Claims (77)
1. Антитело-подобный связывающий белок, содержащий две полипептидные цепи, которые образуют два антиген-связывающих сайта,1. An antibody-like binding protein containing two polypeptide chains that form two antigen-binding sites,
где первая полипептидная цепь содержит структуру VL1-L1-VL2-L2-CL, иwhere the first polypeptide chain contains the structure V L1 -L 1 -V L2 -L 2 -C L , and
и вторая полипептидная цепь содержит структуру VH2-L3-VH1-L4-CH1;and the second polypeptide chain contains the structure V H2 -L 3 -V H1 -L 4 -C H1 ;
где:Where:
(a)(i) VL1 получен из VH первого иммуноглобулинового вариабельного домена тяжелой цепи,(a) (i) V L1 is derived from V H of the first immunoglobulin heavy chain variable domain,
VL2 представляет собой второй иммуноглобулиновый вариабельный домен легкой цепи,V L2 is the second immunoglobulin variable domain of the light chain,
VH2 представляет собой второй иммуноглобулиновый вариабельный домен тяжелой цепи, иV H2 is a second immunoglobulin heavy chain variable domain, and
VH1 получен из VL первого иммуноглобулинового вариабельного домена тяжелой цепи;V H1 obtained from V L of the first immunoglobulin heavy chain variable domain;
(ii) VL1 представляет собой первый иммуноглобулиновый вариабельный домен легкой цепи,(ii) V L1 represents the first immunoglobulin variable domain of the light chain,
VL2 получен из VH второго иммуноглобулинового вариабельного домена тяжелой цепи,V L2 obtained from V H the second immunoglobulin heavy chain variable domain,
VH2 получен из VL второго иммуноглобулинового вариабельного домена легкой цепи, иV H2 is obtained from V L of the second immunoglobulin variable domain of the light chain, and
VH1 представляет собой первый иммуноглобулиновый вариабельный домен тяжелой цепи; илиV H1 represents the first immunoglobulin variable domain of the heavy chain; or
(iii) VL1 получен из VH первого иммуноглобулинового вариабельного домена тяжелой цепи,(iii) V L1 obtained from V H the first immunoglobulin heavy chain variable domain,
VL2 получен из VH второго иммуноглобулинового вариабельного домена тяжелой цепи,V L2 obtained from V H the second immunoglobulin heavy chain variable domain,
VH2 получен из VL второго иммуноглобулинового вариабельного домена легкой цепи, иV H2 is obtained from V L of the second immunoglobulin variable domain of the light chain, and
VН1 получен из VL первого иммуноглобулинового вариабельного домена легкой цепи;V H1 obtained from V L of the first immunoglobulin variable domain of the light chain;
где VL1 и VH1, связаны с образованием первого антиген-связывающего сайта, и VL2 и VH2, связаны с образованием второго антиген-связывающего сайта;where V L1 and V H1 are associated with the formation of a first antigen binding site, and V L2 and V H2 are associated with the formation of a second antigen binding site;
(b) CL представляет собой иммуноглобулиновый константный домен легкой цепи;(b) C L is an immunoglobulin constant domain of the light chain;
(c) CH1 представляет собой иммуноглобулиновый константный домен тяжелой цепи CH1; и(c) C H1 is an immunoglobulin constant domain of the heavy chain of C H1 ; and
(d) L1, L2, L3 и L4 представляют собой аминокислотные линкеры;(d) L 1 , L 2 , L 3 and L 4 are amino acid linkers;
где L2 имеет длину по меньшей мере 1 аминокислотный остаток, и L4 имеет длину по меньшей мере 1 аминокислотный остаток; иwhere L 2 has a length of at least 1 amino acid residue, and L 4 has a length of at least 1 amino acid residue; and
где первый и второй полипептиды образуют перекрестную пару легкая цепь-тяжелая цепь.where the first and second polypeptides form a cross pair of light chain-heavy chain.
2. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, в котором:2. The antibody-like binding protein according to claim 1, in which:
L1 имеет длину 3-12 аминокислотных остатков;L 1 has a length of 3-12 amino acid residues;
L2 имеет длину 3-14 аминокислотных остатков;L 2 has a length of 3-14 amino acid residues;
L3 имеет длину 1-8 аминокислотных остатков; иL 3 has a length of 1-8 amino acid residues; and
L4 имеет длину 1-3 аминокислотных остатков.L 4 has a length of 1-3 amino acid residues.
3. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, в котором:3. The antibody-like binding protein according to claim 1, in which:
L1 имеет длину 5-10 аминокислотных остатков;L 1 has a length of 5-10 amino acid residues;
L2 имеет длину 5-8 аминокислотных остатков;L 2 has a length of 5-8 amino acid residues;
L3 имеет длину 1-5 аминокислотных остатков; иL 3 has a length of 1-5 amino acid residues; and
L4 имеет длину 1 или 2 аминокислотных остатков.L 4 has a length of 1 or 2 amino acid residues.
4. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, в котором:4. The antibody-like binding protein according to claim 1, in which:
L1 имеет длину 7 аминокислотных остатков;L 1 has a length of 7 amino acid residues;
L2 имеет длину 5 аминокислотных остатков;L 2 has a length of 5 amino acid residues;
L3 имеет длину 1 аминокислотный остаток; иL 3 has a length of 1 amino acid residue; and
L4 имеет длину 2 аминокислотных остатков.L 4 has a length of 2 amino acid residues.
5. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, в котором:5. The antibody-like binding protein according to claim 1, in which:
L1 имеет длину 1-3 аминокислотных остатков;L 1 has a length of 1-3 amino acid residues;
L2 имеет длину 1-4 аминокислотных остатков;L 2 has a length of 1-4 amino acid residues;
L3 имеет длину 2-15 аминокислотных остатков; иL 3 has a length of 2-15 amino acid residues; and
L4 имеет длину 2-15 аминокислотных остатков.L 4 has a length of 2-15 amino acid residues.
6. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, в котором:6. The antibody-like binding protein according to claim 1, in which:
L1 имеет длину 1 или 2 аминокислотных остатков;L 1 has a length of 1 or 2 amino acid residues;
L2 имеет длину 1 или 2 аминокислотных остатков;L 2 has a length of 1 or 2 amino acid residues;
L3 имеет длину 4-12 аминокислотных остатков; иL 3 has a length of 4-12 amino acid residues; and
L4 имеет длину 2-12 аминокислотных остатков.L 4 has a length of 2-12 amino acid residues.
7. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, в котором:7. The antibody-like binding protein according to claim 1, in which:
L1 имеет длину 1 аминокислотный остаток;L 1 has a length of 1 amino acid residue;
L2 имеет длину 2 аминокислотных остатков;L 2 has a length of 2 amino acid residues;
L3 имеет длину 7 аминокислотных остатков; иL 3 has a length of 7 amino acid residues; and
L4 имеет длину 5 аминокислотных остатков.L 4 has a length of 5 amino acid residues.
8. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, где один или оба L1 и L3 отсутствуют.8. The antibody-like binding protein according to claim 1, where one or both of L 1 and L 3 are absent.
9. Антитело-подобный связывающий белок по п.8, где L1 отсутствует, и L3 имеет длину 2 или более аминокислотных остатков.9. The antibody-like binding protein of claim 8, where L 1 is absent, and L 3 has a length of 2 or more amino acid residues.
10. Антитело-подобный связывающий белок по п.8, где L3 отсутствует, и L1 имеет длину 1 или более аминокислотных остатков.10. The antibody-like binding protein of claim 8, where L 3 is absent, and L 1 has a length of 1 or more amino acid residues.
11. Антитело-подобный связывающий белок по п.8, где L1 отсутствует, и каждый L2, L3 и L4 имеет длину по меньшей мере 1 аминокислотный остаток. 11. The antibody-like binding protein of claim 8, where L 1 is absent, and each L 2 , L 3 and L 4 has a length of at least 1 amino acid residue.
12. Антитело-подобный связывающий белок по п.8, где L3 отсутствует, и каждый L1 и L2 имеет длину по меньшей мере 1 аминокислотный остаток.12. The antibody-like binding protein of claim 8, where L 3 is absent, and each L 1 and L 2 has a length of at least 1 amino acid residue.
13. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, в котором:13. The antibody-like binding protein according to claim 1, in which:
а) L2 по меньшей мере в два раза длиннее L4; илиa) L 2 is at least two times longer than L 4 ; or
b) L4 по меньшей мере в два раза длиннее L2.b) L 4 is at least twice as long as L 2 .
14. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, где длина обоих L1 и L3 составляет по меньшей мере одну аминокислоту; и14. The antibody-like binding protein according to claim 1, where the length of both L 1 and L 3 is at least one amino acid; and
где L1 по крайней мере в два раза длиннее L3, если L2 по крайней мере в два раза длиннее L4; или where L 1 is at least two times longer than L 3 if L 2 is at least two times longer than L 4 ; or
L3 по меньшей мере в два раза длиннее L1, если L4 по меньшей мере в два раза длиннее L2.L 3 is at least two times longer than L 1 if L 4 is at least two times longer than L 2 .
15. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, где по крайней мере первая или вторая полипептидная цепь дополнительно содержит Fc, то есть иммуноглобулиновую шарнирную область, и иммуноглобулиновые константные домены тяжелой цепи CH2 и CH3, полученные из Fc-домена.15. The antibody-like binding protein according to claim 1, wherein at least the first or second polypeptide chain further comprises Fc, i.e. an immunoglobulin hinge region, and immunoglobulin heavy chain constant domains of C H2 and C H3 derived from the Fc domain.
16. Антитело-подобный связывающий белок по п.15, где Fc связан с карбоксильной концевой областью полипептидной цепи.16. The antibody-like binding protein according to clause 15, where the Fc is associated with the carboxyl terminal region of the polypeptide chain.
17. Антитело-подобный связывающий белок по п.15, где Fc связан с CL и/или CH1.17. The antibody-like binding protein according to clause 15, where Fc is associated with C L and / or C H1 .
18. Антитело-подобный связывающий белок по п.17, где Fc первого полипептида связан с CL и/или Fc второго полипептида связан с CH1.18. The antibody-like binding protein of claim 17, wherein the Fc of the first polypeptide is linked to C L and / or the Fc of the second polypeptide is linked to C H1 .
19. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, где связывающий белок способен специфически связываться с одной или несколькими антигенами-мишенями.19. The antibody-like binding protein of claim 1, wherein the binding protein is capable of specifically binding to one or more target antigens.
20. Антитело-подобный связывающий белок по п.19, где один или несколько антигенов-мишеней выбраны из группы, состоящей из B7.1, B7.2, BAFF, BlyS, C3, C5, CCL11 (эотаксин), CCL15 (MIP-1d), CCL17 (TARC), CCL19 (MIP-3b), CCL2 (MCP-1), CCL20 (MIP-3a), CCL21 (MIP-2), SLC, CCL24 (MPIF-2/эотаксина-2), CCL25 (TECK), CCL26 (эотаксин-3), CCL3 (MIP-1a), CCL4 (MIP-1b), CCL5 (RANTES), CCL7 (MCP-3), CCL8 (mcp-2), CD3, CD19, CD20, CD24, CD40, CD40L, CD80, CD86, CDH1 (E-кадгерин), хитиназы, CSF1 (M-CSF), CSF2 (GM-CSF), CSF3 (GCSF), CTLA4, CX3CL1 (SCYD1), CXCL12 (SDF1), CXCL13, EGFR, FCER1A, FCER2, HER2, IGF1R, IL-1, IL-12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL1A, IL1B, IL1F10, IL1β, IL2, IL4, IL6, IL7, IL8, IL9, IL12/23, IL22, IL23, IL25, IL27, IL35, ITGB4 (интегрин b4), LEP (лептин), MHC класса II, TLR2, TLR4, TLR5, TNF, TNF-α, TNFSF4 (лиганд OX40), TNFSF5 (лиганд CD40), Toll-подобных рецепторов, TREM1, TSLP, TWEAK, XCR1 (GPR5/CCXCR1), DNGR-1(CLEC91) и HMGB1. 20. The antibody-like binding protein of claim 19, wherein the one or more target antigens are selected from the group consisting of B7.1, B7.2, BAFF, BlyS, C3, C5, CCL11 (eotaxin), CCL15 (MIP- 1d), CCL17 (TARC), CCL19 (MIP-3b), CCL2 (MCP-1), CCL20 (MIP-3a), CCL21 (MIP-2), SLC, CCL24 (MPIF-2 / eotaxin-2), CCL25 (TECK), CCL26 (eotaxin-3), CCL3 (MIP-1a), CCL4 (MIP-1b), CCL5 (RANTES), CCL7 (MCP-3), CCL8 (mcp-2), CD3, CD19, CD20, CD24, CD40, CD40L, CD80, CD86, CDH1 (E-cadherin), chitinases, CSF1 (M-CSF), CSF2 (GM-CSF), CSF3 (GCSF), CTLA4, CX3CL1 (SCYD1), CXCL12 (SDF1), CXCL13, EGFR, FCER1A, FCER2, HER2, IGF1R, IL-1, IL-12, IL13, IL15, IL17, IL18, IL1A, IL1B, IL1F10, IL1β, IL2, IL4, IL6, IL7, IL8, IL9, IL12 / 23, IL22, IL23, IL25, IL27, IL35, ITGB4 (integrin b4), LEP (leptin), MHC class II, TLR2, TLR4, TLR5, TNF, TNF-α, TNFSF4 (ligand OX40), TNFSF5 (CD40 ligand), Toll-like receptors, TREM1, TSLP, TWEAK, XCR1 (GPR5 / CCXCR1), DNGR-1 (CLEC91) and HMGB1.
21. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, где связывающий белок является биспецифичным и способен связываться с двумя различными антигенами-мишенями.21. The antibody-like binding protein of claim 1, wherein the binding protein is bispecific and is capable of binding to two different target antigens.
22. Антитело-подобный связывающий белок по п.21, где два разных антигена-мишени выбраны из группы, состоящей из IL4 и IL13, IGF1R и HER2, IGF1R и EGFR, EGFR и HER2, BK и IL13, PDL-1 и CTLA-4, CTLA4 и MHC класса II, IL-12 и IL-18, IL-1α и IL-1β, TNFα и IL12/23, TNFα и IL-12p40, TNFα и IL1β, TNFα и IL-23, и IL17 и IL23.22. The antibody-like binding protein of claim 21, wherein the two different target antigens are selected from the group consisting of IL4 and IL13, IGF1R and HER2, IGF1R and EGFR, EGFR and HER2, BK and IL13, PDL-1 and CTLA- 4, CTLA4 and MHC class II, IL-12 and IL-18, IL-1α and IL-1β, TNFα and IL12 / 23, TNFα and IL-12p40, TNFα and IL1β, TNFα and IL-23, and IL17 and IL23 .
23. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, где связывающий белок способен ингибировать функцию одной или нескольких антигенов-мишеней.23. The antibody-like binding protein of claim 1, wherein the binding protein is capable of inhibiting the function of one or more target antigens.
24. Антитело-подобный связывающий белок по п.1, где по меньшей мере один из линкеров, выбранных из группы, состоящей из L1, L2, L3 и L4, содержит по крайней мере один остаток цистеина.24. The antibody-like binding protein according to claim 1, where at least one of the linkers selected from the group consisting of L 1 , L 2 , L 3 and L 4 contains at least one cysteine residue.
25. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и терапевтически эффективное количество антитело-подобного связывающего белка по п.1.25. A pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier and a therapeutically effective amount of an antibody-like binding protein according to claim 1.
26. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело-подобный связывающий белок по любому из пп.1-24.26. The selected nucleic acid molecule containing the nucleotide sequence encoding the antibody-like binding protein according to any one of claims 1 to 24.
27. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.26.27. The expression vector containing the nucleic acid molecule according to p.
28. Выделенная клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.26, или вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.27.28. The selected host cell containing the nucleic acid molecule according to item 26, or an expression vector containing the nucleic acid molecule according to item 27.