Claims (23)
1. Генетическая экспрессионная система, включающая:1. Genetic expression system, including:
транскрипционный аппарат, регулируемый белком типа LysR, который включает промотор и оператор, экспрессия которых положительно регулируется регуляторным белком типа LysR и коиндуктором, иa transcriptional apparatus regulated by a LysR-type protein, which includes a promoter and an operator, the expression of which is positively regulated by a LysR-type regulatory protein and a co-inductor, and
целевой(ые) ген(ы), с которым(и) указанный транскрипционный аппарат функционально связан, причем целевой(ые) ген(ы) кодирует(ют) белок(ки), вовлеченный(е) в биосинтез указанного коиндуктора, субстрата или предшественника указанного коиндуктора,the target gene (s) with which the indicated transcriptional apparatus is operably linked, the target gene (s) encoding (s) the protein (s) involved in the biosynthesis of the indicated co-inductor, substrate or precursor said co-inductor,
отличающаяся тем, что самоиндуцируемая положительная регуляция по типу обратной связи указанной экспрессионной системы опосредована коиндуктором.characterized in that the self-induced positive regulation by the type of feedback of the indicated expression system is mediated by a co-inductor.
2. Экспрессионная система согласно п.1, отличающаяся тем, что указанная система из бактерии, принадлежащей к семейству Enterobacteriaceae или Pseudomonadaceae.2. The expression system according to claim 1, characterized in that the said system is from a bacterium belonging to the family Enterobacteriaceae or Pseudomonadaceae.
3. Экспрессионная система согласно п.1, отличающаяся тем, что указанная система из бактерии, принадлежащей к семейству Enterobacteriaceae.3. The expression system according to claim 1, characterized in that said system is from a bacterium belonging to the Enterobacteriaceae family.
4. Экспрессионная система согласно п.3, отличающаяся тем, что указанная система из бактерии, принадлежащей к роду Escherichia.4. The expression system according to claim 3, characterized in that the said system is from a bacterium belonging to the genus Escherichia.
5. Экспрессионная система согласно п.4, отличающаяся тем, что указанная бактерия принадлежит к виду Escherichia coli.5. The expression system according to claim 4, characterized in that said bacterium belongs to the species Escherichia coli.
6. Экспрессионная система согласно любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что указанная система из биосинтетического пути L-аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из разветвленных L-аминокислот, L-лизина, L-цистеина, L-метионина и L-триптофана.6. An expression system according to any one of claims 1 to 4, characterized in that said system is from a biosynthetic pathway of an L-amino acid selected from the group consisting of branched L-amino acids, L-lysine, L-cysteine, L-methionine and L tryptophan.
7. Экспрессионная система согласно п.6, отличающаяся тем, что указанная система из биосинтетического пути L-аминокислот с разветвленной цепью.7. The expression system according to claim 6, characterized in that said system is a branched chain L-amino acid biosynthetic pathway.
8. Экспрессионная система согласно любому из пп.1-5 и 7, отличающаяся тем, что промотор есть промотор PilvC, указанный регуляторный белок типа LysR есть белок IlvY и коиндуктор есть 2-ацетомолочная кислота, 2-ацето-2-гидроксимаслянная кислота или их соли.8. The expression system according to any one of claims 1 to 5 and 7, characterized in that the promoter is the P ilvC promoter, said regulatory protein of the LysR type is IlvY protein, and the co-inductor is 2-aceto-lactic acid, 2-aceto-2-hydroxybutyric acid, or their salts.
9. Экспрессионная система согласно п.8, отличающаяся тем, что коиндуктор есть 2-ацетомолочная кислота или ее соль.9. The expression system according to claim 8, characterized in that the co-inductor is 2-acetolactic acid or its salt.
10. Экспрессионная система согласно любому из пп.1-5 и 7, отличающаяся тем, что целевой(ые) ген(ы) кодирует(ют) ацетогидроксикислотасинтетазу.10. The expression system according to any one of claims 1 to 5 and 7, characterized in that the target gene (s) encodes (s) acetohydroxy acid synthetase.
11. Экспрессионная система согласно п.10, отличающаяся тем, что указанные целевые гены кодируют белки, выбранные из группы, состоящей из:11. The expression system according to claim 10, characterized in that said target genes encode proteins selected from the group consisting of:
(A) комбинации из п.п.A1 и A2:(A) combinations of items A1 and A2:
(A1) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком A2; и(A1) a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, or a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, which contains the substitution, deletion, insertion or addition of one or more amino acid residues, and having the activity of acetolactate synthase with protein A2; and
(A2) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком A1;(A2) a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, or a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, which contains the substitution, deletion, insertion or addition of one or more amino acid residues, and having the activity of acetolactate synthase with protein A1;
(B) комбинации из п.п.B1 и B2:(B) combinations of items B1 and B2:
(B1) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком B2; и(B1) a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, or a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6, which contains the substitution, deletion, insertion or addition of one or more amino acid residues, and having the activity of acetolactate synthase with protein B2; and
(B2) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком B1; и(B2) a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, or a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, which contains the substitution, deletion, insertion or addition of one or more amino acid residues, and having the activity of acetolactate synthase with protein B1; and
(C) комбинации из п.п.C1 и C2:(C) combinations of items C1 and C2:
(C1) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, или белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком C2; и(C1) a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32, or a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 32, which contains the substitution, deletion, insertion or addition of one or more amino acid residues, and having the activity of acetolactate synthase with protein C2; and
(C2) белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, или белка, включающего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и обладающего активностью ацетолактатсинтазы с белком C1.(C2) a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, or a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 34, which contains the substitution, deletion, insertion or addition of one or more amino acid residues, and having the activity of acetolactate synthase with protein C1.
12. Экспрессионная система согласно п.11, отличающаяся тем, что указанная ацетогидроксикислотасинтетаза является мутантной ацетолактатсинтазой I, устойчивой к ингибированию по типу обратной связи L-валином.12. The expression system according to claim 11, characterized in that said acetohydroxy acid synthetase is a mutant acetolactate synthase I, which is resistant to feedback inhibition by L-valine.
13. Экспрессионная система согласно любому из п.п.1-5 и 7, отличающаяся тем, что указанный оператор включает участок, с которым связывается указанный регуляторный белок типа LysR.13. The expression system according to any one of claims 1 to 5 and 7, characterized in that said operator includes a site to which said regulatory protein of the LysR type binds.
14. Экспрессионная система согласно п.13, отличающаяся тем, что указанный регуляторный белок типа LysR выбран из группы, состоящей из:14. The expression system according to item 13, wherein the specified regulatory protein of the LysR type is selected from the group consisting of:
(D) белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; и(D) a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10; and
(E) варианта белка, содержащего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких аминокислотных остатков, и имеющего активность регуляторного белка типа LysR.(E) a variant of a protein containing the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, which contains the substitution, deletion, insertion or addition of one or more amino acid residues, and having an activity of a regulatory protein of the LysR type.
15. Экспрессионная система согласно любому из п.п.1-5 и 7, отличающаяся тем, что указанный промотор включает:15. The expression system according to any one of claims 1 to 5 and 7, characterized in that said promoter includes:
(F) ДНК, содержащую нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 30; или(F) DNA containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 30; or
(G) вариант ДНК, содержащий нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 30, которая содержит замену, делецию, вставку или добавление одного или нескольких нуклеотидных остатков, и имеющий активность нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 30.(G) a DNA variant containing the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 30, which contains the substitution, deletion, insertion or addition of one or more nucleotide residues, and having the activity of the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 30.
16. Бактерия-продуцент L-аминокислоты, принадлежащая к семейству Enterobacteriaceae, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что она содержит экспрессионную систему согласно любому из п.п.1-15.16. A bacterium-producer of L-amino acids belonging to the family Enterobacteriaceae, characterized in that the bacterium is modified so that it contains an expression system according to any one of claims 1 to 15.
17. Бактерия согласно п.16, отличающаяся тем, что указанная бактерия содержит ген, кодирующий регуляторный белок типа LysR.17. The bacterium according to clause 16, wherein said bacterium contains a gene encoding a regulatory protein of the LysR type.
18. Бактерия согласно п.16, отличающаяся тем, что указанная бактерия принадлежит к роду Escherichia.18. The bacterium according to clause 16, wherein said bacterium belongs to the genus Escherichia.
19. Бактерия согласно п.18, отличающаяся тем, что указанная бактерия принадлежит к виду Escherichia coli.19. The bacterium according to p. 18, characterized in that the bacterium belongs to the species Escherichia coli.
20. Бактерия согласно любому из пп.16-19, отличающаяся тем, что указанная L-аминокислота есть L-аминокислота с разветвленной цепью.20. A bacterium according to any one of claims 16-19, wherein said L-amino acid is a branched chain L-amino acid.
21. Бактерия согласно п.20, отличающаяся тем, что L-аминокислота с разветвленной цепью выбрана из группы, состоящей из L-валина, L-лейцина и L-изолейцина.21. The bacterium according to claim 20, characterized in that the branched chain L-amino acid is selected from the group consisting of L-valine, L-leucine and L-isoleucine.
22. Способ получения L-аминокислоты с разветвленной цепью, включающий:22. A method of producing a branched chain L-amino acid, comprising:
(i) выращивание бактерии согласно п.20 в питательной среде, так что указанная L-аминокислота с разветвленной цепью накапливается в культуральной жидкости; и (i) growing the bacterium according to claim 20 in a nutrient medium such that said branched chain L-amino acid accumulates in the culture fluid; and
(ii) выделение указанной L-аминокислоты с разветвленной цепью из культуральной жидкости.(ii) isolating said branched chain L-amino acid from the culture fluid.
23. Способ получения L-аминокислоты с разветвленной цепью согласно п.22, отличающийся тем, что указанная L-аминокислота с разветвленной цепью выбрана из группы, состоящей из L-валина, L-лейцина и L-изолейцина.
23. The method for producing the branched-chain L-amino acid according to claim 22, wherein said branched-chain L-amino acid is selected from the group consisting of L-valine, L-leucine and L-isoleucine.