Claims (33)
1. Способ лечения спинальной мышечной атрофии (SMA) у субъекта, нуждающегося в этом, где способ включает введение терапевтически эффективного количества рекомбинантных вирионов аденоассоциированного вируса (rAAV) в центральную нервную систему (ЦНС) субъекта,1. A method of treating spinal muscular atrophy (SMA) in a subject in need thereof, wherein the method comprises administering a therapeutically effective amount of recombinant adeno-associated virus (rAAV) virions to the central nervous system (CNS) of the subject,
где вирионы rAAV содержат самокомплементарный геном AAV (scAAV) и капсид серотипа 8 AAV или серотипа 9 AAVpe,where the rAAV virions contain a self-complementary AAV genome (scAAV) and a capsid of AAV serotype 8 or AAVpe serotype 9,
где геном scAAV содержитwhere the scAAV genome contains
a) дикий тип, инвертированный концевой повтор AAV (ITR),a) wild-type, AAV inverted terminal repeat (ITR),
b) мутированный ITR AAV, где мутированный ITR содержит мутацию в последовательности концевого разрешения,b) AAV mutated ITR, where the mutated ITR contains the mutation in the end resolution sequence,
c) первую регуляторную последовательность, функционально связанную по 5'-концу с полинуклеотидом, кодирующим белок выживаемости двигательных нейронов (SMN), содержащий аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность с аминокислотной последовательностью SEQ ID. NO: 2,c) a first regulatory sequence operably linked at the 5' end to a polynucleotide encoding a survival motor neuron (SMN) protein comprising an amino acid sequence having at least 90% identity with the amino acid sequence of SEQ ID. NO: 2
d) и вторую регуляторную последовательность, функционально связанную с полинуклеотидом, кодирующим белок SMN.d) and a second regulatory sequence operably linked to a polynucleotide encoding an SMN protein.
2. Способ по п. 1, где терапевтически эффективное количество вирионов rAAV составляет от приблизительно 106 до приблизительно 1015 геномных частиц.2. The method of claim 1, wherein the therapeutically effective amount of rAAV virions is from about 10 6 to about 10 15 genomic particles.
3. Способ по п. 1, где терапевтически эффективное количество вирионов rAAV составляет от приблизительно 108 до приблизительно 1014 геномных частиц.3. The method of claim 1, wherein the therapeutically effective amount of rAAV virions is from about 10 8 to about 10 14 genomic particles.
4. Способ по п. 1, где вирионы rAAV вводят по меньшей мере в одну область глубоких ядер мозжечка путем прямой инъекции в спинной мозг, путем интрацеребровентрикулярной инъекции или путем интратекальной инъекции.4. The method of claim 1, wherein the rAAV virions are administered to at least one region of the deep cerebellar nuclei by direct injection into the spinal cord, by intracerebroventricular injection, or by intrathecal injection.
5. Способ по п. 1, где вирионы rAAV вводят путем интратекальной инъекции.5. The method of claim 1 wherein the rAAV virions are administered by intrathecal injection.
6. Способ по любому из пп. 1-5, где дикий тип ITR AAV представляет собой последовательности ITR AAV2 дикого типа.6. The method according to any one of paragraphs. 1-5, where the wild type AAV ITRs are the wild type AAV2 ITR sequences.
7. Способ по любому из пп. 1-5, где мутированный ITR AAV представляет собой мутированный ITR AAV2.7. The method according to any one of paragraphs. 1-5, where the mutated AAV ITR is a mutated AAV2 ITR.
8. Способ по п. 7, где мутированный ITR AAV содержит делецию последовательности концевого разрешения.8. The method of claim 7 wherein the mutated AAV ITR contains a deletion of an end resolution sequence.
9. Способ по любому из пп. 1-5, где первая регуляторная последовательность содержит энхансер цитомегаловируса (CMV) и промотор β-актина курицы (СБА).9. The method according to any one of paragraphs. 1-5, wherein the first regulatory sequence contains a cytomegalovirus (CMV) enhancer and a chicken β-actin (CBA) promoter.
10. Способ по любому из пп. 1-5, где белок выживаемости двигательных нейронов (SMN) содержит аминокислотную последовательность SEQ ID. NO: 2.10. The method according to any one of paragraphs. 1-5, wherein the survival motor neuron (SMN) protein contains the amino acid sequence of SEQ ID. NO: 2.
11. Способ по любому из пп. 1-5, где вторая регуляторная последовательность содержит последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH).11. The method according to any one of paragraphs. 1-5, wherein the second regulatory sequence contains a bovine growth hormone (BGH) polyadenylation sequence.
12. Способ лечения спинальной мышечной атрофии (SMA) у субъекта, нуждающегося в этом, где способ включает интратекальное введение субъекту от приблизительно 106 до приблизительно 1015 геномных частиц рекомбинантных вирионов аденоассоциированного вируса (rAAV),12. A method of treating spinal muscular atrophy (SMA) in a subject in need thereof, wherein the method comprises intrathecally administering to the subject from about 10 6 to about 10 15 genomic particles of recombinant adeno-associated virus (rAAV) virions,
где вирион rAAV содержит самокомплементарный геном AAV (scAAV) и капсид серотипа 8 AAV,where the rAAV virion contains a self-complementary AAV genome (scAAV) and an AAV serotype 8 capsid,
где scAAV геном содержитwhere the scAAV genome contains
a) последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV2,a) AAV2 inverted terminal repeat (ITR) sequence,
b) мутированный ITR AAV2, содержащий мутацию последовательности концевого разрешения, иb) a mutated AAV2 ITR containing a mutation in the end resolution sequence, and
c) полинуклеоид, кодирующий белок выживаемости двигательных нейронов (SMN), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID. NO: 2,c) a polynucleoid encoding a survival motor neuron (SMN) protein containing the amino acid sequence of SEQ ID. NO: 2
d) энхансер цитомегаловируса (CMV) и промотор β-актина курицы (СБА), функционально связанные с полинуклеотидом, кодирующим белок SMN белок, иd) a cytomegalovirus (CMV) enhancer and a chicken β-actin (CBA) promoter operably linked to a polynucleotide encoding the SMN protein, and
e) последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH).e) bovine growth hormone (BGH) polyadenylation sequence.
13. Способ лечения спинальной мышечной атрофии (SMA) у субъекта, нуждающегося в этом, где способ включает интратекальное введение субъекту от приблизительно 106 до приблизительно 1015 геномных частиц рекомбинантных вирионов аденоассоциированного вируса (rAAV),13. A method of treating spinal muscular atrophy (SMA) in a subject in need thereof, wherein the method comprises intrathecally administering to the subject from about 10 6 to about 10 15 genomic particles of recombinant adeno-associated virus (rAAV) virions,
где вирион rAAV содержит самокомплементарный геном AAV (scAAV) и капсид серотипа 9 AAV,where the rAAV virion contains a self-complementary AAV genome (scAAV) and an AAV serotype 9 capsid,
где scAAV геном содержитwhere the scAAV genome contains
a) последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV2,a) AAV2 inverted terminal repeat (ITR) sequence,
b) мутированный ITR AAV2, содержащий мутацию последовательности концевого разрешения, иb) a mutated AAV2 ITR containing a mutation in the end resolution sequence, and
c) полинуклеоид, кодирующий белок выживаемости двигательных нейронов (SMN), содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID. NO: 2,c) a polynucleoid encoding a survival motor neuron (SMN) protein containing the amino acid sequence of SEQ ID. NO: 2
d) энхансер цитомегаловируса (CMV) и промотор β-актина курицы (СБА), функционально связанные с полинуклеотидом, кодирующим белок SMN белок, иd) a cytomegalovirus (CMV) enhancer and a chicken β-actin (CBA) promoter operably linked to a polynucleotide encoding the SMN protein, and
е) последовательность полиаденилирования бычьего гормона роста (BGH).f) bovine growth hormone (BGH) polyadenylation sequence.