RU2042356C1

RU2042356C1 - Method of heparin preparing

Info

Publication number: RU2042356C1
Authority: RU
Inventors: С.Е. Васюков; А.С. Ермолаев; Л.Е. Фрумин; И.А. Донецкий
Original assignee: ВНИИ технологии кровезаменителей и гормональных препаратов
Priority date: 1992-07-21
Filing date: 1992-07-21
Publication date: 1995-08-27

Abstract

FIELD: production of medicinal preparation. SUBSTANCE: method involves extraction of milled lung tissue of cattle with aqueous-saline solution in alkaline medium. Separated pulp is extracted with 2.3-2.5M solution of sodium chloride at pH 9.0-9.2, at 40-80 C, at phase ratio 1:(1.4-1.7). Prepared extract is used for preparing extractant of milled cattle lung. Method ensures to increase the yield of heparin by 20-25% and to isolate chondroitin sulfate additionally. EFFECT: improved method of heparin production.

Description

Изобретение относится к производству медицинских препаратов, в частности к получению биологически активного вещества-гепарина, а также сопутствующих гликозаминогликанов. The invention relates to the production of medicines, in particular to the production of a biologically active substance-heparin, as well as concomitant glycosaminoglycans.

Гепарин представляет собой кислый мукополисахарид (гликозаминогликан) и является препаратом антикоагулянтного действия. Heparin is an acid mucopolysaccharide (glycosaminoglycan) and is an anticoagulant drug.

Начиная с 60-х годов, гепарин получают из различного вида животного сырья (печень, легкие, мукоза и др.) экстракцией солевыми растворами и выделением целевого продукта из экстракта осаждением подходящим осадителем или комплексоном. Starting from the 60s, heparin was obtained from various types of animal raw materials (liver, lungs, mucose, etc.) by extraction with saline solutions and isolation of the target product from the extract by precipitation with a suitable precipitant or complexon.

Известные способы выделения гепарина из животного сырья не позволяют достаточно полно извлекать целевой продукт и значительная часть его вместе с сопутствующими гликозаминогликанами теряется с отходами производства. Known methods for the isolation of heparin from animal raw materials do not allow to fully extract the target product and a significant part of it, together with the accompanying glycosaminoglycans, is lost with production waste.

Наиболее близким по технической сущности и приемам осуществления является способ, заключающийся в экстракции измельченных легких крупного рогатого скота водно-солевым раствором в слабощелочной среде при повышенной температуре. Гепарин, содержащийся в экстракте, концентрируют сорбцией на анионитах с последующим элюированием. Элюат подвергают химической очистке, после чего целевой продукт осаждают этанолом. The closest in technical essence and implementation methods is the method, which consists in the extraction of crushed lungs of cattle with water-salt solution in a slightly alkaline environment at elevated temperature. The heparin contained in the extract was concentrated by sorption on anion exchangers, followed by elution. The eluate is subjected to chemical purification, after which the target product is precipitated with ethanol.

Недостатками этого способа являются: неполное извлечение гепарина из исходного сырья, что связано с тем, что процесс экстракции равновесный и выбранные оптимальные параметры процесса позволяют достигнуть выхода 20 тыс. ед. из 1 кг сырья; невозможность в данных условиях выделить из исходного сырья достаточное количество сопутствующих гликозаминогликанов (например, хондроитинсульфатов). Многочисленными исследованиями установлено, что изменение условий экстрагирования, например соотношение фаз, рН, ионной силы раствора, а также продолжительности и температурного режима экстракции не приводит к значительному увеличению выхода гепарина и ценных сопутствующих компонентов. The disadvantages of this method are: the incomplete extraction of heparin from the feedstock, due to the fact that the extraction process is equilibrium and the selected optimal process parameters allow to achieve a yield of 20 thousand units. from 1 kg of raw materials; the impossibility under these conditions to isolate from the feedstock a sufficient amount of concomitant glycosaminoglycans (for example, chondroitin sulfates). Numerous studies have found that changing the extraction conditions, for example, the ratio of phases, pH, ionic strength of the solution, as well as the duration and temperature of the extraction does not lead to a significant increase in the yield of heparin and valuable associated components.

Цель изобретения увеличение выхода гепарина и дополнительное извлечение сопутствующих гликозаминогликанов (например, хондроитинсульфата). The purpose of the invention is to increase the yield of heparin and the additional extraction of concomitant glycosaminoglycans (for example, chondroitin sulfate).

Для этого жмых легких, полученный после экстракции гепарина, подвергают дополнительной экстракции 2,5 н раствором хлорида натрия при рН 9,0-9,2 соотношении (мас. ) жмых:экстракт 1:(1,4-1,7) при 40-%-80^оС в течение 40-90 мин, экстракт отделяют и используют для приготовления экстрагента.For this, the pulp cake obtained after the extraction of heparin is subjected to additional extraction with a 2.5 N sodium chloride solution at a pH of 9.0–9.2 in a ratio (wt.) Of cake: extract 1: (1.4–1.7) at 40 -% - 80 ^about C for 40-90 minutes, the extract is separated and used to prepare the extractant.

Ниже приведены примеры реализации предлагаемого способа. Below are examples of the implementation of the proposed method.

П р и м е р 1. В круглодонную колбу загружают 750 г жмыха легких крупного рогатого скота (КРС) 1125 мл 2,5 молярного раствора хлорида натрия (соотношение твердой и жидкой фаз 1:1,5) доводят рН до 9,2, смесь нагревают до 60^оС, перемешивают 60 мин и отделяют жмых на центрифуге. Полученный экстракт (1020 мл) загружают в круглодонную колбу, туда же загружают 1 кг измельченных легких КРС 38,6 г хлорида натрия, 980 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 8,8, нагревают до 60^оС ± 2^оС, перемешивают 2 ч, нагревают до 100^оС, выдерживают 2 мин, охлаждают до 50^оС, и отделяют жмых на центрифуге. К полученному экстракту прибавляют 100 мл макропористого сильноосновного анионита АМ-п в Сl-форме, нагревают до 60^оС и перемешивают 6 ч. Затем анионит отделяют, промывают дистиллированной водой, переносят в колонку, промывают 1М-раствором хлорида натрия и десорбируют гепарин 2,5-молярным раствором хлорида натрия. Элюат осаждают 1,5 объемами этанола и перемешивают 1 ч. Осадок отделяют центрифугированием и высушивают на воздухе и в вакуумном сушильном шкафу при 50-60^оС. Получают 0,415 г Na-соли гепарина-сырца активностью 72 ЕД/мг.PRI me R 1. In a round-bottom flask load 750 g of cake of cattle lung (cattle) 1125 ml of a 2.5 molar solution of sodium chloride (the ratio of solid and liquid phases 1: 1.5) bring the pH to 9.2, the mixture is heated to 60 ^° C, stirred for 60 minutes and the cake is separated in a centrifuge. The extract obtained (1020 ml) was loaded into a round-bottom flask, 1 kg of crushed cattle lungs was loaded thereto, 38.6 g of sodium chloride, 980 ml of distilled water, adjusted to pH 8.8, heated to 60 ^° C ± 2 ^° C, stirred for 2 hours was heated ^to 100 ° C, held 2 min, cooled ^to 50 ° C, and separated in the centrifuge cake. To the obtained extract was added 100 ml of macroporous strongly basic anion exchange resin AM-p in the Cl form, heated to 60 ^° C and stirred for 6 hours. Then the anion exchange resin was separated, washed with distilled water, transferred to a column, washed with a 1 M sodium chloride solution and heparin 2 was desorbed. 5 molar solution of sodium chloride. The eluate was precipitated with 1.5 volumes of ethanol and stirred for 1 hour. The precipitate was separated by centrifugation and dried in air and in a vacuum oven at 50-60 ^° C to give 0.415 g of Na-salt of heparin crude activity 72 U / mg.

П р и м е р 2. Получение гепарина-сырца проводят, как в примере 1, но устанавливают кислотность экстрагента жмыха, равной 9,0. В результате получают 0,410 г Na-соли, гепарина-сырца активностью 71 ед/мг. PRI me R 2. Obtaining raw heparin is carried out, as in example 1, but set the acidity of the extractant meal, equal to 9.0. The result is 0.410 g of Na-salt, raw heparin with an activity of 71 u / mg.

П р и м е р 3. Получение гепарина-сырца проводят, как в примере 1, но устанавливают рН экстрагента жмыха, равный 9,1. Экстракцию проводят при соотношении твердой и жидкой фаз, равном 1:1,4, т.е. объем экстрагента составляет 1050 мл. Полученный экстракт в количестве 960 мл загружают в круглодонную колбу и прибавляют 1 кг измельченных легких КРС, 38,8 г NaCl, 1040 мл дистиллированной воды и далее поступают, как в примере 1. В результате получают 0,375 г Na-соли гепарина-сырца активностью 76 ед/мг. PRI me R 3. Obtaining raw heparin is carried out, as in example 1, but set the pH of the extractant meal, equal to 9.1. The extraction is carried out at a ratio of solid and liquid phases equal to 1: 1.4, i.e. the volume of extractant is 1050 ml. The obtained extract in the amount of 960 ml was loaded into a round bottom flask and 1 kg of crushed cattle lung, 38.8 g of NaCl, 1040 ml of distilled water were added and then proceed as in Example 1. The result was 0.375 g of crude heparin Na-salt with activity 76 u / mg

П р и м е р 4. Проводят процесс, как в примере 3, однако соотношение фаз при экстракции жмыха составляет 1:1,7. В результате получают 0,383 г Na-соли гепарина-сырца активностью 81 ед/мг. PRI me R 4. Carry out the process as in example 3, however, the phase ratio during extraction of the cake is 1: 1.7. The result is 0.383 g of Na-salt of raw heparin with an activity of 81 u / mg.

П р и м е р 5. Процесс проводят, как в примере 1, при рН экстрагента жмыха, равном 9,1, соотношении фаз, равном 1:1,5, и концентрации NaСl в экстрагенте, равной 2,3 Моль/л. В результате получают 0,407 г Na соли гепарина-сырца активностью 72 ед/мг. PRI me R 5. The process is carried out, as in example 1, at a pH of the extractant cake, equal to 9.1, a phase ratio of 1: 1.5, and a concentration of NaCl in the extractant equal to 2.3 mol / L. The result is 0.407 g of Na salt of raw heparin with an activity of 72 u / mg.

П р и м е р 6. Процесс проводят, как в примере 5, однако концентрация NaCl в экстракте составляет 2,4 Моль/л. В результате получают 0,327 г/л Na-соли гепарина-сырца активностью 85 ед/мг. PRI me R 6. The process is carried out as in example 5, however, the concentration of NaCl in the extract is 2.4 mol / L. The result is 0.327 g / l Na-salt of crude heparin with an activity of 85 u / mg.

П р и м е р 7. Процесс проводят, как в примере 1, при соотношении фаз 1: 1,5 молярности раствора NaCl, равной 2,4, рН 9,1, при 40^оС. В результате получают 0,393 г Na-соли гепарина-сырца активностью 70 ед/мг.PRI me R 7. The process is carried out, as in example 1, with a phase ratio of 1: 1.5, the molarity of the NaCl solution equal to 2.4, pH 9.1, at 40 ^about C. The result is 0.393 g of Na- raw heparin salts with an activity of 70 u / mg.

П р и м е р 8. Процесс проводят, как в примере 7, но при 80^оС. В результате получают 0,420 г Na-соли гепарина-сырца активностью 75 ед/мг.PRI me R 8. The process is carried out as in example 7, but at 80 ^about C. The result is 0.420 g of Na-salt of heparin raw activity of 75 u / mg

П р и м е р 9. Процесс проводят, как в примере 8, при соотношении фаз 1: 1,5, молярности раствора NaCl 2,4, рН 9,1 60^оС, но продолжительность экстракции составляет 40 мин. В результате получают 0,320 г Na-соли гепарина-сырца активностью 86 ед/мг.PRI me R 9. The process is carried out, as in example 8, with a phase ratio of 1: 1.5, the molarity of the NaCl solution 2.4, pH 9.1 60 ^about With, but the extraction time is 40 minutes The result is 0.320 g of Na-salt of raw heparin with an activity of 86 units / mg.

П р и м е р 10. Проводят, как в примере 9, но продолжительность экстракции составляет 90 мин. В результате получают 0,340 г Na-соли гепарина-сырца активностью 84 ед/мг. PRI me R 10. Carry out, as in example 9, but the duration of the extraction is 90 minutes The result is 0.340 g of Na-salt of raw heparin with an activity of 84 u / mg.

П р и м е р 11. В реактор вместимостью 25 л загружают 7,5 кг жмыха легких КРС и прибавляют 11,25 л 2,4 М раствора NaCl. Устанавливают рН 9,1 добавлением 20%-го раствора NaOH, смесь нагревают до 60 ± 2^оС за 30-35 мин и выдерживают при этих условиях и постоянном перемешивании 60 мин. Жмых отделяют на нутч-фильтре, отжимая его до остаточной влажности 74% Полученный экстракт в количестве 10,35 л загружают в реактор вместимостью 25 л и прибавляют 0,386 кг NaCl, 10 кг измельченных легких КРС и 9,65 л дистиллированной воды. Затем добавлением 20% -го раствора NaOH устанавливают рН 8,8, нагревают до 100^оС, выдерживают при этой температуре 2-3 мин и охлаждают до 50^оС. Полученный экстракт отделяют на нутч-фильтре, отжимая твердую фазу до остаточной влажности 77% Жмых в количестве 7,6 кг направляют на повторную экстракцию по предлагаемому способу, а из экстракта (22,4 л) выделяют гепарин-сырец ионообменным способом в колоночном варианте. Выход гепарина-сырца составляет 3,78 г активностью 78 ед/мг.PRI me R 11. In a reactor with a capacity of 25 l load 7.5 kg of cake of light cattle and add 11.25 l of a 2.4 M NaCl solution. Adjusted to pH 9.1 by addition of 20% NaOH solution, the mixture was heated to 60 ± 2 ^{° C} for 30-35 minutes and held at these conditions and constant stirring 60 min. The cake is separated on a suction filter, squeezing it to a residual moisture content of 74%. The resulting extract in the amount of 10.35 L is loaded into a reactor with a capacity of 25 L and 0.386 kg of NaCl, 10 kg of crushed light cattle and 9.65 L of distilled water are added. Then the addition of 20% NaOH solution was adjusted to pH 8.8, heated ^to 100 ° C, held at this temperature for 2-3 minutes and cooled to 50 ^C. The resulting extract is separated on a suction filter, pressing the solid phase to a residual humidity of 77 % Cake in the amount of 7.6 kg is sent for re-extraction according to the proposed method, and crude heparin is isolated from the extract (22.4 l) by the ion-exchange method in the columnar version. The yield of crude heparin is 3.78 g with an activity of 78 u / mg.

В табл. 1 приведены основные характеристики технологического процесса, включающие крайние границы интервалов. In the table. 1 shows the main characteristics of the process, including the extreme boundaries of the intervals.

П р и м е р 12. Химическую очистку Na-соли гепарина-сырца, полученной по примеру 11, проводят следующим образом. PRI me R 12. Chemical purification of the Na-salt of heparin raw obtained in example 11, is carried out as follows.

К 3,8 г гепарина-сырца активностью 78 ед/мг приливают 100 мл апирогенной дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения, устанавливают рН 8,0-8,5 и нагревают до 70^оС, после чего приливают 1,3 мл 30%-ного раствора натрия марганцово-кислого. Продолжают нагревание при перемешивании до полного обесцвечивания раствора. После этого добавляют 1 г активированного угля и медленно перемешивают в течение 1 ч. Смесь фильтруют на воронке Бюхнера через фильтрующие пластины типа ЕКS-1, КО-5, КО-7. К отфильтрованному раствору добавляют последовательно 0,1 г бисульфита натрия, 0,7 г натрия хлористого и фильтруют через пластины SKS-IIp и мембранный фильтр типа "Раll" и "Millipor". После фильтрации к раствору добавляют 3 мл апирогенной дистиллированной воды, в которой растворено 4,07 г трилона Б. Раствор охлаждают и приливают к нему при перемешивании 60 мл охлажденного этанола-ректификатора. Выпавший осадок гепарина отделяют, высушивают и взвешивают. Получают 1,84 г порошка гепарина активностью 140 ед/мг. Выход по стадии химочистки составляет 85% выход гепарина 25200 ед/кг.To 3.8 g of crude heparin activity 78 U / mg poured in 100 ml of pyrogen-free distilled water, stirred until complete dissolution, adjusted to pH 8.0-8.5 and heated to ⁷⁰ ° C, then poured 1.3 ml of 30% solution of sodium manganese acid. Heating is continued with stirring until the solution is completely discolored. After this, 1 g of activated carbon is added and slowly stirred for 1 h. The mixture is filtered on a Buchner funnel through filter plates of the type EKS-1, KO-5, KO-7. To the filtered solution, 0.1 g of sodium bisulfite, 0.7 g of sodium chloride are successively added and filtered through SKS-IIp plates and a membrane filter of the type "Pall" and "Millipor". After filtration, 3 ml of pyrogen-free distilled water is added to the solution, in which 4.07 g of Trilon B is dissolved. The solution is cooled and 60 ml of chilled ethanol-rectifier are added to it with stirring. The precipitated heparin precipitate is separated, dried and weighed. 1.84 g of heparin powder with an activity of 140 u / mg are obtained. The yield from the dry cleaning stage is 85%; the yield of heparin is 25,200 units / kg.

П р и м е р 13. Химочистку гепарина-сырца, наработанного по примерам 1-10 проводят, как в примере 12, объединяя гепарин-сырец, полученный от 10 одинаковых загрузок. Результаты химочистки приведены в табл. 2. PRI me R 13. The dry cleaning of raw heparin obtained in examples 1-10 is carried out, as in example 12, combining raw heparin obtained from 10 identical downloads. The results of chemical cleaning are given in table. 2.

П р и м е ч а н и е 1. В графе "Активность гепарина-сырца" приведена активность усредненного сырца от 10 аналогичных загрузок. NOTE 1 The column “Activity of raw heparin” shows the activity of averaged raw from 10 similar loads.

П р и м е ч а н и е 2. В графе "Выход на стадии,", рассчитывался по формуле:

100%
Из таблицы видно, что выход гепарина, полученного по предлагаемому способу, составляет 24-26 тыс. ЕД/кг, что на 25% больше, чем в действующей технологии. Внедрение в промышленность предлагаемого способа позволит на 25% увеличить производство гепарина без увеличения количества перерабатываемого сырья и без увеличения мощностей.NOTE 2: In the column "Output at the stage," it was calculated by the formula:

100%
The table shows that the yield of heparin obtained by the proposed method is 24-26 thousand units / kg, which is 25% more than in the current technology. The introduction of the proposed method into the industry will increase the production of heparin by 25% without increasing the amount of processed raw materials and without increasing capacity.

П р и м е р 14. К 11,2 л экстракта, полученного, как в примере 11 (собранного после колонки и освобожденного от гепарина), прибавляют 22,4 л охлажденного этилового спирта-ректификата и оставляют для созревания осадка на 2 ч при перемешивании. После этого осадок отделяют на стаканчиковой центрифуге. Надосадочную жидкость сливают, а осадок помещают в стакан, куда прибавляют 0,5 М раствор NaCl до общего объема 1,25 л. Добавлением 20%-го NaOH устанавливают рН 9-9,2 и перемешивают до получения до однородной суспензии, затем прибавляют 75 мл сильноосновного макропористого анионита в Cl-форме и оставляют при перемешивании и 50±2^оС на 18 ч. После этого анионит отделяют, промывают 50 мл 0,5 М раствором NaCl, помещают в колонку диаметром 2,2 см и промывают снизу вверх 125 мл 0,5 растворa NaCl со скоростью 40 мл/мин. После окончания промывания проводят десорбцию 2,5 М раствором NaCl со скоростью 10 мл/мин, причем собирают 125 мл элюата. К этому количеству элюата добавляют 250 мл этилового спирта-ректификата, охлажденного до 3-5^оС и полученную смесь медленно перемешивают при 8-10^оС в течение 2 ч. Осадок отделяют на воронке Бюхнера, промывают 50 мл этилового спирта-ректификата и высушивают в вакуум-шкафу при 50^оС до постоянного веса. Выход хондроитинсульфата (структуру устанавливают по данным ЯМР-спектроскопии) составляет 1,35 г.PRI me R 14. To 11.2 l of the extract obtained as in example 11 (collected after the column and freed from heparin), add 22.4 l of chilled ethyl rectified alcohol and left to mature the precipitate for 2 hours at stirring. After this, the precipitate is separated in a cup centrifuge. The supernatant is drained and the precipitate is placed in a beaker where a 0.5 M NaCl solution is added to a total volume of 1.25 L. By addition of 20% NaOH the pH was adjusted to 9-9,2 and stirred until obtaining a homogeneous suspension, then added 75 ml of a macroporous strongly basic anion exchanger in the Cl-form and is left under stirring and 50 ± 2 ^{° C} for 18 hours. After this anion exchanger is separated washed with 50 ml of 0.5 M NaCl solution, placed in a column with a diameter of 2.2 cm and washed upward from 125 ml of 0.5 NaCl solution at a rate of 40 ml / min. After washing, desorption is carried out with a 2.5 M NaCl solution at a rate of 10 ml / min, whereupon 125 ml of eluate is collected. To this amount of eluate was added 250 ml of ethyl alcohol rectified, cooled to 3-5 ^{° C} and the resulting mixture was slowly stirred at 8-10 ^C. for 2 hours. The precipitate was isolated on a Buchner funnel, washed with 50 ml of ethyl alcohol and dried rectified in a vacuum oven at 50 ^C to constant weight. The yield of chondroitin sulfate (the structure is determined according to NMR spectroscopy) is 1.35 g.

П р и м е р 15. 11,2 л экстракта, полученного как в примере 11 (собранного после колонки и освобожденного от гепарина), разбавляют в два раза дистиллированной водой и устанавливают рН 9-9,2 20%-ным раствором NaOH, полученный раствор нагревают до 50±2^оС при этой температуре пропускают через колонку диаметром 3,6 см, содержащую 375 мл сильноосновного макропористого анионита в Cl-форме со скоростью 185 мл/мин. После окончания сорбции проводят десорбцию 2,5 М раствором NaCl со скоростью 30 мл/мин и собирают 580 мл элюата. К элюату добавляют 1200 мл этилового спирта-ректификата, охлажденного до 3-5^оС и полученную взвесь медленно перемешивают при 8-10^оС в течение 2 ч. Осадок отделяют на стаканчиковой центрифуге, переносят на воронку Бюхнера, промывают два раза по 30 мл этилового спирта-ректификата и высушивают в вакуум-сушильном шкафу при 50^оС до постоянного веса. Выход порошка составляет 1,83 г. По данным УФ-спектроскопии он содержит 25% хондроитинсульфата, остальное нуклеиновые кислоты.PRI me R 15. 11.2 l of the extract obtained as in example 11 (collected after the column and freed from heparin), diluted twice with distilled water and set the pH to 9-9.2 with a 20% solution of NaOH, the resulting solution was heated to 50 ± 2 ^{° C} at this temperature is passed through a column of diameter 3.6 cm, containing 375 ml of a macroporous strongly basic anion exchanger in the Cl-form at a rate of 185 ml / min. After the end of sorption, desorption is carried out with a 2.5 M NaCl solution at a rate of 30 ml / min and 580 ml of eluate is collected. To the eluate was added 1200 ml of ethyl rectified alcohol, cooled to 3-5 ^{° C} and the resulting slurry was slowly stirred at 8-10 ^C. for 2 hours. The precipitate is separated in bowl centrifuge, transferred to a Buchner funnel, washed twice with 30 ml of rectified ethyl alcohol and dried in a vacuum oven ^at 50 C to constant weight. The yield of powder is 1.83 g. According to UV spectroscopy, it contains 25% chondroitin sulfate, the rest is nucleic acid.

П р и м е р 16. 11,2 л экстракта, полученного по действующей технологии, прошедшего через колонны, обрабатывают, как в примере 14. Выход хондроитинсульфата составляет 0,54 г. PRI me R 16. 11.2 l of the extract obtained by the current technology, passed through the columns, is treated as in example 14. The yield of chondroitin sulfate is 0.54 g.

П р и м е р 17. 11,2 г экстракта, полученного как в примере 16, обрабатывают, как в примере 15. Выход порошка составляет 1.68 г. По данным УФ-спекстроскопии он содержит 96% нуклеиновых кислот. PRI me R 17. 11.2 g of the extract obtained as in example 16, processed as in example 15. The powder yield is 1.68 g. According to UV spectroscopy, it contains 96% nucleic acids.

П р и м е р 18. В реактор вместимостью 25 л загружают 11,25 л отработанного экстракта (из которого ионообменным методом извлечен гепарин), прибавляют 0,658 кг и 7,5 кг жмыха легких, полученных после отделения экстракта по известному способу, включают мешалку, доводят рН до 9,1 20%-ным раствором NaOH, содержимое реактора нагревают до 60±2^оС за 30-35 мин и выдерживают при этой температуре 60 мин. Далее поступают, как в примере 11.PRI me R 18. In a reactor with a capacity of 25 l load 11.25 l of spent extract (from which heparin was extracted by ion-exchange method), add 0.658 kg and 7.5 kg of lung cake obtained after separation of the extract by a known method, include a stirrer the pH was adjusted to 9.1 with 20% NaOH solution, the reactor contents are heated to 60 ± 2 ^{° C} for 30-35 minutes and kept at this temperature for 60 min. Then proceed as in example 11.

Выход гепарина-сырца составляет 4,78 г, его активность 68 ед/мг. The yield of raw heparin is 4.78 g, its activity is 68 u / mg.

Отработанный вторичный экстракт делят на две части. Одну часть обрабатывают, как в примере 14. Выход хондроитинсульфата составляет 1,96 г. The spent secondary extract is divided into two parts. One part is treated as in Example 14. The yield of chondroitin sulfate is 1.96 g.

Другую часть обрабатывают, как в примере 15. Выход порошка составляет 2,74 г, в котором содержится 19% хондроитинсульфата. The other part is treated as in Example 15. The powder yield is 2.74 g, which contains 19% of chondroitin sulfate.

Из примеров 14-18 видно, что, осуществляя экстракцию по предлагаемому способу, удается из отработанных экстрактов извлечь дополнительные продукты, в том числе хондроитинсульфат ценный гликозаминогликан, используемый в медицинской и парфюмерной промышленности. Внедрение способа позволит получить дополнительно за счет комплексного использования сырья около 100 кг/год хондроитинсульфата. From examples 14-18 it is seen that, carrying out the extraction according to the proposed method, it is possible to extract additional products from spent extracts, including the valuable glycosaminoglycan chondroitin sulfate used in the medical and perfume industry. The implementation of the method will allow to obtain additionally due to the integrated use of raw materials about 100 kg / year of chondroitin sulfate.

Claims

METHOD FOR PRODUCING HEPARIN from cattle lungs by grinding raw materials, extraction with 0.8 1.2 M aqueous salt solution with a pH of 8.5-8.8 at 60-100 ^o C and a mass ratio of solid and liquid phases of 1: (2 -3), separating the cake and further isolating heparin from the supernatant by the ion-exchange method on anion exchange resin, characterized in that the cake is subjected to additional extraction with a 2.3-2.5 M aqueous-salt solution with a pH of 9.0-9.2 at 40-80 40-90 ^o C min and a weight ratio of the solid and liquid phases of 1: (1.4-1.7), and the resulting supernatant was used to prepare easily estragenta x.