RU2014142296A - Способ определения SH-групп в мембранах эритроцитов периферической крови, позволяющей определять устойчивость эритроцитов и степень оксигенации гемоглобина - Google Patents

Abstract

Способ определения SH-групп в мембранах эритроцитов периферической крови, включающий выполнение гистохимической реакции в инкубационном растворе, состоящим из смеси: 1-25 мг дигидрокси-динафтил-дисульфида в 15 мл абсолютного спирта и 2-35 мл 0,1 М веронал-ацетатного буфера, в которую в объеме 500 мкл вносят 200 мкл цельной крови с коагулянтом и инкубируют при 56°C в течение 1 часа, после чего выдерживают при комнатной температуре 10 мин. и промывают отцентрифугированный осадок в дистиллированной воде, а затем дважды в 0,01% уксусной кислоте и дважды в 96°C спирте, содержат 5 мин в эфире, промывают в 96° спирте, а затем в дистиллированной воде и осадок помещают на 10 мин в раствор прочного синего на 0,1 М фосфатном буфере с pH 7,6-7,8 из расчета 1 мг/мл; промывают в течение 2 мин. в проточной воде, а затем в дистиллированной, центрифугируют, избыток надосадочной жидкости убирают и из оставшейся взвеси готовят монослойные мазки, на которых изучают компьютерным цитофотометрическим методом содержание SH-групп в мембранах эритроцитов и устанавливают, что при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 количество SH-групп в мембранах эритроцитов снижается до 10,50±0,20 усл. ед., что увеличивает в периферической крови до 12,00±0,09% дегенеративных форм эритроцитов, а содержание HbOснижается до 91,2±1,3%.

Claims (1)

1. Способ определения SH-групп в мембранах эритроцитов периферической крови, включающий выполнение гистохимической реакции в инкубационном растворе, состоящим из смеси: 1-25 мг дигидрокси-динафтил-дисульфида в 15 мл абсолютного спирта и 2-35 мл 0,1 М веронал-ацетатного буфера, в которую в объеме 500 мкл вносят 200 мкл цельной крови с коагулянтом и инкубируют при 56°C в течение 1 часа, после чего выдерживают при комнатной температуре 10 мин. и промывают отцентрифугированный осадок в дистиллированной воде, а затем дважды в 0,01% уксусной кислоте и дважды в 96°C спирте, содержат 5 мин в эфире, промывают в 96° спирте, а затем в дистиллированной воде и осадок помещают на 10 мин в раствор прочного синего на 0,1 М фосфатном буфере с pH 7,6-7,8 из расчета 1 мг/мл; промывают в течение 2 мин. в проточной воде, а затем в дистиллированной, центрифугируют, избыток надосадочной жидкости убирают и из оставшейся взвеси готовят монослойные мазки, на которых изучают компьютерным цитофотометрическим методом содержание SH-групп в мембранах эритроцитов и устанавливают, что при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 количество SH-групп в мембранах эритроцитов снижается до 10,50±0,20 усл. ед., что увеличивает в периферической крови до 12,00±0,09% дегенеративных форм эритроцитов, а содержание HbO₂ снижается до 91,2±1,3%.