Claims (34)
1. Аденоассоциированный вирус (AAV), содержащий капсидный белок, где капсидный белок содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 95% идентичной (i) любой из SEQ ID NO:1-7, (ii) области VP2 из любой из SEQ ID NO:1-7 или (iii) области VP3 из любой из SEQ ID NO:1-7, и дополнительно содержащий трансген, содержащий гетерологичный ген, функционально связанный с регуляторной последовательностью, контролирующей экспрессию гетерологичного гена в клетке-хозяине.1. An adeno-associated virus (AAV) containing a capsid protein, where the capsid protein contains an amino acid sequence that is at least 95% identical to (i) any of SEQ ID NOs: 1-7, (ii) the VP2 region from any of SEQ ID NO:1-7 or (iii) a VP3 region from any of SEQ ID NO:1-7, and further comprising a transgene containing a heterologous gene operably linked to a regulatory sequence controlling the expression of the heterologous gene in the host cell.
2. AAV по п. 1, где капсидный белок содержит аминокислотную последовательность из (i) любой из SEQ ID NO:1-7, (ii) области VP2 из любой из SEQ ID NO:1-7 или (iii) области VP3 из любой из SEQ ID NO:1-7.2. AAV according to claim 1, wherein the capsid protein comprises an amino acid sequence from (i) any of SEQ ID NOs: 1-7, (ii) a VP2 region from any of SEQ ID NOs: 1-7, or (iii) a VP3 region from any of SEQ ID NOs: 1-7.
3. Аденоассоциированный вирус (AAV), содержащий капсидный белок, где капсидный белок содержит функциональный фрагмент из любой из SEQ ID NO: 1-7, и дополнительно содержащий трансген, содержащий гетерологичный ген, функционально связанный с регуляторной последовательностью, контролирующей экспрессию гетерологичного гена в клетке-хозяине.3. Adeno-associated virus (AAV) containing a capsid protein, where the capsid protein contains a functional fragment from any of SEQ ID NOs: 1-7, and additionally containing a transgene containing a heterologous gene operably linked to a regulatory sequence that controls the expression of a heterologous gene in a cell -owner.
4. AAV по п. 3, где капсид содержит одно или несколько из вариабельных областей (VR), константных областей, локализованных между вариабельными областями, домена GBS и петли GH из аминокислотной последовательности из любой из SEQ ID NO: 1-7.4. AAV according to claim 3, wherein the capsid contains one or more of the variable regions (VR), constant regions located between the variable regions, the GBS domain, and the GH loop from the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 1-7.
5. Аденоассоциированный вирус, содержащий капсидный белок, где капсидный белок содержит аминокислотную последовательность, кодируемую нуклеотидной последовательностью, которая гибридизуется с (i) нуклеотидной последовательностью из любой из SEQ ID NO: 8-14, (ii) нуклеотидной последовательностью, кодирующей область VP2 из аминокислотной последовательности из любой из SEQ ID NO: 1-7, или (iii) нуклеотидной последовательностью, кодирующей область VP3 из аминокислотной последовательности из любой из SEQ ID NO: 1-7, и дополнительно содержащий трансген, содержащий гетерологичный ген, функционально связанный с регуляторной последовательностью, контролирующей экспрессию гетерологичного гена в клетке-хозяине.5. An adeno-associated virus containing a capsid protein, wherein the capsid protein comprises an amino acid sequence encoded by a nucleotide sequence that hybridizes to (i) a nucleotide sequence from any of SEQ ID NOs: 8-14, (ii) a nucleotide sequence encoding a VP2 region from an amino acid a sequence from any of SEQ ID NOs: 1-7, or (iii) a nucleotide sequence encoding a VP3 region from an amino acid sequence from any of SEQ ID NOs: 1-7, and further comprising a transgene containing a heterologous gene operably linked to a regulatory sequence , which controls the expression of a heterologous gene in the host cell.
6. AAV по любому из пп. 1-5, дополнительно содержащий инвертированные концевые повторы AAV.6. AAV according to any one of paragraphs. 1-5, additionally containing AAV inverted terminal repeats.
7. Композиция, содержащая AAV по любому из пп. 1-6 и физиологически совместимый носитель.7. Composition containing AAV according to any one of paragraphs. 1-6 and a physiologically compatible carrier.
8. Способ доставки трансгена в клетку, включающий приведение клетки в контакт с AAV по любому из пп. 1-6.8. A method for delivering a transgene into a cell, comprising bringing the cell into contact with an AAV according to any one of paragraphs. 1-6.
9. Композиция, содержащая AAV по любому из пп. 1-6, для доставки трансгена в клетку.9. Composition containing AAV according to any one of paragraphs. 1-6 to deliver the transgene into the cell.
10. Применение AAV по любому из пп. 1-6 для получения лекарственного средства для доставки трансгена в клетку.10. The use of AAV according to any one of paragraphs. 1-6 to obtain a drug for delivering the transgene into the cell.
11. Способ, композиция или применение по любому из пп. 8-10, где клетка представляет собой клетку печени.11. The method, composition or use according to any one of paragraphs. 8-10, where the cell is a liver cell.
12. Способ лечения субъекта, страдающего нарушением или заболеванием, ассоциированным с аномальной активностью эндогенного белка, включающий введение субъекту эффективного количества AAV, содержащего капсидный белок, где капсидный белок содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 95% идентичной (i) любой из SEQ ID NO:1-7, (ii) области VP2 из любой из SEQ ID NO:1-7 или (iii) области VP3 из любой из SEQ ID NO:1-7, и где AAV содержит трансген, кодирующий биологически активную копию белка.12. A method of treating a subject suffering from a disorder or disease associated with abnormal endogenous protein activity, comprising administering to the subject an effective amount of an AAV containing a capsid protein, wherein the capsid protein contains an amino acid sequence that is at least 95% identical to (i) any of SEQ ID NOs: 1-7, (ii) a VP2 region from any of SEQ ID NOs: 1-7 or (iii) a VP3 region from any of SEQ ID NOs: 1-7, and wherein the AAV contains a transgene encoding a biologically active copy squirrel.
13. Способ лечения субъекта, страдающего нарушением или заболеванием, ассоциированным с аномальной активностью эндогенного белка, включающий введение субъекту эффективного количества AAV по любому из пп. 1-8.13. A method of treating a subject suffering from a disorder or disease associated with abnormal endogenous protein activity, comprising administering to the subject an effective amount of AAV according to any one of paragraphs. 1-8.
14. Способ по п. 12 или 13, где нарушение или заболевание ассоциировано с аномальной активностью эндогенного гена, экспрессированного в клетке печени.14. The method of claim 12 or 13, wherein the disorder or disease is associated with an abnormal activity of an endogenous gene expressed in a liver cell.
15. Способ по любому из пп. 12-14, где нарушение или заболевание выбрано из группы, состоящей из гемофилии A, гемофилии B, болезни Вильсона, наследственного ангионевротического отека (HAE), недостаточности антитрипсина альфа 1 и галактоземии.15. The method according to any one of paragraphs. 12-14, wherein the disorder or disease is selected from the group consisting of hemophilia A, hemophilia B, Wilson's disease, hereditary angioedema (HAE), alpha 1 antitrypsin deficiency, and galactosemia.
16. Вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую капсидный белок аденоассоциированного вируса (AAV), имеющий аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 95% идентичной (i) любой из SEQ ID NO:1-7, (ii) области VP2 из любой из SEQ ID NO:1-7 или (iii) области VP3 из любой из SEQ ID NO:1-7.16. A vector containing a nucleic acid sequence encoding an adeno-associated virus (AAV) capsid protein having an amino acid sequence that is at least 95% identical to (i) any of SEQ ID NOs: 1-7, (ii) the VP2 region of any of SEQ ID NOs: 1-7 or (iii) VP3 regions from any of SEQ ID NOs: 1-7.
17. Вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую капсидный белок аденоассоциированного вируса (AAV), где нуклеотидная последовательность гибридизуется с (i) последовательностью нуклеиновой кислоты из любой из SEQ ID NO: 8-14, (ii) нуклеотидной последовательностью, кодирующей область VP2 из любой из SEQ ID NO:1-7, или (iii) нуклеотидной последовательностью, кодирующей область VP3 из любой из SEQ ID NO:1-7.17. A vector containing a nucleic acid sequence encoding an adeno-associated virus (AAV) capsid protein, wherein the nucleotide sequence hybridizes to (i) a nucleic acid sequence from any of SEQ ID NOs: 8-14, (ii) a nucleotide sequence encoding a VP2 region from any of SEQ ID NOs: 1-7, or (iii) a nucleotide sequence encoding a VP3 region from any of SEQ ID NOs: 1-7.
18. Вектор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую капсидный белок, содержащий функциональный фрагмент из любой из SEQ ID NO: 1-7.18. A vector containing a nucleic acid sequence encoding a capsid protein containing a functional fragment from any of SEQ ID NOs: 1-7.
19. Вектор по п. 18, где капсид содержит одно или несколько из вариабельных областей (VR), константных областей, локализованных между вариабельными областями, домена GBS и петли GH из аминокислотной последовательности из любой из SEQ ID NO: 1-7.19. The vector of claim 18, wherein the capsid contains one or more of variable regions (VR), constant regions located between variable regions, a GBS domain, and a GH loop from an amino acid sequence from any of SEQ ID NOs: 1-7.
20. Вектор по любому из пп. 16-19, где последовательность нуклеиновой кислоты функционально связана с гетерологичным регуляторным элементом, контролирующим экспрессию капсидного белка в клетке-хозяине.20. Vector according to any one of paragraphs. 16-19, wherein the nucleic acid sequence is operably linked to a heterologous regulatory element that controls the expression of a capsid protein in a host cell.
21. Клетка, содержащая вектор по любому из пп. 16-20.21. A cell containing a vector according to any one of paragraphs. 16-20.
22. Применение AAV по любому из пп. 1-8 для получения лекарственного средства для лечения нарушения или заболевания.22. The use of AAV according to any one of paragraphs. 1-8 to provide a medicament for the treatment of a disorder or disease.
23. Применение по п. 22, где нарушение или заболевание ассоциировано с аномальной активностью эндогенного белка и, кроме того, где AAV содержит трансген, кодирующий биологически активную копию белка.23. Use according to claim 22, wherein the disorder or disease is associated with abnormal activity of the endogenous protein, and furthermore, where the AAV contains a transgene encoding a biologically active copy of the protein.
24. Применение по п. 22 или 23, где нарушение или заболевание выбрано из группы, состоящей из гемофилии A, гемофилии B, болезни Вильсона, наследственного ангионевротического отека (HAE), недостаточности антитрипсина альфа 1 и галактоземии.24. Use according to claim 22 or 23, wherein the disorder or disease is selected from the group consisting of hemophilia A, hemophilia B, Wilson's disease, hereditary angioedema (HAE), alpha 1 antitrypsin deficiency, and galactosemia.
25. Композиция, содержащая AAV по любому из пп. 1-8, для лечения заболевания или нарушения.25. Composition containing AAV according to any one of paragraphs. 1-8 for treating a disease or disorder.
26. Композиция по п. 25, где нарушение или заболевание ассоциировано с аномальной активностью эндогенного белка и, кроме того, где AAV содержит трансген, кодирующий биологически активную копию белка.26. The composition of claim 25, wherein the disorder or disease is associated with an abnormal activity of the endogenous protein and, in addition, where the AAV contains a transgene encoding a biologically active copy of the protein.
27. Композиция по п. 26, где нарушение или заболевание выбрано из группы, состоящей из гемофилии A, гемофилии B, болезни Вильсона, наследственного ангионевротического отека (HAE), недостаточности антитрипсина альфа 1 и галактоземии.27. The composition of claim 26 wherein the disorder or disease is selected from the group consisting of hemophilia A, hemophilia B, Wilson's disease, hereditary angioedema (HAE), alpha 1 antitrypsin deficiency, and galactosemia.
28. Способ получения аденоассоциированного вируса (AAV) по любому из пп. 1-8, включающий:28. The method of obtaining adeno-associated virus (AAV) according to any one of paragraphs. 1-8, including:
(a) культивирование клетки для вирусной продукции, в которую введен первый вектор на основе нуклеиновой кислоты, содержащий 5’- и 3’-последовательности инвертированного концевого повтора AAV, фланкирующие трансген, содержащий гетерологичный ген, функционально связанный с регуляторными последовательностями, контролирующими экспрессию гетерологичного гена в клетке-хозяине, и второй вектор на основе нуклеиновой кислоты, содержащий последовательности нуклеиновых кислот rep и cap AAV, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты cap кодирует капсид AAV, который является по меньшей мере на 95% идентичным любой из SEQ ID NO:1-7; и(a) culturing a cell for viral production into which a first nucleic acid vector is introduced containing the 5' and 3' inverted terminal repeat sequences of AAV flanking a transgene containing a heterologous gene operably linked to regulatory sequences controlling expression of the heterologous gene in the host cell, and a second nucleic acid vector containing the AAV rep and cap nucleic acid sequences, wherein said cap nucleic acid sequence encodes an AAV capsid that is at least 95% identical to any of SEQ ID NOs: 1-7 ; And
(b) выделение AAV из супернатанта культуры клеток для вирусной продукции.(b) isolation of AAV from cell culture supernatant for viral production.
29. Способ по п. 28, где клетка для вирусной продукции представляет собой клетку млекопитающего.29. The method of claim 28, wherein the viral production cell is a mammalian cell.
30. Способ по п. 29, где клетка млекопитающего выбрана из группы, состоящей из клеток HEK293, HeLa, CHO, NS0, SP2/0, PER.C6, Vero, RD, BHK, HT 1080, A549, Cos-7, ARPE-19 и MRC-5.30. The method of claim 29 wherein the mammalian cell is selected from the group consisting of HEK293, HeLa, CHO, NS0, SP2/0, PER.C6, Vero, RD, BHK, HT 1080, A549, Cos-7, ARPE cells -19 and MRC-5.
31. Способ по п. 30, где клетка млекопитающего представляет собой клетку HEK293.31. The method of claim 30 wherein the mammalian cell is a HEK293 cell.
32. Аденоассоциированный вирус (AAV), полученный способом по любому из пп. 28-31.32. Adeno-associated virus (AAV), obtained by the method according to any one of paragraphs. 28-31.