RU2015116744A - РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК Per-TB4GyrA-AcSer, КОДИРУЮЩАЯ СЕРИНОВУЮ АЦЕТИЛТРАНСФЕРАЗУ, СПОСОБНУЮ IN VIVO АЦЕТИЛИРОВАТЬ N-КОНЦЕВОЙ СЕРИН ДЕЗАЦЕТИЛТИМОЗИНА БЕТА 4 И ГИБРИДНЫЙ БЕЛОК, СПОСОБНЫЙ К АВТОКАТАЛИТИЧЕСКОМУ РАСЩЕПЛЕНИЮ С ОБРАЗОВАНИЕМ ТИМОЗИНА БЕТА 4 ЧЕЛОВЕКА, ШТАММ Eschrichia coli C3030/pER-TB4GyRA-AcSer ПРОДУЦЕНТ УКАЗАННЫХ БЕЛКОВ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНОГО ТИМОЗИНА БЕТА 4 ЧЕЛОВЕКА - Google Patents

Abstract

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pER - TB4GyrA - AcSer, содержащая полицистронную конструкцию для одновременного биосинтеза двух белков - гибридного полипептида, содержащего тимозин β4 человека и интеин, и фермента E.coli - сериновой ацетилтрансферазы в клетках Escherichia col;NdeI/SapI - фрагмента ДНК плазмиды pTWIN-1;NdeI/SapI - фрагмента ДНК, содержащего адаптированную к этим сайтам последовательность гена рекомбинантного человеческого тимозина β4 и содержащая в качестве генетического маркера ген β-лактамазы, детерминирующий устойчивость трансформированных плазмидой pER - TB4GyrA - AcSer клеток E.coli к пенициллиновым антибиотикам; уникальные сайты узнавания рестрикционных эндонуклеаз, расположенные на следующем расстоянии влево от сайта BamHI - Pstl - 575 п.о., NdeI -: 1493 п.о., XbaI - 1532 п.о., EcoRV - 3565 п.о., HpaI - 3621 п.о.2. Штамм Escherichia coli С3030/ pER - TB4GyrA - AcSer, продуцирующий гибридный полипептид, содержащий дезацетилтимозина β4 человека и интеин, а также сериновую ацетилтрансферазу, полученный путем трансформации клеток штамма Escherichia coli С3030 рекомбинантной плазмидной ДНК pER - TB4GyrA - AcSer по п. 1.3. Способ получения рекомбинантного тимозина β4 человека, включающий трансформацию штамма Escherichia coli С3030 плазмидной ДНК pER - TB4GyrA - AcSer, по п. 1, культивирование штамма-продуцента Escherichia coli С3030/ pER - TB4GyrA - AcSer по п. 2, отделение гибридного белка TB4GyrA в растворимой форме после разрушения клеток с помощью ультразвукового дезинтегратора в буферном растворе (50 мМ Tris/HCl, 10 мM EDTA, 1 мM PMSF), адсорбирование гибридного белка на колонкес хитиновым сорбентом (NEB, England), индуцирование его автокаталитического расщепления промыванием хитинового сорбента буферным раствором, содержащим уравновешенным в буфере, содержа�

Claims (3)

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pER - TB4GyrA - AcSer, содержащая полицистронную конструкцию для одновременного биосинтеза двух белков - гибридного полипептида, содержащего тимозин β4 человека и интеин, и фермента E.coli - сериновой ацетилтрансферазы в клетках Escherichia col;

NdeI/SapI - фрагмента ДНК плазмиды pTWIN-1;

NdeI/SapI - фрагмента ДНК, содержащего адаптированную к этим сайтам последовательность гена рекомбинантного человеческого тимозина β4 и содержащая в качестве генетического маркера ген β-лактамазы, детерминирующий устойчивость трансформированных плазмидой pER - TB4GyrA - AcSer клеток E.coli к пенициллиновым антибиотикам; уникальные сайты узнавания рестрикционных эндонуклеаз, расположенные на следующем расстоянии влево от сайта BamHI - Pstl - 575 п.о., NdeI -: 1493 п.о., XbaI - 1532 п.о., EcoRV - 3565 п.о., HpaI - 3621 п.о.

2. Штамм Escherichia coli С3030/ pER - TB4GyrA - AcSer, продуцирующий гибридный полипептид, содержащий дезацетилтимозина β4 человека и интеин, а также сериновую ацетилтрансферазу, полученный путем трансформации клеток штамма Escherichia coli С3030 рекомбинантной плазмидной ДНК pER - TB4GyrA - AcSer по п. 1.

3. Способ получения рекомбинантного тимозина β4 человека, включающий трансформацию штамма Escherichia coli С3030 плазмидной ДНК pER - TB4GyrA - AcSer, по п. 1, культивирование штамма-продуцента Escherichia coli С3030/ pER - TB4GyrA - AcSer по п. 2, отделение гибридного белка TB4GyrA в растворимой форме после разрушения клеток с помощью ультразвукового дезинтегратора в буферном растворе (50 мМ Tris/HCl, 10 мM EDTA, 1 мM PMSF), адсорбирование гибридного белка на колонкес хитиновым сорбентом (NEB, England), индуцирование его автокаталитического расщепления промыванием хитинового сорбента буферным раствором, содержащим уравновешенным в буфере, содержащим 50 мM Tris/HCl, 100 мМ NaCl, 100 мМ ДТТ, инкубирование на сорбентев течение 24 ч при 25°С, элюирование целевого пептида тем же буфером и очистку целевого продукта обращенно-фазовой хроматографией.