Claims (19)
1. Способ производства лакто-N-триозы II генетически модифицированной клеткой микроорганизма-хозяина, включающий стадии, на которых1. A method for the production of lacto-N-triose II by a genetically modified cell of a host microorganism, including the steps in which
- получают генетически модифицированную клетку микроорганизма-хозяина, которая включает:- receive a genetically modified host microorganism cell, which includes:
- по меньшей мере одну рекомбинантную β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу,- at least one recombinant β-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase,
- повышенную экспрессию или активность по меньшей мере одного белка, осуществляющего экспорт сахара, способного осуществлять экспорт лакто-N-триозы II;- increased expression or activity of at least one sugar export protein capable of exporting lacto-N-triose II;
- культивируют клетку микроорганизма-хозяина в среде в условиях, обеспечивающих производство лакто-N-триозы II, в результате чего осуществляется повышенный уровень экспорта лакто-N-триозы II в среду по сравнению с немодифицированной клеткой микроорганизма-хозяина, и- culturing the cell of the host microorganism in the environment under conditions that ensure the production of lacto-N-triose II, resulting in an increased level of export of lacto-N-triose II to the environment compared to the unmodified cell of the host microorganism, and
- получают лакто-N-триозу II из среды.- get lacto-N-triose II from the environment.
2. Способ по п. 1, где указанная β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза относится к классу lgtA из Neisseria meningitides или PmnagT из Pasteurella multocida, или их вариантам.2. The method of claim 1, wherein said β-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase is of the class IgtA from Neisseria meningitides or PmnagT from Pasteurella multocida, or variants thereof.
3. Способ по п. 1, где указанный по меньшей мере один белок, осуществляющий экспорт сахара, выбран из группы, состоящей из yjhB из Escherichia coli, proP из Mannheimia succiniciproducens, setA из Cedecea neteri и их функциональных фрагментов.3. The method of claim 1, wherein said at least one sugar export protein is selected from the group consisting of yjhB from Escherichia coli, proP from Mannheimia succiniciproducens, setA from Cedecea neteri, and functional fragments thereof.
4. Способ по п. 1, в котором в генетически модифицированной клетке микроорганизма-хозяина осуществлена инактивация эндогенных генов β-галактозидазы и глюкозамин-6-фосфат-дезаминазы, и при этом указанная генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина содержит нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую функциональный белок лактозопермеазы.4. The method according to claim 1, in which inactivation of endogenous β-galactosidase and glucosamine-6-phosphate deaminase genes is carried out in the genetically modified host microorganism cell, and at the same time, said genetically modified host microorganism cell contains a nucleic acid sequence encoding a functional protein lactose permease.
5. Способ по п. 1, где указанная генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина включает повышенную способность продуцировать УДФ-N-ацетилглюкозамин и УДФ-галактозу или ГДФ-фукозу или ЦМФ-N-ацетилнейраминовую кислоту по сравнению с генетически не модифицированной клеткой-хозяином, при этом, возможно, указанная повышенная способность продуцировать УДФ-N-ацетилглюкозамин и УДФ-галактозу присутствует за счет сверхэкспрессии одного или более чем одного гена, кодирующего белок, выбранный из группы, состоящей из L-глутамин:D-фруктозо-6-фосфат-аминотрансферазы, N-ацетилглюкозамин-1-фосфатуридилтрансферазы/глюкозамин-1-фосфатацетилтрансферазы, фосфоглюкозаминмутазы, УДФ-галактозо-4-эпимеразы, фосфоглюкомутазы, глюкозо-1-фосфатуридилилтрансферазы.5. The method according to claim 1, wherein said genetically modified host microorganism cell includes an increased ability to produce UDP-N-acetylglucosamine and UDP-galactose or GDP-fucose or CMP-N-acetylneuraminic acid compared to a non-genetically modified host cell, it is possible that said increased ability to produce UDP-N-acetylglucosamine and UDP-galactose is due to overexpression of one or more genes encoding a protein selected from the group consisting of L-glutamine:D-fructose-6-phosphate- aminotransferases, N-acetylglucosamine-1-phosphate uridyltransferase/glucosamine-1-phosphate acetyltransferase, phosphoglucosamine mutase, UDP-galactose-4-epimerase, phosphoglucomutase, glucose-1-phosphate uridylyltransferase.
6. Способ по п. 4, где указанную генетически модифицированную клетку микроорганизма-хозяина культивируют в присутствии глюкозы, сахарозы, глицерина или их комбинации.6. The method of claim 4, wherein said genetically modified host microorganism cell is cultured in the presence of glucose, sucrose, glycerol, or a combination thereof.
7. Способ по п. 6, где указанную генетически модифицированную клетку микроорганизма-хозяина культивируют не в присутствии N-ацетилглюкозамина или галактозы.7. The method of claim 6, wherein said genetically modified host microorganism cell is not cultured in the presence of N-acetylglucosamine or galactose.
8. Генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина для производства лакто-N-триозы II, где указанная генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина включает:8. A genetically modified host microorganism cell for the production of lacto-N-triose II, wherein said genetically modified host microorganism cell comprises:
- по меньшей мере одну рекомбинантную β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу, и- at least one recombinant β-1,3-N-acetylglucosaminyltransferase, and
- повышенную экспрессию или активность по меньшей мере одного белка, осуществляющего экспорт сахара, способного осуществлять экспорт лакто-N-триозы II.- increased expression or activity of at least one sugar export protein capable of exporting lacto-N-triose II.
9. Генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина по п. 8, где указанная β-1,3-N-ацетилглюкозаминилтрансфераза относится к классу lgtA из Neisseria meningitides или PmnagT из Pasteurella multocida, или их вариантам.9. The genetically modified host microorganism cell of claim 8, wherein said β-1,3-N-acetylglucosaminyl transferase is of the IgtA class from Neisseria meningitides or PmnagT from Pasteurella multocida, or variants thereof.
10. Генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина по п. 8, где указанный по меньшей мере один белок, осуществляющий экспорт сахара, выбран из группы, состоящей из yjhB из Escherichia coli, proP из Mannheimia succiniciproducens, setA из Cedecea neteri и их функциональных фрагментов.10. The genetically modified host microorganism cell of claim 8, wherein said at least one sugar export protein is selected from the group consisting of yjhB from Escherichia coli, proP from Mannheimia succiniciproducens, setA from Cedecea neteri, and functional fragments thereof.
11. Генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина по п. 8, где в указанной генетически модифицированной клетке микроорганизма-хозяина осуществлена инактивация эндогенных генов β-галактозидазы и глюкозамин-6-фосфат-дезаминазы, и при этом указанная генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина содержит нуклеиновокислотную последовательность, кодирующую функциональный белок лактозопермеазы.11. A genetically modified host microorganism cell according to claim 8, wherein in said genetically modified host microorganism cell, endogenous β-galactosidase and glucosamine-6-phosphate deaminase genes have been inactivated, and said genetically modified host microorganism cell contains a nucleic acid a sequence encoding a functional lactose permease protein.
12. Генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина по п. 8, где указанная генетически модифицированная клетка микроорганизма-хозяина включает повышенную способность продуцировать УДФ-N-ацетилглюкозамин и УДФ-галактозу или ГДФ-фукозу или ЦМФ-N-ацетилнейраминовую кислоту по сравнению с генетически не модифицированной клеткой-хозяином, при этом, возможно, указанная повышенная способность продуцировать УДФ-N-ацетилглюкозамин и УДФ-галактозу присутствует за счет сверхэкспрессии одного или более чем одного гена, кодирующего белок, выбранный из группы, состоящей из L-глутамин:D-фруктозо-6-фосфат-аминотрансферазы, N-ацетилглюкозамин-1-фосфатуридилтрансферазы/глюкозамин-1-фосфатацетилтрансферазы, фосфоглюкозаминмутазы, УДФ-галактозо-4-эпимеразы, фосфоглюкомутазы, глюкозо-1-фосфатуридилилтрансферазы.12. The genetically modified host microorganism cell of claim 8, wherein said genetically modified host microorganism cell comprises an increased ability to produce UDP-N-acetylglucosamine and UDP-galactose or GDP-fucose or CMP-N-acetylneuraminic acid compared to a genetically non-genetically modified host cell. modified by the host cell, it is possible that this increased ability to produce UDP-N-acetylglucosamine and UDP-galactose is due to the overexpression of one or more genes encoding a protein selected from the group consisting of L-glutamine: D-fructose -6-phosphate aminotransferase, N-acetylglucosamine-1-phosphate uridyltransferase / glucosamine-1-phosphate acetyltransferase, phosphoglucosamine mutase, UDP-galactose-4-epimerase, phosphoglucomutase, glucose-1-phosphate uridylyltransferase.