RU2016899C1 - Method of alkaline phosphatase preparing - Google Patents
Method of alkaline phosphatase preparing Download PDFInfo
- Publication number
- RU2016899C1 RU2016899C1 SU4946819A RU2016899C1 RU 2016899 C1 RU2016899 C1 RU 2016899C1 SU 4946819 A SU4946819 A SU 4946819A RU 2016899 C1 RU2016899 C1 RU 2016899C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- water
- alkaline phosphatase
- volume
- supernatant
- raw materials
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к энзимологии, конкретно к способу получения фермента - щелочной фосфотазы, используемого для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных заболеваний, а также для лечения расстройств опорно-двигательного аппарата. The invention relates to enzymology, specifically to a method for producing an alkaline phosphatase enzyme used for the diagnosis of viral, bacterial and parasitic diseases, as well as for the treatment of disorders of the musculoskeletal system.
Известны способы получения щелочной фосфотазы путем аэробной ферментации штаммов Escherichia coli [1] или Achromobacter lyticus [2] на сложных питательных средах. Known methods for producing alkaline phosphatase by aerobic fermentation of strains of Escherichia coli [1] or Achromobacter lyticus [2] on complex nutrient media.
Недостатками этих способов являются их длительность и невысокая активность целевого продукта (100-120 ед/мг белка). The disadvantages of these methods are their duration and low activity of the target product (100-120 u / mg protein).
Известен способ получения щелочной фосфатазы из кишечника крупного рогатого скота [3]. A known method of producing alkaline phosphatase from the intestines of cattle [3].
Однако удельная активность фермента также не превышает 150 ед/мг белка. However, the specific activity of the enzyme also does not exceed 150 u / mg protein.
Наиболее близким к заявленному является способ получения щелочной фосфатазы из сгустков крови, остающихся после выделения γ-глобулина [4]. Closest to the claimed is a method of producing alkaline phosphatase from blood clots remaining after isolation of γ-globulin [4].
Согласно этому способу сырье гомогенизируют в воде при рН 5,4, затем гомогенат центрифугируют, из надосадочной жидкости высаливают сначала балластные белки, а затем целевой продукт путем последовательного добавления возрастающих концентраций сернокислого аммония, после чего целевого продукт очищают диализом, хроматографией на геле гидроокиси алюминия, повторным диализом и сушат. According to this method, the feedstock is homogenized in water at pH 5.4, then the homogenate is centrifuged, ballast proteins are salted out of the supernatant, and then the target product is added successively by increasing concentrations of ammonium sulfate, after which the target product is purified by dialysis, chromatography on aluminum hydroxide gel, repeated dialysis and dried.
Недостатки известного способа заключаются в его многостадийности (16 стадий) и сложности в техническом исполнении, длительности (около 95 ч), незначительном выходе (0,2-0,5% к массе исходного сырья) и низкой удельной активности фермента (130-160 ед/мг белка). The disadvantages of this method are its multi-stage (16 stages) and complexity in technical performance, duration (about 95 hours), low yield (0.2-0.5% by weight of the feedstock) and low specific activity of the enzyme (130-160 units / mg protein).
Целью изобретения является упрощение и интенсификация технологического процесса, увеличение выхода и удельной активности щелочной фосфатазы. The aim of the invention is to simplify and intensify the process, increase the yield and specific activity of alkaline phosphatase.
Это достигается тем, что в способе получения щелочной фосфатазы, включающем гомогенизацию сырья в воде, центрифугирование, высаливание надосадочной жидкости, растворение активной фракции в воде, обессоливание диализом, очистку и сушку, в качестве сырья используют селезенку крупного рогатого скота (к.р.с.), гомогенизацию сырья проводят при рН 8,5-9,0, высаливание - хлоридом натрия при 2-6оС, взятым из расчета 10-12% от объема раствора, растворение проводят из расчета 0,1-0,2 объема воды к массе сырья, а очистку - осаждением и переосаждением из 4-6 объемов этилового спирта при 0-4оС.This is achieved by the fact that in the method of producing alkaline phosphatase, including homogenization of the raw material in water, centrifugation, salting out of the supernatant, dissolving the active fraction in water, desalination by dialysis, cleaning and drying, cattle spleen is used as raw material (cat.s. .) homogenizing the raw material is carried out at a pH of 8.5-9.0, desalting - sodium chloride at 2-6 ° C, taken from the calculation of 10-12% of the volume of solution, the dissolution is carried out at the rate of 0.1-0.2 volume water to the mass of raw materials, and purification by precipitation and reprecipitation from 4-6 volumes in ethyl alcohol at 0-4 about C.
Предложенный способ отличается от известного использованием другого сырья и других приемов выделения и очистки целевого продукта. Эти отличия приводят к упрощению и интенсификации технологического процесса, увеличению выхода и удельной активности щелочной фосфатазы. Следовательно, предложенное техническое решение заявителя соответствует критерию изобретения "существенные отличия". The proposed method differs from the known using other raw materials and other methods of isolation and purification of the target product. These differences lead to a simplification and intensification of the process, an increase in the yield and specific activity of alkaline phosphatase. Therefore, the proposed technical solution of the applicant meets the criteria of the invention "significant differences".
Заявленная совокупность признаков на дачу подачи заявки неизвестна, что позволяет сделать вывод о соответствии предлагаемого технического решения критерию изобретения "новизна". The claimed combination of features to the country of application is unknown, which allows us to conclude that the proposed technical solution meets the criteria of the invention of "novelty."
Использованные в предложенном способе стадии и параметры технологического процесса являются необходимыми и логически обоснованными. Used in the proposed method, the stages and parameters of the process are necessary and logically justified.
Щелочная фосфатаза является ферментом, продуцируемым различными органами и тканями млекопитающих. Как показали исследования, она содержится в крови, сыворотке, лимфе, печени, кишечнике, но наиболее высокое ее содержание выявлено в селезенке к.р.с. Поэтому этот орган выбран в качестве объекта исследования. Alkaline phosphatase is an enzyme produced by various organs and tissues of mammals. Studies have shown that it is found in the blood, serum, lymph, liver, intestines, but its highest content was found in the spleen Therefore, this body is selected as the object of study.
Как и в случае известного способа для извлечения щелочной фосфатазы был использован прием гомогенизации сырья в воде, однако рН среды выбран не 5,4, а 8,5-9,0, поскольку рН 5,4 соответствует изоэлектрической точке фермента, в то время как рН 8,5-9,0 является оптимумом его активности [2]. As in the case of the known method for the extraction of alkaline phosphatase, the method of homogenization of the raw material in water was used, however, the pH of the medium was not chosen to be 5.4, but 8.5-9.0, since pH 5.4 corresponds to the isoelectric point of the enzyme, while pH 8.5-9.0 is the optimum of its activity [2].
При осуществлении процесса высаливания щелочной фосфатазы в предложенном способе предусматривается использование не сернокислого аммония, а хлорида натрия, поскольку выбранные концентрации NaCl (10-12% к объему фильтрата) позволяют осадить практически полностью целевой продукт. Кроме того, освобождение от ионов Cl- при последующем диализе происходит значительно быстрее, чем от ионов SO4 2-.When carrying out the process of salting out alkaline phosphatase in the proposed method, the use of sodium chloride is not ammonium sulfate, but sodium chloride, since the selected concentration of NaCl (10-12% by volume of the filtrate) allows precipitating almost completely the target product. In addition, the release from Cl - ions during subsequent dialysis occurs much faster than from SO 4 2- ions.
Вместе с тем следует учитывать, что наиболее полное формирование осадка, а следовательно, и максимальное выделение щелочной фосфатазы достигаются при высаливании в условиях низких температур (2-6оС). При более высоких температурах процесс высаливания в значительной степени замедляется.However, it should be borne in mind that the most complete formation of the precipitate, and hence the maximum isolation is achieved when the alkaline phosphatase salting out at low temperatures (2-6 ° C). At higher temperatures, the salting out process slows down significantly.
Очистку целевого продукта в предложенном способе проводят путем последовательного осаждения и переосаждения из 2-4 объемов этилового спирта при 0-4оС, что позволяет в более полной степени освободиться от примесей белковой и небелковой природы в отличие от хроматографии на геле Al(OH)3, используемой в известном способе.Purification of the expected product in the inventive method is carried out by sequential deposition and redeposition of 2-4 volumes of ethanol at 0-4 ° C, allowing more fully free from impurities protein and nonprotein nature as opposed to gel chromatography on Al (OH) 3 used in the known method.
Важно подчеркнуть, что другие осаждающие соединения, такие как ацетон или этилацетат, не приводят к положительному результату, поскольку целевой продукт при этом подвергается денатурационным изменениям, влекущим за собой снижение его удельной активности. It is important to emphasize that other precipitating compounds, such as acetone or ethyl acetate, do not lead to a positive result, since the target product undergoes denaturation changes, which entail a decrease in its specific activity.
П р и м е р 1. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды, подщелоченной 1 н. раствором NaHCO3 до рН 8,5, при 20оС в течение 1 ч. Смесь центрифугируют при 3000 об/мин 10 мин, надосадочную жидкость отделяют и к 2 л раствора добавляют 200 г NaCl (10% от объема раствора), смесь перемешивают до растворения соли и выдерживают при 2оС в течение 4 ч. Осадок отделяют центрифугированием при 3000 об/мин, растворяют в 100 мл воды (0,1 объема к массе сырья) и центрифугируют при 3000 об/мин 10 мин. Надосадочную жидкость отделяют и диализуют против воды при 20оС в течение 18 ч. 100 мл диализата вливают в 400 мл этилового спирта, предварительно охлажденного до 0оС, выдерживают 2 ч, осадок отделяют, растворяют в 100 мл воды, центрифугируют при 3000 об/мин 10 мин, надосадочную жидкость отделяют, вливают в 400 мл этилового спирта, охлажденного до 0оС, выдерживают 2 ч, осадок отделяют и сушат в вакууме. Получают 20 г (выход 2% к массе сырья) щелочной фосфатазы с удельной активностью 450 ед/мг белка (удельную активность щелочной фосфатазы определяли по количеству фосфора, отщепляемого от β-глицерофосфата).PRI me R 1. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 l of water, alkalinized 1 N. NaHCO 3 solution to pH 8.5, at 20 ° C for 1 h. The mixture was centrifuged at 3000 rev / min for 10 minutes, the supernatant separated and 2 L of the solution was added 200 g of NaCl (10% of solution volume), and the mixture was stirred to dissolve the salts and kept at 2 ° C for 4 hours. The precipitate was separated by centrifugation at 3000 rev / min, dissolved in 100 ml of water (0.1 volume to weight of raw materials) and centrifuged at 3000 rev / min for 10 minutes. The supernatant was separated and dialyzed against water at 20 ° C for 18 hours. 100 ml of dialysate was poured into 400 mL of ethanol previously cooled to 0 ° C, aged for 2 hours, the precipitate is dissolved in 100 ml of water, centrifuged at 3000 rpm / min for 10 minutes, the supernatant was separated, poured into 400 ml of ethanol, cooled to 0 ° C, aged for 2 hours, the precipitate was collected and dried in vacuo. Get 20 g (yield 2% by weight of raw materials) of alkaline phosphatase with a specific activity of 450 u / mg protein (specific activity of alkaline phosphatase was determined by the amount of phosphorus cleaved from β-glycerophosphate).
П р и м е р 2. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2,5 л воды, подщелоченной до рН 8,75, при 22оС в течение 1,5 ч. Смесь центрифугируют 10 мин, надосадочную жидкость отделяют и к 2,5 л раствора добавляют 275 г NaCl (11% от объема раствора), смесь перемешивают до растворения соли и выдерживают при 4оС 6 ч. Осадок отделяют центрифугированием 10 мин, растворяют в 150 мл воды (0,15 объема к массе сырья) и центрифугируют 10 мин. Надосадочную жидкость отделяют и диализуют против воды при 22оС в течение 21 ч. 150 мл диализата вливают в 750 мл этилового спирта, охлажденного до 2оС, выдерживают 5 ч, осадок отделяют, растворяют в 150 мл воды, центрифугируют 10 мин, надосадочную жидкость отделяют, вливают в 750 мл этилового спирта, охлажденного до 2оС, через 5 ч осадок отделяют и сушат в вакууме. Получают 22,5 г (выход 2,25% к массе сырья) щелочной фосфатазы с удельной активностью 505 ед/мг белка.PRI me R 2. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2.5 l of water, alkalized to pH 8.75, at 22 ° C for 1.5 hours. The mixture was centrifuged for 10 min, the supernatant was separated and 2.5 liter of solution was added 275 g of NaCl (11% by volume solution), the mixture was stirred to dissolve the salt and kept at 4 ° C for 6 hours. The precipitate was separated by centrifugation for 10 minutes, dissolved in 150 ml of water (0.15 volume to feed weight) and centrifuged for 10 min. The supernatant was separated and dialyzed against water at 22 ° C for 21 hours. 150 ml of dialysate was poured into 750 ml of ethanol, cooled to 2 ° C, held for 5 hours, the precipitate is dissolved in 150 ml of water, centrifuged 10 min, the supernatant separated liquid, is poured into 750 ml of ethanol, cooled to 2 ° C, after 5 hours the precipitate was collected and dried in vacuo. Obtain 22.5 g (yield 2.25% by weight of raw materials) of alkaline phosphatase with a specific activity of 505 u / mg protein.
П р и м е р 3. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 3 л воды, подщелоченной до рН 9,0, при 25оС в течение 2 ч. Смесь центрифугируют 10 мин, надосадочную жидкость отделяют и к 3 л раствора добавляют 360 г NaCl (12% от объема раствора). Смесь перемешивают до растворения соли и выдерживают при 6оС 8 ч. Осадок отделяют центрифугированием, растворяют в 200 мл воды (0,2 объема к массе сырья) и центрифугируют 10 мин. Надосадочную жидкость отделяют и диализуют против воды при 25оС 24 ч. 200 мл диализата вливают в 1200 мл этилового спирта, охлажденного до 4оС, через 8 ч осадок отделяют, растворяют в 200 мл воды, центрифугируют 10 мин, надосадочную жидкость отделяют, вливают в 1200 мл этилового спирта, охлажденного до 4оС, через 8 ч осадок отделяют и сушат в вакууме. Получают 25 г (выход 2,5% к массе сырья) щелочной фосфатазы с удельной активностью 560 ед/мг белка.PRI me R 3. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 3 liters of water, alkalized to pH 9.0, at 25 ° C for 2 hours. The mixture was centrifuged for 10 min, the supernatant is separated and to the solution was added 3 liters of 360 g of NaCl (12% of solution volume). The mixture was stirred to dissolve the salt and kept at 6 ° C for 8 hours. The precipitate was collected by centrifugation, dissolved in 200 ml of water (0.2 volume to feed weight) and centrifuged for 10 min. The supernatant was separated and dialyzed against water at 25 ° C for 24 hours. 200 ml of dialysate was poured into 1200 ml of ethanol, chilled to 4 ° C after 8 h the precipitate was separated, dissolved in 200 ml of water, centrifuged 10 min, the supernatant is separated, poured into 1200 ml of ethanol, cooled to 4 ° C; after 8 hours, the precipitate was separated and dried in vacuo. Get 25 g (yield 2.5% by weight of raw materials) of alkaline phosphatase with a specific activity of 560 units / mg protein.
При изменении заявленной совокупности существенных признаков положительный эффект не достигается, что подтверждается сравнительными примерами 4-15. When changing the claimed combination of essential features, a positive effect is not achieved, which is confirmed by comparative examples 4-15.
П р и м е р 4. 1 кг измельченной селезенки свиной гомогенизируют в 2 л воды, подщелоченной до рН 8,5, и далее поступают, как в примере 1. Получают 9,4 г щелочной фосфатазы (выход 0,94% к массе сырья) с удельной активностью 400 ед/мг белка. PRI me R 4. 1 kg of crushed pork spleen is homogenized in 2 l of water, alkalinized to pH 8.5, and then proceed as in example 1. Receive 9.4 g of alkaline phosphatase (yield 0.94% by weight raw materials) with a specific activity of 400 units / mg protein.
П р и м е р 5. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды, подщелоченной до рН 8,0, и далее поступают, как в примере 1. Получают 18,8г г щелочной фосфатазы (выход 1,88% к массе сырья) с удельной активностью 310 ед/мг белка. PRI me R 5. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 l of water, alkalinized to pH 8.0, and then proceed, as in example 1. Receive 18.8 g of alkaline phosphatase (yield of 1.88% by weight of raw materials) with a specific activity of 310 units / mg protein.
П р и м е р 6. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды, подщелоченной до рН 9,5, и далее поступают, как в примере 1. Получают 18,5 г щелочной фосфатазы (выход 1,85% к массе сырья) с удельной активностью 275 ед/мг белка. PRI me R 6. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 l of water, alkalinized to pH 9.5, and then proceed as in example 1. Obtain 18.5 g of alkaline phosphatase (yield 1.85% by weight of raw materials) with a specific activity of 275 units / mg protein.
П р и м е р 7. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды, подщелоченной до рН 8,5, и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что количество NaCl составляют 8% от объема надосадочной жидкости. Получают 2,4 г (выход 0,24% к массе сырья) щелочной фосфатазы с удельной активностью 380 ед/мг белка. PRI me R 7. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 l of water, alkaline to pH 8.5, and then proceed as in example 1, except that the amount of NaCl is 8% of the volume of the supernatant. 2.4 g are obtained (yield 0.24% by weight of the raw material) of alkaline phosphatase with a specific activity of 380 u / mg protein.
П р и м е р 8. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в воде, подщелоченной до рН 8,5, и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что количество NaCl составляет 14% от объема надосадочной жидкости. Получают 34 г порошка (выход 3,4% к массе сырья) с удельной активностью 25 ед/мг белка. PRI me R 8. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in water, alkalinized to pH 8.5, and then proceed as in example 1, except that the amount of NaCl is 14% of the volume of the supernatant. 34 g of powder are obtained (yield 3.4% by weight of raw materials) with a specific activity of 25 u / mg protein.
П р и м е р 9. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды, подщелоченной до рН 8,5, и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что высаливание надосадочной жидкости проводят при 0оС. При этом получают такое же количество щелочной фосфатазы (20 г) с той же удельной активностью (450 ед/мг белка), что и вы примере 1, что свидетельствует о нецелесообразности снижения температуры высаливания.PRI me R 9. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 L of water, alkalized to pH 8.5, and proceed as in Example 1 except that the salting out the supernatant is carried out at 0 ° C. This produces the same amount of alkaline phosphatase (20 g) with the the same specific activity (450 u / mg protein), as you are example 1, which indicates the inappropriateness of lowering the salting temperature.
П р и м е р 10. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды при рН 8,5 и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что высаливание надосадочной жидкости проводят при 8оС. При этом осадок формируется только через 12 ч, что приводит к нерациональному удлинению технологического процесса.PRI me R 10. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 L of water at pH 8.5, and proceed as in Example 1 except that the salting out the supernatant is carried out at 8 ° C. Thus the precipitate formed only after 12 h, which leads to inefficient elongation process.
П р и м е р 11. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды при рН 8,5 и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что осадок после высаливания NaCl растворяют в 250 мл воды (0,25 объема к массе сырья). Получают целевой продукт с тем же выходом (2%) и удельной активностью (450 ед/мг белка), что и в примере 1, что свидетельствует о нецелесообразности увеличения количества воды для растворения осадка вследствие излишнего расхода реактивов на дальнейшие технологические операции. PRI me R 11. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 l of water at pH 8.5 and then proceed as in example 1, except that the precipitate after salting out with NaCl is dissolved in 250 ml of water (0.25 volume to weight of raw material). Get the target product with the same yield (2%) and specific activity (450 u / mg protein), as in example 1, which indicates the inappropriateness of increasing the amount of water to dissolve the precipitate due to excessive consumption of reagents for further technological operations.
П р и м е р 12. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды при рН 8,5 и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что осадок после высаливания NaCl растворяют в 50 мл воды (0,05 объема к массе сырья). Пpи этом образуется густая суспензия, не разделяющаяся при центрифугировании, вследствие чего выделение целевого продукта становится невозможным. PRI me R 12. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 l of water at a pH of 8.5 and then proceed as in example 1, except that the precipitate after salting out with NaCl is dissolved in 50 ml of water (0.05 volume to weight of raw material). In this case, a thick suspension is formed that does not separate during centrifugation, as a result of which the isolation of the target product becomes impossible.
П р и м е р 13. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды при рН 8,5 и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что для осаждения и переосаждения фермента используют 3 объема этилового спирта, охлажденного до -2оС. При этом осадок плохо формируется, и выход целевого продукта составляет лишь 0,3% к массе сырья.PRI me
П р и м е р 14. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды при рН 8,5 и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что для осаждения и переосаждения фермента используют 7 объемов этилового спирта при 6оС. Получают целевой продукт с тем же выходом (2%) и активностью (450 ед/мг белка), что и в примере 1, что свидетельствует о нецелесообразности увеличения объема этилового спирта для осаждения щелочной фосфатазы.PRI me R 14. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 l of water at pH 8.5 and then proceed as in example 1, except that for the precipitation and reprecipitation of the enzyme using 7 volumes of ethyl alcohol at 6 about C. Get the target product in the same yield (2%) and activity (450 u / mg protein), as in example 1, which indicates the inappropriateness of increasing the volume of ethyl alcohol for precipitation of alkaline phosphatase.
П р и м е р 15. 1 кг измельченной селезенки к.р.с. гомогенизируют в 2 л воды при рН 8,5 и далее поступают, как в примере 1, за исключением того, что для осаждения и переосаждения фермента используют ацетон. Получают целевой продукт (выход 2% к массе сырья) с удельной активностью 210 ед/мг белка. PRI me R 15. 1 kg of crushed spleen k.s. homogenized in 2 l of water at pH 8.5 and then proceed as in example 1, except that acetone is used to precipitate and reprecipitate the enzyme. Get the target product (yield 2% by weight of raw materials) with a specific activity of 210 units / mg protein.
Сопоставительный анализ технико-экономических показателей заявленного объекта и известного способа приведен в таблице. Comparative analysis of technical and economic indicators of the claimed object and the known method are shown in the table.
Из таблицы видно, что как по известному, так и по предлагаемому способу получают щелочную фосфатазу с идентичными характеристиками (оптимум рН). Предлагаемый способ позволяет упростить и сократить более чем в 2 раза технологический процесс, повысить выход целевого продукта в 6,4 раза и его удельную активность в 3,7 раза. The table shows that both the known and the proposed method receive alkaline phosphatase with identical characteristics (optimum pH). The proposed method allows to simplify and reduce more than 2 times the process, increase the yield of the target product by 6.4 times and its specific activity by 3.7 times.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4946819 RU2016899C1 (en) | 1991-06-19 | 1991-06-19 | Method of alkaline phosphatase preparing |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4946819 RU2016899C1 (en) | 1991-06-19 | 1991-06-19 | Method of alkaline phosphatase preparing |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016899C1 true RU2016899C1 (en) | 1994-07-30 |
Family
ID=21579978
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4946819 RU2016899C1 (en) | 1991-06-19 | 1991-06-19 | Method of alkaline phosphatase preparing |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2016899C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2492868C2 (en) * | 2011-11-03 | 2013-09-20 | Александр Владимирович Коханов | Method for preparing and cleaning placental alkaline phosphatase |
-
1991
- 1991-06-19 RU SU4946819 patent/RU2016899C1/en active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 1. Garen A. Levinthal C. Fine structure genetic and chemical study of the enzyme alkaline phosphatase of E.cdi. Biochem. Biophys. Acta, 1960, v.38, N 3, p.470-475. * |
| 2. Патент США N 4581332, кл. C 12N 9/52, опублик. 1986. * |
| 3. Mc Combe R., Bowers s.Alkaline phosphatase. - N.Y. Plenum Press, 1979, p.986. * |
| 4. Патент СРР N 85360, кл. C 12N 9/10, опублик. 1985. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2492868C2 (en) * | 2011-11-03 | 2013-09-20 | Александр Владимирович Коханов | Method for preparing and cleaning placental alkaline phosphatase |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brown et al. | Biochemistry of amphibian development: I. Ribosome and protein synthesis in early development of Rana pipiens | |
| US4321325A (en) | Process for producing L-threonine | |
| US5061622A (en) | Process for the production of κ-casein glycomacropeptide | |
| JPS6356300A (en) | Removing agent of nucleic acid or endotoxin and method for removing said compound | |
| US7087719B2 (en) | Method for the crystallization of human serum albumin | |
| RU2016899C1 (en) | Method of alkaline phosphatase preparing | |
| AU637584B2 (en) | Method for the preparation of a biologically active substance | |
| CA2326374C (en) | Process for the recovery and purification of a recombinant protein from a cell | |
| Dewey | Biochemical factors in the maximal growth of Tetrahymena | |
| SU1575946A3 (en) | Method of manufactg concentrate of clucosoomerase | |
| US3138542A (en) | Process for the manufacture of a streptokinase preparation | |
| RU2054943C1 (en) | Method of hyaluronidase preparing | |
| Smith-Kielland | The effect of mitomycin C on deoxyribonucleic acid and messenger ribonucleic acid in Escherichia coli | |
| RU2180688C1 (en) | Method of lactate dehydrogenase preparing | |
| SU745478A1 (en) | Method of producing protein from egg albumin | |
| US4342748A (en) | Sleep-promoting factor | |
| KR880001120B1 (en) | Process for purifying elastase | |
| US2602041A (en) | Method for the manufacture of polymyxin | |
| SU1723123A1 (en) | Method of pepsin preparation | |
| RU2023720C1 (en) | Method of preparing of factor xiii in blood coagulation | |
| RU2017496C1 (en) | Method of dna sodium salt isolation | |
| SU1523570A1 (en) | Method of obtaining carboxypeptidase a from swine pancreatic gland | |
| US3719562A (en) | Production of polynucleotide phosphorylase | |
| SU1693048A1 (en) | Method of bilirubin oxidase preparation | |
| SU459475A2 (en) | Purification Method - Asparaginase |