RU2051174C1 - Method for production of compounds ws 7622 a, b, c and/or d-inhibitors of human leucocyteelastase or their pharmaceutically available salts - Google Patents

Method for production of compounds ws 7622 a, b, c and/or d-inhibitors of human leucocyteelastase or their pharmaceutically available salts Download PDF

Info

Publication number
RU2051174C1
RU2051174C1 SU904743493A SU4743493A RU2051174C1 RU 2051174 C1 RU2051174 C1 RU 2051174C1 SU 904743493 A SU904743493 A SU 904743493A SU 4743493 A SU4743493 A SU 4743493A RU 2051174 C1 RU2051174 C1 RU 2051174C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
max
meoh
methanol
substance
chloroform
Prior art date
Application number
SU904743493A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Хатанака Хироси
Езаки Масами
Тсудзии Ейсаку
Окамото Масанори
Сигематсу Нобухару
Окухара Масакуни
Такасе Сигехиро
Original Assignee
Фудзисава Фармасьютикал Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Фудзисава Фармасьютикал Ко., Лтд. filed Critical Фудзисава Фармасьютикал Ко., Лтд.
Application granted granted Critical
Publication of RU2051174C1 publication Critical patent/RU2051174C1/en

Links

Images

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts

Abstract

FIELD: pharmaceutical industry. SUBSTANCE: strain Streptomyces resistomycificus is cultivated in liquid culture medium. Desired materials WS 7622 A, B, C or D or their pharmaceutically available salts are then isolated of culture medium. EFFECT: improves efficiency of method. 12 dwg, 6 tbl

Description

Изобретение касается способа получения новых веществ под обозначением WS 7622А, В, С и D, а именно к новым веществам WS 7622А, В, С и D и их фармацевтически приемлемым солям, обладающим ингибирующим действием на лейкоцитэластазу человека, и способам их получения. The invention relates to a method for producing new substances under the designation WS 7622A, B, C and D, namely, to new substances WS 7622A, B, C and D and their pharmaceutically acceptable salts having an inhibitory effect on human leukocyte elastase, and methods for their preparation.

Вещества WS 7622А, В, С и D могут быть получены культивированием в питательной среде штаммов рода Streptomyces, продуцирующих вещества WS 7622А, В, С и D. Substances WS 7622A, B, C and D can be obtained by culturing in a culture medium strains of the genus Streptomyces producing substances WS 7622A, B, C and D.

Микроорганизм, который может быть использован для получения веществ WS 7622А, В, С и D, относится к продуцирующему эти вещества штамму, принадлежащему к роду Streptomyces, среди которых и недавно выделенный из образца почвы, собранной в Хиронохо, Фукушима-кен (Япония), штамм Streptomyсes resistomycificus N 7622. A microorganism that can be used to produce substances WS 7622A, B, C, and D refers to a strain producing these substances belonging to the genus Streptomyces, among which is a recently isolated soil sample collected in Hironoho, Fukushima-ken (Japan), strain Streptomyces resistomycificus N 7622.

Лиофилизованный образец недавно выделенного Streptomyces resistomycificus N 7622 первоначально депонирован при участии Международного депозитарного агентства согласно Будапештскому соглашению Исследовательским институтом ферментации, Агентством промышленных наук и технологии под регистрационным номеpом ГЕРМ ВР-2306 (дата депонирования 23 февраля 1989 г.), но затем этот штамм получил наименование Streptomyces resistomycificus N 7622. The lyophilized sample of the recently isolated Streptomyces resistomycificus N 7622 was originally deposited with the participation of the International Depository Agency under the Budapest Agreement by the Research Institute of Fermentation, the Agency for Industrial Sciences and Technology under the registration number GERM BP-2306 (date of deposit February 23, 1989), but then this strain was named Streptomyces resistomycificus N 7622.

Для Streptomyces resistomycificus характерны следующие морфологические, культуральные, биологические и физиологические показатели. (1) Морфологическая характеристика. The following morphological, cultural, biological, and physiological parameters are characteristic of Streptomyces resistomycificus. (1) Morphological characteristics.

Для таксономных исследований использованы известные методики. Known methods have been used for taxonomic studies.

Морфологические наблюдения проведены с помощью оптического и электронного микроскопа на культурах, выращенных при 30оС в течение 14 дн на овсяном агаре, солодовом агаре с дрожжевым экстрактом и крахмальном агаре с неорганическими солями.Morphological observations were made with an optical microscope and electron on cultures grown at 30 ° C for 14 days on oatmeal agar, malt extract agar, yeast starch agar and inorganic salts.

Вегетативный мицеллий развивается хорошо и без фрагментации. Воздушный мицеллий ветвится моноподиально и образует спиральные цепи и прямогибкие цепи спор с более чем 30 спорами на цепь. Споры имеют гладкую поверхность, овальную форму размером 0,7-0,9-0,8-1,1 мкм. Склеротичных гранул, спорангий и зооспор не наблюдается. (2) Культуральная характеристика. Vegetative mycelium develops well and without fragmentation. Aerial mycelium branches monopodially and forms spiral chains and straight flexible spore chains with more than 30 spores per chain. Spores have a smooth surface, oval in shape 0.7-0.9-0.8-1.1 microns in size. Sclerotic granules, sporangia and zoospores are not observed. (2) Cultural characteristic.

Культуральные показатели наблюдают на десяти типах сред. Cultural indicators are observed on ten types of media.

Инкубирование ведут 21 день при 30оС. Использованная в настоящем исследовании цветовая характеристика взята из Справочника цветности Mettmen. Полученные результаты приведены в табл. 1.Incubation are 21 days at 30 ° C was used in this study is taken from the color characteristic Handbook Mettmen color. The results are shown in table. 1.

Окраска воздушного мицеллия от голубовато-серой до коричневато-серой. Цвет обратной стороны при росте коричневый на солодовом агаре с дрожжевым экстрактом и овсяном агаре, фиолетово-коричневый на крахмальном агаре с неорганическими солями и серовато-красный на сахаронитратном агаре. Образуются меланоидные пигменты, других растворимых пигментов не обнаружено. (3) Тип клеточной стенки. The color of aerial micellium is from bluish-gray to brownish-gray. The color of the reverse side when growing is brown on malt agar with yeast extract and oat agar, purple-brown on starchy agar with inorganic salts and grayish red on sugar-nitrate agar. Melanoid pigments are formed, no other soluble pigments were found. (3) Type of cell wall.

Анализ клеточной стенки осуществлен по известным методикам. The analysis of the cell wall was carried out by known methods.

Анализ полного клеточного гидролизата штамма N 7622 показывает присутствие L, L-диаминопимелиновой кислоты. Соответственно клеточная стенка данного штамма классифицирована как принадлежащая типу I. (4) Биологические и физиологические свойства. Analysis of the complete cell hydrolyzate of strain N 7622 shows the presence of L, L-diaminopimelic acid. Accordingly, the cell wall of this strain is classified as belonging to type I. (4) Biological and physiological properties.

Физиологические свойства и усвоение источников углерода отражены соответственно в табл. 2 и 3. The physiological properties and assimilation of carbon sources are reflected in table. 2 and 3.

Температурный интервал для роста штамма задается на солодовом агаре с дрожжевым экстрактом с помощью инкубатора ТN-3, обеспечивающим температурный градиент. The temperature range for strain growth is set on malt agar with yeast extract using a TN-3 incubator, which provides a temperature gradient.

Усвоение источников углеродов определяют по известной методике. The assimilation of carbon sources is determined by a known method.

На основе морфологических и физиологических показателей штамм N 7622 отнесли к роду Streptomyces. Based on morphological and physiological parameters, strain N 7622 was assigned to the genus Streptomyces.

Так, проведено сравнение с разновидностями Streptomyces. В результате обнаружено, что данный штамм очень похож по своим показателям на Streptomyces resistomycificus IF012814. Т. е. найдено, что свойства обоих штаммов почти идентичны за исключением некоторых различий. So, a comparison is made with varieties of Streptomyces. As a result, it was found that this strain is very similar in performance to Streptomyces resistomycificus IF012814. That is, it was found that the properties of both strains are almost identical, with the exception of some differences.

В табл. 4 приведены различия между обоими штаммами. In the table. 4 shows the differences between both strains.

Следовательно, эти различия слишком незначительны для того, чтобы отнести штамм N 7622 к другому виду. Therefore, these differences are too insignificant to refer strain N 7622 to another species.

Таким образом, этот штамм идентифицирован как Streptomyces и обозначен как Streptomyces resistomycificus N 7622. Thus, this strain is identified as Streptomyces and designated as Streptomyces resistomycificus N 7622.

Вещества WS 7622А, В, С и D продуцируются при выращивании в питательной среде, содержащей ассимилирующие источники углерода и азота, в аэробных условиях (например, встряхиваемая культура, погруженная культура и т. п.), принадлежащих к роду Streptomyces штаммов, продуцирующих вещества WS 7622А, В, С и D. Среда может быть искусственной или натуральной. Substances WS 7622A, B, C and D are produced when grown in a nutrient medium containing assimilative sources of carbon and nitrogen under aerobic conditions (e.g., shake culture, submerged culture, etc.) belonging to the genus Streptomyces of the strains producing substances WS 7622A, B, C, and D. The medium may be artificial or natural.

Рекомендуемыми источниками углерода может служить глюкоза, манноза, глицерин, мелласа, крахмал, гидролизат крахмала и т. п. а рекомендуемыми источниками азота могут служить мясной экстракт, гидролизат казеина, пептон, мука из клейковины, кукурузная мука, мука из жмыха хлопковых семян, соевая мука, раствор после замачивания кукурузы, сухие дрожжи, фосфат аммония, сульфат аммония, мочевина и т. п. В среду могут быть также введены неорганические соли, такие как фосфаты, хлориды, и дpугие соли металлов, например динатрийгидрофосфат, калийдигидрофосфат, карбонат кальция, сульфат железа (II), сульфат магния, сульфат меди, сульфат цинка, хлорид марганца, хлорид магния и т. д. Если в ходе ферментации происходит обильное пенообразование, в среду в приемлемых количествах может быть добавлено пеногасящее средство, такое как растительные масла, например соевое масло, льняное масло и т. д. высшие спирты, например октадеканол. Recommended carbon sources include glucose, mannose, glycerin, mellas, starch, starch hydrolyzate, etc. The recommended nitrogen sources include meat extract, casein hydrolyzate, peptone, gluten flour, corn flour, cottonseed meal, soybean flour, solution after soaking corn, dry yeast, ammonium phosphate, ammonium sulfate, urea, etc. Inorganic salts, such as phosphates, chlorides, and other metal salts, such as disodium hydrogen phosphate, potassium dihydrof, can also be introduced osfate, calcium carbonate, ferrous (II) sulfate, magnesium sulfate, copper sulfate, zinc sulfate, manganese chloride, magnesium chloride, etc. If profuse foaming occurs during fermentation, an antifoam agent may be added in an acceptable amount, such like vegetable oils, such as soybean oil, linseed oil, etc. higher alcohols, such as octadecanol.

Ферментацию рекомендуют проводить 50-200 ч при 30оС.Fermentation is recommended for 50-200 hours at 30 about C.

Из вышеприведенных условий ферментации подбирают оптимальный вариант условий в соответствии с показателями используемого штамма микроорганизма. From the above fermentation conditions, the optimal variant of the conditions is selected in accordance with the indicators of the microorganism strain used.

Поскольку основная часть полученных таким образом веществ WS 7622А, В, С и D присутствует внутриклеточно в культуре бульона, бульон вначале фильтруют. К полученной мицеллильной лепешке добавляют приемлемый растворитель, такой как ацетон, после чего целевое соединение отделяют от полученной смеси и очищают по методике, обычно применяемой для получения антибиотиков. К примеру, могут быть использованы следующие методики: концентрирование при пониженном давлении, сушка вымораживанием, экстрагирование растворителем, регулирование рН, обработка анионообменной смолой, катионообменной смолой, неионной адсорбирующей смолой и т. д. обработка адсорбирующим средством, таким как активированный уголь, кремниевая кислота, силикагель или окись алюминия, кристаллизация и перекристаллизация как по отдельности, так и в приемлемом сочетании. Since the bulk of substances thus obtained WS 7622A, B, C and D are present intracellularly in broth culture, the broth is first filtered. An acceptable solvent, such as acetone, is added to the obtained micelle cake, after which the target compound is separated from the resulting mixture and purified according to the procedure usually used to obtain antibiotics. For example, the following methods can be used: concentration under reduced pressure, freeze drying, solvent extraction, pH adjustment, treatment with an anion exchange resin, cation exchange resin, nonionic adsorption resin, etc. treatment with an adsorbent agent such as activated carbon, silicic acid, silica gel or alumina, crystallization and recrystallization both individually and in an acceptable combination.

Компоненты WS 7622А, В, С и D могут быть выделены из культурального бульона, например, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в следующих условиях: Колонка: Ямамура Химический институт, Киото, A-302 (OD64х 150 мм), Подвижная фаза: СH3OH=CH3CN=0,3% водн. Н3PO4 (10:1:10), Детектирование: 210 нм, Скорость потока: 1 мл/мин, Время удерживания (мин): WS 7622А 6,93, WS 7622В 10,08, WS 7622С 5,3, WS 7622D 4,38.Components WS 7622A, B, C, and D can be isolated from the culture broth, for example, using high performance liquid chromatography under the following conditions: Column: Yamamura Chemical Institute, Kyoto, A-302 (OD64 x 150 mm), Mobile phase: CH 3 OH = CH 3 CN = 0.3% aq. H 3 PO 4 (10: 1: 10), Detection: 210 nm, Flow rate: 1 ml / min, Retention time (min): WS 7622А 6.93, WS 7622В 10.08, WS 7622С 5.3, WS 7622D 4.38.

Образовавшиеся в культуральном бульоне вещества WS 7622А, В, С и D могут быть выделены в свободной форме или при желании в виде соответственно фармацевтической приемлемой соли. Для выделения этих веществ в виде фармацевтически приемлемой соли полученное из мицеллиального экстракта целевое соединение обрабатывают основанием, таким как неорганическое основание, например соединение щелочного металла (например, гидроксид натрия, гидроксид калия и т. д. ), соединение щелочноземельного металла (например, гидроксид кальция, гидроксид магния и т. д.), аммиак, органическое основание (например, триэтиламин, дициклогексиламин и т. д.), или кислотой, такой как неорганическая кислота (например, хлористоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и т. д. ) или органическая кислота (например, муравьиная кислота, уксусная кислота, п-толуолсульфокислота, лимонная кислота, щавелевая кислота и т. д.) с получением в результате соответствующей соли каждого из веществ WS 7622А, В, С и D. The substances WS 7622A, B, C and D formed in the culture broth can be isolated in free form or, if desired, as a pharmaceutically acceptable salt, respectively. To isolate these substances in the form of a pharmaceutically acceptable salt, the target compound obtained from the micellial extract is treated with a base such as an inorganic base, for example an alkali metal compound (e.g. sodium hydroxide, potassium hydroxide, etc.), an alkaline earth metal compound (e.g. calcium hydroxide , magnesium hydroxide, etc.), ammonia, an organic base (e.g. triethylamine, dicyclohexylamine, etc.), or an acid such as an inorganic acid (e.g. hydrochloric acid, sulfur acid, phosphoric acid, etc.) or an organic acid (e.g. formic acid, acetic acid, p-toluenesulfonic acid, citric acid, oxalic acid, etc.) to obtain the corresponding salt of each of the substances WS 7622A, B, C and D.

Каждая из полученных солей веществ WS 7622А, В, С и D может быть вновь превращена известными способами в свободные вещества WS 7622А. В, С и D. Each of the obtained salts of substances WS 7622A, B, C, and D can be re-converted by known methods into free substances WS 7622A. B, C and D.

(1) Вещество WS 7622А
Вещество SW 7622А является новым соединением со следующими физико-химическими свойствами. Физико-химические свойства вещества WS 7622А: Внешний вид бесцветные призмы Характер вещества кислый Цветные реакции положительные: сульфат церия, пары йода;
отрицательные: нингидрин, реактив Молиша Растворимость растворимо: метанол, этанол, н-бутанол
плохо растворимо: хлороформ, ацетон этилацетат;
не растворимо: вода, н-гексан Тонкослойная хроматография (ТСХ)
хлороформ-метанол (5:1 об.(об.) Rf 0,51
ацетон-метанол (10:1) -"- 0,62
(пластинки кизельгель 60 F254 силикагель, Мерк) Температура плавления 250-252оС (разл. ) Удельное вращение (α)D 23 + 36о (с 1,0, МеОН) Уф-спектр λmax (МеОН) 287 нм (ε 3600), λmax (MеОН-НСl): 287 нм, λmax (МеОН-MaОН): 298 нм Молекулярная формула С47Н63N9O13 Элементный анализ:
Вычислено для С47Н63N9O13 C 56,56, H 6,77, N 126,3%
Найдено: C 56,65, H 6,62, N 12,27% Молекулярная масса: FAB-MSm/z 984(M + Na)+ Инфракрасный спектр поглощения (ИК) (см. рис. 1): D λmax(КВF): 3400, 3300, 3060, 2980, 2940, 1735, 1710, 1690, 1670, 1660, 1640, 1540, 1520, 1470, 1380, 1330, 1300, 1260, 1220, 1200, 1160, 1130, 1090, 1000, 980, 940, 920 см-1. Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1Н(1Н-ЯМР) (см. фиг. 2) (400 МГц: CD3OD) δ 7,22-7,09 (3Н, m), 6,88-6,77 (3Н, m), 6,74 (1H, s), 6,46 (1H, s), 5,46 (1H, m), 5,18 (1H, s), 4,85 (1H, s), 4,77 (1H, m) 4,65 (1H, m), 4,5 (1H, m), 3,96 (1H, m), 3,91 (1H, d, J 9 Гц), 3,6-3,47 (2Н, m), 3,03 (1H, m), 2,9 (3H, S), 2,86 (1H, m), 2,59-2,49 (2H, m), 2,39 (1H, m), 2,29-2,16 (2H, m), 2 (1H, m), 1,84 (1H, m), 1,74 (3H, d, J 6 Гц), 1,72-1,53 (4H, m), 1,44 (3H, d, J6 Гц), 1,12 (1Н, m), 1,1 (6H, d, J 6 Гц), 0,99 (3Н, d, J 6 Гц), 0,94 (3Н, d, J 6 Гц). Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 13С (13С-ЯМР) (см. фиг. 3) (100 МГц, СD3OD ) δ 179.7 (s), 176,3 (S), 174,7 (s), 173,3 (s), 172,4 (s), 171,4 (s), 170,3 (s), 165,8 (s), 160,2 (s), 145,7 (s), 145,6 (s), 137,5 (s), 134 ( d), 131,4 (s), 130,6 (d) x 2, 129,8 (s), 129,1 (d) x 2, 129,1 (s), 127,6 (d), 119,1 (d), 118 (d), 76 (d), 73,4 (d), 63,1 (d), 61,4 (d), 57,1 (d), 53,6 (d), 52,7 (d), 50,5 (d), 39,9 (t), 36,1 (t), 35,8 (d), 31,8 (q), 31 (t), 30,8 (d), 29,9 (t), 29,7 (t), 25,2 (t), 22,3 (t), 20,2 (q), 20 (q) x 2, 19,7 (q), 19,5 (q), 13,3 (q).(1) Substance WS 7622A
The substance SW 7622A is a new compound with the following physicochemical properties. Physico-chemical properties of the substance WS 7622A: Appearance colorless prisms Character of the substance is acidic Color reactions are positive: cerium sulfate, iodine vapor;
negative: ninhydrin, molich reagent Solubility soluble: methanol, ethanol, n-butanol
poorly soluble: chloroform, acetone ethyl acetate;
insoluble: water, n-hexane Thin layer chromatography (TLC)
chloroform-methanol (5: 1 vol. (vol.) Rf 0,51
acetone-methanol (10: 1) - "- 0.62
(diatomaceous earth gel 60 F254 silica gel, Merck) Melting point 250-252 о С (decomp.) Specific rotation (α) D 23 + 36 о (с 1,0, МеОН) UV spectrum λ max (МеОН) 287 nm (ε 3600), λ max (MeOH-HCl): 287 nm, λ max (MeOH-MaOH): 298 nm Molecular formula C 47 H 63 N 9 O 13 Elemental analysis:
Calculated for C 47 H 63 N 9 O 13 C 56.56, H 6.77, N 126.3%
Found: C 56.65, H 6.62, N 12.27% Molecular mass: FAB-MSm / z 984 (M + Na) + Infrared absorption spectrum (IR) (see Fig. 1): D λ max ( KBF): 3400, 3300, 3060, 2980, 2940, 1735, 1710, 1690, 1670, 1660, 1640, 1540, 1520, 1470, 1380, 1330, 1300, 1260, 1220, 1200, 1160, 1130, 1090, 1000 , 980, 940, 920 cm -1 . Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for 1 H ( 1 H-NMR) nuclei (see Fig. 2) (400 MHz: CD 3 OD) δ 7.22-7.09 (3H, m), 6.88-6.77 (3H, m), 6.74 (1H, s), 6.46 (1H, s), 5.46 (1H, m), 5.18 (1H, s), 4.85 (1H, s) , 4.77 (1H, m) 4.65 (1H, m), 4.5 (1H, m), 3.96 (1H, m), 3.91 (1H, d, J 9 Hz), 3 6-3.47 (2H, m), 3.03 (1H, m), 2.9 (3H, S), 2.86 (1H, m), 2.59-2.49 (2H, m) ), 2.39 (1H, m), 2.29-2.16 (2H, m), 2 (1H, m), 1.84 (1H, m), 1.74 (3H, d, J 6 Hz), 1.72-1.53 (4H, m), 1.44 (3H, d, J6 Hz), 1.12 (1H, m), 1.1 (6H, d, J 6 Hz), 0.99 (3H, d, J 6 Hz), 0.94 (3H, d, J 6 Hz). Nuclear magnetic resonance spectrum on 13 C ( 13 C-NMR) nuclei (see Fig. 3) (100 MHz, CD 3 OD) δ 179.7 (s), 176.3 (S), 174.7 (s), 173 , 3 (s), 172.4 (s), 171.4 (s), 170.3 (s), 165.8 (s), 160.2 (s), 145.7 (s), 145, 6 (s), 137.5 (s), 134 (d), 131.4 (s), 130.6 (d) x 2, 129.8 (s), 129.1 (d) x 2, 129 , 1 (s), 127.6 (d), 119.1 (d), 118 (d), 76 (d), 73.4 (d), 63.1 (d), 61.4 (d) , 57.1 (d), 53.6 (d), 52.7 (d), 50.5 (d), 39.9 (t), 36.1 (t), 35.8 (d), 31.8 (q), 31 (t), 30.8 (d), 29.9 (t), 29.7 (t), 25.2 (t), 22.3 (t), 20.2 (q), 20 (q) x 2, 19.7 (q), 19.5 (q), 13.3 (q).

(2) Вещество WS 7622 В
Вещество WS 7622В является новым соединением со следующими физико-химическими свойствами. Физико-химические свойства вещества WS 7622В: Внешний вид бесцветные иглы Характер вещества кислый Цветные реакции положительные: сульфат церия, пары йода, хлорид железа (III);
отрицательные: нингидрин, реактив Молиша, реактив Драгендорффа Растворимость растворимо: метанол, этанол, н-бутанол;
плохо растворимо: хлороформ, ацетон;
не растворимо: вода, н-гексан Тонкослойная хроматография (ТСХ)
хлороформ-метанол (5:1 об./об.) Rf 0,55
(пластинки кизельгель 60 F254 силикагель, Мерк) Температура плавления 248-250оС (разл. ) Удельное вращение (α)D 23 + 39о (с 1,0, МеОН) УФ-спектр λmax (МеОН) 287 нм ( ε 3800), λmax (МеОН-НСl): 287 нм, λmax (МеОН)-NaОН): 299 нм Молекулярная формула С48Н65N9O13 Элементный анализ:
Вычислено для С48Н65N9O13 ˙ 3H2O: С 55,96, H 6,95, N 12,24%
Найдено: С 55,84, Н 7,05, N 12,12% Молекулярная масса: FAB-MSm /Z 998 (M+ Na)+
ИК-спектр (см. фиг. 4) λmax (КВF): 3400, 3300, 2960, 1735, 1680, 1660, 1640, 1540, 1520, 1460, 1400, 1380, 1330, 1290, 1250, 1200, 1180, 1150, 1130, 1080, 1050, 1000, 980, 940, 920 cм-1.(2) Substance WS 7622 V
The substance WS 7622B is a new compound with the following physicochemical properties. Physico-chemical properties of the substance WS 7622B: Appearance colorless needles Character of the substance is acidic Color reactions are positive: cerium sulfate, iodine vapor, iron (III) chloride;
negative: ninhydrin, Molis reagent, Dragendorff reagent Solubility soluble: methanol, ethanol, n-butanol;
poorly soluble: chloroform, acetone;
insoluble: water, n-hexane Thin layer chromatography (TLC)
chloroform-methanol (5: 1 v / v) Rf 0.55
(diatomaceous earth gel plate 60 F254 silica gel, Merck) Melting point 248-250 о С (decomp.) Specific rotation (α) D 23 + 39 о (с 1.0, МеОН) UV spectrum λ max (МеОН) 287 nm (ε 3800), λ max (MeOH-HCl): 287 nm, λ max (MeOH) -NaOH): 299 nm Molecular formula C 48 H 65 N 9 O 13 Elemental analysis:
Calculated for C 48 H 65 N 9 O 13 ˙ 3H 2 O: C 55.96, H 6.95, N 12.24%
Found: C 55.84, H 7.05, N 12.12% Molecular Weight: FAB-MSm / Z 998 (M + Na) +
IR spectrum (see Fig. 4) λ max (KBF): 3400, 3300, 2960, 1735, 1680, 1660, 1640, 1540, 1520, 1460, 1400, 1380, 1330, 1290, 1250, 1200, 1180, 1150, 1130, 1080, 1050, 1000, 980, 940, 920 cm -1 .

1Н-ЯМР-спектр (см. фиг. 5) (400 МГц: ДМСО d6) δ 9,48 (1Н, шир.s), 9,03 (1Н, шир.s), 8,76 (1Н, шир.S), 8,3 (1Н, шир.d, J6 Гц)7,77(1, Н, d, J 7 Гц), 7,21 (1Н, d, J8 Гц), 7,2-7,11 (3Н, m), 6,97 (1Н, шир. d, J7 Гц), 6,8 (2Н, d, J 8 Гц), 6,72 (1Н, шир. s), 6,67 (1Н, s), 6,63 (1H, q, J 7 Гц), 6,37 (1Н, s), 5,48 (1H, m), 5,4 (1H, m), 5,09 (1H, m), 4,77 (1H, m), 4,64 (1H, m), 4,38 (1H, m), 4,31 (1H, m), 3,87-3,8 (2H, m), 3,4-3,3 (2H, m), 2,95 (1H, m), 2,79 (3H, s), 2,65 (1H, m) 2,4-2-2 (4H, m), 2 (1H, m), 1,87 (1H, m), 1,73 (1H, m), 1,65 (3H, d, J 7 Гц), 1,65-1,4 (5H, m), 1,32 (3H, d, J 6 Гц), 1,27 (1Н, m), 0,97 (3H, d, J 6 Гц), 0,97 (1Н, m), 0,91 (3H, d, J 6 Гц), 0,88 (3H, d, J 6 Гц), 0,81 (3Н, t, J 7 Гц). 1 H-NMR spectrum (see FIG. 5) (400 MHz: DMSO d 6 ) δ 9.48 (1H, br.s), 9.03 (1H, br.s), 8.76 (1H, br. S), 8.3 (1H, br. d, J6 Hz) 7.77 (1, Н, d, J 7 Hz), 7.21 (1Н, d, J8 Hz), 7.2-7 11 (3H, m), 6.97 (1H, br d, J7 Hz), 6.8 (2H, d, J 8 Hz), 6.72 (1 H, br s), 6.67 ( 1H, s), 6.63 (1H, q, J 7 Hz), 6.37 (1H, s), 5.48 (1H, m), 5.4 (1H, m), 5.09 (1H , m), 4.77 (1H, m), 4.64 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.31 (1H, m), 3.87-3.8 (2H, m), 3.4-3.3 (2H, m), 2.95 (1H, m), 2.79 (3H, s), 2.65 (1H, m) 2.4-2-2 ( 4H, m), 2 (1H, m), 1.87 (1H, m), 1.73 (1H, m), 1.65 (3H, d, J 7 Hz), 1.65-1.4 (5H, m), 1.32 (3H, d, J 6 Hz), 1.27 (1H, m), 0.97 (3H, d, J 6 Hz), 0.97 (1H, m), 0.91 (3H, d, J 6 Hz), 0.88 (3H, d, J 6 Hz), 0.81 (3H, t, J 7 Hz).

13С-ЯМР-спектр (см. фиг. 6) (100 МГц, ДМСО d6) δ 175,6 (s), 174,8 (s), 172 (s), 170,9 (s), 170,6 (s), 170,3 (s), 168,7 (s), 162,5 (s), 157,4 (s), 144,2 (s), 144,2 (s), 136,5 (s), 131,1 (d), 130,7 (s), 129,6 (d) x 2, 128,4 (s), 127,9 (d) x 2, 127,8 (s), 126,4 (d), 118,9 (d), 116,8 (d), 74,2 (d), 72,1 (d), 61 (d), 59,8 (d), 55,2 (d), 51,6 (d), 50,8 (d), 48,6 (d), 40,9 (d), 38,2 (t), 35 (t), 30,8 (q), 29,8 (t), 28,8 (d), 28,4 (t), 28,1 (t), 27,1 (t), 23,3 (t), 21,2 (t), 19,6 (q), 19,1 (q), 19 (q), 17,7 (q), 12,9 (q), 11,9 (q). 13 C-NMR spectrum (see FIG. 6) (100 MHz, DMSO d 6 ) δ 175.6 (s), 174.8 (s), 172 (s), 170.9 (s), 170, 6 (s), 170.3 (s), 168.7 (s), 162.5 (s), 157.4 (s), 144.2 (s), 144.2 (s), 136.5 (s), 131.1 (d), 130.7 (s), 129.6 (d) x 2, 128.4 (s), 127.9 (d) x 2, 127.8 (s), 126.4 (d), 118.9 (d), 116.8 (d), 74.2 (d), 72.1 (d), 61 (d), 59.8 (d), 55.2 (d), 51.6 (d), 50.8 (d), 48.6 (d), 40.9 (d), 38.2 (t), 35 (t), 30.8 (q) , 29.8 (t), 28.8 (d), 28.4 (t), 28.1 (t), 27.1 (t), 23.3 (t), 21.2 (t), 19.6 (q), 19.1 (q), 19 (q), 17.7 (q), 12.9 (q), 11.9 (q).

(3) Вещество WS 7622C
Вещество WS 7622С является новым соединением со следующими физико-химическими свойствами. Физико-химические свойства WS 7622С: Внешний вид бесцветные иглы Характер вещества кислый Цветные реакции положительные: сульфат церия, пары йода, хлорид железа (III);
отрицательные: нингидрин, реактив Молиша, реактив Драгендорффа Растворимость растворимо: метанол, этанол;
плохо растворимо: хлороформ, ацетон, этилацетат;
не растворимо: вода, н-гексан Тонкослойная хроматография (ТСХ) хлороформ-метанол (4:1 об./об) Rf 0,56
(Пластинки с кизельгелем 60 F 254 силикагелем, Мерк) Температура плавления 250-252о (разл.) Удельное вращение (α)D 23 + 36о (с 0,5, МеОН) УФ-спектр λmax (МеОН) 287 нм (ε 3500), λmax (МеОН-НСl): 287 нм, λmax (МеОН-NаОН) 298 нм Молекулярная формула С46Н61N9O13 Элементный анализ:
Вычислено для С46Н61N9O13 ˙6H2O: С 52,31, Н 6,97, N 11,94%
Найдено: С 51,95, Н 6,66, N 11,77% Молекулярная масса: FAB-MSm/Z 970 (M+ Na)+ ИК-спектр (см. фиг. 7) (КВF) λmax: 3400, 3300, 2980, 1740, 1700, 1660, 1640, 1540, 1470, 1450, 1410, 1335, 1260, 1230, 1200, 1160, 1140, 1070, 1010, 980, 940, 920, 880 см-1.(3) Substance WS 7622C
The substance WS 7622C is a new compound with the following physicochemical properties. Physico-chemical properties of WS 7622C: Appearance colorless needles Character of the substance is acidic Color reactions are positive: cerium sulfate, iodine vapor, iron (III) chloride;
negative: ninhydrin, Molis reagent, Dragendorff reagent Solubility soluble: methanol, ethanol;
poorly soluble: chloroform, acetone, ethyl acetate;
insoluble: water, n-hexane Thin layer chromatography (TLC) chloroform-methanol (4: 1 v / v) Rf 0.56
(Kiesel gel plates 60 F 254 silica gel, Merck) Melting point 250-252 о (decomp.) Specific rotation (α) D 23 + 36 о (с 0.5, МеОН) UV spectrum λ max (МеОН) 287 nm ( ε 3500), λ max (MeOH-HCl): 287 nm, λ max (MeOH-NaOH) 298 nm Molecular formula C 46 H 61 N 9 O 13 Elemental analysis:
Calculated for C 46 H 61 N 9 O 13 ˙ 6H 2 O: C 52.31, H 6.97, N 11.94%
Found: C 51.95, H 6.66, N 11.77% Molecular mass: FAB-MSm / Z 970 (M + Na) + IR spectrum (see Fig. 7) (KBF) λ max : 3400, 3300 , 2980, 1740, 1700, 1660, 1640, 1540, 1470, 1450, 1410, 1335, 1260, 1230, 1200, 1160, 1140, 1070, 1010, 980, 940, 920, 880 cm -1 .

1Н-ЯМР-спектр (см. фиг. 8) (400 МГц, СD3OD) δ 7,21-7,1 (3H, m), 6,86-6,77 (3H, m), 6,75 (1H, s), 6,47 (1H, s), 5,46 (1H, m), 5,18 (1H, m ), 4,85 (1H, S), 4,74 (1H, m), 4,65 (1H, m), 4,51 (1H, m), 3,94 (1H, m), 3,9 (1H, d, J 10 Гц), 3,58-3,46 (2H, m), 3,02 (1H, m), 2,9 (3H, s), 2,86 (1H, m), 2,55 (1H, m), 2,38 (1H, d, J 14 и 11 Гц), 2,28 (2H, q, J 7 Гц), 2,3-2,16 (2H, m), 1,99 (1H, m), 1,84 (1H, m), 1,75 (3H, d, J 7 Гц), 1,78-1,54 (4H, m), 1,44 (3H, d, J 6,5 Гц), 1,13 (3H, t, J 7 Гц), 1,12 (1H, m), 1,01 (3H, d, J 6,5 Гц), 0-97 (3H, d, J 6,5 Гц). 1 H-NMR spectrum (see Fig. 8) (400 MHz, CD 3 OD) δ 7.21-7.1 (3H, m), 6.86-6.77 (3H, m), 6, 75 (1H, s), 6.47 (1H, s), 5.46 (1H, m), 5.18 (1H, m), 4.85 (1H, S), 4.74 (1H, m ), 4.65 (1H, m), 4.51 (1H, m), 3.94 (1H, m), 3.9 (1H, d, J 10 Hz), 3.58-3.46 ( 2H, m), 3.02 (1H, m), 2.9 (3H, s), 2.86 (1H, m), 2.55 (1H, m), 2.38 (1H, d, J 14 and 11 Hz), 2.28 (2H, q, J 7 Hz), 2.3-2.16 (2H, m), 1.99 (1H, m), 1.84 (1H, m), 1.75 (3H, d, J 7 Hz), 1.78-1.54 (4H, m), 1.44 (3H, d, J 6.5 Hz), 1.13 (3H, t, J 7 Hz), 1.12 (1H, m), 1.01 (3H, d, J 6.5 Hz), 0-97 (3H, d, J 6.5 Hz).

13С-ЯМР-спектр (см. фиг. 9) (100 МГц, СD3OD) δ 176,7(s), 176,4 (s), 174,7 (s), 173,4 (s), 172,5 (s), 171,4 (s), 170,4 (s), 165,8 (s), 160,4 (s), 145,8 (s), 145,7 (s), 137,5 (s), 134 (d), 131,4 (s), 130,6 (d) x 2, 129,8 (s), 129,1 (d) x 2, 129,1 (s), 127,7 (d), 119,1 (d), 118 (d), 76 (d), 73,5 (d), 63,1 (d), 61,4 (d), 57,1 (d), 53,7 (d), 52,7 (d), 50,5 (d), 39,9 (t), 36,1 (t), 31,8 (q), 31 (t), 30,8 (d), 29,9 (t), 29,7 (t), 25,3 (t), 22,3 (t), 20,2 (q), 19,4 (q), 13,3 (q), 10,3 (q). 13 C-NMR spectrum (see FIG. 9) (100 MHz, CD 3 OD) δ 176.7 (s), 176.4 (s), 174.7 (s), 173.4 (s), 172.5 (s), 171.4 (s), 170.4 (s), 165.8 (s), 160.4 (s), 145.8 (s), 145.7 (s), 137 5 (s), 134 (d), 131.4 (s), 130.6 (d) x 2, 129.8 (s), 129.1 (d) x 2, 129.1 (s), 127.7 (d), 119.1 (d), 118 (d), 76 (d), 73.5 (d), 63.1 (d), 61.4 (d), 57.1 (d ), 53.7 (d), 52.7 (d), 50.5 (d), 39.9 (t), 36.1 (t), 31.8 (q), 31 (t), 30 , 8 (d), 29.9 (t), 29.7 (t), 25.3 (t), 22.3 (t), 20.2 (q), 19.4 (q), 13, 3 (q), 10.3 (q).

(4) Вещество WS 7622D
Вещество WS 7622D является новым соединением со следующими физико-химическими свойствами. Физико-химические свойства вещества WS 7622D: Внешний вид бесцветные иглы Характер вещества кислый Цветные реакции положительные: сульфат церия, пары йода, хлорид железа (III);
отрицательные: нингидрин, реактив Молиша, реактив Драгендорффа Растворимость растворимо: метанол, этанол;
плохо растворимо: вода, хлороформ;
не растворимо: н-гексан Тонкослойная хроматография (ТСХ) хлороформ-метанол (4:1 об./об.) Rf 0,45
(пластинки с кизельгелем 60 F254 силикагелем, Мерк) Температура плавления 250-252оС Удельное вращение (α)D 24 + 35,8о (c 0,5, МеОН) УФ-спектр (МеОН) λmax: 287 нм (ε 3640), (МеОН-НСl) λmax 287 нм, (МеОН-NаОН) λmax 298 нм Молекулярная формула: С45Н59N9O13 Элементный анализ:
Вычислено для С45H59N9O13 ˙ 6H2O: C 51,86, H 6,87, N 12,10%
Найдено: С 51,90, Н 6,26, N 12,08% Молекулярная масса: FAB-MSm/Z 956 (М+ Na)+
ИК-спектр (см. фиг. 10) (КВF) λmax: 3360, 2950, 1730, 1700, 1680, 1660, 1640, 1530, 1460, 1380, 1330, 1290, 1250, 1200, 1170, 1160, 1140, 1080, 980, 940, 920, 880 см-1.(4) Substance WS 7622D
The substance WS 7622D is a new compound with the following physicochemical properties. Physico-chemical properties of the substance WS 7622D: Appearance colorless needles Character of the substance is acidic Color reactions are positive: cerium sulfate, iodine vapor, iron (III) chloride;
negative: ninhydrin, Molis reagent, Dragendorff reagent Solubility soluble: methanol, ethanol;
poorly soluble: water, chloroform;
insoluble: n-hexane Thin layer chromatography (TLC) chloroform-methanol (4: 1 v / v) Rf 0.45
(Kiesel gel 60 plates with silica gel F254, Merck) Melting point: 250-252 C. Optical rotation (α) D 24 of + 35.8 (c 0,5, MeOH) UV Spectrum (MeOH) λ max: 287 nm (ε 3640), (MeOH-НСl) λ max 287 nm, (MeOH-Naon) λ max 298 nm Molecular formula: С 45 Н 59 N 9 O 13 Elemental analysis:
Calculated for C 45 H 59 N 9 O 13 ˙ 6H 2 O: C 51.86, H 6.87, N 12.10%
Found: C 51.90, H 6.26, N 12.08% Molecular mass: FAB-MSm / Z 956 (M + Na) +
IR spectrum (see FIG. 10) (KBF) λ max : 3360, 2950, 1730, 1700, 1680, 1660, 1640, 1530, 1460, 1380, 1330, 1290, 1250, 1200, 1170, 1160, 1140, 1080, 980, 940, 920, 880 cm -1 .

1Н-ЯМР-спектр (см. фиг. 11) (400 МГц, СD3OD)δ 7,2-7,1 (3Н, m), 6,85-6,77 (3Н, m), 6,73 (1H, s), 6,46 (1H, s), 5,46 (1H, m), 5,18 (1H, m), 4,84 (1H, s), 4,73 (1H, m), 4,64 (1H, m), 4,5 (1H, m), 3,99-3,87 (2H, m), 3,58-3,46 (2H, m), 3,01 (1H, m), 2,9 (3H, s), 2,87 (1H, m), 2,53 (1H, m), 2,38 (1H, d-d, J 14 и 11 Гц), 2,3-2,16 (2H, m), 2 (1H, m), 1,99 (3H, s), 1,84 (1H, m), 1,75 (3H, d, J 7 Гц), 1,76-1,55 (4Н, m), 1,43 (3H, d, J 6,5 Гц), 1,15 (1H, m), 1 (3H, d, J 6,5 Гц), 0,95 (3H, d, J 6,5 Гц). 1 H-NMR spectrum (see FIG. 11) (400 MHz, CD 3 OD) δ 7.2-7.1 (3H, m), 6.85-6.77 (3H, m), 6, 73 (1H, s), 6.46 (1H, s), 5.46 (1H, m), 5.18 (1H, m), 4.84 (1H, s), 4.73 (1H, m ), 4.64 (1H, m), 4.5 (1H, m), 3.99-3.87 (2H, m), 3.58-3.46 (2H, m), 3.01 ( 1H, m), 2.9 (3H, s), 2.87 (1H, m), 2.53 (1H, m), 2.38 (1H, dd, J 14 and 11 Hz), 2.3 -2.16 (2H, m), 2 (1H, m), 1.99 (3H, s), 1.84 (1H, m), 1.75 (3H, d, J 7 Hz), 1, 76-1.55 (4H, m), 1.43 (3H, d, J 6.5 Hz), 1.15 (1H, m), 1 (3H, d, J 6.5 Hz), 0, 95 (3H, d, J 6.5 Hz).

13С-ЯМР-спектр (см. фиг. 12) (100 МГц, СD3OD) δ 176,4 (s), 174,6 (s), 173,4 (s), 173 (s), 172,4 (s), 171,4 (s), 170,4 (S)m 165,8 (s), 160,3 (s), 145,9 (s), 145,9 (s), 137,5 (s), 134 (d), 131,4 (s), 130,6 (d) x 2, 129,8 (S), 129,1 (d) x 2, 129,1 (s), 127,6 (d), 119 (d), 118 (d), 76 (d), 73,5 (d), 63,1(d), 61,3 (d), 57,1 (d), 53,9 (d), 52,7 (d), 50,5 (d), 39,9 (t), 36,1 (t), 31,8 (q), 31 (t), 30,7 (d), 39,9 (t), 39,6 (t), 25,3 (t), 20,2 (q), 19,5 (q), 19,4 (q), 13,3 (q). 13 C-NMR spectrum (see FIG. 12) (100 MHz, CD 3 OD) δ 176.4 (s), 174.6 (s), 173.4 (s), 173 (s), 172, 4 (s), 171.4 (s), 170.4 (S) m 165.8 (s), 160.3 (s), 145.9 (s), 145.9 (s), 137.5 (s), 134 (d), 131.4 (s), 130.6 (d) x 2, 129.8 (S), 129.1 (d) x 2, 129.1 (s), 127, 6 (d), 119 (d), 118 (d), 76 (d), 73.5 (d), 63.1 (d), 61.3 (d), 57.1 (d), 53, 9 (d), 52.7 (d), 50.5 (d), 39.9 (t), 36.1 (t), 31.8 (q), 31 (t), 30.7 (d ), 39.9 (t), 39.6 (t), 25.3 (t), 20.2 (q), 19.5 (q), 19.4 (q), 13.3 (q) .

Фармацевтически приемлемые соли каждого из веществ WS 7622А, В, С и D включают соли с неорганическими или органическими основаниями, такими как: соль щелочного металла (например, соль натрия, соль калия и т. д.), соль щелочноземельного металла (например, соль кальция и т. д.), соль аммония, соль этаноламина, соль триэтиламина, соль дициклогексиламина и т. п. а также соли, образуемые добавлением органических и неорганических кислот, такие как: метансульфонат, хлоргидрат, сульфат, нитрат, фосфат и т. п. Pharmaceutically acceptable salts of each of the substances WS 7622A, B, C, and D include salts with inorganic or organic bases, such as an alkali metal salt (e.g., sodium salt, potassium salt, etc.), alkaline earth metal salt (e.g., salt calcium, etc.), ammonium salt, ethanolamine salt, triethylamine salt, dicyclohexylamine salt, etc., as well as salts formed by the addition of organic and inorganic acids, such as methanesulfonate, hydrochloride, sulfate, nitrate, phosphate, etc. P.

Вещества WS 7622А, В, С и D и их фармацевтически приемлемые соли обладают ингибирующей активностью по отношению к лейкоцитэластазе человека, и применимы в качестве ингибиторов лейкоцитэластазы человека для лечения некоторых заболеваний, например: эмфиземы легких, атеросклероза, ревматоидного артрита, остеоартрита, псориаза, панкреотита, респираторного дистресс-синдрома у взрослых и т. п. Substances WS 7622A, B, C and D and their pharmaceutically acceptable salts have inhibitory activity against human leukocytelastase, and are useful as inhibitors of human leukocytelastase for the treatment of certain diseases, for example: lung emphysema, atherosclerosis, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, psoriasis, pancreas respiratory distress syndrome in adults, etc.

Для иллюстрации применимости WS 7622А, В, С и D, их производных и их фармацевтически приемлемых солей ниже приведены данные фармакологических испытаний. To illustrate the applicability of WS 7622A, B, C and D, their derivatives and their pharmaceutically acceptable salts, pharmacological test data are provided below.

Опыты с ингибированием протеазы
(1) Получение грубой лейкоцитэластазы человека.Protease Inhibition Experiments
(1) Obtaining gross human leukocytelastase.

У здорового добровольца отбирают 50 мл крови. Использованием Моно-Поли-разрешающей среды отделяют лейкоциты, которые собирают центрифугированием. Оставшиеся эритроциты лизируют добавлением дистиллированной воды с осаждением и центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. К полученному осадку добавляют 10 мл 2М NaClO10 и экстрагируют эластазу. После экстрагирования в течение 120 мин при 0оС центрифугированием получают жидкую часть с эластазной активностью. После добавления к жидкой части равного объема хлороформа и интенсивного встряхивания отделяют прозрачный раствор с эластазной активностью. Прибавляют 10 мл НЕРЕS-буфера и используют в ферментивных испытаниях. (2) Методика.A healthy volunteer takes 50 ml of blood. Using a Mono-Poly-resolving medium, white blood cells are separated, which are collected by centrifugation. The remaining red blood cells are lysed by adding distilled water to precipitate and centrifuged for 30 minutes at 3000 rpm. To the resulting precipitate was added 10 ml of 2M NaClO 10 and extracted with elastase. After extracting for 120 minutes at 0 ° C, a liquid portion by centrifugation with elastase activity. After adding an equal volume of chloroform to the liquid part and intensive shaking, a clear solution with elastase activity is separated. Add 10 ml of HEPES-buffer and used in enzymatic tests. (2) Methodology.

В ходе испытания используют 0,1М НЕРЕS-буфер (N-(2-гидроксилэтил)пиперазин-N'-2-этансульфоновая кислота), содержащий 0,5 NaCl, рН 7,5. В ячейках пластины для микротитрования с 96 ячейками смешивают двадцать 25 мкл 2 мМ раствора метоксисукцинил-(Ala)2-Pro-Val-п-нитроанилида (100 мМ раствор в диметилсульфоксиде, разбавленный буфером) с 50 мкл образца (10 мкл образца в органическом растворителе разбавляют в 5 раз буфером). С помощью микропластинчатого считывающего устройства измеряют поглощение смеси при длине волны 415 нм. После измерения добавляют 25 мкл препарата эластазы мокроты человека (ЭПЧ) в концентрации 6 мкг/мл или 25 мкл препаратa лейкоцитэластазы человека и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. После этого измеряют поглощение при 415 нм. Процент ингибирования лекарством определяют по формуле: 100 х (1- "r" в присутствии ингибитора) "r" в отсутствие ингибитора), где "r" поглощение после 30-минутного инкубирования минус поглощение перед добавлением фермента. Действие ингибиторов на другие протеазы определяют аналогично использованием N-сукцинил-(Ala)2-п-нитроанилида для эластазы поджелудочной железы свиньи (тип IV, конечная концентрация 5 мкг/мл), N-альфа-бензоил-Arg-п-нитроанилида для трипсина поджелудочной железы быка (тип I, конечная концентрация 16 мкг/мл), метоксисукцинил-(Ala)2-PrO-Met-п-нитроанилида для химотрипсина поджелудочной железы быка (тип II, конечная концентрация 1,5 мкг/мл) и катепсина G мокроты человека (конечная концентрация 10 ед./мл). ЭМЧ и катепсин G получены от Эластин Продакто Сомпани Инк. шт. Монтана, США. Все другие субстраты и протеазы поставлены фирмой Сигма Кемикалз Ко.During the test, 0.1 M HEPES buffer (N- (2-hydroxyethyl) piperazine-N'-2-ethanesulfonic acid) containing 0.5 NaCl, pH 7.5, was used. Twenty 25 μl of a 2 mM solution of methoxysuccinyl- (Ala) 2 -Pro-Val-p-nitroanilide (100 mM solution in dimethyl sulfoxide diluted in buffer) are mixed with 50 μl of a sample (10 μl of the sample in an organic solvent) in 96-well microtiter plates diluted 5 times with buffer). Using a microplate reader, the absorption of the mixture is measured at a wavelength of 415 nm. After measurement, add 25 μl of human sputum elastase (EPC) at a concentration of 6 μg / ml or 25 μl of human leukocytelastase and leave for 30 min at room temperature. After that, the absorbance is measured at 415 nm. The percent inhibition by drug is determined by the formula: 100 x (1- “r” in the presence of an inhibitor) “r” in the absence of an inhibitor), where “r” is absorption after 30 minutes of incubation minus absorption before addition of the enzyme. The effect of inhibitors on other proteases is determined similarly using N-succinyl- (Ala) 2 -p-nitroanilide for porcine pancreatic elastase (type IV, final concentration 5 μg / ml), N-alpha-benzoyl-Arg-p-nitroanilide for trypsin bovine pancreas (type I, final concentration 16 μg / ml), methoxysuccinyl- (Ala) 2 -PrO-Met-p-nitroanilide for bovine pancreas chymotrypsin (type II, final concentration 1.5 μg / ml) and cathepsin G human sputum (final concentration of 10 units / ml). EMF and cathepsin G are obtained from the Elastin Product Company Inc. PC. Montana, USA All other substrates and proteases are supplied by Sigma Chemicals Co.

Результаты приведены в табл. 5 и 6. The results are shown in table. 5 and 6.

Каждая величина выражена в виде 50%-ной ингибирующей концентрации. Each value is expressed as a 50% inhibitory concentration.

П р и м е р 1 (Получение вещества WS 7622А)
В каждую из двенадцати колб Эрленмейера на 500 мл загружают водную посевную среду (200 мл), содержащую 1% растворимого крахмала, 1% сахарозы, 1% глюкозы, 1% фарма-среды (фирменное название муки из хлопковых семян), 0,5% полипептона, 0,5% соевой муки и 0,1% СаСО3, и стерилизуют 30 мин при 120оС. Каждую из посевных сред заражают петелькой Streptomyces resistomycificus N 7622 на зрелой скошенной культуре. Колбы встряхивают 3 дня при 30оС с помощью роторных качалок. Полученный посевной культурой заражают 160 л стерильных ферментативных сред, содержащих 4% Пайн-Декс (фирменное название кислотного гидролизата крахмала), 1% муки из клейковины, 0,5% проросшей пшеницы, 0,5% картофельного белка и 0,2% СаСО3, в сосуде-ферментаторе на 200 л из нержавеющей стали. Ферментацию ведут 5 дн при 25оС, скорости подачи воздуха 160 л/мин и перемешивании со скоростью 200 об/мин.PRI me R 1 (Preparation of substance WS 7622A)
In each of the twelve Erlenmeyer flasks per 500 ml, an aqueous inoculum medium (200 ml) containing 1% soluble starch, 1% sucrose, 1% glucose, 1% pharmaceutical medium (brand name cottonseed flour) is loaded, 0.5% polypeptone, 0.5% soybean meal and 0.1% of CaCO3 and sterilized for 30 minutes at 120 ° C. Each of the seed medium inoculated with Streptomyces resistomycificus N loop 7622 on mature beveled culture. The flasks are shaken for 3 days at 30 ° C with a rotary rocking. The resulting seed culture infects 160 L of sterile enzyme media containing 4% Pine-Dex (brand name acid starch hydrolyzate), 1% gluten flour, 0.5% sprouted wheat, 0.5% potato protein and 0.2% CaCO 3 , in a 200 L stainless steel fermenter. Fermentation lead 5 days at 25 ° C, air flow rate 160 l / min and stirring at 200 rev / min.

Количество вещества WS 7622А в ферментационном бульоне оценивают в испытании на ингибирование эластазы in vitro. The amount of substance WS 7622A in the fermentation broth was evaluated in an in vitro elastase inhibition assay.

Для испытания образец готовят следующим образом. For testing, the sample is prepared as follows.

При интенсивном перемешивании к бульону добавляют равное количество ацетона. Смесь оставляют на 1 ч при комнатной температуре и затем фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении до необходимого объема. Испытание на ингибирование эластазы описано ранее. With vigorous stirring, an equal amount of acetone is added to the broth. The mixture was left for 1 h at room temperature and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure to the desired volume. An elastase inhibition assay has been described previously.

Культуральный бульон (160 л) фильтруют через диатомовую землю и при перемешивании к мицелиальному пирогу добавляют 50 л ацетона. Смесь оставляют примерно на сутки при комнатной температуре и затем фильтруют. Для удаления ацетона фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Фильтрат (140 л) вышеполученного бульона и мицелиальный экстракт объединяют и пропускают через колонку с полимерным адсорбентом Диаионом НР-20. Колонку промывают 50 л воды и 50% -ным водным метанолом (50 л). Концентрированием элюата при пониженном давлении получают маслянистый остаток, который переносят на колонку с силикагелем (Кизельгель 60, 70-230 меш, Мерк, 1,3 л) и хроматографируют. Колонку промывают 2 л смеси н-гексан-этилацетат (1:1 об./об.) и 4 л этилацетата, активное вещество элюируют с колонки ацетоном (3 л) и смесью ацетон-метанол (10:1,6 л). Активные фракции (6 л) соединяют, концентрируют досуха и подвергают колоночной хроматографии на силикагеле со ступенчатым элюированием смесями хлороформа с метанолом в качестве растворителей. Активное вещество элюируется смесью хлороформ-метанол (10:1 об./об.). Концентрированием и высушиванием фракций при пониженном давлении получают 3 г желтого порошка. Вещество WS 7622А выделено с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением колонки УМС-D-ODS-15В (30 х 250 мм) из нержавеющей стали, заполненной S-15 окисью кремния в качестве обращенной фазы. В 50 мкл метанола растворяют 50 мг желтого порошка и наносят на колонку для ВЭЖХ с 60%-ным водным метанолом в качестве подвижной фазы при скорости потока 20 мл/мин. Время удерживания вещества WS 7622А 17,6 мин. Хроматограмму воспроизводят 60 раз, содержащие вещество WS 7622А фракции объединяют и концентрируют досуха. Остаток растворяют в небольшом количестве метанола и после выдерживания примерно сутки получают 600 мг вещества WS 7622А в виде бесцветных призм. The culture broth (160 L) is filtered through diatomaceous earth and 50 L of acetone is added to the mycelial cake with stirring. The mixture is left for about a day at room temperature and then filtered. To remove acetone, the filtrate was concentrated under reduced pressure. The filtrate (140 L) of the broth obtained above and the mycelial extract are combined and passed through a column with a polymer adsorbent Diaion HP-20. The column is washed with 50 L of water and 50% aqueous methanol (50 L). Concentration of the eluate under reduced pressure gives an oily residue, which is transferred onto a silica gel column (Kiesel gel 60, 70-230 mesh, Merck, 1.3 L) and chromatographed. The column is washed with 2 L of a mixture of n-hexane-ethyl acetate (1: 1 v / v) and 4 L of ethyl acetate, the active substance is eluted from the column with acetone (3 L) and a mixture of acetone-methanol (10: 1.6 L). The active fractions (6 L) are combined, concentrated to dryness and subjected to silica gel column chromatography with stepwise elution with mixtures of chloroform and methanol as solvents. The active substance is eluted with a mixture of chloroform-methanol (10: 1 v / v). Concentration and drying of the fractions under reduced pressure give 3 g of a yellow powder. The substance WS 7622A was isolated by high performance liquid chromatography (HPLC) using a UMS-D-ODS-15B (30 x 250 mm) stainless steel column filled with S-15 silica as reverse phase. 50 mg of yellow powder was dissolved in 50 μl of methanol and applied to an HPLC column with 60% aqueous methanol as the mobile phase at a flow rate of 20 ml / min. The retention time of the substance WS 7622A 17.6 minutes The chromatogram is reproduced 60 times, the fractions containing substance WS 7622A are combined and concentrated to dryness. The residue was dissolved in a small amount of methanol, and after holding for about a day, 600 mg of substance WS 7622A were obtained as colorless prisms.

П р и м е р 2 (Получение вещества WS 7622В). PRI me R 2 (Preparation of substance WS 7622B).

В каждую из двенадцати колб Эрленмейера на 500 мл помещают водную посевную среду (200 мл), содержащую 1% растворимого крахмала, 1% сахарозы, 1% глюкозы, 1% фарма-среды (фирменное название муки из семян хлопка), 0,5% полипептона, 0,5% соевой муки и 0,1% СаСО3 и стерилизуют 30 мин при 120оС. В каждую из посевных сред вносят для заражения петельку зрелой скошенной культуры Streptomyces resistomycificus N 7622. Колбы встряхивают 3 дня при 30оС с помощью роторной качалки. Полученной посевной культурой заражают 160 л стерильной ферментационной среды, содержащей 4% Пайн-Декс (фирменное название кислотного гидролизата крахмала), 1% муки из клейковины, 0,5% проросшей пшеницы, 0,5% картофельного белка и 0,2% СаСО3, в сосуде-ферментаторе из нержавеющей стали на 200 л. Ферментацию ведут 5 дн. при 25оС, скорости пропускания воздуха 160 л/мин и скорости перемешивали 200 об./мин.In each of the twelve Erlenmeyer flasks per 500 ml, an aqueous seed medium (200 ml) was placed containing 1% soluble starch, 1% sucrose, 1% glucose, 1% pharmaceutical medium (brand name cottonseed flour), 0.5% polypeptone, 0.5% soybean meal and 0.1% of CaCO3 and sterilized for 30 minutes at 120 ° C. to each of the seed medium is made to infect mature chamfered eyelet culture Streptomyces resistomycificus N 7622. The flasks were shaken for 3 days at 30 ° C with using a rotary rocking chair. The resulting seed culture infects 160 L of sterile fermentation medium containing 4% Pine-Dex (brand name acid starch hydrolyzate), 1% gluten flour, 0.5% sprouted wheat, 0.5% potato protein and 0.2% CaCO 3 , in a 200 l stainless steel fermenter vessel. Fermentation is 5 days. at 25 ° C, the velocity of air passing 160 l / min and stirring speed 200 rev. / min.

Количество вещества WS 7622В в ферментационном бульоне оценивают в испытании ингибирования эластазы in vitro. Образец для испытания готовят следующим образом. The amount of substance WS 7622B in the fermentation broth was evaluated in an in vitro elastase inhibition assay. A test sample is prepared as follows.

При интенсивном перемешивании к бульону прибавляют равное количество ацетона, смесь оставляют на 1 ч при комнатной температуре и затем фильтруют. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении до необходимого объема. Испытание на ингибирование эластазы описано ранее. With vigorous stirring, an equal amount of acetone is added to the broth, the mixture is left for 1 h at room temperature and then filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure to the desired volume. An elastase inhibition assay has been described previously.

Культуральный бульон (160 л) фильтруют через диатомовую землю. При перемешивании к мицелиальному пирогу добавляют 50 л ацетона. Смесь оставляют примерно на сутки при комнатной температуре и затем фильтруют. Для удаления ацетона фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Фильтрат (140 л) из вышеполученного бульона и мицелиальный экстракт объединяют и затем пропускают через колонку с примерным адсорбентом Диаионом НР-20 (фирменное название). Колонку промывают 50 л воды и 50%-ным водным метанолом (50 л), абсорбат элюируют 40 л метанола. Элюат концентрируют при пониженном давлении с получением маслянистого остатка, который переносят на колонку с силикагелем (Кизельгель 60, 70-230 меш, Мерк, 1,3 л) и хроматографируют. Колонку промывают 2 л смеси н-гексан-этилацетат (1:1 об./об.) и 4 л этилацетата, активное вещество элюируют из колонки ацетоном (3 л) и смесью ацетон-метанол (10:16 л). Активные фракции (6 л) объединяют, концентрируют досуха и подвергают колоночной хроматографии на силикагеле со ступенчатым элюированием смесями хлороформ-метанол в качестве растворителей. Активное вещество элюируется смесью хлороформ-метанол (10: 1). Концентрированием фракций и высушиванием при пониженном давлении получают 3 г желтого порошка. Вещество WS 7622В выделяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением колонок УМС-D-ODS-15В (30 х 250 мм) из нержавеющей стали, заполненных S-15 окисью кремния в качестве обращенной фазы. В 50 мкл метанола растворяют 50 мг желтого порошка и переносят в ВЭЖХ-колонку вместе с 60%-ным водным метанолом в качестве подвижной фазы при скорости потока 20 мл/мин. Время удерживания вещества WS 7622В 23 мин. Хроматограмму воспроизводят 60 раз, содержащие вещество WS 7622В фракции объединяют, концентрируют и после кристаллизации из метанола получают 180 мг вещества WS 7622В в виде бесцветных игл. The culture broth (160 L) is filtered through diatomaceous earth. With stirring, 50 l of acetone is added to the mycelial cake. The mixture is left for about a day at room temperature and then filtered. To remove acetone, the filtrate was concentrated under reduced pressure. The filtrate (140 L) from the broth obtained above and the mycelial extract are combined and then passed through a column with an exemplary adsorbent Diaion HP-20 (brand name). The column is washed with 50 L of water and 50% aqueous methanol (50 L), the absorbate is eluted with 40 L of methanol. The eluate was concentrated under reduced pressure to give an oily residue, which was transferred onto a silica gel column (Kiesel gel 60, 70-230 mesh, Merck, 1.3 L) and chromatographed. The column was washed with 2 L of a mixture of n-hexane-ethyl acetate (1: 1 v / v) and 4 L of ethyl acetate, the active substance was eluted from the column with acetone (3 L) and acetone-methanol (10:16 L). The active fractions (6 L) are combined, concentrated to dryness and subjected to silica gel column chromatography with stepwise elution with chloroform-methanol mixtures as solvents. The active substance is eluted with a mixture of chloroform-methanol (10: 1). Concentration of the fractions and drying under reduced pressure give 3 g of a yellow powder. The substance WS 7622B was isolated by high performance liquid chromatography (HPLC) using UMS-D-ODS-15B (30 x 250 mm) stainless steel columns filled with S-15 silica as reverse phase. 50 mg of yellow powder was dissolved in 50 μl of methanol and transferred to an HPLC column together with 60% aqueous methanol as the mobile phase at a flow rate of 20 ml / min. The retention time of the substance WS 7622B 23 min. The chromatogram is reproduced 60 times, the fractions containing substance WS 7622B are combined, concentrated and after crystallization from methanol, 180 mg of substance WS 7622B are obtained in the form of colorless needles.

П р и м е р 3 (Получение вещества WS 7622С и D). PRI me R 3 (Preparation of substance WS 7622C and D).

Ферментацию проводят по методике примера 1. Fermentation is carried out according to the method of example 1.

К полученному в результате ферментационному бульону (70 л) при перемешивании добавляют 70 л метанола. Смесь оставляют на 1 ч при комнатной температуре и затем фильтруют. К фильтрату добавляют 140 л воды и получают 280 л 25% -ного водного раствора метанола. Раствор пропускают через колонку с полимерным адсорбентом Диаионом НР-20 (фирменное название, 5 л). Колонку промывают 10 л 50%-ного водного метанола и элюируют 10 л метанола. Концентрированием элюата при пониженном давлении получают маслянистый остаток, который переносят в колонку с силикагелем (Кизельгель 60, 70-230 меш, Мерк, 2,2 л) и хроматографируют. Колонку промывают 10 л ацетона, активные вещества элюируют смесью ацетон-метанол (5:1). Собраны следующие фракции элюата: фракция N 1 1 л, фракция N 2 5,4 л, фракция N 3 3,8 л, фракция N 4 3,2 л. Вещества WS 7622С и D элюируются во фракции N 3 и фракции N 4 соответственно. To the resulting fermentation broth (70 L), 70 L of methanol was added with stirring. The mixture was left for 1 h at room temperature and then filtered. 140 L of water was added to the filtrate to give 280 L of a 25% aqueous methanol solution. The solution is passed through a column with a polymer adsorbent Diaion NR-20 (brand name, 5 l). The column was washed with 10 L of 50% aqueous methanol and eluted with 10 L of methanol. Concentration of the eluate under reduced pressure gives an oily residue, which is transferred to a silica gel column (Kiesel gel 60, 70-230 mesh, Merck, 2.2 L) and chromatographed. The column is washed with 10 L of acetone, the active substances are eluted with a mixture of acetone-methanol (5: 1). The following eluate fractions were collected: fraction N 1 1 l, fraction N 2 5.4 l, fraction N 3 3.8 l, fraction N 4 3.2 l. Substances WS 7622C and D elute in fraction N 3 and fraction N 4, respectively.

Выделение вещества WS 7622С. Isolation of substance WS 7622C.

Концентрированием и высушиванием при пониженном давлении фракции N 3 получают 1,2 г желтого порошка. 1 г содержащего вещество WS 7622С порошка растворяют в 6 мл смеси хлороформ-метанол (10:1) и подвергают колоночной хроматографии на силикагеле (100 мл), предварительно промытой смесью хлороформ-метанол (10:1). Колонку промывают 30 мл смеси хлороформ-метанол (10: 1) и вещество WS 7622С элюируют смесью хлороформ-метанол (5:1). Первые 180 мл элюата отбрасывают, последующие 80 мл собирают и после концентрирования и высушивания при пониженном давлении получают 372 мг порошка. Порошок растворяют в 6 мл этанола и после выдерживания 1 ч при 4оС получают 170 мг вещества WS 7622С в виде бесцветных игл.Concentration and drying under reduced pressure of fraction N 3 gives 1.2 g of a yellow powder. 1 g of a powder containing substance WS 7622C was dissolved in 6 ml of a mixture of chloroform-methanol (10: 1) and subjected to column chromatography on silica gel (100 ml), previously washed with a mixture of chloroform-methanol (10: 1). The column was washed with 30 ml of a mixture of chloroform-methanol (10: 1) and the substance WS 7622C was eluted with a mixture of chloroform-methanol (5: 1). The first 180 ml of the eluate is discarded, the next 80 ml is collected, and after concentration and drying under reduced pressure, 372 mg of powder is obtained. The powder is dissolved in 6 ml of ethanol, and after incubation for 1 hour at 4 ° C gave 170 mg of WS 7622S as colorless needles.

Выделение вещества WS 7622D. Isolation of substance WS 7622D.

Концентрированием фракций N 4 досуха получают 3,3 г желтого порошка. 1 г содержащего вещество WS 7622D порошка растворяют в 60 мл смеси хлороформ-метанол (20:1) и подвергают хроматографии в колонке с 100 мл силикагеля, предварительно смоченного хлороформом. Колонку промывают 300 мл смеси хлороформ-метанол (20: 1) и 300 мл смеси хлороформ-метанол (10:1), вещество WS 7622D элюируют смесью хлороформ-метанол (5:1). Первые 200 мл элюата отбрасывают, последующие 90 мл собирают и после концентрирования досуха получают 127 мг порошка. Порошок растворяют в небольшом количестве этанола и после выдерживания около суток при 4оС получают 90 мг вещества WS 7622D в виде бесцветных игл.Concentration of fractions No. 4 to dryness gives 3.3 g of a yellow powder. 1 g of a powder containing substance WS 7622D was dissolved in 60 ml of a mixture of chloroform-methanol (20: 1) and subjected to column chromatography with 100 ml of silica gel previously wetted with chloroform. The column was washed with 300 ml of a mixture of chloroform-methanol (20: 1) and 300 ml of a mixture of chloroform-methanol (10: 1), substance WS 7622D was eluted with a mixture of chloroform-methanol (5: 1). The first 200 ml of the eluate is discarded, the next 90 ml is collected and after concentration to dryness, 127 mg of powder is obtained. The powder was dissolved in a small amount of ethanol and after standing overnight at 4 ° C to give 90 mg WS 7622D substance as colorless needles.

Claims (1)

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВ WS 7622 А, В, С И/ИЛИ D-ИНГИБИТОРОВ ЛЕЙКОЦИТЭЛАСТАЗЫ ЧЕЛОВЕКА ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ, заключающийся в том, что культивируют штамм-продуцент Streptomyces resistomycificus N 7622 (FERMBP-2306) в жидкой питательной среде, содержащей усваиваемые источники углерода, азота и минеральные соли, культуральную жидкость фильтруют и выделяют целевые продукты или их фармацевтически приемлемые соли со следующими физико-химическими свойствами:
Вещество WS 7622А:
Внешний вид: бесцветные призмы.METHOD FOR PRODUCING SUBSTANCES WS 7622 A, B, C AND / OR D-INHIBITORS OF HUMAN LEUKOCYTELASTASIS OR THEIR PHARMACEUTALLY ACCEPTABLE SALTS, which consists in cultivating a producer strain of Streptomyces resistomycificus N 7622 (nutrient medium), FERMB carbon, nitrogen and mineral salts, the culture fluid is filtered and the target products or their pharmaceutically acceptable salts with the following physicochemical properties are isolated:
Substance WS 7622A:
Appearance: colorless prisms. Характер веществ кислотный. The nature of the substances is acidic. Цветные реакции положительные: сульфат церия, пары Йода, отрицательные: нингидрин, реактив Молиша. Color reactions are positive: cerium sulfate, iodine vapor, negative: ninhydrin, Molis reagent. Растворимость растворимо: метанол, этанол, н-бутанол, плохо растворимо: хлороформ, ацетон, этилацетат, нерастворимо: вода, н-гексан. Solubility soluble: methanol, ethanol, n-butanol, poorly soluble: chloroform, acetone, ethyl acetate, insoluble: water, n-hexane. Тонкослойная хроматография (ТСХ):
хлороформ-метанол (5:1 об./об.) Rf 0,51,
ацетон-метанол (10:1 об./об.) Rf 0,52,
пластинки с кизельгель 60, F254 силикагелем, Мерк.Thin layer chromatography (TLC):
chloroform-methanol (5: 1 v / v) Rf 0.51,
acetone-methanol (10: 1 v / v) Rf 0.52,
records with kiesel gel 60, F254 silica gel, Merck. Температура плавления 250-252oС (разл.).Melting point 250-252 o C (decomp.). Удельное вращение (α) 2 D 3+36° (концентрация 1,0 MeOH).Specific Rotation (α) 2 D 3 +36 ° (concentration of 1.0 MeOH). УФ-спектр (MeOH) λmax:287нм(ε=3600),(MeOH-HCl)λmax: 287 нм, (MeOH-NaOH) λmax:298нм.
Молекулярная формула: C4 7H6 3N9O1 3.UV spectrum (MeOH) λ max : 287 nm (ε = 3600), (MeOH-HCl) λ max : 287 nm, (MeOH-NaOH) λ max : 298 nm.
Molecular Formula: C 4 7 H 6 3 N 9 O 1 3 . Элементный анализ:
выч.для C4 7H6 3N9O1 3 · 2H2O C 56,56, H 6,77, N 12,63%
найдено: C 56,65, H 6,62, N 12,27%
Молекулярная масса FAB MSm/z 984 (M + Na)+.Elemental analysis:
calcd for C 4 7 H 6 3 N 9 O 1 3 · 2H 2 OC 56.56, H 6.77, N 12.63%
Found: C 56.65, H 6.62, N 12.27%
Molecular Weight of FAB MSm / z 984 (M + Na) + . Инфракрасный спектр поглощения (КВГ) νmax 3400, 3300, 3060, 2980, 2940, 1735, 1710, 1690, 1670, 1660, 1640, 1540, 1520, 1470, 1380, 1330, 1300, 1260, 1220, 1200, 1160, 1130, 1090, 1000, 980, 940, 920 см- 1.Infrared Absorption Spectrum (CVG) ν max 3400, 3300, 3060, 2980, 2940, 1735, 1710, 1690, 1670, 1660, 1640, 1540, 1520, 1470, 1380, 1330, 1300, 1260, 1220, 1200, 1160, 1130, 1090, 1000, 980, 940, 920 cm - 1 . Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1Н/400 МГц, CP3OD/δ 7,22-7,09 (3H, m), 6,88 6,77 (3H, m), 6,74 (1H, s), 6,46 (1H, s), 5,46 (1H, m), 5,18 (1H, s), 4,85 (1H, s), 4,77 (1H, m), 4,65 (1H, m), 4,5 (1H, m), 3,96 (1H, m), 3,91 (1H, d, J=9Гц), 3,6-3,47 (2H, m), 3,03 (1H, m), 2,9 (3H, s), 2,86 (1H, m), 2,59-2,49 (2H, m), 2,39 (1H, m), 2,29-2,1 (2H, m), 2(1H, m), 1,84 (1H, m), 1,74 (3H, d J=9Гц), 1,72-1,53 (4H, m), 1,44 (3H, d, J= 6гц), 1,12 (1H, m), 1,1 (6H, d, j=6Гц), 0,99 (3H, d, J=6Гц), 0,94 (3H, d, J= 6Гц).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for Cores 1 N / 400 MHz, CP 3 OD / δ 7.22-7.09 (3H, m), 6.88 6.77 (3H, m), 6.74 (1H, s) 6.46 (1H, s), 5.46 (1H, s), 5.18 (1H, s), 4.85 (1H, s), 4.77 (1H, m), 4.65 ( 1H, m), 4.5 (1H, m), 3.96 (1H, m), 3.91 (1H, d, J = 9Hz), 3.6-3.47 (2H, m), 3 03 (1H, m), 2.9 (3H, s), 2.86 (1H, m), 2.59-2.49 (2H, m), 2.39 (1H, m), 2, 29-2.1 (2H, m), 2 (1H, m), 1.84 (1H, m), 1.74 (3H, d J = 9Hz), 1.72-1.53 (4H, m ), 1.44 (3H, d, J = 6Hz), 1.12 (1H, m), 1.1 (6H, d, j = 6Hz), 0.99 (3H, d, J = 6Hz), 0.94 (3H, d, J = 6Hz). Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1 3С/100 МГц, CD3OD/δ 179,7 (s), 176,3 (s), 174,7 (s), 173,3 (s), 172,4 (s), 171,4 (s), 170,3 (s), 165,8 (s), 160,2 (s), 145,7 (s), 145,6 (s), 137,5 (s), 134 (d), 131,4 (s), 130,6 (d) · 2, 129,8 (s), 129,1 (d) · 2, 129,1 (s), 127,6 (d), 119,1 (d), 118 (d), 76 (d), 73,4 (d), 63,1 (d),61,4 (d), 57,1 (d), 53,6 (d), 52,7 (d), 50,5 (d), 39,9 (t), 36,1 (t), 35,8 (d), 31,9 (q), 31 (t), 30,8 (d), 29,9 (t), 39,7 (t), 25,2 (t), 22,3 (t), 20,2 (q), 20 (q) · 2, 19,7 (q), 19,5 (q), 13,3 (q).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for Cores 1 3 C / 100 MHz, CD 3 OD / δ 179.7 (s), 176.3 (s), 174.7 (s), 173.3 (s), 172.4 ( s), 171.4 (s), 170.3 (s), 165.8 (s), 160.2 (s), 145.7 (s), 145.6 (s), 137.5 (s ), 134 (d), 131.4 (s), 130.6 (d) 2, 129.8 (s), 129.1 (d) 2, 129.1 (s), 127.6 ( d), 119.1 (d), 118 (d), 76 (d), 73.4 (d), 63.1 (d), 61.4 (d), 57.1 (d), 53, 6 (d), 52.7 (d), 50.5 (d), 39.9 (t), 36.1 (t), 35.8 (d), 31.9 (q), 31 (t ), 30.8 (d), 29.9 (t), 39.7 (t), 25.2 (t), 22.3 (t), 20.2 (q), 20 (q) 19.7 (q), 19.5 (q), 13.3 (q). Вещество WS 7622В:
Внешний вид бесцветные иглы.Substance WS 7622B:
Appearance colorless needles. Характер вещества кислотный. The nature of the substance is acidic. Цветные реакции положительные: сульфат церия, пары йода, хлорид железа (III), отрицательные: нингидрин, реактив Молиша, реактив Драгендорффа. Color reactions are positive: cerium sulfate, iodine vapor, iron (III) chloride, negative: ninhydrin, Molish reagent, Dragendorff reagent. Растворимость растворимо: метанол, этанол, н-бутанол, плохо растворимо: хлороформ, ацетон, нерастворимо: вода, н-гексан. Solubility soluble: methanol, ethanol, n-butanol, poorly soluble: chloroform, acetone, insoluble: water, n-hexane. Тонкослойная хроматография (ТСХ)
хлороформ-метанол (5:1 об./об.) Rf 0,55,
пластинки с кизельгелем 60, F 254 силикагелем, Мерк.Thin layer chromatography (TLC)
chloroform-methanol (5: 1 v / v) Rf 0.55,
silica gel plate 60, F 254 silica gel, Merck. Температура плавления 248-250oС (разл.).Melting point 248-250 o C (decomp.). Удельное вращение (α) 2 D 3+39° (концентрация 1,0 MeOH).Specific Rotation (α) 2 D 3 +39 ° (concentration 1.0 MeOH). УФ-спектр (MeOH) λmax 287hm, (ε=3800),, (MeOH-HCl) λmax 287hm, (MeOH-NaOH) λmax 299hm.UV spectrum (MeOH) λ max 287hm, (ε = 3800) ,, (MeOH-HCl) λ max 287hm, (MeOH-NaOH) λ max 299hm. Молекулярная формула: C4 8H6 5N9O1 3.Molecular Formula: C 4 8 H 6 5 N 9 O 1 3 . Элементный анализ:
выч.для C4 8H6 5N9O1 3 · 3H2O C 55,96, H 6,95, N 12,24%
найдено: C 55,84, H 7,05, N 12,12%
Молекулярная масса FAB-MSm/z 998 (M+Na)+.Elemental analysis:
calcd for C 4 8 H 6 5 N 9 O 1 3 · 3H 2 OC 55.96, H 6.95, N 12.24%
Found: C, 55.84; H, 7.05; N, 12.12%
Molecular Weight of FAB-MSm / z 998 (M + Na) + . Инфракрасный спектр поглощения (KBF) νmax 3400, 3300, 2960, 1735, 1680, 1660, 1640, 1540, 1520, 1460, 1400, 1380, 1330, 1290, 1250, 1460, 1400, 1380, 1330, 1290, 1250, 1200, 1180, 1050, 1000, 980, 940, 920 см- 1.Infrared Absorption Spectrum (KBF) ν max 3400, 3300, 2960, 1735, 1680, 1660, 1640, 1540, 1520, 1460, 1400, 1380, 1330, 1290, 1250, 1460, 1400, 1380, 1330, 1290, 1250, 1200, 1180, 1050, 1000, 980, 940, 920 cm - 1 . Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1 3С/400 Мгц, ДМСО- d6/δ: 9,48(1Н, шир. s), 9,03(1Н, шир.s), 8,76(1Н, шир.s), 8,3(1Н, шир.d, J=6Гц), 7,77(1Н, d, J=7 Гц), 7,21(1Н, d, J=8Гц), 7,2-7,11(3Н,m), 6,97(1Н, шир.d, J=7 гц), 6,8 (2Н, d, J=8 Гц), 6,72(1Н, шир.s), 6,67(1Н, s), 6,63(1Н, q, J=7 Гц), 6,37 (1Н, s), 5,48(1Н, m), 5,4(1Н, m), 5,09(1Н,m), 4,77(1Н,m), 4,64(1Н, m), 4,38(1Н, m), 4,31(1Н, m), 3,87-3,8(2Н, m), 3,4-3,3(2Н, m), 2,95(1Н,m), 2,79(3Н, s), 2,65(1Н, m), 2,4-2,2(4Н, m), 2(1Н,m), 1,87(1Н,m), 1,73(1Н,m), 1,65(3Н, d, J= 7 Гц), 1,65-1,4(5Н, m), 1,32(3Н, d, J=6 Гц), 1,27(1Н,m), 0,97(3Н, d, J=6 Гц), 0,97(1Н, m), 0,91(3Н, d, J=6 Гц), 0,88(3Н, d, J=6 Гц), 0,81(3Н, t, J=7 Гц).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for Cores 1 3 C / 400 MHz, DMSO-d 6 / δ: 9.48 (1H, br.s), 9.03 (1H, br.s), 8.76 (1H, br. s), 8.3 (1H, br d, J = 6Hz), 7.77 (1H, d, J = 7 Hz), 7.21 (1H, d, J = 8Hz), 7.2-7 11 (3H, m), 6.97 (1H, br d, J = 7 Hz), 6.8 (2H, d, J = 8 Hz), 6.72 (1 H, br.s), 6 67 (1H, s), 6.63 (1H, q, J = 7 Hz), 6.37 (1H, s), 5.48 (1H, m), 5.4 (1H, m), 5 09 (1H, m), 4.77 (1H, m), 4.64 (1H, m), 4.38 (1H, m), 4.31 (1H, m), 3.87-3, 8 (2H, m), 3.4-3.3 (2H, m), 2.95 (1H, m), 2.79 (3H, s), 2.65 (1H, m), 2.4 -2.2 (4H, m), 2 (1H, m), 1.87 (1H, m), 1.73 (1H, m), 1.65 (3H, d, J = 7 Hz), 1 65-1.4 (5H, m), 1.32 (3H, d, J = 6 Hz), 1.27 (1H, m), 0.97 (3H, d, J = 6 Hz), 0 97 (1H, m), 0.91 (3H, d, J = 6 Hz), 0.88 (3H, d, J = 6 Hz), 0.81 (3H, t, J = 7 Hz). Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1 3С/100 МГц, ДМСО d6/δ: 175,6(s), 174,8(s), 172(s),170,9(s),170,6(s), 170,3(s), 168,7(s), 162,5(s), 157,4(s), 144,2(s), 144,2(s), 136,5(s), 131,1(d), 130,7(s), 129,6(d) · 2, 128,4(s), 127,9(d) · 2, 127,8(s), 126,4(d), 118,9(d), 116,8(d), 74,2(d), 72,1(d), 61(d), 59,8(d), 55,2(d), 51,6(d), 50,8(d), 48,6(d), 40,9(d), 38,2(t), 35(t), 30,8(q), 29,8(t), 28,8(d), 28,4(t), 28,1(t), 27,1(t), 23,3(t), 21,2(t), 19,6(q), 19,1(q), 19(q), 17,7(q), 12,9(q), 11,9(q).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for Cores 1 3 C / 100 MHz, DMSO d 6 / δ: 175.6 (s), 174.8 (s), 172 (s), 170.9 (s), 170.6 (s ), 170.3 (s), 168.7 (s), 162.5 (s), 157.4 (s), 144.2 (s), 144.2 (s), 136.5 (s) , 131.1 (d), 130.7 (s), 129.6 (d) 2, 128.4 (s), 127.9 (d) 2, 127.8 (s), 126.4 (d), 118.9 (d), 116.8 (d), 74.2 (d), 72.1 (d), 61 (d), 59.8 (d), 55.2 (d) , 51.6 (d), 50.8 (d), 48.6 (d), 40.9 (d), 38.2 (t), 35 (t), 30.8 (q), 29, 8 (t), 28.8 (d), 28.4 (t), 28.1 (t), 27.1 (t), 23.3 (t), 21.2 (t), 19.6 (q), 19.1 (q), 19 (q), 17.7 (q), 12.9 (q), 11.9 (q). Вещество WS 7622С:
Внешний вид бесцветные иглы.Substance WS 7622C:
Appearance colorless needles. Характер вещества кислотный. The nature of the substance is acidic. Цветные реакции положительные: сульфат церия, пары йода, хлорид железа (III), отрицательные: нингидрин, реактив Молиша, реактив Драгендорффа. Color reactions are positive: cerium sulfate, iodine vapor, iron (III) chloride, negative: ninhydrin, Molish reagent, Dragendorff reagent. Растворимость растворимо: метанол, этанол, плохо растворимо: хлороформ, ацетон, этилацетат, нерастворимо: вода, н-гексан. Solubility soluble: methanol, ethanol, poorly soluble: chloroform, acetone, ethyl acetate, insoluble: water, n-hexane. Тонкослойная хроматография (ТСХ): хлороформ-метанол (4:1 об./об.)Rf 0,56 (пластинки с кизельгелем 60, F 254 силикагелем, Мерк). Thin layer chromatography (TLC): chloroform-methanol (4: 1 v / v) Rf 0.56 (60 silica gel plate, F 254 silica gel, Merck). Температура плавления 250-252oС (разл.).Melting point 250-252 o C (decomp.). Удельное вращение (α/ 2 D 3+36° (концентрация0,5, MeOH).Specific rotation (α / 2 D 3 +36 ° (concentration 0.5, MeOH). УФ-спектр (MeOH) λmax 287 нм (ε=3500), (MeOH-HCl) λmax 287 hm, (MeOH-NaOH) λmax 298 hm.UV spectrum (MeOH) λ max 287 nm (ε = 3500), (MeOH-HCl) λ max 287 hm, (MeOH-NaOH) λ max 298 hm. Молекулярная формула C4 6H6 1N9O1 3.The molecular formula is C 4 6 H 6 1 N 9 O 1 3 . Элементный анализ:
выч.для C4 6H6 1N9O1 3 · 6H2O C 52,31, H 6,97, N 11,94%
найдено: C 51,95, H 6,66, N 11,77%
Молекулярная масса: FAB MSm/Z 970/M+Na/+
Инфракрасный спектр поглощения (KBF) νmax 3400, 3300, 2980, 1740, 1700, 1660, 1640, 1540, 1470, 1450, 1410, 1335, 1260, 1230, 1200, 1160, 1140, 1070, 1010, 980, 940, 920, 880 см- 1.Elemental analysis:
calcd for C 4 6 H 6 1 N 9 O 1 3 · 6H 2 OC 52.31, H 6.97, N 11.94%
Found: C, 51.95; H, 6.66; N, 11.77%
Molecular Weight: FAB MSm / Z 970 / M + Na / +
Infrared Absorption Spectrum (KBF) ν max 3400, 3300, 2980, 1740, 1700, 1660, 1640, 1540, 1470, 1450, 1410, 1335, 1260, 1230, 1200, 1160, 1140, 1070, 1010, 980, 940, 920, 880 cm - 1 . Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1Н/400 МГц, CD3OD/δ 7,21-7,1(3Н, m), 6,86-6,77(3Н, m), 6,75(1Н, s), 6,47(1Н, s), 5,46(1Н,m), 5,18(1Н, m), 4,85(1Н, s), 4,74(1Н, m), 4,65(1Н,m), 4,51(1Н,m), 3,94(1Н,m) 3,9(1H, d, J= 10Гц), 5,58-3,46(2Н, m), 3,02(1Н, m), 2,9(3Н,s), 2,86(1Н,m), 2,55(1Н, m), 2,38(1Н, d,J=14 и 11 Гц), 2,28(2Н, q, J=7 Гц), 2,3-2,16(2Н,m), 1,99(1Н,m), 1,84(1Н,m), 1,75(3H,d,J=7 Гц), 1,78-1,54(4Н,m), 1,44(3Н,d, J=6,5 Гц), 1,13(3Н, t, J=7Гц), 1,12(1H,m), 1,01(3H, d, J=6,5 Гц), 0,97(3H, d J=6,5 Гц).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for Cores 1 N / 400 MHz, CD 3 OD / δ 7.21-7.1 (3H, m), 6.86-6.77 (3H, m), 6.75 (1H, s ), 6.47 (1H, s), 5.46 (1H, m), 5.18 (1H, m), 4.85 (1H, s), 4.74 (1H, m), 4.65 (1H, m), 4.51 (1H, m), 3.94 (1H, m) 3.9 (1H, d, J = 10Hz), 5.58-3.46 (2H, m), 3 , 02 (1H, m), 2.9 (3H, s), 2.86 (1H, m), 2.55 (1H, m), 2.38 (1H, d, J = 14 and 11 Hz) 2.28 (2H, q, J = 7 Hz), 2.3-2.16 (2H, m), 1.99 (1H, m), 1.84 (1H, m), 1.75 ( 3H, d, J = 7 Hz), 1.78-1.54 (4H, m), 1.44 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.13 (3H, t, J = 7Hz ), 1.12 (1H, m), 1.01 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.97 (3H, d J = 6.5 Hz). Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1 3С/100 МГц, CD3OD/δ 176,7(s), 176,4(s), 174,7(s), 173,4(s), 172,5(s), 171,4(s), 170,4(s), 165,8(s), 160,4(s), 145,8(s), 145,7(s), 137,5 (s), 134 (d), 131,4(s), 130,6(d) · 2, 129,8(s), 129,1(d) · 2, 129,1 (s), 127,7 (d), 119,1 (d),118 (d), 76(d), 73,5(d), 63,1(d), 61,4(d), 57,1(d), 53,7(d),52,7(d), 50,5(d), 39,9(t), 36,1(t), 31,8(q), 31(t), 30,8(d), 29,9(t), 29,7(t), 29,7(t), 25,3(t), 22,3(t), 20,2(q), 19,4(q), 19,4(q), 13,3(q), 10,3(q).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for Cores 1 3 C / 100 MHz, CD 3 OD / δ 176.7 (s), 176.4 (s), 174.7 (s), 173.4 (s), 172.5 ( s), 171.4 (s), 170.4 (s), 165.8 (s), 160.4 (s), 145.8 (s), 145.7 (s), 137.5 (s ), 134 (d), 131.4 (s), 130.6 (d) 2, 129.8 (s), 129.1 (d) 2, 129.1 (s), 127.7 ( d), 119.1 (d), 118 (d), 76 (d), 73.5 (d), 63.1 (d), 61.4 (d), 57.1 (d), 53, 7 (d), 52.7 (d), 50.5 (d), 39.9 (t), 36.1 (t), 31.8 (q), 31 (t), 30.8 (d ), 29.9 (t), 29.7 (t), 29.7 (t), 25.3 (t), 22.3 (t), 20.2 (q), 19.4 (q) 19.4 (q), 13.3 (q), 10.3 (q). Вещество WS 7622D:
Внешний вид бесцветные иглы.Substance WS 7622D:
Appearance colorless needles. Характер вещества кислотный. The nature of the substance is acidic. Цветные реакции положительные: сульфат церия, пары йода, хлорид железа (III), отрицательные: нингидрин, реактив Молиша, реактив Драгендорффа. Color reactions are positive: cerium sulfate, iodine vapor, iron (III) chloride, negative: ninhydrin, Molish reagent, Dragendorff reagent. Растворимость растворимо: метанол, этанол, плохо растворимо: вода, хлороформ, нерастворимо: н-гексан. Solubility soluble: methanol, ethanol, poorly soluble: water, chloroform, insoluble: n-hexane. Тонкослойная хроматография (ТСХ): хлороформ-метанол (4:1 об./об.)Rf 0,45 (пластинки с Кизельгелем 60, F 254 силикагелем, Мерк). Thin layer chromatography (TLC): chloroform-methanol (4: 1 v / v) Rf 0.45 (plates with Kiesel gel 60, F 254 silica gel, Merck). Температура плавления 250-252oС (разл.).Melting point 250-252 o C (decomp.). Удельное вращение (α/ 2 D 4 +35,8o /концентрация 0,5 MeOH).Specific rotation (α / 2 D 4 +35.8 o / concentration 0.5 MeOH). УФ-спектр (MEOH) λmax 287 нм ε = 3640 (MeOH-HCl) λmax: 287 hm, (MeOH-NaOH) λmax: 298 hm.UV spectrum (MEOH) λ max 287 nm ε = 3640 (MeOH-HCl) λ max : 287 hm, (MeOH-NaOH) λ max : 298 hm. Молекулярная формула: C4 5H5 9N9O1 3.Molecular Formula: C 4 5 H 5 9 N 9 O 1 3 . Элементный анализ:
выч.для C4 5H5 9N9O1 3 · 6H2O C 51,86, H 6,87, N12,10%
найдено: C 51,90, H 6,26, N 12,08%
Молекулярная масса: FAB-MSm/Z 956 (M+Na)+.Elemental analysis:
calcd for C 4 5 H 5 9 N 9 O 1 3 · 6H 2 OC 51.86, H 6.87, N12.10%
Found: C, 51.90; H, 6.26; N, 12.08%
Molecular mass: FAB-MSm / Z 956 (M + Na) + . Инфракрасный спектр поглощения (KBF) νmax:
Figure 00000001
.Infrared Absorption Spectrum (KBF) ν max :
Figure 00000001
. Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1Н/400 мГц, CD3OD/δ 7,2-7,1 (3Н,m), 6,85-6,77(3Н,m), 6,73(1Н,s), 6,46(1Н,s), 5,46(1Н,m), 5,18(1Н,m), 4,84(1Н, s), 4,73(1H, m), 4,64(1Н, m), 4,5(1Н,m), 3,99-3,87(2Н,m), 3,58-3,46(2Н,m), 3,01(1Н,m), 2,9(3Н,s), 2,87(1Н,m), 2,53(1Н,m), 2,38(1H,D-d, J=14 и 11 Гц), 2,3-2,16(2Н,m), 2(1Н, m), 1,99(3Н, s), 1,84(1Н,m), 1,75(3Н,d, J=7 Гц), 1,76-1,55(4Н, m), 1,43(3Н, d, J=6,5 Гц), 1,15(1Н, m), 1(3Н,d, J=6,5 Гц), 0,95(3Н, d, J=6,5 Гц).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for Cores 1 N / 400 MHz, CD 3 OD / δ 7.2-7.1 (3H, m), 6.85-6.77 (3H, m), 6.73 (1H, s ), 6.46 (1H, s), 5.46 (1H, m), 5.18 (1H, m), 4.84 (1H, s), 4.73 (1H, m), 4.64 (1H, m), 4.5 (1H, m), 3.99-3.87 (2H, m), 3.58-3.46 (2H, m), 3.01 (1H, m), 2.9 (3H, s), 2.87 (1H, m), 2.53 (1H, m), 2.38 (1H, Dd, J = 14 and 11 Hz), 2.3-2.16 (2H, m), 2 (1H, m), 1.99 (3H, s), 1.84 (1H, m), 1.75 (3H, d, J = 7 Hz), 1.76-1 55 (4H, m), 1.43 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.15 (1H, m), 1 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.95 (3H, d, J = 6.5 Hz). Спектр ядерного магнитного резонанса на ядрах 1 3С/100 мГц, CD3OD/δ 176,4(s), 174,6(s), 173,4(s), 173 (s), 172,4(s), 171,4(s), 170,4(s), 165,8(s), 160,3(s), 145,9(s), 145,9(s), 137,5(s), 134(d), 131,4(s), 130,6(d) · 2, 129,8(s), 129,1(d) ·2, 129,1(s), 127,6(d), 119(d), 118(d), 76(d), 73,5(d), 63,1(d), 61,3(d), 57,1(d), 53,9(d), 52,7(d), 50,5(d), 39,9(t), 36,1(t), 31,8(q), 31(t), 30,7(d), 29,9(t), 29,6(t), 25,3(t), 22,4(q), 22,3(t), 20,2(q), 19,5(q), 19,4(q), 13,3(q).Nuclear Magnetic Resonance Spectrum for Cores 1 3 C / 100 MHz, CD 3 OD / δ 176.4 (s), 174.6 (s), 173.4 (s), 173 (s), 172.4 (s) , 171.4 (s), 170.4 (s), 165.8 (s), 160.3 (s), 145.9 (s), 145.9 (s), 137.5 (s), 134 (d), 131.4 (s), 130.6 (d) 2, 129.8 (s), 129.1 (d) 2, 129.1 (s), 127.6 (d) , 119 (d), 118 (d), 76 (d), 73.5 (d), 63.1 (d), 61.3 (d), 57.1 (d), 53.9 (d) , 52.7 (d), 50.5 (d), 39.9 (t), 36.1 (t), 31.8 (q), 31 (t), 30.7 (d), 29, 9 (t), 29.6 (t), 25.3 (t), 22.4 (q), 22.3 (t), 20.2 (q), 19.5 (q), 19.4 (q), 13.3 (q).
SU904743493A 1989-10-02 1990-03-13 Method for production of compounds ws 7622 a, b, c and/or d-inhibitors of human leucocyteelastase or their pharmaceutically available salts RU2051174C1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB898922164A GB8922164D0 (en) 1989-10-02 1989-10-02 Fr 901277 substance,derivatives thereof,processes for preparation thereof and use thereof
GB8922164.2 1989-10-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2051174C1 true RU2051174C1 (en) 1995-12-27

Family

ID=10663929

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU904743493A RU2051174C1 (en) 1989-10-02 1990-03-13 Method for production of compounds ws 7622 a, b, c and/or d-inhibitors of human leucocyteelastase or their pharmaceutically available salts
SU904830589A RU2021280C1 (en) 1989-10-02 1990-08-03 Method of synthesis of compound "ws7622a" derivatives

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU904830589A RU2021280C1 (en) 1989-10-02 1990-08-03 Method of synthesis of compound "ws7622a" derivatives

Country Status (2)

Country Link
GB (1) GB8922164D0 (en)
RU (2) RU2051174C1 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Аналогов в патентной и научно-технической литературе не выявлено. *

Also Published As

Publication number Publication date
GB8922164D0 (en) 1989-11-15
RU2021280C1 (en) 1994-10-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK171329B1 (en) Pseudodisaccharide designated salbostatin, process for its preparation, plant protection product containing it and process for protecting plants against insects and / or harmful fungi
EP0451547B1 (en) 1,4,8-Triazacyclotridecane derivatives having prolyl endopeptidase inhibiting activity
US5142096A (en) 2,4-dihydroxy-3,5,6-trimethylbenzoic acid compounds
RU2051174C1 (en) Method for production of compounds ws 7622 a, b, c and/or d-inhibitors of human leucocyteelastase or their pharmaceutically available salts
EP0387712B1 (en) WS 7622 A,B,C and D substances, derivatives thereof, processes for preparation thereof and use thereof
US4014860A (en) Plasminostreptin (enzyme inhibitor) and method for producing it from streptomyces
RU2221870C2 (en) Mumbaistatin, method for its preparing and its application as pharmaceutical preparation
JP3326793B2 (en) FR901451 substance, its production method and its use
JP2966859B2 (en) Novel bioactive substance dioctatin and method for producing the same
JPH03157372A (en) Yl-01869p substance and production thereof
EP0284358B1 (en) Novel anti-tumor compounds, method for the preparation thereof, and pharmaceutical preparations containing them
KR0141322B1 (en) Antibiotics kimorexin-a and method for producing thereof
US4912215A (en) Q-1047 Substances
JP3068700B2 (en) Novel trehazolin derivatives and their production
JPH0474163A (en) New physiologically active substance mbp049-13 and production thereof
JPH01228495A (en) Enzyme inhibitor, its production and use
JP3686693B2 (en) Novel physiologically active substances veractin A and B and method for producing the same
JPS6348284A (en) Novel antibiotic yp-02908l-a and production thereof
JPH07173191A (en) New enzyme-inhibiting agent sf2776 substance and its production
JPS6330493A (en) C-304 substance and production thereof
JPH01168660A (en) Yl-0710m compound and production thereof
JPS62190193A (en) Novel platelet-agglutination suppressing substance aglyceride a, b and c, production and use thereof
JPH05239023A (en) Physiologically active substance mbp039-06 and its production
JPS61234787A (en) Novel antibiotic sf-2398 substance and production thereof
JPS6344581A (en) Substance yl-0358m-a and production thereof