RU2016147204A - Метод обнаружения канцерогенеза шейки матки - Google Patents

Метод обнаружения канцерогенеза шейки матки

Info

Publication number
RU2016147204A
RU2016147204A RU2016147204A RU2016147204A RU2016147204A RU 2016147204 A RU2016147204 A RU 2016147204A RU 2016147204 A RU2016147204 A RU 2016147204A RU 2016147204 A RU2016147204 A RU 2016147204A RU 2016147204 A RU2016147204 A RU 2016147204A
Authority
RU
Grant status
Application
Patent type
Prior art keywords
e6
e7
antibody
protein
method
Prior art date
Application number
RU2016147204A
Other languages
English (en)
Inventor
Винченцо МАККАЛЛИНИ
БЕНЕДЕТТО Джузеппе ДИ
Original Assignee
Винченцо МАККАЛЛИНИ
БЕНЕДЕТТО Джузеппе ДИ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by the preceding groups
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407Specifically defined cancers
    • G01N33/57411Specifically defined cancers of cervix
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electro-chemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electro-chemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416Systems
    • G01N27/447Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704Details; Accessories
    • G01N27/44747Composition of gel or of carrier mixture
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by the preceding groups
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5091Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing the pathological state of an organism
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by the preceding groups
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by the preceding groups
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/5748Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving oncogenic proteins
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by the preceding groups
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/581Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with enzyme label (including co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or substrates)
    • GPHYSICS
    • G06COMPUTING; CALCULATING; COUNTING
    • G06FELECTRIC DIGITAL DATA PROCESSING
    • G06F19/00Digital computing or data processing equipment or methods, specially adapted for specific applications
    • GPHYSICS
    • G06COMPUTING; CALCULATING; COUNTING
    • G06FELECTRIC DIGITAL DATA PROCESSING
    • G06F19/00Digital computing or data processing equipment or methods, specially adapted for specific applications
    • G06F19/10Bioinformatics, i.e. methods or systems for genetic or protein-related data processing in computational molecular biology
    • G06F19/22Bioinformatics, i.e. methods or systems for genetic or protein-related data processing in computational molecular biology for sequence comparison involving nucleotides or amino acids, e.g. homology search, motif or Single-Nucleotide Polymorphism [SNP] discovery or sequence alignment
    • GPHYSICS
    • G16INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16HHEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
    • G16H50/00ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics
    • G16H50/20ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics for computer-aided diagnosis, e.g. based on medical expert systems
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/005Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
    • G01N2333/01DNA viruses
    • G01N2333/025Papovaviridae, e.g. papillomavirus, polyomavirus, SV40, BK virus, JC virus
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/56Staging of a disease; Further complications associated with the disease

Claims (37)

1. Способ обнаружения злокачественного перерождения клеток, вызываемого вирусом папилломы человека (ВПЧ) у женщин, проходящих скрининг на рак шейки матки, включающий обнаружение в образцах клеток, взятых из плоскоклеточного-цилиндроклеточного стыка эпителия шейки матки обследуемой пациентки, белкового комплекса Е6/р53, состоящего из белка Е6 и белка р53, и белкового комплекса E7/pRB, состоящего из белка Е7 и белка pRB, согласно которому обнаружение указанных двух белковых комплексов показывает, что у обследуемой пациентки канцерогенез стал необратимым, и указанное обнаружение выполняется при комбинированном использовании антител-антибелков Е6 и антител-антибелков Е7.
2. Способ по п. 1, включающий следующие шаги в соответствии с методикой вестерн-блоттинга:
a) подготовка образца клеток, взятых из плоскоклеточного-цилиндроклеточного стыка эпителия шейки матки обследуемой пациентки и его помещение в физиологический раствор;
b) извлечение белков из указанного образца и денатурирование полученных белков;
c) обработка полученных таким образом денатурированных белков электрофорезом в полиакриламидном геле;
d) перенос белков, полученных во время предыдущей операции, на мембрану и нейтрализация свободных участков указанной мембраны;
e) идентификация указанных белков путем их инкубации по меньшей мере со следующими антителами:
первичным моноклональным антителом-антибелком Е6;
первичным моноклональным антителом-антибелком Е7;
с последующей инкубацией с вторичными антителами анти-IgG, конъюгированными с биотином или ферментом-посредником, таким как щелочная фосфатаза;
f) проведение колориметрического анализа или хемилюминесценции продуктов, полученных в результате предыдущей операции;
в которой результаты упомянутого анализа, демонстрирующие двойную полосу реакции по крайней мере для одного из белков Е6 и Е7, где указанная двойная полоса содержит первую полосу, соответствующую молекулярной массе искомого белка, т.е. Е6 или Е7, а вторая полоса соответствует молекулярной массе, отличающейся и превышающей молекулярную массу соответствующего белка первой полосы, и указанный молекулярный вес по существу равен 71 кД для белкового комплекса Е6/р53 и 115,5 кД для белкового комплекса E7/pRB, показывают, что канцерогенез обследуемой пациентки стал необратимым.
3. Способ по п. 2, в котором на указанной стадии e) указанные белки также инкубировали со следующими антителами:
первичным моноклональным антителом-антибелком р53;
первичным моноклональным антителом-антибелком pRb;
дальнейшие действия аналогичны тем, которые проводились в случае инкубации с указанными первичными моноклональными антителами-антибелками Е6 и антибелками Е7, в которых результаты упомянутого анализа, показывающие двойную полосу реакции по крайней мере для одного из белков р53 и pRb, где указанная двойная полоса, содержащая первую полосу, соответствующую молекулярной массе искомого белка р53 или pRb, и вторая полоса, соответствующая молекулярной массе, отличающейся и более высокой, чем молекулярная масса соответствующего белка первой полосы, показывают, что у обследуемой пациентки канцерогенез стал необратимым.
4. Способ по п. 2 или 3, согласно изобретению, где результаты упомянутого анализа показывают одну полосу реакции на белки Е6 и Е7, и указанная одна полоса соответствует молекулярной массе искомого белка Е6 или Е7, показывают, что у обследуемой пациентки канцерогенез еще не начался или еще не стал необратимым.
5. Способ по п. 4, согласно которому результаты анализа, не показывающие какой-либо полосы реакции для белков Е6 и Е7, означают, что у обследуемой пациентки отсутствует интеграция ДНК вируса с ДНК клеток.
6. Способ по любому из пп. 2 или 3, согласно которому вторичные антитела-анти-IgG указанной стадии e) конъюгированы с щелочной фосфатазой, и согласно которому указанное обнаружение по пункту f) представляет собой колориметрический анализ или хемилюминесценцию.
7. Способ по п. 2, в котором указанное первичное моноклональное антитело-антибелок Е6 представляет собой мышиное антитело-антибелок Е6 вирусного типа HPV16 и HPV18, а указанное первичное моноклональное антитело-антибелок Е7 представляет собой мышиное антитело-антибелок Е7 вирусного типа HPV16 и HPV18.
8. Способ по п. 3, в котором указанное первичное моноклональное антитело-антибелок р53 представляет собой мышиное моноклональное антитело к антибелку р53 человека, и указанное первичное моноклональное антитело-антибелок pRb представляет собой мышиное моноклональное антитело к антибелку pRb человека.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обнаружение выполняется путем комбинированного использования антител-антибелков Е6, антител-антибелков Е7, антител антибелков р53 и антител-антибелков pRB, включающих следующие шаги в соответствии с методом Sandwich ELISA:
a) идентификация изучаемого образца, хранящегося в соответствии с требованиями к жидкофазной цитологии;
b) адсорбция в разных лунках микропланшета антител-антибелков Е6 и антибелков Е7 для захвата антител вирусного белка Е6 или Е7;
c) блокировка остальных участков лунок, связывающих белки с помощью блокирующего буфера;
d) дозирование непосредственно в каждую лунку указанного образца для анализа;
e) идентификация искомых белков путем инкубации с разбавленным антителом-антибелком р53 в лунках, адсорбированных с антителом-антибелком Е6 и разбавленным антителом-антибелком pRB в лунках, адсорбированных с антителом-антибелком Е7;
f) блокировка эндогенного субстрата;
g) инкубация в соответствующие лунки антитела, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP);
h) дозирование раствора хромогена в каждую лунку
i) продукт реакции на стадии h) изучается по интенсивности света, обнаруживаемого при длине волны 450 нм с помощью спектрофотометра, при этом результаты, демонстрирующие окрашивание и подтвержденные положительной абсорбцией, показывают, что у обследуемой пациентки присутствует белковый комплекс Е6/р53 и/или E7/pRB, подтверждающий взаимодействие между белками вируса и человеческими белками, и, следовательно, наличие у обследуемой пациентки необратимого канцерогенеза.
10. Способ в соответствии со стадиями e), f), g) и h) по п. 9, в котором используются имеющиеся на рынке системы, позволяющие усиливать хромогенный сигнал, предпочтительно с использованием антител-антибелков р53 и pRB, биотинилированного и выделенного стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой или другим ферментом.
11. Способ по п. 9, в котором в случае отсутствия положительных результатов обнаружения и отсутствия абсорбции сигнала при длине волны 450 нм для обоих белковых комплексов Е6/р53 и E7/pRB результат указывает на то, что у обследуемой пациентки отсутствует интеграция вирусной ДНК с клеточной ДНК; однако не исключается возможность интеграции вирусной ДНК с клеточной ДНК.
12. Способ по п. 9, отличающийся тем, что первичное моноклональное антитело-антибелок Е6 представляет собой мышиное моноклональное антитело-антибелок Е6 вирусных типов HPV16 и HPV18, указанное первичное моноклональное антитело-антибелок Е7 представляет собой мышиное моноклональное антитело-антибелок Е7 вирусного типа HPV16, указанное первичное моноклональное антитело-антибелок р53 представляет собой моноклональное мышиное антитело к анти-р53-белку человека, указанное первичное моноклональное антитело-анти-pRb-белок представляет собой моноклональное мышиное антитело к анти-pRB-белку человека.
13. Способ обнаружения злокачественного перерождения клеток, вызываемого вирусом папилломы человека (ВПЧ) по любому из пп. 2-5 и 9-12, в соответствии с которым указанный способ используется в рамках скрининговой программы для женского населения или в программе ранней диагностики для выявления рака шейки матки после цитологической диагностики атипичных клеток плоского эпителия (ASC) или худшего диагноза и последующего положительного результата теста на ДНК ВР-ВПЧ.
14. Способ обнаружения злокачественного перерождения клеток, вызываемого вирусом папилломы человека (ВПЧ) по любому из пп. 2-5 и 9-12, в соответствии с которым указанный способ используется в рамках скрининговой программы для женского населения или в программе ранней диагностики для выявления рака шейки матки после положительного результата теста на ДНК ВР-ВПЧ и последующей цитологической диагностики атипичных клеток плоского эпителия (ASC) или худшего диагноза.
15. Способ обнаружения злокачественного перерождения клеток, вызываемого вирусом папилломы человека (ВПЧ) по любому из пп. 2-5 и 9-12, в соответствии с которым указанный способ используется в рамках диагностических мер, скрининга или последующего наблюдения за пациентами с опухолевыми поражениями, вызванными ВПЧ или подозреваемыми во внематочных областях, таких как анус-генитальная область, ротоглотка и т.д.
RU2016147204A 2014-05-07 2015-05-07 Метод обнаружения канцерогенеза шейки матки RU2016147204A (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
ITRM20140225 2014-05-07
ITRM2014A000225 2014-05-07
PCT/IT2015/000126 WO2015170360A4 (en) 2014-05-07 2015-05-07 Method for detecting carcinogenesis in the uterine cervix

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2016147204A true true RU2016147204A (ru) 2018-06-07

Family

ID=51136646

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016147204A RU2016147204A (ru) 2014-05-07 2015-05-07 Метод обнаружения канцерогенеза шейки матки

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20170074881A1 (ru)
EP (1) EP3140655A1 (ru)
CN (1) CN107003313A (ru)
CA (1) CA2983712A1 (ru)
RU (1) RU2016147204A (ru)
WO (1) WO2015170360A4 (ru)

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1195438A1 (en) * 2000-10-06 2002-04-10 Rijksuniversiteit te Groningen Genetic immunisation against cervical carcinoma
EP1386929A1 (en) * 2002-07-29 2004-02-04 MTM Laboratories AG Peptides associated with tumors and uses related thereto
CN101550181B (zh) * 2008-04-03 2011-08-03 清华大学深圳研究生院 人乳头瘤病毒16型e7蛋白功能拮抗肽及其编码基因与应用
US8859218B2 (en) * 2008-06-13 2014-10-14 Oncohealth Corp. In situ detection of early stages and late stages HPV infection
EP2427763A4 (en) * 2009-05-07 2013-08-21 Oncohealth Corp Identification of high grade or cin2 for early stages and late stages detection, screening, and diagnosis of human papillomavirus (hpv) and hpv-associated cancers
WO2011084598A1 (en) * 2010-01-08 2011-07-14 Oncohealth Corporation High throughput cell-based hpv immunoassays for diagnosis and screening of hpv-associated cancers
CN203249922U (zh) * 2013-02-22 2013-10-23 艾托金生物医药(苏州)有限公司 用于检测抗人乳头瘤病毒抗体的免疫检测试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date Type
US20170074881A1 (en) 2017-03-16 application
WO2015170360A4 (en) 2015-12-30 application
CN107003313A (zh) 2017-08-01 application
EP3140655A1 (en) 2017-03-15 application
CA2983712A1 (en) 2015-11-12 application
WO2015170360A1 (en) 2015-11-12 application

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES1112830U8 (es) Barbacoa de sobremesa
RU2015132201A (ru) Способ нефропексии
DE112014006581A5 (de) Feldgerät
RU2017114346A (ru) АНТАГОНИСТЫ ИНТЕГРИНА ανβ6
RU2017114352A (ru) АНТАГОНИСТЫ ИНТЕГРИНА ανβ6
RU2016148407A (ru) Основанный на правилах анализ важности видео
RU2016136522A (ru) Способы дегидратации-гидролиза и катализаторы для них
RU2016135761A (ru) Декальцинирующее устройство
RU2016137685A (ru) Способ диагностики туберкулеза
DE102014210430A8 (de) Reinigungsgerät
RU2016141593A (ru) Ледокольное устройство
RU2017107552A (ru) Новые галоген-замещенные соединения
RU2017107553A (ru) Новые галоген-замещенные соединения
RU2017101427A (ru) Новые галоген-замещенные соединения
JP2013108123A5 (ja) 成膜方法
RU2015137125A (ru) Способ загара
RU2016142354A (ru) Аналоги мясного фарша
RU2015136355A (ru) Транспортное средство
FI10487U1 (fi) Suurtalouspata
RU2017107091A (ru) Медицинское устройство и способ его изготовления
RU2016124315A (ru) Оптический пирометр
RU2015156092A (ru) Устройство обработки одежды
RU2015125016A (ru) Рабочее колесо вентилятора
RU2016142619A (ru) Соединение имплантата