RU2024110309A - Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения - Google Patents
Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2024110309A RU2024110309A RU2024110309A RU2024110309A RU2024110309A RU 2024110309 A RU2024110309 A RU 2024110309A RU 2024110309 A RU2024110309 A RU 2024110309A RU 2024110309 A RU2024110309 A RU 2024110309A RU 2024110309 A RU2024110309 A RU 2024110309A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- composition according
- less
- paragraphs
- viral vector
- Prior art date
Links
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 title claims 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 36
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims 7
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 claims 7
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 5
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 claims 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 5
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims 5
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 claims 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 5
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims 4
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 claims 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims 4
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims 2
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 claims 2
- 101000617738 Homo sapiens Survival motor neuron protein Proteins 0.000 claims 2
- -1 MgCl 2 Chemical compound 0.000 claims 2
- 102100021947 Survival motor neuron protein Human genes 0.000 claims 2
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 claims 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 1
- 102000006890 Methyl-CpG-Binding Protein 2 Human genes 0.000 claims 1
- 108010072388 Methyl-CpG-Binding Protein 2 Proteins 0.000 claims 1
- 108010034546 Serratia marcescens nuclease Proteins 0.000 claims 1
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims 1
- 208000003954 Spinal Muscular Atrophies of Childhood Diseases 0.000 claims 1
- 108010021188 Superoxide Dismutase-1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100038836 Superoxide dismutase [Cu-Zn] Human genes 0.000 claims 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims 1
- 229910052792 caesium Inorganic materials 0.000 claims 1
- TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N caesium atom Chemical compound [Cs] TVFDJXOCXUVLDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 claims 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 claims 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 claims 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 claims 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 claims 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims 1
Claims (79)
1. Фармацевтическая композиция, содержащая:
a. от 1 до 8 х 1013 геномов вирусного вектора AAV9/мл (г.в./мл);
b. менее 7% пустых вирусных капсидов;
c. менее 100 нг/мл белка клетки-хозяина на 1 х 1013 мкг/мл; и
d. менее 2 х 105 пг/мл остаточной ДНК клетки-хозяина на 1 х 1013 мкг/мл;
причем по меньшей мере 80% из 1-8 х 1013 геномов вирусного вектора AAV9/мл являются функциональными.
2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая:
a. менее 0,09 нг бензоназы на 1,0 х 1013 г.в.,
b. менее 30 мкг/г (ppm) цезия, и
c. 20-80 частей на миллион полоксамера 188.
3. Фармацевтическая композиция по п.1 или 2, содержащая:
a. менее 0,50 нг бычьего сывороточного альбумина (БСА) на 1,0 х 1013 г.в.;
b. менее 6,8х105 пг остаточной плазмидной ДНК на 1,0 х 1013 г.в.;
c. рН 7,7-8,3; или
d. 390-430 мОсм/кг;
4. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-3, содержащая
a. менее 600 частиц размером ≥ 25 мкм на контейнер с фармацевтической композицией, и
b. менее 6000 частиц размером ≥ 10 мкм на контейнер с фармацевтической композицией.
5. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-4, имеющая инфекционный титр 3,9 х 108-8,4 х 1010 МЕ на 1,0 х 1013 г.в.
6. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-5, содержащая общий белок в количестве 100-300 мкг на 1,0 х 1013 г.в.
7. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-6, содержащая:
рН 7,7-8,3,
390-430 мОсм/кг,
менее 600 частиц размером ≥ 25 мкм на контейнер с фармацевтической композицией,
менее 6000 частиц размером ≥ 10 мкм на контейнер с фармацевтической композицией,
1,7 х 1013-2,3 х 1013 г.в./мл,
инфекционный титр 3,9 х 108-8,4 х 1010 МЕ на 1,0 х 1013 г.в,
общий белок 100-300 мкг на 1,0 х 1013 г.в,
содержание плюроника F-68 20-80 ppm,
менее 5% пустого капсида,
и общую чистоту, определенную с помощью SDS-PAGE, более или равную 95%, и
менее или равно 0,75 ЕС/мл эндотоксина.
8. Фармацевтическая композиция по п.7, где фармацевтическая композиция индуцирует медианную выживаемость в мышиной модели delta7SMN, превышающую или равную 24 дням, в дозе 7,5 х 1013 мкг/кг.
9. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-8, где вирусный вектор AAV9 содержит полинуклеотид, кодирующий белок выживающего двигательного нейрона (SMN), полинуклеотид, кодирующий MeCP2, или полинуклеотид, кодирующий shRNA SOD1.
10. Фармацевтическая композиция по п.9, где
(a) полинуклеотид, кодирующий белок SMN, содержит последовательность, кодирующую белок SEQ ID NO: 2, или
(b) вирусный вектор AAV9 содержит SEQ ID NO: 1.
11. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-10, где вирусный вектор AAV9 содержит модифицированный ITR AAV2, промотор куриного бета-актина (CB), немедленный/ранний энхансер цитомегаловируса (CMV), модифицированный интрон поздней 16s SV40, сигнал полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH) и немодифицированный ITR AAV2.
12. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-11, где фармацевтическая композиция представляет собой водный фармацевтический состав.
13. Фармацевтическая композиция по п.12, где водный фармацевтический состав содержит Трис-буфер, MgCl2, NaCl и полоксамер 188, или
где водный фармацевтический состав не содержит консерванта.
14. Фармацевтическая композиция по п.13, где:
(i) концентрация Трис-буфера составляет 10-30 нМ;
(ii) pH состава составляет от 7,7 до 8,3;
(iii) концентрация MgCl2 составляет 0,5-1,5 мМ;
(iv) концентрация NaCl составляет 100-300 мМ; или
(v) состав содержит 0,005% мас./об. полоксамера 188.
15. Фармацевтическая композиция по п.13 или 14, где:
(i) концентрация Трис-буфера составляет 20 мМ Трис при pH 8,0;
(ii) pH состава составляет от 7,7 до 8,3;
(iii) концентрация MgCl2 составляет 1 мМ;
(iv) концентрация NaCl составляет 200 мМ; и
(v) состав содержит 0,005% мас./об. полоксамера 188.
16. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-15, содержащая менее 5%, менее 3% или менее 1% пустых капсидов.
17. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-16, где фармацевтическая композиция пригодна для интратекального или внутривенного введения.
18. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-17, где вирусный вектор AAV9 получен путем:
a. подкисления и очистки клеточного лизата клеток, экспрессирующих вирусный вектор AAV9;
b. очистки продукта (а) с использованием катионообменной хроматографии (CEX);
c. фильтрации продукта (b) посредством фильтрации с тангенциальным потоком;
d. ультрацентрифугирования продукта (c) с использованием 2-4М буфера хлорида цезия (CsCl); и
e. сбора вирусного вектора AAV9 из продукта (d).
19. Набор, содержащий фармацевтическую композицию по любому из пп. 1-18.
20. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 1-18 для лечения спинальной мышечной атрофии (СМА) I типа у пациента, нуждающегося в этом, где вирусный вектор AAV9 содержит полинуклеотид, кодирующий белок выживаемости мотонейронов (SMN).
21. Применение по п.20, в котором пациент:
a. имеет возраст девять месяцев или меньше;
b. имеет массу тела по меньшей мере приблизительно 2,6 кг;
c. имеет биаллельные нулевые мутации или делеции SMN1; и
d. имеет по меньшей мере одну функциональную копию SMN2.
22. Применение по п.20, где композицию вводят путем внутривенной или интратекальной инфузии пациенту, нуждающемуся в этом.
23. Фармацевтическая композиция для интратекального введения для лечения спинальной мышечной атрофии (СМА) I типа у пациента, нуждающегося в этом, содержащая:
a. от 1 до 8 х 1013 геномов вирусного вектора AAV9/мл (г.в./мл);
b. менее 7% пустых вирусных капсидов;
c. менее 100 нг/мл белка клетки-хозяина на 1 х 1013 г.в./мл; и
d. менее 2х10 5 пг/мл остаточной ДНК клетки-хозяина на 1 х 1013 г.в./мл;
причем по меньшей мере 80% из 1-8 х 1013 геномов вирусного вектора AAV9/мл являются функциональными.
24. Фармацевтическая композиция по п.23, где водный фармацевтический состав содержит Трис-буфер, MgCl2, NaCl и полоксамер 188, или
где водный фармацевтический состав не содержит консерванта.
25. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 1-18 для интратекального введения для лечения спинальной мышечной атрофии I типа (СМА) у пациента, нуждающегося в этом, где вирусный вектор AAV9 содержит полинуклеотид, кодирующий белок выживаемости мотонейронов (SMN).
26. Применение фармацевтической композиции по п.23 для интратекального введения для лечения спинальной мышечной атрофии (СМА) I типа у пациента, нуждающегося в этом, где вирусный вектор AAV9 содержит полинуклеотид, кодирующий белок выживаемости мотонейронов (SMN).
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/583,035 | 2017-11-08 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020118557A Division RU2818529C2 (ru) | 2017-11-08 | 2018-11-01 | Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2024110309A true RU2024110309A (ru) | 2024-04-23 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20210269487A1 (en) | Recombinant aav1, aav5, and aav6 capsid mutants and uses thereof | |
| JP2021502123A5 (ru) | ||
| US11878056B2 (en) | Scalable manufacturing platform for viral vector purification and viral vectors so purified for use in gene therapy | |
| JP7421338B2 (ja) | 免疫調節融合タンパク質 | |
| ES2768763T3 (es) | Vectores rAAV mejorados y métodos para la transducción de fotorreceptores y células EPR | |
| JP6767483B2 (ja) | 遺伝子療法のための、改変されたフリードライヒ運動失調症遺伝子およびベクター | |
| JP6837009B2 (ja) | 多段階陰イオン交換クロマトグラフィーによる組換えアデノ随伴ウイルス粒子の精製 | |
| JP2022125201A (ja) | 変異体キャプシドを有するアデノ関連ウイルスビリオンおよびその使用方法 | |
| JP2020510428A5 (ru) | ||
| RU2019139555A (ru) | Генная терапия нейрональных цероидных липофусцинозов | |
| MX2014004732A (es) | Formulaciones de etanercept estabilizadas con meglumina. | |
| JP4617058B2 (ja) | コンセンサスインターフェロンのＢ型肝炎表面抗原とｅ抗原の抑制剤としての応用 | |
| JP2021507687A5 (ru) | ||
| CA3099306A1 (en) | Compositions and methods for the treatment of parkinson's disease | |
| CN111225677A (zh) | 单采血液分离方法和用途 | |
| JP2019504003A5 (ru) | ||
| JP2020510648A5 (ru) | ||
| EP1294918B1 (en) | Replication deficient adenoviral tnf vector | |
| WO2006131550A1 (en) | Process for the purification of il-18 binding protein | |
| JPWO2020113034A5 (ru) | ||
| RU2024110309A (ru) | Средства и способ получения вирусных векторов и варианты их применения | |
| NZ804906A (en) | Means and method for preparing viral vectors and uses of same | |
| AU719601B2 (en) | In-vitro construction of SV40 viruses and pseudoviruses | |
| JP2008532518A (ja) | 昆虫細胞において産生される組換えｅ−セレクチン | |
| RU2021118669A (ru) | Вирусные векторы на основе aav и пути их применения |