Claims (3)
1. Способ определения снижения радиационно-индуцированной миграции клеток рака молочной железы, включающий 72-часовое воздействие на опухолевые клетки ДНК-связывающих лигандов - водонерастворимых димерных бисбензимидазолов, и облучение, отличающийся тем, что после радиационного воздействия миграционную активность опухолевых клеток in vitro определяют с помощью теста заживления раны: клетки инкубируют до достижения ими 100% монослоя, добавляют DB(5) или DB(7), через 24 часа удаляют узкую полосу монослоя и облучают оставшиеся клетки в дозе 4 Гр, инкубируют клетки в течение 48 часов при температуре +37°С в CO2-инкубаторе с 5% содержанием CO2, определяют ширину свободной от клеток полосы через 24 и 48 часов после облучения в сравнении с исходным значением, принятым за 100%, и регистрируют снижение радиационно-индуцированной миграции на 26,8% через 24 часа, на 19,9% через 48 часов - под влиянием DB(5) и на 17,9% через 24 часа - под влиянием DB(7).1. A method for determining a decrease in radiation-induced migration of breast cancer cells, including a 72-hour exposure of tumor cells to DNA-binding ligands - water-insoluble dimeric bisbenzimidazoles, and irradiation, characterized in that after radiation exposure, the migration activity of tumor cells in vitro is determined using wound healing test: cells are incubated until they reach 100% monolayer, DB(5) or DB(7) is added, after 24 hours a narrow band of the monolayer is removed and the remaining cells are irradiated at a dose of 4 Gy, cells are incubated for 48 hours at a temperature of +37 °C in a CO 2 incubator with 5% CO 2 , determine the width of the cell-free band 24 and 48 hours after irradiation in comparison with the initial value taken as 100%, and register a decrease in radiation-induced migration by 26.8% after 24 hours, by 19.9% after 48 hours - under the influence of DB(5) and by 17.9% after 24 hours - under the influence of DB(7).
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что миграционную активность опухолевых клеток определяют с помощью с помощью трансвелл анализа: клетки инкубируют при температуре +37°С с водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 5 метиленовыми группами в составе линкера (DB (5) или водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 7 метиленовыми группами DB(7) в течение 24 часов, далее клетки облучают в дозе 4 Гр, через 48 часов клетки отмывают от DB(5) или DB(7) и высевают в транслуночные вставки, инкубируют в течение трех суток при температуре +37°С в CO2-инкубаторе с 5% содержанием CO2, после чего подсчитывают количество мигрировавших клеток с помощью светового микроскопа и регистрируют снижение радиационно-индуцированной миграции в 2,3 раза по влиянием DB(5) и в 3,5 раза под влиянием DB(7).2. The method according to claim 1, characterized in that the migration activity of tumor cells is determined using transwell analysis: cells are incubated at a temperature of +37°C with water-insoluble dimeric bisbenzimidazole with 5 methylene groups in the linker (DB (5) or water-insoluble dimeric bisbenzimidazole with 7 methylene groups DB(7) for 24 hours, then the cells are irradiated at a dose of 4 Gy, after 48 hours the cells are washed from DB(5) or DB(7) and seeded in transwell inserts, incubated for three days at temperature +37°C in a CO 2 incubator with 5% CO 2 content, after which the number of migrated cells is counted using a light microscope and a decrease in radiation-induced migration is recorded by 2.3 times under the influence of DB(5) and 3.5 times under the influence of DB(7).
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что определяют уровень экспрессии гена OCLN: инкубируют клетки при температуре +37°С с водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 5 метиленовыми группами в составе линкера DB(5) или водонерастворимым димерным бисбензимидазолом с 7 метиленовыми группами DB(7) в течение 24 часов, далее клетки облучают в дозе 4 Гр, через 48 часов выделяют мРНК, которую путём реакции обратной транскрипции переводят в комплементарную ДНК (кДНК), далее проводят полимеразную цепную реакцию в реальном времени, определяют пороговые циклы амплификации (Ct) и при помощи расчетного метода ΔΔCt регистрируют увеличение радиационно-индуцированного уровня экспрессии OCLN в 2,4 раза под влиянием DB(5) и в 1,9 раз под влиянием DB(7).3. The method according to claim 1, characterized in that the level of expression of the OCLN gene is determined: cells are incubated at a temperature of +37°C with water-insoluble dimeric bisbenzimidazole with 5 methylene groups in the linker DB(5) or water-insoluble dimeric bisbenzimidazole with 7 methylene groups DB (7) for 24 hours, then the cells are irradiated at a dose of 4 Gy, after 48 hours mRNA is isolated, which is converted into complementary DNA (cDNA) by the reverse transcription reaction, then a real-time polymerase chain reaction is carried out, threshold amplification cycles (Ct ) and using the calculation method ΔΔCt register an increase in the radiation-induced level of expression of OCLN 2.4 times under the influence of DB(5) and 1.9 times under the influence of DB(7).