Claims (1)
Способ получения цитокинов из тромбоцитов пуповинной крови, как субстрата для разработки лекарственных средств для человека и животных, содержащий три этапа: на первом этапе производят забор пуповинной крови у разных доноров, вводят в каждый пакет с донорской кровью раствор «Стабизол 200/400» в объеме 20% от объема крови пакета, центрифугируют каждый из пакетов с кровью в режиме плавного изменения программы, в результате чего кровь разделяется на обогащенную тромбоцитами плазму и эритроциты, указанная программа состоит из следующих режимов: разгон с ускорением 4 до 540 в течение 5 мин; разгон с ускорением 9 до 900 в течение 2 мин; торможение с ускорением 9 до 300 и вращением в течение 2 мин; торможение с ускорением 9 до 100 и вращение в течение 1,3 мин с последующим отключением, (свободное вращение со 100), затем из пакетов осторожно удаляют эритроциты и утилизируют их; на втором этапе проводят объединение всех донорских пакетов ОТП и концентрацию тромбоцитов, для чего полученную обогащенную тромбоцитами плазму переносят в соответствующее количество пробирок типа фалькон (50 мл), проводят центрифугирование (концентрацию тромбоцитов) в режиме 15 минут на скорости 4000 g, в результате центрифугирования получают концентрат тромбоцитов и обедненную плазму, обедненную плазму убирают для использования в качестве растворителя, оставляя 5 мл плазмы на дне пробирок, полученные тромбоцитарные концентраты разных доноров объединяют в одной пробирке (50 мл) и разводят обедненной плазмой до объема 50 мл, или в качестве растворителя используют физиологический раствор, если в дальнейшем требуется исключить белки плазмы; полученный пул тромбоконцентрата повторно центрифугируют в режиме 60 минут на скорости 50 g для удаления остатков эритроцитов и лейкоцитов, после центрифугирования надосадочную жидкость в объеме 45-48 мл переносят в новую пробирку объемом 50 мл, а 1 мл раствора отправляют в лабораторию для подсчета тромбоцитов на автоматизированном гематологическом анализаторе, на третьем этапе полученный тромбоконцентрат с известным количеством тромбоцитов на мл или мкл подвергают процедуре хранения/активации, при этом фалькон с тромбоконцентратом опускают в криохранилище сухого типа на 15 минут при температуре -196 градусов, замороженный продукт помещают на хранение в морозильную камеру при температуре -80 градусов, где хранят до 3-х лет, причем дальнейшую активацию продукта проводят перед непосредственным использованием путем быстрого размораживания, для этого фалькон помещают в водяную баню с температурой +37 градусов, до полного оттаивания продукта, а при необходимости получить продукт с концентрацией цитокинов/ тромбоцитов менее чем в замороженном продукте, конечный продукт разводят в соответствующее количество раз, при этом используют исходную концентрацию тромбоцитов.A method for producing cytokines from umbilical cord blood platelets as a substrate for the development of drugs for humans and animals, comprising three stages: at the first stage, cord blood is collected from different donors, a solution of Stabisol 200/400 is introduced into each donated blood package in volume 20% of the blood volume of the packet, each of the blood packets is centrifuged in the program smooth change mode, as a result of which the blood is divided into platelet-rich plasma and red blood cells, this program consists of the following modes: acceleration with acceleration 4 to 540 for 5 min; acceleration with an acceleration of 9 to 900 for 2 minutes; braking with acceleration of 9 to 300 and rotation for 2 min; braking with an acceleration of 9 to 100 and rotation for 1.3 minutes, followed by shutdown, (free rotation from 100), then red blood cells are carefully removed from the packets and disposed of; at the second stage, all donor OTP packages are combined and the platelet concentration is achieved, for which the obtained platelet-rich plasma is transferred to the corresponding number of Falcon type tubes (50 ml), centrifugation (platelet concentration) is carried out for 15 minutes at a speed of 4000 g, as a result of centrifugation platelet concentrate and depleted plasma, depleted plasma are removed for use as a solvent, leaving 5 ml of plasma at the bottom of the tubes, the obtained platelet concentrates of different sizes donors were combined in one tube (50 mL) and the depleted plasma is diluted to a volume of 50 ml, or used as solvent saline, if needed to further eliminate the plasma proteins; the resulting platelet concentrate pool is centrifuged again in 60 minutes at a speed of 50 g to remove residual red blood cells and white blood cells, after centrifugation, the supernatant in a volume of 45-48 ml is transferred to a new 50 ml tube, and 1 ml of the solution is sent to a laboratory for platelet counting on an automated hematological analyzer, at the third stage, the obtained platelet concentrate with a known platelet count per ml or μl is subjected to the storage / activation procedure, while the falcon with the platelet concentrate is omitted they are stored in a dry type cryostorage for 15 minutes at a temperature of -196 degrees, the frozen product is stored in a freezer at a temperature of -80 degrees, where it is stored for up to 3 years, and further product activation is carried out before direct use by quick defrosting, for this Falcon is placed in a water bath with a temperature of +37 degrees until the product is completely thawed, and if necessary, get a product with a concentration of cytokines / platelets less than in a frozen product, the final product is diluted in the appropriate number of times, while using the initial concentration of platelets.