RU2020133923A - Устойчивые к патогенам животные, содержащие модифицированные гены аминопептидазы n (anpep) - Google Patents
Устойчивые к патогенам животные, содержащие модифицированные гены аминопептидазы n (anpep) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2020133923A RU2020133923A RU2020133923A RU2020133923A RU2020133923A RU 2020133923 A RU2020133923 A RU 2020133923A RU 2020133923 A RU2020133923 A RU 2020133923A RU 2020133923 A RU2020133923 A RU 2020133923A RU 2020133923 A RU2020133923 A RU 2020133923A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nucleotide
- sequence
- protein
- animal
- seq
- Prior art date
Links
- 102100016549 ANPEP Human genes 0.000 title claims 38
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 title claims 8
- 244000052769 pathogens Species 0.000 title claims 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims 6
- 108010049990 CD13 Antigens Proteins 0.000 title claims 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 52
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 52
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 claims 48
- 230000002759 chromosomal Effects 0.000 claims 25
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 11
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 claims 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 7
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 claims 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 6
- 108010009992 CD163 antigen Proteins 0.000 claims 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 4
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 claims 4
- 210000000349 Chromosomes Anatomy 0.000 claims 3
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims 3
- 241000004176 Alphacoronavirus Species 0.000 claims 2
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 claims 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 claims 2
- 101700080605 NUC1 Proteins 0.000 claims 2
- 210000004681 Ovum Anatomy 0.000 claims 2
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 claims 2
- 241000711493 Porcine respiratory coronavirus Species 0.000 claims 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims 2
- 241000711484 Transmissible gastroenteritis virus Species 0.000 claims 2
- 230000001058 adult Effects 0.000 claims 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims 2
- 101700006494 nucA Proteins 0.000 claims 2
- 229920000033 CRISPR Polymers 0.000 claims 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 claims 1
- 229920001405 Coding region Polymers 0.000 claims 1
- 229920002676 Complementary DNA Polymers 0.000 claims 1
- 210000001161 Embryo, Mammalian Anatomy 0.000 claims 1
- 229920002459 Intron Polymers 0.000 claims 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 claims 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 claims 1
- 102100018868 SIGLEC1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710017790 SIGLEC1 Proteins 0.000 claims 1
- 210000003856 Spermatozoa Anatomy 0.000 claims 1
- 229920000978 Start codon Polymers 0.000 claims 1
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 claims 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 claims 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 claims 1
- 102000037240 fusion proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims 1
- 125000000012 isoleucine group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 claims 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 claims 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims 1
Claims (76)
1. Сельскохозяйственное животное или его потомство, или животная клетка, содержащая по меньшей мере одну модифицированную хромосомную последовательность в гене, кодирующем белок аминопептидазы N (ANPEP).
2. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 1, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность в гене, кодирующем белок ANPEP, снижает восприимчивость животного, потомства или клетки к инфекции патогеном по сравнению с восприимчивостью к инфекции патогеном сельскохозяйственного животного, потомства или клетки, которые не содержат модифицированную хромосомную последовательность в гене, кодирующем белок ANPEP.
3. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 2, отличающиеся тем, что патоген включает вирус.
4. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 3, отличающиеся тем, что вирус включает вирус рода Alphacoronavirus.
5. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 4, отличающиеся тем, что вирус рода Alphacoronavirus включает вирус трансмиссивного гастроэнтерита (TGEV) или респираторный коронавирус свиней (PRCV).
6. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-5, отличающиеся тем, что сельскохозяйственное животное включает животное-свинью, или клетка получена от животного-свиньи.
7. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-6, отличающиеся тем, что животное или потомство представляет собой эмбрион, молодое животное или взрослое животное, или клетка включает эмбриональную клетку, клетку, полученную от молодого животного, или клетку, полученную от взрослого животного.
8. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-7, отличающиеся тем, что животное, потомство или клетка является гетерозиготным по модифицированной хромосомной последовательности в гене, кодирующем белок ANPEP.
9. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-7, отличающиеся тем, что животное, потомство или клетка является гомозиготным по модифицированной хромосомной последовательности в гене, кодирующем белок ANPEP.
10. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-9, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность содержит вставку в аллеле гена, кодирующего белок ANPEP, делецию в аллеле гена, кодирующего белок ANPEP, замену в аллеле гена, кодирующего белок ANPEP, или комбинацию любых из них.
11. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 10, отличающиеся тем, что вставка, делеция, замена или комбинация любых из них приводит к неправильному кодированию в аллеле гена, кодирующего белок ANPEP.
12. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 10, отличающиеся тем, что делеция включает
делецию стартового кодона аллеля гена, кодирующего белок ANPEP; или
делецию всей кодирующей последовательности аллеля гена, кодирующего белок ANPEP.
13. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-12, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность в гене, кодирующем белок ANPEP, вызывает снижение продукции или активности белка ANPEP по сравнению с продукцией или активностью белка ANPEP у животного, потомства или клетки, у которых отсутствует модифицированная хромосомная последовательность в гене, кодирующем белок ANPEP.
14. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-13, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность в гене, кодирующем белок ANPEP, приводит к по существу отсутствию продуцирования функционального белка ANPEP животным, потомством или клеткой.
15. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-14, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность включает модификацию экзона 2 аллеля гена, кодирующего белок ANPEP; экзона 4 аллеля гена, кодирующего белок ANPEP; интрона, который примыкает к экзону 2 или экзону 4 аллеля гена, кодирующего белок ANPEP; или любую их комбинацию.
16.Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 15, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность включает делецию в экзоне 2 аллеля гена, кодирующего белок ANPEP, делеция включает делецию в рамке считывания в экзоне 2.
17.Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 16, отличающиеся тем, что делеция в рамке считывания в экзоне 2:
приводит к делеции аминокислот с 194 по 196 белка ANPEP; или
приводит к делеции аминокислот с 194 по 197 белка ANPEP, при этом делеция в рамке считывания необязательно дополнительно приводит к замене остатка валина в положении 198 белка ANPEP на остаток изолейцина.
18.Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 15, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность включает модификацию, выбранную из группы, состоящей из:
делеции 182 пар оснований от нуклеотида 1397 до нуклеотида 1578 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135, при этом удаленная последовательность заменена вставкой из 5 пар оснований, начинающейся с нуклеотида 1397;
делеции 9 пар оснований от нуклеотида 1574 до нуклеотида 1582 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 9 пар оснований от нуклеотида 1577 до нуклеотида 1585 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 9 пар оснований от нуклеотида 1581 до нуклеотида 1589 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 867 пар оснований от нуклеотида 819 до нуклеотида 1685 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 867 пар оснований от нуклеотида 882 до нуклеотида 1688 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
вставки 1 пары оснований между нуклеотидами 1581 и 1582 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
вставки 1 пары оснований между нуклеотидами 1580 и 1581 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
вставки 1 пары оснований между нуклеотидами 1579 и 1580 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
вставки 2 пар оснований между нуклеотидами 1581 и 1582 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 267 пар оснований от нуклеотида 1321 до нуклеотида 1587 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 267 пар оснований от нуклеотида 1323 до нуклеотида 1589 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 1 пары оснований нуклеотида 1581 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 12 пар оснований от нуклеотида 1582 до нуклеотида 1593 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 25 пар оснований от нуклеотида 1561 до нуклеотида 1585 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 25 пар оснований от нуклеотида 1560 до нуклеотида 1584 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 8 пар оснований от нуклеотида 1575 до нуклеотида 1582 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 8 пар оснований от нуклеотида 1574 до нуклеотида 1581 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 661 пары оснований от нуклеотида 940 до нуклеотида 1600 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135, при этом удаленная последовательность заменена вставкой из 8 пар оснований, начинающейся с нуклеотида 940;
делеции 8 пар оснований от нуклеотида 1580 до нуклеотида 1587 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135, при этом удаленная последовательность заменена вставкой из 4 пар оснований, начинающейся с нуклеотида 1580;
и любой их комбинации.
19. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 18, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность включает модификацию, выбранную из группы, состоящей из:
делеции 661 пары оснований от нуклеотида 940 до нуклеотида 1600 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135, при этом удаленная последовательность заменена вставкой из 8 пар оснований, начинающейся с нуклеотида 940;
делеции 8 пар оснований от нуклеотида 1580 до нуклеотида 1587 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135, при этом удаленная последовательность заменена вставкой из 4 пар оснований, начинающейся с нуклеотида 1580;
вставки 1 пары оснований между нуклеотидами 1581 и 1582 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
вставки 2 пар оснований между нуклеотидами 1581 и 1582 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 9 пар оснований от нуклеотида 1581 до нуклеотида 1589 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 12 пар оснований от нуклеотида 1582 до нуклеотида 1593 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
делеции 1 пары оснований нуклеотида 1581 по сравнению с референсной последовательностью SEQ ID NO: 135;
и любой их комбинации.
20. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-14, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность включает модификацию в области, содержащей нуклеотиды с 17235 по 22422 референсной последовательности SEQ ID NO: 132.
21. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 10-20, отличающиеся тем, что к животное, потомство или клетка содержат хромосомную последовательность в гене, кодирующем белок ANPEP, имеющий по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99%, по меньшей мере 99,9% или 100% идентичность последовательности SEQ ID NO: 135 или 132 в областях хромосомной последовательности вне вставки, делеции или замены.
22. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-21, отличающиеся тем, что сельскохозяйственное животное, потомство или клетка содержат хромосомную последовательность, включающую SEQ ID NO: 163, 164, 165, 166, 167, 168, 170, 171, 172, 173, 174, 176, 177 или 178.
23. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-22, отличающиеся тем, что сельскохозяйственное животное, потомство или клетка дополнительно содержат по меньшей мере одну модифицированную хромосомную последовательность в гене, кодирующем белок CD163.
24. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 23, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность в гене, кодирующем белок CD163, снижает восприимчивость животного, потомства или клетки к инфекции вирусом репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRSV) по сравнению с восприимчивостью животного, потомства или клетки, которые не содержат модифицированную хромосомную последовательность в гене, кодирующем белок CD163, к инфекции вирусом репродуктивного и респираторного синдрома свиней.
25. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 23 или 24, отличающиеся тем, что модифицированная хромосомная последовательность в гене, кодирующем белок CD163, приводит к по существу отсутствию продуцирования функционального белка CD163 животным, потомством или клеткой.
26. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-25, отличающиесяся тем, что сельскохозяйственное животное, потомство или клетка дополнительно содержат модифицированную хромосомную последовательность в гене, кодирующем белок SIGLEC1.
27. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по любому из пп. 1-26, отличающиесяся тем, что животное или потомство включают генетически отредактированное животное или потомство, или клетка включает генетически отредактированную клетку.
28. Сельскохозяйственное животное, потомство или клетка по п. 27, отличающиеся тем, что животное или клетка генетически отредактированы с использованием хоминг-эндонуклеазы, при этом хоминг-эндонуклеаза включает систему кластерных регулярных коротких палиндромных повторов (CRISPR), эффекторную нуклеазу, подобную активатору транскрипции (TALEN), нуклеазу цинкового пальца (ZFN) и белок слияния на основе рекомбиназы, мегануклеазу или любую их комбинацию.
29. Клетка по любому из пп 1-28, отличающаяся тем, что указанная клетка включает сперматозоид, яйцеклетку (необязательно оплодотворенную яйцеклетку) или соматическую клетку (необязательно фибробласт).
30. Способ получения животного, не являющегося человеком, или линии клеток животных, не являющихся человеком, имеющих пониженную восприимчивость к инфекции патогеном, включающий
модификацию ооцита или сперматозоида для введения модифицированной хромосомной последовательности в гене, кодирующем белок аминопептидазы N (ANPEP) по меньшей мере в один из ооцита и сперматозоида, и оплодотворение ооцита сперматозоидом для создания оплодотворенной яйцеклетки, содержащей модифицированную хромосомную последовательность в гене, кодирующем белок ANPEP; или
модификацию оплодотворенной яйцеклетки для введения модифицированной хромосомной последовательности в ген, кодирующий белок ANPEP, в оплодотворенную яйцеклетку;
перенос оплодотворенной яйцеклетки суррогатной самке животного, при этом в результате беременности и родов в срок получается животное-потомок;
скрининг животного-потомка на чувствительность к патогену; и
отбор животных-потомков, которые имеют пониженную чувствительность к патогену по сравнению с животными, которые не содержат модифицированную хромосомную последовательность в гене, кодирующем белок ANPEP.
31. Способ повышения устойчивости сельскохозяйственного животного к инфекции патогеном, включающий изменение по меньшей мере одной хромосомной последовательности в гене, кодирующем белок аминопептидазы N (ANPEP), так что продукция или активность белка ANPEP снижается по сравнению с продукцией или активностью белка ANPEP по сравнению с сельскохозяйственными животными, которые не содержат модифицированной хромосомной последовательности в гене, кодирующем белок ANPEP.
32. Популяция сельскохозяйственных животных, состоящая из двух или более сельскохозяйственных животных и/или их потомства по любому из пп. 1-28.
33. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из
(a) нуклеотидной последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 135, при этом нуклеотидная последовательность включает по меньшей мере одну замену, вставку или делецию по сравнению с SEQ ID NO: 135;
(б) нуклеотидной последовательности, имеющей по меньшей мере 80% идентичности последовательности с последовательностью SEQ ID NO: 132, при этом нуклеотидная последовательность включает по меньшей мере одну замену, вставку или делецию по сравнению с SEQ ID NO: 132;
(в) кДНК (a) или (б).
34. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 33, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота включает нуклеотидную последовательность, имеющую по меньшей мере 80%, по меньшей мере 85%, по меньшей мере 87,5%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98%, по меньшей мере 99% или, по меньшей мере 99,9% идентичности с SEQ ID NO: 132 или 135, при этом нуклеотидная последовательность содержит по меньшей мере одну замену, вставку или делецию по сравнению с SEQ ID NO: 132 или 135.
35. Молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 33 или 34, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота содержит SEQ ID NO. 163, 164, 165, 166, 167, 168, 170, 171, 172, 173, 174, 176, 177 или 178.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/663,495 | 2018-04-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020133923A true RU2020133923A (ru) | 2022-05-27 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2018525000A5 (ru) | ||
| JP6700306B2 (ja) | 受精前の卵細胞、受精卵、及び標的遺伝子の改変方法 | |
| Xiang et al. | Editing porcine IGF2 regulatory element improved meat production in Chinese Bama pigs | |
| RU2018107842A (ru) | Устойчивые к патогенам животные, имеющие модифицированные гены cd163 | |
| Bishop et al. | Genome editing approaches to augment livestock breeding programs | |
| JP6190995B2 (ja) | 簡便で高効率の遺伝子改変非ヒト哺乳動物の作製方法 | |
| AU2013277214B2 (en) | Genetically edited animals and methods for making the same | |
| US20160029604A1 (en) | Multiplex gene editing | |
| US20120276537A1 (en) | Homologous recombination in the oocyte | |
| JP2016507228A (ja) | 無角家畜 | |
| US20190223417A1 (en) | Genetically modified animals having increased heat tolerance | |
| Sakurai et al. | A non-inheritable maternal Cas9-based multiple-gene editing system in mice | |
| US11535850B2 (en) | Methods for improving the health of porcine species by targeted inactivation of CD163 | |
| WO2002066638A1 (fr) | Gene recombinant contenant une sequence de repetition inversee et utilisation correspondante | |
| Zevnik et al. | 3R measures in facilities for the production of genetically modified rodents | |
| RU2020133923A (ru) | Устойчивые к патогенам животные, содержащие модифицированные гены аминопептидазы n (anpep) | |
| Tinh et al. | Crispr/Cas9 and its current application status on pig breeding | |
| Owen et al. | Improved rate of targeted gene knock-in of in-vitro fertilized bovine embryos. | |
| JP7007734B2 (ja) | 条件付きノックアウト動物の製造方法 | |
| Benavides et al. | Rodent Genetics | |
| Novak et al. | Endangered Przewalski’s horse, Equus przewalskii, cloned from historically cryopreserved cells | |
| Ito et al. | Summary of Currently Available Mouse Models | |
| Čechová et al. | Boosting the potential of cattle breeding using molecular biology, genetics, and bioinformatics approaches–a review | |
| WO2019184937A1 (zh) | 产生具有改善的特性的猪的方法 | |
| Pritchett-Corning et al. | Genetically modified animals |