RU2011149982A

RU2011149982A - PRODUCER OF FUSION PROTEIN THIOREDOXINE AND DOMAIN 4 INFESTIN, METHOD FOR ITS PRODUCTION AND EXPRESSION PLASMID pET32a-Inf4, ENCODING FUSION PROTEIN

Info

Publication number: RU2011149982A
Application number: RU2011149982/10A
Authority: RU
Inventors: Иван Иванович Воробьев; Надежда Александровна Орлова
Original assignee: Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН (ЦТП ФХФ РАН)
Priority date: 2011-12-08
Filing date: 2011-12-08
Publication date: 2013-11-20

Abstract

1. Экспрессионная плазмида pET32a-Inf4, содержащая фрагмент ДНК, кодирующий слитный белок, включающий тиоредоксин I E.coli и домен 4 инфестина Triatoma infestans, под контролем промотора, функционирующего в бактериальной клетке.2. Бактерия, принадлежащая к роду Escherichia, трансформированная плазмидой по п.1, - продуцент слитного белка, включающего тиоредоксин I E.coli и домен 4 инфестина Triatoma infestans.3. Бактерия по п.2, отличающаяся тем, что указанная бактерия относится к штамму E.coli BL21[DE3]/рET32a-Inf4.4. Слитный белок, включающий тиоредоксин I E.coli и домен 4 инфестина Triatoma infestans.5. Способ получения слитного белка, включающего тиоредоксин I E.coli и домен 4 инфестина Triatoma infestans, включающий культивирование бактерии по п.2 в питательной среде, разрушение бактериальных клеток и очистку слитного белка с использованием металлохелатной хроматографии и анионообменной хроматографии.6. Способ получения интактного домена 4 инфестина Triatoma infestans, включающий расщепление очищенного слитного белка по п.5 при помощи энтерокиназы и очистку интактного домена 4 инфестина Triatoma infestans при помощи металлохелатной хроматографии.1. An expression plasmid pET32a-Inf4 containing a DNA fragment encoding a fusion protein comprising E. coli thioredoxin I and Triatoma infestans domain 4 infestin, under the control of a promoter that functions in a bacterial cell. A bacterium belonging to the genus Escherichia, transformed with the plasmid according to claim 1, is a producer of a fusion protein comprising E. coli thioredoxin I and Triatoma infestans domain 4. The bacterium according to claim 2, characterized in that said bacterium belongs to the E. coli strain BL21 [DE3] / pET32a-Inf4.4. A fusion protein including E. coli thioredoxin I and Triestoma infestans domain 4. 5. A method for producing a fusion protein comprising E. coli thioredoxin I and Triatoma infestans infestin domain 4, comprising culturing the bacterium of claim 2 in a nutrient medium, destroying bacterial cells and purifying the fusion protein using metal chelate chromatography and anion exchange chromatography. 6. A method of obtaining the intact domain 4 of the infestin Triatoma infestans, comprising splitting the purified fusion protein according to claim 5 using enterokinase and purification of the intact domain 4 of the infestin Triestoma infestans using metal chelate chromatography.

Claims

1. An expression plasmid pET32a-Inf4 containing a DNA fragment encoding a fusion protein comprising E. coli thioredoxin I and Triatoma infestans infestans domain 4, under the control of a promoter that functions in a bacterial cell.

2. A bacterium belonging to the genus Escherichia, transformed with the plasmid according to claim 1, is a producer of a fusion protein comprising E.coli thioredoxin I and Triestoma infestans domain 4.

3. The bacterium according to claim 2, characterized in that said bacterium belongs to the E. coli strain BL21 [DE3] / pET32a-Inf4.

4. A fusion protein comprising thioredoxin I of E. coli and domain 4 of infestin Triatoma infestans.

5. A method for producing a fusion protein comprising E.coli thioredoxin I and Triatoma infestans infestin domain 4, comprising culturing the bacterium of claim 2 in a nutrient medium, destroying bacterial cells and purifying the fusion protein using metal chelate chromatography and anion exchange chromatography.

6. A method of obtaining the intact domain 4 of the infestin Triatoma infestans, comprising splitting the purified fusion protein according to claim 5 using enterokinase and purification of the intact domain 4 of the infestin Triestoma infestans using metal chelate chromatography.