RU2020113566A - НЕ ЯВЛЯЮЩИЕСЯ ЧЕЛОВЕКОМ ЖИВОТНЫЕ, СОДЕРЖАЩИЕ ГУМАНИЗИРОВАННЫЙ ЛОКУС TrkB - Google Patents
НЕ ЯВЛЯЮЩИЕСЯ ЧЕЛОВЕКОМ ЖИВОТНЫЕ, СОДЕРЖАЩИЕ ГУМАНИЗИРОВАННЫЙ ЛОКУС TrkB Download PDFInfo
- Publication number
- RU2020113566A RU2020113566A RU2020113566A RU2020113566A RU2020113566A RU 2020113566 A RU2020113566 A RU 2020113566A RU 2020113566 A RU2020113566 A RU 2020113566A RU 2020113566 A RU2020113566 A RU 2020113566A RU 2020113566 A RU2020113566 A RU 2020113566A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- trkb
- human animal
- sequence
- endogenous
- human
- Prior art date
Links
- 101150056950 Ntrk2 gene Proteins 0.000 title claims 35
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims 2
- 102100035080 BDNF/NT-3 growth factors receptor Human genes 0.000 claims 29
- 101000596896 Homo sapiens BDNF/NT-3 growth factors receptor Proteins 0.000 claims 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 23
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims 16
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 12
- 101100517383 Homo sapiens NTRK2 gene Proteins 0.000 claims 11
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims 10
- 108020005004 Guide RNA Proteins 0.000 claims 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims 6
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims 6
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims 3
- 210000003994 retinal ganglion cell Anatomy 0.000 claims 3
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 claims 2
- 208000030768 Optic nerve injury Diseases 0.000 claims 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims 2
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 claims 2
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 claims 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 claims 2
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 claims 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 2
- 150000003384 small molecules Chemical group 0.000 claims 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims 2
- 102000010400 1-phosphatidylinositol-3-kinase activity proteins Human genes 0.000 claims 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 claims 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 claims 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims 1
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 claims 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 claims 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 claims 1
- 102000006261 human tropomyosin-related kinase-B Human genes 0.000 claims 1
- 108010058135 human tropomyosin-related kinase-B Proteins 0.000 claims 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 claims 1
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 claims 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 claims 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 claims 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 claims 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
- A01K67/027—New breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0278—Humanized animals, e.g. knockin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
- A01K67/027—New breeds of vertebrates
- A01K67/0271—Chimeric animals, e.g. comprising exogenous cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
- A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
- C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
- C12N15/907—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination in mammalian cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y207/00—Transferases transferring phosphorus-containing groups (2.7)
- C12Y207/10—Protein-tyrosine kinases (2.7.10)
- C12Y207/10001—Receptor protein-tyrosine kinase (2.7.10.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/15—Humanized animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/072—Animals genetically altered by homologous recombination maintaining or altering function, i.e. knock in
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
- A01K2267/0318—Animal model for neurodegenerative disease, e.g. non- Alzheimer's
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/033—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a motif for targeting to the internal surface of the plasma membrane, e.g. containing a myristoylation motif
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/035—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal for targeting to the external surface of a cell, e.g. to the outer membrane of Gram negative bacteria, GPI- anchored eukaryote proteins
Claims (64)
1. Не являющееся человеком животное, содержащее генетически модифицированный эндогенный локус TrkB, кодирующий белок TRKB, причем белок TRKB содержит цитоплазматический домен, трансмембранный домен и внеклеточный домен, и весь или часть внеклеточного домена кодируется сегментом эндогенного локуса TrkB, который был подвергнут делеции и заменен ортологичной последовательностью TRKB человека.
2. Не являющееся человеком животное по п. 1, причем белок TRKB содержит внеклеточный домен TRKB человека.
3. Не являющееся человеком животное по п. 2, причем внеклеточный домен содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 60.
4. Не являющееся человеком животное по п. 2 или 3, причем весь внеклеточный домен кодируется сегментом эндогенного локуса TrkB, который был подвергнут делеции и заменен ортологичной последовательностью TRKB человека, необязательно при этом кодирующая последовательность для внеклеточного домена содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 72.
5. Не являющееся человеком животное по любому предыдущему пункту, причем белок TRKB содержит эндогенный сигнальный пептид.
6. Не являющееся человеком животное по п. 5, причем сигнальный пептид содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 51 или 55.
7. Не являющееся человеком животное по п. 5 или 6, причем весь сигнальный пептид кодируется эндогенной последовательностью TrkB, необязательно при этом кодирующая последовательность для сигнального пептида содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 63 или 67.
8. Не являющееся человеком животное по любому предыдущему пункту, причем белок TRKB содержит эндогенный трансмембранный домен TRKB.
9. Не являющееся человеком животное по п. 8, причем трансмембранный домен содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 53 или 57.
10. Не являющееся человеком животное по п. 8 или 9, причем весь трансмембранный домен кодируется эндогенной последовательностью TrkB, необязательно при этом кодирующая последовательность для трансмембранного домена содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 65 или 69.
11. Не являющееся человеком животное по любому предыдущему пункту, причем белок TRKB содержит эндогенный цитоплазматический домен TRKB.
12. Не являющееся человеком животное по п. 11, причем цитоплазматический домен содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 54 или 58.
13. Не являющееся человеком животное по п. 11 или 12, причем весь цитоплазматический домен кодируется эндогенной последовательностью TrkB, необязательно при этом кодирующая последовательность для цитоплазматического домена содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 66 или 70.
14. Не являющееся человеком животное по любому предыдущему пункту, причем белок TRKB содержит эндогенный сигнальный пептид TRKB, эндогенный трансмембранный домен TRKB и эндогенный цитоплазматический домен TRKB.
15. Не являющееся человеком животное по п. 14, причем сигнальный пептид содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 51, трансмембранный домен содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 53, и цитоплазматический домен содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 54, или причем сигнальный пептид содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 55, трансмембранный домен содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 57, и цитоплазматический домен содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 58.
16. Не являющееся человеком животное по п. 14 или 15, причем весь сигнальный пептид, весь трансмембранный домен и весь цитоплазматический домен кодируются эндогенной последовательностью TrkB, необязательно при этом кодирующая последовательность для сигнального пептида содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 63, кодирующая последовательность для трансмембранного домена содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 65, и кодирующая последовательность для цитоплазматического домена содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 66, или необязательно при этом кодирующая последовательность для сигнального пептида содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 67, кодирующая последовательность для трансмембранного домена содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 69, и кодирующая последовательность для цитоплазматического домена содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 70.
17. Не являющееся человеком животное по любому предыдущему пункту, причем белок TRKB представляет собой химерный белок TRKB не являющегося человеком животного/человека.
18. Не являющееся человеком животное по п. 17, причем внеклеточный домен представляет собой внеклеточный домен TRKB человека, трансмембранный домен представляет собой трансмембранный домен эндогенного белка TRKB, и цитоплазматический домен представляет собой цитоплазматический домен эндогенного белка TRKB.
19. Не являющееся человеком животное по п. 17 или 18, причем белок TRKB содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4 или 5.
20. Не являющееся человеком животное по п. 19, причем кодирующая последовательность генетически модифицированного локуса TrkB, кодирующего белок TRKB, содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12 или 13.
21. Не являющееся человеком животное по любому предыдущему пункту, причем не являющееся человеком животное является гетерозиготным по генетически модифицированному эндогенному локусу TrkB.
22. Не являющееся человеком животное по любому из пп. 1-20, причем не являющееся человеком животное является гомозиготным по генетически модифицированному эндогенному локусу TrkB.
23. Не являющееся человеком животное по любому предыдущему пункту, причем не являющееся человеком животное представляет собой млекопитающее.
24. Не являющееся человеком животное по п. 23, причем не являющееся человеком животное представляет собой грызуна.
25. Не являющееся человеком животное по п. 24, причем не являющееся человеком животное представляет собой крысу или мышь.
26. Не являющееся человеком животное по п. 25, причем не являющееся человеком животное представляет собой крысу.
27. Не являющееся человеком животное по п. 26, причем белок TRKB содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 5.
28. Не являющееся человеком животное по п. 27, причем кодирующая последовательность генетически модифицированного локуса TrkB, кодирующего белок TRKB, содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 13.
29. Не являющееся человеком животное по п. 25, причем не являющееся человеком животное представляет собой мышь.
30. Не являющееся человеком животное по п. 29, причем белок TRKB содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 4.
31. Не являющееся человеком животное по п. 30, причем кодирующая последовательность генетически модифицированного локуса TrkB, кодирующего белок TRKB, содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 12.
32. Способ оценки активности нацеленного на TRKB человека реагента in vivo, предусматривающий следующее:
(a) введение нацеленного на TRKB человека реагента не являющемуся человеком животному по любому из пп. 1-31; и
(b) оценка активности нацеленного на TRKB человека реагента у не являющегося человеком животного.
33. Способ по п. 32, при котором стадия (a) предусматривает инъекцию нацеленного на TRKB человека реагента не являющемуся человеком животному.
34. Способ по п. 32 или 33, при котором стадия (b) предусматривает оценку изменений одного или нескольких или всего из следующего: масса тела, состав тканей организма, метаболизм и локомоция, по сравнению с контрольным не являющимся человеком животным.
35. Способ по п. 34, при котором оценка изменений в составе тканей организма предусматривает оценку массы нежировых тканей и/или массы жировой ткани по сравнению с контрольным не являющимся человеком животным.
36. Способ по п. 34 или 35, при котором оценка изменений в метаболизме предусматривает оценку изменений в потреблении пищи и/или потреблении воды.
37. Способ по любому из пп. 32-36, при котором стадия (b) предусматривает оценку фосфорилирования TRKB и/или активации путей MAPK/ERK и PI3K/Akt по сравнению с контрольным не являющимся человеком животным.
38. Способ по любому из пп. 27-32, при котором стадия (b) предусматривает оценку нейропротекторной активности.
39. Способ по п. 38, при котором стадия (b) предусматривает оценку нейропротекторной активности, и причем не являющееся человеком животное представляет собой крысу.
40. Способ по любому из пп. 32-39, при котором стадия (b) предусматривает оценку жизнеспособности ганглиозных клеток сетчатки.
41. Способ по п. 40, при котором жизнеспособность ганглиозных клеток сетчатки оценивают в модели полного пересечения зрительного нерва после повреждения зрительного нерва.
42. Способ по п. 40, при котором жизнеспособность ганглиозных клеток сетчатки оценивают в модели раздавливания зрительного нерва.
43. Способ по любому из пп. 32-42, при котором нацеленный на TRKB человека реагент представляет собой антигенсвязывающий белок.
44. Способ по п. 43, при котором антигенсвязывающий белок представляет собой антитело-агонист TRKB человека.
45. Способ по любому из пп. 32-42, при котором нацеленный на TRKB человека реагент представляет собой малую молекулу.
46. Способ по п. 45, при котором малая молекула представляет собой агонист TRKB человека.
47. Способ получения не являющегося человеком животного по любому из пп. 1-31, предусматривающий следующее:
(a) введение в плюрипотентную клетку не являющегося человеком животного, которая не является эмбрионом на стадии одной клетки, следующего: (i) экзогенная матрица репарации, содержащая нуклеиновую кислоту-вставку, фланкированную 5’ гомологичным плечом, которое гибидизуется с 5’ целевой последовательностью на эндогенном локусе TrkB, и 3’ гомологичным плечом, которое гибидизуется с 3’ целевой последовательностью на эндогенном локусе TrkB, причем нуклеиновая кислота-вставка содержит ортологичную последовательность TRKB человека; и (ii) нуклеазный агент, нацеленный на целевую последовательность в пределах эндогенного локуса TrkB, причем геном модифицируют для включения в него генетически модифицированного эндогенного локуса TrkB;
(b) введение модифицированной плюрипотентной клетки не являющегося человеком животного в эмбрион-хозяин; и
(c) имплантация эмбриона-хозяина в организм суррогатной матери для получения генетически модифицированного не являющегося человеком животного поколения F0, содержащего генетически модифицированный эндогенный локус TrkB.
48. Способ по п. 47, при котором плюрипотентная клетка представляет собой эмбриональную стволовую (ES) клетку.
49. Способ по п. 47 или 48, при котором нуклеазный агент представляет собой белок Cas9 и гидовую РНК, которая нацелена на целевую последовательность для гидовой РНК в пределах эндогенного локуса TrkB.
50. Способ по п. 49, при котором стадия (a) дополнительно предусматривает введение в плюрипотентную клетку не являющегося человеком животного второй гидовой РНК, которая нацелена на вторую целевую последовательность для гидовой РНК в пределах эндогенного локуса TrkB.
51. Способ по любому из пп. 47-50, при котором экзогенная матрица репарации представляет собой большой нацеливающий вектор, который составляет по меньшей мере 10 т.п.н. в длину, или причем экзогенная матрица репарации представляет собой большой нацеливающий вектор, в котором общая сумма 5’ гомологичного плеча и 3’ гомологичного плеча составляет по меньшей мере 10 т.п.н. в длину.
52. Способ получения не являющегося человеком животного по любому из пп. 1-31, предусматривающий следующее:
(a) введение в эмбрион на стадии одной клетки не являющегося человеком животного следующего: (i) экзогенная матрица репарации, содержащая нуклеиновую кислоту-вставку, фланкированную 5’ гомологичным плечом, которое гибидизуется с 5’ целевой последовательностью на эндогенном локусе TrkB, и 3’ гомологичным плечом, которое гибидизуется с 3’ целевой последовательностью на эндогенном локусе TrkB, причем нуклеиновая кислота-вставка содержит ортологичную последовательность TRKB человека; и (ii) нуклеазный агент, нацеленный на целевую последовательность в пределах эндогенного локуса TrkB, причем геном модифицируют для включения в него генетически модифицированного эндогенного локуса TrkB; и
(b) имплантация модифицированного эмбриона на стадии одной клетки не являющегося человеком животного в организм суррогатной матери для получения генетически модифицированного не являющегося человеком животного поколения F0, содержащего генетически модифицированный эндогенный локус TrkB.
53. Способ по п. 52, при котором нуклеазный агент представляет собой белок Cas9 и гидовую РНК, которая нацелена на целевую последовательность для гидовой РНК в пределах эндогенного локуса TrkB.
54. Способ по п. 53, при котором стадия (a) дополнительно предусматривает введение в не относящийся к человеку эмбрион на стадии одной клетки второй гидовой РНК, которая нацелена на вторую целевую последовательность для гидовой РНК в пределах эндогенного локуса TrkB.
55. Клетка не являющегося человеком животного, содержащая генетически модифицированный эндогенный локус TrkB, кодирующий белок TRKB, причем белок TRKB содержит цитоплазматический домен, трансмембранный домен и внеклеточный домен, и весь или часть внеклеточного домена кодируется сегментом эндогенного локуса TrkB, который был подвергнут делеции и заменен ортологичной последовательностью TRKB человека.
56. Геном не являющегося человеком животного, содержащий генетически модифицированный эндогенный локус TrkB, кодирующий белок TRKB, причем белок TRKB содержит цитоплазматический домен, трансмембранный домен и внеклеточный домен, и весь или часть внеклеточного домена кодируется сегментом эндогенного локуса TrkB, который был подвергнут делеции и заменен ортологичной последовательностью TRKB человека.
57. Нацеливающий вектор для создания генетически модифицированного эндогенного локуса TrkB, кодирующего белок TRKB, причем белок TRKB содержит цитоплазматический домен, трансмембранный домен и внеклеточный домен, и весь или часть внеклеточного домена кодируется сегментом эндогенного локуса TrkB, который был подвергнут делеции и заменен ортологичной последовательностью TRKB человека, и причем нацеливающий вектор содержит нуклеиновую кислоту-вставку, содержащую ортологичную последовательность TRKB человека, фланкированную 5’ гомологичным плечом, нацеленным на 5’ целевую последовательность на эндогенном локусе TrkB, и 3’ гомологичным плечом, нацеленным на 3’ целевую последовательность на эндогенном локусе TrkB.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762592905P | 2017-11-30 | 2017-11-30 | |
| US62/592,905 | 2017-11-30 | ||
| US201862661373P | 2018-04-23 | 2018-04-23 | |
| US62/661,373 | 2018-04-23 | ||
| PCT/US2018/063390 WO2019108983A1 (en) | 2017-11-30 | 2018-11-30 | Non-human animals comprising a humanized trkb locus |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020113566A true RU2020113566A (ru) | 2021-12-30 |
| RU2020113566A3 RU2020113566A3 (ru) | 2022-02-10 |
| RU2800428C2 RU2800428C2 (ru) | 2023-07-21 |
Family
ID=
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20190159436A1 (en) | 2019-05-30 |
| EP3585164A1 (en) | 2020-01-01 |
| IL310006A (en) | 2024-03-01 |
| EP3585164B1 (en) | 2023-12-27 |
| CA3076377A1 (en) | 2019-06-06 |
| EP3585164C0 (en) | 2023-12-27 |
| IL274740A (en) | 2020-07-30 |
| AU2018375796A1 (en) | 2020-04-23 |
| JP7361031B2 (ja) | 2023-10-13 |
| JP2024009849A (ja) | 2024-01-23 |
| SG11202002456WA (en) | 2020-04-29 |
| EP4299732A2 (en) | 2024-01-03 |
| WO2019108983A1 (en) | 2019-06-06 |
| US20220361464A1 (en) | 2022-11-17 |
| CN111655031B (zh) | 2022-11-18 |
| RU2020113566A3 (ru) | 2022-02-10 |
| IL274740B1 (en) | 2024-02-01 |
| EP4299732A3 (en) | 2024-03-27 |
| CN116064611A (zh) | 2023-05-05 |
| CN111655031A (zh) | 2020-09-11 |
| US11419318B2 (en) | 2022-08-23 |
| JP2021508236A (ja) | 2021-03-04 |
| KR20200090770A (ko) | 2020-07-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10251376B2 (en) | Increasing healthy lifespan and delaying progression of age-related phenotypes by selectively removing senescent cells | |
| Larcher et al. | Characterization of dystrophin deficient rats: a new model for Duchenne muscular dystrophy | |
| HRP20200613T1 (hr) | Neljudske životinje koje imaju humanizirani gen 1 za programiranu staničnu smrt | |
| HRP20231121T1 (hr) | Životinje koje nisu ljudi, koje imaju gen za humanizirani protein koji regulira signale | |
| US10655144B2 (en) | Nucleic acid construct with a p16 promoter that causes a prodrug converting enzyme to be expressed specifically in senescent cells | |
| JP2019047818A5 (ru) | ||
| JP2019022518A5 (ru) | ||
| ES2700972T3 (es) | Animales no humanos que tienen un gen de factor activador de células B humanizado | |
| JP2021508236A5 (ru) | ||
| IL274740B1 (en) | Non-human animals containing a human TRKB locus | |
| CN106282122B (zh) | 一种非人哺乳动物恐惧症或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途 | |
| AU2016270587B2 (en) | Non-human animals having a disruption in a C9ORF72 locus | |
| BR112016026245A2 (pt) | ?roedor, e, métodos para fazer um roedor humanizado, para fazer um camundongo com dpp4 humanizado, para fazer um roedor transgênico humanizado e para determinar a eficácia terapêutica in vivo de um antagonista da dpp4 específica para humanos no roedor? | |
| Wu et al. | Combining constitutively active rheb expression and chondroitinase promotes functional axonal regeneration after cervical spinal cord injury | |
| CN107072217A (zh) | 长寿动物模型和延长寿命与抑制肿瘤发生的方法 | |
| US9429567B2 (en) | Method for screening substances having weight-regulating action | |
| Fukuda et al. | Non-invasive in vivo imaging of UCP1 expression in live mice via near-infrared fluorescent protein iRFP720 | |
| RU2018103093A (ru) | Гуманизированная скелетная мышца | |
| CN108024522A (zh) | Etv2及其用途 | |
| Van Dyke | Cues for reproduction in squamate reptiles | |
| Kalds et al. | When less is more: targeting the Myostatin gene in livestock for augmenting meat production | |
| RU2018103234A (ru) | Гуманизированная мышца сердца | |
| Zheng et al. | A Cre-driver rat model for anatomical and functional analysis of glucagon (Gcg)-expressing cells in the brain and periphery | |
| US20220192165A1 (en) | Non-human animals having a humanized tslp gene, a humanized tslp receptor gene, and/or a humanized il7ra gene | |
| US20230172170A1 (en) | Non-human animals having a humanized cxcl13 gene |