Claims (39)
1. Рекомбинантные бактерии, содержащие1. Recombinant bacteria containing
а) по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, функционально связанную с прокариотическим хлорид-индуцируемым промотором и кодирующую по меньшей мере один гетерологичный фактор, оказывающий терапевтический и/или профилактический эффект у субъекта, предпочтительно после применения указанных рекомбинантных бактерий у указанного субъекта, причем указанный гетерологичный фактор независимо представляет собой гетерологичный полипептид или его комплекс, иa) at least one nucleotide sequence operably linked to a prokaryotic chloride-inducible promoter and encoding at least one heterologous factor that has a therapeutic and/or prophylactic effect in a subject, preferably after the use of said recombinant bacteria in said subject, wherein said heterologous factor is independently a heterologous polypeptide or a complex thereof, and
b) по меньшей мере один прокариотический регуляторный ген, контролирующий активность указанного хлорид-индуцируемого промотора,b) at least one prokaryotic regulatory gene that controls the activity of said chloride-inducible promoter,
причем указанный гетерологичный полипептид содержит по меньшей мере один эукариотический полипептид, по меньшей мере один его фрагмент или их комбинацию.wherein said heterologous polypeptide comprises at least one eukaryotic polypeptide, at least one fragment thereof, or a combination thereof.
2. Рекомбинантная нуклеиновая кислота, содержащая2. Recombinant nucleic acid containing
а) по меньшей мере одну нуклеотидную последовательность, функционально связанную с прокариотическим хлорид-индуцируемым промотором и кодирующую по меньшей мере один гетерологичный фактор, оказывающий терапевтический и/или профилактический эффект у субъекта, причем указанный гетерологичный фактор независимо представляет собой гетерологичный полипептид или его комплекс, иa) at least one nucleotide sequence operably linked to a prokaryotic chloride-inducible promoter and encoding at least one heterologous factor having a therapeutic and/or prophylactic effect in a subject, said heterologous factor being independently a heterologous polypeptide or a complex thereof, and
b) по меньшей мере один прокариотический регуляторный ген, контролирующий активность указанного хлорид-индуцируемого промотора,b) at least one prokaryotic regulatory gene that controls the activity of said chloride-inducible promoter,
причем указанный гетерологичный полипептид содержит эукариотический полипептид, по меньшей мере один его фрагмент или их комбинацию.wherein said heterologous polypeptide comprises a eukaryotic polypeptide, at least one fragment thereof, or a combination thereof.
3. Рекомбинантные бактерии по п. 1, отличающиеся тем, что указанная по меньшей мере одна нуклеотидная последовательность, функционально связанная с прокариотическим хлорид-индуцируемым промотором и кодирующая по меньшей мере один гетерологичный фактор и/или указанный по меньшей мере один прокариотический регуляторный ген, контролирующий активность указанного хлорид-индуцируемого промотора, независимо расположена на хромосоме и/или по меньшей мере одной плазмиде указанных рекомбинантных бактерий.3. Recombinant bacteria according to claim 1, characterized in that said at least one nucleotide sequence is functionally linked to a prokaryotic chloride-inducible promoter and encodes at least one heterologous factor and/or said at least one prokaryotic regulatory gene that controls the activity of said chloride-inducible promoter is independently located on a chromosome and/or at least one plasmid of said recombinant bacteria.
4. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 2, отличающиеся тем, что каждый из указанного хлорид-индуцируемого промотора и/или указанного по меньшей мере одного регуляторного гена не зависит от вида предпочтительно грамположительной или грамотрицательной бактерии.4. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1 or 3 or a recombinant nucleic acid according to claim 2, characterized in that each of said chloride-inducible promoter and/or said at least one regulatory gene is independent of the species of preferably Gram-positive or Gram-negative bacteria.
5. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3, 4 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 4, отличающаяся тем, что указанный хлорид-индуцируемый промотор представляет собой PgadC вида бактерии таксономического порядка Lactobacillales, предпочтительно Lactococcus lactis.5. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1 or 3, 4 or recombinant nucleic acid according to any one of paragraphs. 2 or 4, characterized in that said chloride-inducible promoter is a PgadC bacterial species of the taxonomic order Lactobacillales, preferably Lactococcus lactis.
6. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3, 4 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 4, отличающиеся тем, что указанный регуляторный ген кодирует gadR вида бактерий таксономического порядка Lactobacillales, предпочтительно Lactococcus lactis.6. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1 or 3, 4 or recombinant nucleic acid according to any one of paragraphs. 2 or 4, characterized in that said regulatory gene encodes the gadR of a bacterial species of the taxonomic order Lactobacillales, preferably Lactococcus lactis.
7. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3-6 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 4-6, отличающиеся тем, что указанный хлорид-индуцируемый промотор и указанный по меньшей мере один регуляторный ген расположены в хлорид-индуцируемой кассете для экспрессии генов, причем указанный хлорид-индуцируемый промотор расположен после указанного по меньшей мере одного регуляторного гена, а указанная хлорид-индуцируемая кассета для экспрессии генов контролирует транскрипцию по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере один гетерологичный фактор.7. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1 or 3-6 or a recombinant nucleic acid according to any one of paragraphs. 2 or 4-6, characterized in that said chloride-inducible promoter and said at least one regulatory gene are located in a chloride-induced cassette for gene expression, wherein said chloride-inducible promoter is located after said at least one regulatory gene, and said chloride-inducible gene expression cassette controls the transcription of at least one nucleotide sequence encoding at least one heterologous factor.
8. Рекомбинантные бактерии или рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 7, отличающиеся тем, что указанная хлорид-индуцируемая кассета для экспрессии генов содержит или состоит из нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 2 и контролирует транскрипцию по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности, кодирующей по меньшей мере один гетерологичный фактор.8. Recombinant bacteria or recombinant nucleic acid according to claim 7, characterized in that said chloride-induced gene expression cassette contains or consists of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 and controls the transcription of at least one nucleotide sequence encoding at least one heterologous factor.
9. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3 или 7, 8 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 7-8, отличающиеся тем, что указанный по меньшей мере один гетерологичный фактор представляет собой гетерологичный полипептид или его комплекс, каждый из которых содержит по меньшей мере один эукариотический полипептид, по меньшей мере один его фрагмент или их комбинацию.9. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3 or 7, 8 or recombinant nucleic acid according to any one of paragraphs. 2 or 7-8, characterized in that said at least one heterologous factor is a heterologous polypeptide or a complex thereof, each of which contains at least one eukaryotic polypeptide, at least one fragment thereof, or a combination thereof.
10. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3 или 7-9 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 7-9, отличающиеся тем, что указанный по меньшей мере один гетерологичный фактор выбран из группы, состоящей из полипептидных гормонов, факторов роста, цитокинов, хемокинов, ферментов, нейропептидов, антител, их предшественников, их фрагментов и их комбинаций, полученных из вида эукариот, предпочтительно вида млекопитающих, более предпочтительно человека.10. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3 or 7-9 or a recombinant nucleic acid according to any one of paragraphs. 2 or 7-9, characterized in that said at least one heterologous factor is selected from the group consisting of polypeptide hormones, growth factors, cytokines, chemokines, enzymes, neuropeptides, antibodies, their precursors, their fragments and combinations thereof, obtained from a eukaryotic species, preferably a mammalian species, more preferably a human.
11. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1 или 3-10, дополнительно содержащие по меньшей мере один инактивированный ген, кодирующий незаменимый белок, необходимый для жизнеспособности указанных рекомбинантных бактерий.11. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1 or 3-10, additionally containing at least one inactivated gene encoding an essential protein required for the viability of these recombinant bacteria.
12. Рекомбинантные бактерии по п. 11, отличающиеся тем, что указанный ген, кодирующий незаменимый белок, инактивирован делецией указанного гена, мутацией указанного гена, сайленсингом указанного гена, опосредованным РНК-интерференцией (RNAi), трансляционным ингибированием указанного гена или их комбинацией.12. Recombinant bacteria according to claim 11, characterized in that said gene encoding an essential protein is inactivated by deletion of said gene, mutation of said gene, RNAi-mediated silencing of said gene, translational inhibition of said gene, or a combination thereof.
13. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по любому из пп. 2 или 4-10, дополнительно содержащая по меньшей мере один ген, кодирующий незаменимый белок, необходимый для жизнеспособности рекомбинантной бактерии.13. Recombinant nucleic acid according to any one of paragraphs. 2 or 4-10, additionally containing at least one gene encoding an essential protein necessary for the viability of the recombinant bacterium.
14. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 11-12 или рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 13, отличающиеся тем, что указанный по меньшей мере один ген, необходимый для жизнеспособности, выбран из группы, состоящей из аланинрацемазы (alr), тимидилатсинтазы (thyA), аспарагинсинтазы (asnH), ЦТФ-синтазы (pyrG), триптофансинтазы (trpBA) и их комбинаций.14. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 11-12 or a recombinant nucleic acid according to claim 13, characterized in that said at least one gene required for viability is selected from the group consisting of alanine racemase (alr), thymidylate synthase (thyA), asparagine synthase (asnH), CTP- synthase (pyrG), tryptophan synthase (trpBA), and combinations thereof.
15. Нуклеиновая кислота по любому из пп. 2, 4-10, 13 или 14, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная нуклеиновая кислота находится в форме плазмиды.15. Nucleic acid according to any one of paragraphs. 2, 4-10, 13 or 14, characterized in that said recombinant nucleic acid is in the form of a plasmid.
16. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12 или 14, содержащие по меньшей мере одну рекомбинантную нуклеиновую кислоту по любому из пп. 2, 4-10, 14 или 15.16. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12 or 14 containing at least one recombinant nucleic acid according to any one of paragraphs. 2, 4-10, 14 or 15.
17. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16, отличающиеся тем, что указанные рекомбинантные бактерии представляют собой непатогенные бактерии.17. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12, 14 or 16, characterized in that said recombinant bacteria are non-pathogenic bacteria.
18. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12 или 14-17, отличающиеся тем, что указанные рекомбинантные бактерии представляют собой рекомбинантные бактерии, предпочтительно молочнокислые бактерии, более предпочтительно - виды Lactobacillus или Lactococcus.18. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12 or 14-17, characterized in that said recombinant bacteria are recombinant bacteria, preferably lactic acid bacteria, more preferably Lactobacillus or Lactococcus species.
19. Рекомбинантные бактерии по любому из п. 18, отличающиеся тем, что указанный вид Lactococcus представляет собой Lactococcus lactis, предпочтительно Lactococcus lactis подвид cremoris.19. Recombinant bacteria according to any one of claim 18, characterized in that said species of Lactococcus is Lactococcus lactis , preferably Lactococcus lactis subsp. cremoris.
20. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20 для применения в медицине.20. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12, 14 or 16-20 for medical use.
21. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20 для применения при лечении предпочтительно хронической воспаленной раны.21. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12, 14 or 16-20 for use in the treatment of a preferably chronic inflammatory wound.
22. Рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20 для применения при лечении опухоли, предпочтительно злокачественной опухоли.22. Recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12, 14 or 16-20 for use in the treatment of a tumour, preferably a malignant tumour.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20 и по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.23. Pharmaceutical composition containing recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12, 14 or 16-20 and at least one pharmaceutically acceptable excipient.
24. Набор для применения в медицине, содержащий24. Kit for use in medicine, containing
а) рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20, способные экспрессировать по меньшей мере один гетерологичный фактор под контролем прокариотического хлорид-индуцируемого промотора, иa) recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12, 14, or 16-20 capable of expressing at least one heterologous factor under the control of a prokaryotic chloride-inducible promoter, and
b) по меньшей мере один индуктор, содержащий хлорид-ионы.b) at least one inductor containing chloride ions.
25. Медицинское устройство, содержащее25. Medical device containing
а) рекомбинантные бактерии по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-20, способные экспрессировать по меньшей мере один гетерологичный фактор под контролем прокариотического хлорид-индуцируемого промотора.a) recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12, 14, or 16-20 capable of expressing at least one heterologous factor under the control of a prokaryotic chloride-inducible promoter.
26. Фармацевтическая композиция по п. 23 или набор по п. 24 или медицинское устройство по п. 25, отличающиеся тем, что указанные рекомбинантные бактерии находятся в растворе, заморожены или высушены, предпочтительно лиофилизированы или высушены распылением.26. A pharmaceutical composition according to claim 23 or a kit according to claim 24 or a medical device according to claim 25, characterized in that said recombinant bacteria are in solution, frozen or dried, preferably lyophilized or spray dried.
27. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 23 или 26 или набор по любому из пп. 24 или 26 или медицинское устройство по любому из пп. 25 или 26, отличающиеся тем, что указанные рекомбинантные бактерии разводят в жидкой, предпочтительно культуральной среде, содержащей хлорид-ионы.27. Pharmaceutical composition according to any one of paragraphs. 23 or 26 or a set according to any one of paragraphs. 24 or 26 or a medical device according to any one of paragraphs. 25 or 26, characterized in that said recombinant bacteria are bred in a liquid, preferably a culture medium containing chloride ions.
28. Набор по любому из пп. 24, 26 или 27, отличающийся тем, что указанный набор представлен в виде комбинированного препарата для раздельного, последовательного или одновременного применения при лечении, предпочтительно хронической воспаленной раны.28. Set according to any one of paragraphs. 24, 26 or 27, characterized in that said kit is presented as a combined preparation for separate, sequential or simultaneous use in the treatment, preferably of a chronic, inflamed wound.
29. Набор по любому из пп. 24, 26 или 28, отличающийся тем, что указанный набор представлен в виде комбинированного препарата для раздельного, последовательного или одновременного применения при лечении опухоли, предпочтительно злокачественной опухоли.29. Set according to any one of paragraphs. 24, 26 or 28, characterized in that said kit is presented as a combined preparation for separate, sequential or simultaneous use in the treatment of a tumor, preferably a malignant tumor.
30. Применение среды для разведения, содержащей хлорид-ионы, для разведения рекомбинантных бактерий по любому из пп. 1, 3-12, 14 или 16-19.30. The use of a dilution medium containing chloride ions for breeding recombinant bacteria according to any one of paragraphs. 1, 3-12, 14 or 16-19.