RU2012869C1 - Способ спектрофотометрического определения аминокислот - Google Patents
Способ спектрофотометрического определения аминокислот Download PDFInfo
- Publication number
- RU2012869C1 RU2012869C1 SU4912443A RU2012869C1 RU 2012869 C1 RU2012869 C1 RU 2012869C1 SU 4912443 A SU4912443 A SU 4912443A RU 2012869 C1 RU2012869 C1 RU 2012869C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- amino acids
- solution
- tryptophan
- proline
- determination
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Сущность: способ позволяет селективно определить пролин или триптофан в присутствии других аминокислот. Для этого к раствору пробы добавляют избыток раствора 7-хлор-4,6-динитробензофуроксана в органическом растворителе, нейтрализуют раствор и регистрируют оптическую плотность раствора в области 500 - 550 нм. В этой области спектра поглощают только продукты реакции пролина или триптофана с цветореагентом, что позволяет селективно определять указанные аминокислоты в смеси с другими аминокислотами без предварительного их выделения. 1 табл.
Description
Изобретение относится к аналитической химии аминокислот, а именно способу спектрофотометрического определения пролина или триптофана в растворах в присутствии других α -аминокислот (лейцин, изолейцин, валин, глутаминовая кислота, аланин) с помощью реагента 7-хлор-4,6-динитробензофуроксана.
Изобретение может быть использовано для анализа продуктов ферментационного процесса биосинтеза пролина или триптофана, в ходе которого образуются указанные выше алифатические аминокислоты.
Известен способ количественного спектрофотометрического определения аминокислот, реакционноспособных по отношению к пара-нитроанилидам (на нерастворимых носителях). Полимер обрабатывают нитроанилидом аминокислоты (лейцина, глицина, аланина). Определяют реакционные по отношению к нитроанилидам функциональные группы (альдегидные, бензохиноновые и т. д. ), фотометрируя при 310 нм [1] .
Однако способ длителен, трудоемок и не позволяет проводить раздельное определение аминокислот в смеси.
Известен способ спектрофотометрического определения аминокислот с помощью цветореагента (1-хиноксалил-2)-3-метил-5(n-карбоксифенил) формазана в присутствии нитрата ртути [2] .
Однако предложенный способ не обеспечивает селективности определений аминокислот в смеси.
Известен способ спектрофотометрического определения триптофана путем расщепления гетероцикла действием азотистой кислоты и получением окрашенных продуктов [3] .
Предложенный способ также не обеспечивает селективность определения аминокислот в смесях.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к настоящему способу является способ количественного спектрофотометрического определения аминокислот с применением нингидринового реагента [4] .
Однако использование указанного реагента не позволяет проводить селективные определения одних аминокислот в присутствии других, поскольку образующиеся продукты реакции для большинства аминокислот имеют полосы поглощения, накладывающиеся друг на друга.
Таким образом, известные способы не позволяют проводить количественные определения отдельных аминокислот в смесях без их предварительного разделения.
Целью изобретения является повышение селективности определения пролина или триптофана в присутствии других аминокислот, образующихся в продуктах ферментации при их биосинтезе, а также упрощение способа.
Цель достигается за счет того, что в способе определения триптофана или пролина в присутствии других аминокислот анализируемую смесь обрабатывают раствором 7-хлор-4,6-динитробензофуроксана и определяют содержание пролина или триптофана фотометрированием раствора в области 500-550 нм. 7-хлор-4,6-динитробензофуроксан в указанных условиях реагирует со всеми аминокислотами, находящимися в анализируемой смеси. Однако контрастность продуктов реакции (сдвиг максимума поглощения продукта реакции по сравнению с максимумом поглощения реагента) для пролина и триптофана значительно больше, чем для других аминокислот. Этот факт позволяет проводить определение пролина или триптофана в присутствии других аминокислот.
П р и м е р 1. Определение пролина или триптофана в искусственной смеси аминокислот.
Для определения пролина или триптофана в анализируемой смеси аминокислот готовят неводный (ацетонитрил, спирты) раствор реагента - 7-хлор-4,6-динитробензофуроксана с концентрацией 10-2 моль/л. В мерную колбу объемом 25 см3 отбирают 1 см3 анализируемого раствора, содержащего 0,01-0,2 мг аминокислот, добавляют 4 см3 раствора реагента (7-хлор-4,6-динитробензофуроксана) и доводят содержимое мерной колбы до метки буферным раствором с pH 6,86. Полученный раствор фотометрируют при длинах волн 500-550 нм относительно раствора сравнения, содержащего раствор реагента той же концентрации. Содержание пролина или триптофана определяют по градуировочному графику или методом добавок. Для построения градуировочного графика готовят растворы, содержащие 0,01-0,2 мг пролина или триптофана в мерной колбе на 25 см3, добавляют 4 см3 реагента и доводят содержимое колбы до метки буферным раствором с pH 6,86. В указанных условиях наблюдается появление оранжевой окраски анализируемого раствора, связанной с образованием продуктов реакции с триптофаном или пролином. В то же время остальные аминокислоты (валин, лейцин, изолейцин, аланин, глутаминовая кислота, глицин) с реагентами образуют продукты реакции, не мешающие определению триптофана или пролина. Результаты, аналогичные определению триптофана, получены для определения пролина.
В таблице представлены результаты определения пролина или триптофана в присутствии указанных выше аминокислот.
П р и м е р 2. Определение триптофана в культуральной жидкости биосинтеза триптофана.
Ферментационный раствор подготовлен в анализу следующим образом:
Биомасса продуцента отделена центрифугированием,
После подкисления соляной кислотой фильтрата культуральной жидкости до pH 1 выпавший осадок отделен повторным центрифугированием.
Биомасса продуцента отделена центрифугированием,
После подкисления соляной кислотой фильтрата культуральной жидкости до pH 1 выпавший осадок отделен повторным центрифугированием.
Фильтрат нейтрализован буферным раствором 7,05 и затем проведено определение содержания триптофана методом добавок настоящим способом.
В результате определения получено содержание триптофана в культуральной жидкости 8,7±0,1 г/л.
Claims (1)
- СПОСОБ СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ, заключающийся в том, что к анализируемой пробе добавляют раствор цветореагента и фотометрируют полученный раствор, отличающийся тем, что, с целью селективного определения триптофана или пролина в присутствии других аминокислот и упрощения способа, в качестве цветореагента добавляют раствор 7-хлор-4,6-динитробензофуроксана в органическом растворителе, затем нейтрализуют раствор, а фотометрируют при 500 - 550 нм.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4912443 RU2012869C1 (ru) | 1991-02-18 | 1991-02-18 | Способ спектрофотометрического определения аминокислот |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU4912443 RU2012869C1 (ru) | 1991-02-18 | 1991-02-18 | Способ спектрофотометрического определения аминокислот |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2012869C1 true RU2012869C1 (ru) | 1994-05-15 |
Family
ID=21561170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU4912443 RU2012869C1 (ru) | 1991-02-18 | 1991-02-18 | Способ спектрофотометрического определения аминокислот |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2012869C1 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1445603A1 (de) * | 2003-02-04 | 2004-08-11 | F. Hoffman-la Roche AG | Fluorimetrische Bestimmung von Analyten durch Amin-N-Oxide als Redoxindikatoren |
| WO2008108689A3 (en) * | 2007-03-07 | 2008-12-18 | Nekommercheskoe Uchrezhdenie N | Mix for identification test in the process of quality control of the medicine 'glycine tablets for sublingual applying 0,1g' methods of its preparation and identity evaluation in the process of quality control of the aforementioned medicine |
| US8043859B2 (en) | 2007-03-07 | 2011-10-25 | Nekommercheskoe Uchrezhdenie “Nauchno-Issledovateljskiyj Institut Citokhimii I Molekulyarnoyj Farmakologii” | Quality control mixture for glycine tablets, a method for preparing the mixture and a method for identifying the mixture |
| WO2022049213A1 (en) | 2020-09-02 | 2022-03-10 | Immundiagnostik Ag | Test kit and method of determining tryptophan in extracts of faecal samples |
| RU2811527C1 (ru) * | 2023-06-23 | 2024-01-15 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Волгоградский государственный аграрный университет" (ФГБОУ ВО Волгоградский ГАУ) | Способ количественного определения валина на инфракрасных анализаторах Bruker MPA или Bruker Tango-R в кормовом валине |
-
1991
- 1991-02-18 RU SU4912443 patent/RU2012869C1/ru active
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1445603A1 (de) * | 2003-02-04 | 2004-08-11 | F. Hoffman-la Roche AG | Fluorimetrische Bestimmung von Analyten durch Amin-N-Oxide als Redoxindikatoren |
| US7723121B2 (en) | 2003-02-04 | 2010-05-25 | Carina Horn | Fluorimetric determination of analytes by amine-N-oxides as redox indicators |
| WO2008108689A3 (en) * | 2007-03-07 | 2008-12-18 | Nekommercheskoe Uchrezhdenie N | Mix for identification test in the process of quality control of the medicine 'glycine tablets for sublingual applying 0,1g' methods of its preparation and identity evaluation in the process of quality control of the aforementioned medicine |
| US8043859B2 (en) | 2007-03-07 | 2011-10-25 | Nekommercheskoe Uchrezhdenie “Nauchno-Issledovateljskiyj Institut Citokhimii I Molekulyarnoyj Farmakologii” | Quality control mixture for glycine tablets, a method for preparing the mixture and a method for identifying the mixture |
| WO2022049213A1 (en) | 2020-09-02 | 2022-03-10 | Immundiagnostik Ag | Test kit and method of determining tryptophan in extracts of faecal samples |
| RU2811527C1 (ru) * | 2023-06-23 | 2024-01-15 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Волгоградский государственный аграрный университет" (ФГБОУ ВО Волгоградский ГАУ) | Способ количественного определения валина на инфракрасных анализаторах Bruker MPA или Bruker Tango-R в кормовом валине |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Peace et al. | Chromatographic determination of amino acids in foods | |
| Hall et al. | Observations on the use of 2, 4, 6-trinitrobenzenesulphonic acid for the determination of available lysine in animal protein concentrates | |
| Heems et al. | Fully automated precolumn derivatization, on-line dialysis and high-performance liquid chromatographic analysis of amino acids in food, beverages and feedstuff | |
| Msagati et al. | Evaluation of methods for the isolation, detection and quantification of cyanobacterial hepatotoxins | |
| Jin et al. | Determination ofd-Amino Acids Labeled with Fluorescent Chiral Reagents, R (−)-andS (+)-4-(3-Isothiocyanatopyrrolidin-1-yl)-7-(N, N-dimethylaminosulfonyl)-2, 1, 3-benzoxadiazoles, in Biological and Food Samples by Liquid Chromatography | |
| Park et al. | Automated HPLC analysis of glutathione and thiol-containing compounds in grape juice and wine using pre-column derivatization with fluorescence detection | |
| LICHT et al. | Amino acid analysis of peptides and proteins | |
| Hird et al. | The enzymic reaction of amino acids with glutathione | |
| RU2012869C1 (ru) | Способ спектрофотометрического определения аминокислот | |
| Kirchert et al. | In-process quality control of wine by planar chromatography versus micro planar chromatography | |
| Robrish et al. | The use of the o-phthalaldehyde reaction as a sensitive assay for protein and to determine protein in bacterial cells and dental plaque | |
| Hsieh et al. | Determination of lysine with ninhydrin-ferric reagent | |
| Cory et al. | Isolation and characterization of enolase from rainbow trout (Salmo gairdnerii gairdnerii) | |
| Crowell et al. | Determination of alpha amino nitrogen in musts and wines by TNBS method | |
| Biondi et al. | A new procedure for the specific high-performance liquid chromatographic determination of hydroxyproline | |
| Topper et al. | Spectrophotometric evidence for formation of a dihydroxyacetone phosphate-aldolase complex | |
| Suzuki et al. | Spectrophotometric determination of glycine with 2, 4, 6-trichloro-s-triazine | |
| Pan et al. | Determination of phenylacetic acid and phenylacetamides in samples from penicillin fermentations | |
| Block | Amino acid analysis of protein hydrolysates | |
| Hashiba | Non-Enzymic Browning of Soy Sauce: Comparison of the Browning of Soy Sauce with that of a Sugar-amino Acid Model System | |
| Brendel et al. | Ion-exchange separation and automated assay of complex mixtures of amino acids and some hexosamines: Part II | |
| You et al. | Determination of biogenic amines by RPHPLC with fluorescent detection after derivatization with 2-(9-carbazole) ethyl chloroformate (CEOC) | |
| Tsatsaronis et al. | A STUDY ON THE AMINOACIDS CONTAINED IN SEVERAL GREEK WINES. | |
| CN111693639B (zh) | 一种检测禽组织、禽蛋或猪肉中青霉素g残留的确证分析方法 | |
| SU929544A1 (ru) | Способ фотометрического определени нитрат-ионов |