RU2018109739A

RU2018109739A - Трансгенное животное для получения антител, имеющих общую легкую цепь

Info

Publication number: RU2018109739A
Application number: RU2018109739A
Authority: RU
Inventors: Уильям Дон ХАРРИМАН; Роберт ЭТЧЕЗ; Филип А. ЛЕЙТОН
Original assignee: Кристал Байосайнс Инк.
Priority date: 2015-08-27
Filing date: 2016-08-24
Publication date: 2019-09-20
Also published as: BR112018003778A2; AU2016311334B2; US20180249687A1; CN108024523A; WO2017035274A1; IL257623A; US11033009B2; JP2018525014A; MX2018002493A; AU2016311334A1; RU2018109739A3; CA2995724A1; CO2018002741A2; EP3340787A1; EP3340787A4; KR20180038554A

Claims

1. Трансгенное животное, содержащее геном, содержащий трансген общей легкой цепи, причем трансген общей легкой цепи содержит неиммуноглобулиновый промотор легкой цепи и последовательность, кодирующую общую легкую цепь.

2. Трансгенное животное по п. 1, отличающееся тем, что общая легкая цепь экспрессируется конститутивным образом.

3. Трансгенное животное по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что трансген общей легкой цепи представляет собой индуцируемый рекомбиназой трансген общей легкой цепи, содержащий:

i. неиммуноглобулиновый промотор легкой цепи;

ii. последовательность, кодирующую общую легкую цепь, и

iii. промежуточную последовательность, которая предотвращает экспрессию общей легкой цепи, пока промежуточная последовательность не будет вырезана рекомбиназой.

4. Трансгенное животное по п. 3, отличающееся тем, что вырезание промежуточной последовательности индуцируемого рекомбиназой трансгена общей легкой цепи происходит при экспрессии рекомбиназы.

5. Трансгенное животное по п. 3, отличающееся тем, что промежуточная последовательность индуцируемого рекомбиназой трансгена общей легкой цепи фланкируется сайтами рекомбинации.

6. Трансгенное животное по п. 3, отличающееся тем, что промежуточная последовательность содержит селективный маркер.

7. Трансгенное животное по п. 6, отличающееся тем, что кассета селективного маркера содержит сайт полиаденилирования, который препятствует транскрипции нижележащих областей.

8. Трансгенное животное по любому из предыдущих пунктов, дополнительно содержащее трансген рекомбиназы, причем указанный трансген рекомбиназы содержит кодирующую рекомбиназу последовательность, функционально связанную с промотором легкой цепи иммуноглобулина.

9. Трансгенное животное по п. 8, отличающееся тем, что промотор легкой цепи иммуноглобулина представляет собой эндогенный промотор легкой цепи иммуноглобулина.

10. Трансгенное животное по п. 8, отличающееся тем, что трансген рекомбиназы представляет собой самоинактивирующийся трансген рекомбиназы.

11. Трансгенное животное по п. 10, отличающееся тем, что самоинактивирующийся трансген рекомбиназы содержит кодирующую рекомбиназу последовательность, фланкируемую сайтами рекомбинации.

12. Трансгенное животное по любому из предыдущих пунктов отличающееся тем, что рекомбиназа представляет собой Cre, а сайты рекомбинации представляют собой сайты lox.

13. Трансгенное животное по п. 8, отличающееся тем, что трансген рекомбиназы и трансген общей легкой цепи генетически связаны.

14. Трансгенное животное по п. 13, отличающееся тем, что рекомбинация между трансгеном рекомбиназы и трансгеном общей легкой цепи происходит с частотой, составляющей не более 2,5%.

15. Трансгенное животное по п. 13, отличающееся тем, что трансгенное животное является гетерозиготным в отношении указанных генетически связанных трансгенов.

16. Трансгенное животное по п. 13, отличающееся тем, что трансгенное животное является гомозиготным в отношении указанных генетически связанных трансгенов.

17. Трансгенное животное по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что кодирующая общую легкую цепь последовательность кодирует общую легкую цепь иммуноглобулина, содержащую предварительно перестроенную вариабельную область.

18. Трансгенное животное по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что кодирующая общую легкую цепь последовательность кодирует человеческую вариабельную область, функционально связанную с константной областью легкой цепи иммуноглобулина.

19. Трансгенное животное по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что трансгенное животное представляет собой трансгенную птицу.

20. Трансгенная птица по п. 19, отличающаяся тем, что трансгенная птица представляет собой трансгенную курицу.

21. Трансгенное животное по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что трансген общей легкой цепи замещает по меньшей мере часть эндогенного локуса легкой цепи иммуноглобулина, включая любые присутствующие в нем псевдогены, генома указанного животного.

22. Способ получения гибридного животного, включающий:

скрещивание трансгенного животного, которое вырабатывает общую легкую цепь, со вторым трансгенным животным, содержащим геном, содержащий нокин искусственной тяжелой цепи; и

получение потомства от скрещивания.

23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что нокин искусственной тяжелой цепи представляет собой нокин человеческой тяжелой цепи.

24. Способ получения антитела с общей легкой цепью, причем указанное антитело является специфическим в отношении антигена, а указанный способ включает:

a) иммунизацию трансгенного животного по любому из пп. 1-20 указанным антигеном;

b) создание гибридом с использованием клеток указанного иммунизированного трансгенного животного;

c) скрининг указанных гибридом для выявления антиген-специфической гибридомы; и

d) выделение антиген-специфического антитела из указанной антиген-специфической гибридомы.

25. Способ по п. 24, отличающийся тем, что искусственная тяжелая цепь представляет собой искусственную человеческую тяжелую цепь.

26. Способ по п. 24, отличающийся тем, что трансгенное животное представляет собой трансгенную курицу.