo at 40 ° C until 1/7 of the initial volume, water and an alcohol residue acidified with 2N. hydrochloric acid to pH 4.0-4.2 and extracted with chloroform three times with 1/10 of the volume, the chloroform extracts were combined and evaporated in vacuo to dryness at 40 ° C, the residue was dissolved in 1 l of ethanol and analyzed for the presence of biologically active substances. Get a solution with the following content of biologically active substances, mg / l: prostaglandin E 2 and its esters 3.15 ± 0.26; prostaglandin F 2α and its esters 1.6 ± 0.31; phospholipids 205 ± 51; carotenoids 3.21 ± 0.17. The total yield of biologically active substances 212.96 mg. The total yield of biologically active substances in example 1 was 6.37 g.
П р и м е р 2. Выращивают гриб F.S. штамм BKMF 3051 D на жидкой питательной среде 4 в ферментере объемом 100 л при температуре 26оС с перемешиванием мешалкой со скоростью 210 об/мин и при аэрации 1 л/л/мин в течение 72 ч. Получают продукты, как описано в примере 1.PRI me R 2. Grow the fungus FS strain BKMF 3051 D on a liquid nutrient medium 4 in a fermenter with a volume of 100 l at a temperature of 26 about With stirring with a stirrer at a speed of 210 rpm and with aeration 1 l / l / min for 72 hours. Get the products as described in example 1.
Получают 64,2 кг водного экстракта БАВ со следующим содержанием веществ, мг/л: фермент с коллагеназной активностью 200 ± 83; фосфолипиды 9,8 ± 3,1; простагландин Е2 и его эфиры 2,8 ± 0,72; простагландин F2α и его эфиры 3,7 ± 0,86. Общий выход БАВ 216,3 мг/л х 60 л 12,98 г.Get 64.2 kg of an aqueous extract of biologically active substances with the following content of substances, mg / l: enzyme with collagenase activity 200 ± 83; phospholipids 9.8 ± 3.1; prostaglandin E 2 and its esters 2.8 ± 0.72; prostaglandin F 2α and its esters 3.7 ± 0.86. The total yield of biologically active substances 216.3 mg / l x 60 l 12.98 g.
Получают 1 л спиртового экстракта БАВ со следующим содержанием веществ, мг/л: простагландин Е2 и его эфиры 9,1 ± 2,85; простагландин F2α и его эфиры 6,8 ± 1,57; фосфолипиды 434 ± 95; каротиноиды 5,6 ± 0,55. Общий выход БАВ 455,5 мг. Суммарный выход БАВ в примере 2 составил 13,43 г.Get 1 l of alcoholic extract of biologically active substances with the following content of substances, mg / l: prostaglandin E 2 and its esters 9.1 ± 2.85; prostaglandin F 2α and its esters 6.8 ± 1.57; phospholipids 434 ± 95; carotenoids 5.6 ± 0.55. The total yield of biologically active substances 455.5 mg. The total yield of biologically active substances in example 2 was 13.43 g.
П р и м е р 3. Гриб F.S. штамм BKMF 3051 D выращивают в ферментере объемом 100 л на жидкой питательной среде 2, при температуре 26оС с перемешиванием мешалкой со скоростью 210 об/мин и при аэрации 1 л/л/мин в течение 42 ч. Получают продукты, как описано в примере 1.EXAMPLE EXAMPLE 3. Fungus strain FS 3051 D BKMF grown in a fermenter volume of 100 liters of liquid nutrient medium 2 at 26 ° C with stirring with a stirrer at a speed of 210 rev / min and aerated at 1 liter / liter / min within 42 hours. Receive the products as described in example 1.
Получают 64,2 кг водного экстракта со следующим содержанием БАВ, мг/л: фермент с коллагеназной активностью 164 ± 82; фосфолипиды 10,2 ± 3,1; простагландин Е2 и его эфиры 0,89 ± 0,37; простагландин F2α и его эфиры 0,47 ± 0,23. Общий выход БАВ 10,53 г.Get 64.2 kg of an aqueous extract with the following content of biologically active substances, mg / l: enzyme with collagenase activity 164 ± 82; phospholipids 10.2 ± 3.1; prostaglandin E 2 and its esters 0.89 ± 0.37; prostaglandin F 2α and its esters 0.47 ± 0.23. The total yield of biologically active substances 10.53 g.
Получают 1 л спиртового экстракта БАВ со следующим содержанием веществ, мг/л: простагландин Е2 и его эфиры 4,7 ± 0,83; простагландин F2α и его эфиры 2,9 ± 0,45; фосфолипиды 250 ± 68; каротиноиды 4,8 ± 0,42. Общий выход БАВ 0,26 г. Суммарный выход БАВ в примере 3 10,79 г.Get 1 l of alcoholic extract of biologically active substances with the following content of substances, mg / l: prostaglandin E 2 and its esters 4.7 ± 0.83; prostaglandin F 2α and its esters 2.9 ± 0.45; phospholipids 250 ± 68; carotenoids 4.8 ± 0.42. The total yield of biologically active substances 0.26 g. The total yield of biologically active substances in example 3 10.79,
П р и м е р 4. Гриб F.S. штамм BKMF 3051 D выращивают в ферментаторе объемом 100 л на жидкой питательной среде 1, содержащей, г/л: меласса 20; глицерин 2,0; аммоний азотнокислый 3,5; магний сернокислый 0,2; калий хлористый 0,3; натрий фосфорнокислый однозамещенный 0,8 и кобальт хлористый 0,02, при температуре 26оС с перемешиванием мешалкой со скоростью 210 об/мин и при аэрации воздухом 1 л/л/мин в течение 48 ч. По окончании роста гриба биомассу отделяют от водного раствора на нутч-фильтре. Получают 7 кг биомассы 85%-ной влажности и 60 кг водного экстракта.PRI me R 4. Mushroom FS strain BKMF 3051 D grown in a fermenter with a volume of 100 l in a liquid nutrient medium 1 containing, g / l: molasses 20; glycerol 2.0; ammonium nitrate 3.5; magnesium sulfate 0.2; potassium chloride 0.3; sodium phosphate monobasic 0.8 and 0.02 cobalt chloride, at 26 ° C with stirring with a stirrer at a speed of 210 rev / min and aerated at 1 liter air / liter / min for 48 hours. After completion of growth of the fungus biomass was separated from the aqueous solution on the suction filter. Get 7 kg of biomass 85% moisture and 60 kg of water extract.
К 60 кг водного экстракта добавляют для стабилизации 4,2 кг этилового спирта. Проводят анализ на содержание БАВ. Получают, мг/л: фермент с коллагеназной актив- ностью 175 ± 79; фосфолипиды 11,0 ± 3,5; простагландин Е2 и его эфиры 1,92 ± 0,43; простагландин F2α и его эфиры 0,98 ± 0,34. Общий выход БАВ 11,33 г.To 60 kg of the aqueous extract, 4.2 kg of ethyl alcohol are added to stabilize. Analyze the content of biologically active substances. Receive, mg / l: enzyme with collagenase activity 175 ± 79; phospholipids 11.0 ± 3.5; prostaglandin E 2 and its esters 1.92 ± 0.43; prostaglandin F 2α and its esters 0.98 ± 0.34. The total yield of biologically active substances 11.33 g.
Из 7 кг измельченной биомассы выделяют БАВ, как описано в примере 1. Получают раствор со следующим содержанием БАВ, мг/л: простагландин Е2и его эфиры 6,5 ± 1,29; простагландин F2α и его эфиры 3,2-0,91; фосфолипиды 288-85; каротиноиды 5,0-0,35. Общий выход БАВ 0,303 г. Суммарный выход БАВ в примере 4 11,633 г.A biologically active substance is isolated from 7 kg of ground biomass as described in Example 1. A solution is obtained with the following biologically active substance, mg / L: prostaglandin E 2 and its esters 6.5 ± 1.29; prostaglandin F 2α and its esters 3.2-0.91; phospholipids 288-85; carotenoids 5.0-0.35. The total yield of biologically active substances is 0.303 g. The total yield of biologically active substances in example 4 is 11.633.
П р и м е р 5. Гриб F. S. штамм BKMF 3051 D выращивают в ферментаторе объемом 100 л на жидкой питательной среде следующего состава, г/л: меласса 30; сахароза 25; аммоний азотнокислый 4; калий фосфорнокислый однозамещенный 5; в условиях, описанных в примере 1. Получают целевые продукты, как описано в примере 1. Получают следующее содержание БАВ в водном экстракте, мг/л: фермент с коллагеназной активностью 300 ± 96; фосфолипиды 12 ± 3,0; простагландин Е2 и его эфиры 5,0 ± 0,25; простагландин F2α и его эфиры 6,0 ± 0,27. Общий выход БАВ 19,38 г.PRI me R 5. Mushroom FS strain BKMF 3051 D grown in a fermenter with a volume of 100 l in a liquid nutrient medium of the following composition, g / l: molasses 30; sucrose 25; ammonium nitrate 4; monosubstituted potassium phosphate 5; under the conditions described in example 1. Get the target products, as described in example 1. Receive the following content of biologically active substances in the aqueous extract, mg / l: enzyme with collagenase activity 300 ± 96; phospholipids 12 ± 3.0; prostaglandin E 2 and its esters 5.0 ± 0.25; prostaglandin F 2α and its esters 6.0 ± 0.27. The total yield of biologically active substances 19.38 g.
Получают следующее содержание БАВ в спиртовом экстракте, мг/л: простагландин Е2 и его эфиры 10,0 ± 0,1; простагландин F2α и его эфиры 7,0 ± 0,9; фосфолипиды 300 ± 71; каротиноиды 3,0 ± 0,15. Общий выход БАВ 0,32 г. Суммарный выход БАВ в примере 5 19,7 г.Get the following content of biologically active substances in the alcohol extract, mg / l: prostaglandin E 2 and its esters 10.0 ± 0.1; prostaglandin F 2α and its esters 7.0 ± 0.9; phospholipids 300 ± 71; carotenoids 3.0 ± 0.15. The total yield of biologically active substances is 0.32 g. The total yield of biologically active substances in example 5 is 19.7 g.
П р и м е р 6. Гриб F. S. штамм BKMF 3051 D выращивают, как описано в примере 1, на питательной среде следующего состава, г/л: меласса 25; сахароза 22,5; аммоний азотнокислый 3,5; калий фосфорнокислый однозамещенный 3,5. Целевые продукты получают, как описано в примере 1. Выращивание проводили в течение 48 ч. PRI me R 6. Mushroom F. S. strain BKMF 3051 D is grown, as described in example 1, on a nutrient medium of the following composition, g / l: molasses 25; sucrose 22.5; ammonium nitrate 3.5; monosubstituted potassium phosphate 3.5. The desired products are obtained as described in example 1. Cultivation was carried out for 48 hours.
Получают следующее содержание БАВ в водном экстракте, мг/л: фермент с коллагеназной активностью 100; фосфолипиды 10; простаглан-Е2 и его эфиры 5,0; простагландин F2α и его эфиры 3,0. Общий выход БАВ 7,08 г.Get the following content of biologically active substances in the aqueous extract, mg / l: enzyme with collagenase activity of 100; phospholipids 10; prostaglan-E 2 and its esters 5.0; prostaglandin F 2α and its esters 3.0. The total yield of biologically active substances 7.08 g.
Получают следующее содержание БАВ в спиртовом экстракте, мг/л: простагландин Е2 и его эфиры 10,0; простагландин F2α и его эфиры 5,0; фосфолипиды 200,1; каротиноиды 2,0. Общий выход БАВ 0,22 г. Суммарный выход БАВ в примере 6 7,3 г.Get the following content of biologically active substances in the alcohol extract, mg / l: prostaglandin E 2 and its esters 10.0; prostaglandin F 2α and its esters 5.0; phospholipids 200.1; carotenoids 2.0. The total yield of biologically active substances is 0.22 g. The total yield of biologically active substances in example 6 is 7.3 g.
Claims (2)
Простогландин Е2 и его эфиры - 0,04 - 0,1
Простагландин E2α и его эфиры - 0,03 - 0,07
Фосфолипиды - 1,5 - 3,0
Каротиноиды - 0,01 - 0,03
а водный экстракт используют как источник фермента с коллагеназной активностью 100 - 300 мг/л, фосфолипидов 8 - 12 мг/л, простагландина Е2 и его эфиров 2 - 5 мг/л и простагландина E2α и его эфиров 1 - 6 мг/л.1. METHOD FOR PRODUCING BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES, including cultivating Fusarium sambucinum fungus in a liquid nutrient medium containing carbon, nitrogen and phosphorus sources at a temperature of 26 o C and aeration with air in an amount of 0.8 - 1.2 l / min, followed by separation of the culture medium biomass and aqueous extract, characterized in that, in order to increase the yield of the target product, Fusarium sambucinum strain BKMF 3051D is used as producer, cultivation is carried out on a nutrient medium of the following composition: molasses 20-30 g / l, sucrose 20-25 g / l, and mmonium nitrate 3 - 4 g / l, potassium phosphate monosubstituted 2 - 5 g / l, water - the rest, the separated biomass is incubated with ethyl alcohol in four stages with the release of biologically active substances containing mainly prostaglandin E 2 and its esters, prostaglandin E 2α and its esters, phospholipids and carotenoids, followed by their dissolution in ethanol or oil to the following concentration, wt.%:
Prostoglandin E 2 and its esters - 0.04 - 0.1
Prostaglandin E 2α and its esters - 0.03 - 0.07
Phospholipids - 1.5 - 3.0
Carotenoids - 0.01 - 0.03
and the aqueous extract is used as a source of enzyme with collagenase activity of 100-300 mg / l, phospholipids 8-12 mg / l, prostaglandin E 2 and its esters 2-5 mg / l and prostaglandin E 2α and its esters 1-6 mg / l .
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5055932 RU2054484C1 (en) | 1992-07-23 | 1992-07-23 | Method of preparing biologically active substances |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU5055932 RU2054484C1 (en) | 1992-07-23 | 1992-07-23 | Method of preparing biologically active substances |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2054484C1 true RU2054484C1 (en) | 1996-02-20 |
Family
ID=21610219
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU5055932 RU2054484C1 (en) | 1992-07-23 | 1992-07-23 | Method of preparing biologically active substances |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2054484C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007027121A1 (en) * | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostyu Gella-Pharma | Biologically active milk-based food product |
| WO2007073235A1 (en) * | 2005-12-23 | 2007-06-28 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostyu 'gella-Pharma' | Method for producing a biologically active product exhibiting a hepatoprotective action |
| RU2511427C1 (en) * | 2012-09-10 | 2014-04-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный машиностроительный университет (МАМИ)" | Strain fusarium sambucinum - producent of fungal protein biomass |
-
1992
- 1992-07-23 RU SU5055932 patent/RU2054484C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 1. Авторское свидетельство СССР N 1045632, кл. C 12P 7/64, 1981. 2. Патент США N 3069322, кл. C 12P 7/64, 82, 1983. 3. Патент США N 3888904, кл. C 12P 7/64, 85. 4. Журнал гигиены, эпидемиологии, микробиологии и иммунологии, т.18, N 4, 1974, с.477-482. 5. Авторское свидетельство СССР N 1137104А, кл. C 12P 7/64, 1985. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007027121A1 (en) * | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostyu Gella-Pharma | Biologically active milk-based food product |
| WO2007073235A1 (en) * | 2005-12-23 | 2007-06-28 | Obschestvo S Ogranichennoi Otvetstvennostyu 'gella-Pharma' | Method for producing a biologically active product exhibiting a hepatoprotective action |
| RU2511427C1 (en) * | 2012-09-10 | 2014-04-10 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный машиностроительный университет (МАМИ)" | Strain fusarium sambucinum - producent of fungal protein biomass |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0533775B1 (en) | Labeled compounds for use in a diagnostic breath test | |
| US6558943B1 (en) | Method for propagating fungi using solid state fermentation | |
| Bailey et al. | Yeast sterol esters and their relationship to the growth of yeast | |
| Işik et al. | Comparison of the fatty acid composition of the freshwater fish larvae Tilapia zillii, the rotifer Brachionus calyciflorus, and the microalgae Scenedesmus abundans, Monoraphidium minitum and Chlorella vulgaris in the algae-rotifer-fish larvae food chains | |
| EP1402045B1 (en) | Method for producing g(g)-linolenic acids from a ciliate culture by adding suitable precursor molecules to said culture medium | |
| PETERSEN et al. | Production of cladospirone bisepoxide, a new fungal metabolite | |
| RU2054484C1 (en) | Method of preparing biologically active substances | |
| Yi et al. | Metabolic formation of dodecanedioic acid from n-dodecane by a mutant of Candida tropicalis | |
| IIZUKA et al. | MICROBIOLOGICAL STUDIES ON PETROLEUM AND NATURAL GAS IX. CANDIDAL OXIDATION OF DECANE | |
| CA2331471C (en) | Compounds with an antioxidant activity, compositions useful as food integrators containing them and process for their preparation | |
| RU2115732C1 (en) | Strain mucor circinelloides varietas lusitanicus - a producer of vitamin f and method of vitamin f producing | |
| Ramesha et al. | Metabolism of platelet-activating factor by arachidonic acid-depleted rat polymorphonuclear leukocytes. | |
| US4249008A (en) | 3,4-Dihydro-4-hydroxy-5-(3-hydroxy-2-pyridinyl)-4-methyl-2H-pyrrole-2-carboxamide | |
| KAWAGUCHI et al. | Cyclization of 2, 3-oxidosqualene with microsomal fraction of Cephalosporium caerulens | |
| Awaya et al. | PREPARATION OF13C-AND 3H-LABELED CERULENIN AND BIOSYNTHESIS WITH13C-NMR | |
| Lilly et al. | The production of carotene by Phycomyces blakesleeanus | |
| Goodfellow et al. | Studies on squalene biosynthesis in Sarcophaga bullata larvae | |
| RU2054485C1 (en) | Method of uroporphyrin preparing | |
| Tatsuzawa et al. | Changes in fatty acid composition of Pavlova lutheri (Prymnesiophyceae) affected by culturing conditions | |
| Goodfellow et al. | Mevalonate biosynthesis in the fly, Sarcophaga bullata | |
| JPS61216696A (en) | Production of menaquinone-4 | |
| CN1584010A (en) | Process for producing Sporidiobolus ruineniae strains with improved coenzyme Q10 production | |
| SU1370134A1 (en) | Method of determining nitrogen monoxide separated by soil microorganisms | |
| Ajami | Approaches to the biosynthesis of the cecropia C18-Juvenile Hormone | |
| CN112626140A (en) | Efficient and rapid production process for biologically synthesizing jasmonic acid |