RU2011144738A - METHOD FOR PRODUCING AND CLEANING PLACENTAL ALKALINE PHOSPHATASE - Google Patents

METHOD FOR PRODUCING AND CLEANING PLACENTAL ALKALINE PHOSPHATASE Download PDF

Info

Publication number
RU2011144738A
RU2011144738A RU2011144738/15A RU2011144738A RU2011144738A RU 2011144738 A RU2011144738 A RU 2011144738A RU 2011144738/15 A RU2011144738/15 A RU 2011144738/15A RU 2011144738 A RU2011144738 A RU 2011144738A RU 2011144738 A RU2011144738 A RU 2011144738A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
enzyme
extract
subjected
heat treatment
ammonium sulfate
Prior art date
Application number
RU2011144738/15A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2492868C2 (en
Inventor
Александр Владимирович Коханов
Владимир Викторович Белопасов
Александр Алексеевич Меснянкин
Ирина Сергеевна Ямпольская
Оксана Алексеевна Луцева
Original Assignee
Александр Владимирович Коханов
Александр Алексеевич Меснянкин
Оксана Алексеевна Луцева
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Александр Владимирович Коханов, Александр Алексеевич Меснянкин, Оксана Алексеевна Луцева filed Critical Александр Владимирович Коханов
Priority to RU2011144738/15A priority Critical patent/RU2492868C2/en
Publication of RU2011144738A publication Critical patent/RU2011144738A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2492868C2 publication Critical patent/RU2492868C2/en

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Способ получения и очистки плацентарной щелочной фосфатазы, заключающийся в экстрагировании фермента из сырья, термообработки экстракта, фракционировании белков сульфатом аммония и последующей очистки фермента методом препаративного электрофореза, отличающийся тем, что после экстрагирования фермента из плаценты 3М хлоридом калия и прогревания первичного экстракта в течение 10 мин при 65°C, проводят повторную термообработку экстракта в присутствии сульфата кадмия 0,14%-ной концентрации в течение 1-3 мин при 65°C с последующим охлаждением колбы под струей воды, добавляют в экстракт сульфат аммония до 30% насыщения, отделяют осадок центрифугированием, надосадочную жидкость, минуя стадию диализа, подвергают гидрофобной хроматографии на колонке с фенил-сефарозой, проводят элюцию фермента с колонки 0,02М трис-глициновым электродным буфером рН 8,6, а ферментсодержащий элюат подвергают препаративному электрофорезу в 7%-ном полиакриламидном геле.The method of obtaining and purification of placental alkaline phosphatase, which consists in extracting the enzyme from raw materials, heat treatment of the extract, fractionation of proteins with ammonium sulfate and subsequent purification of the enzyme by preparative electrophoresis, characterized in that after extraction of the enzyme from the placenta with 3M potassium chloride and heating of the primary extract for 10 min at 65 ° C, repeated heat treatment of the extract is carried out in the presence of cadmium sulfate of 0.14% concentration for 1-3 minutes at 65 ° C, followed by cooling to foreheads under a stream of water, ammonium sulfate is added to the extract to 30% saturation, the precipitate is separated by centrifugation, the supernatant, bypassing the dialysis stage, is subjected to hydrophobic chromatography on a phenyl-sepharose column, the enzyme is eluted from the column with 0.02 M Tris-glycine electrode pH buffer 8.6, and the enzyme-containing eluate is subjected to preparative electrophoresis in 7% polyacrylamide gel.

Claims (1)

Способ получения и очистки плацентарной щелочной фосфатазы, заключающийся в экстрагировании фермента из сырья, термообработки экстракта, фракционировании белков сульфатом аммония и последующей очистки фермента методом препаративного электрофореза, отличающийся тем, что после экстрагирования фермента из плаценты 3М хлоридом калия и прогревания первичного экстракта в течение 10 мин при 65°C, проводят повторную термообработку экстракта в присутствии сульфата кадмия 0,14%-ной концентрации в течение 1-3 мин при 65°C с последующим охлаждением колбы под струей воды, добавляют в экстракт сульфат аммония до 30% насыщения, отделяют осадок центрифугированием, надосадочную жидкость, минуя стадию диализа, подвергают гидрофобной хроматографии на колонке с фенил-сефарозой, проводят элюцию фермента с колонки 0,02М трис-глициновым электродным буфером рН 8,6, а ферментсодержащий элюат подвергают препаративному электрофорезу в 7%-ном полиакриламидном геле. The method of obtaining and purification of placental alkaline phosphatase, which consists in extracting the enzyme from raw materials, heat treatment of the extract, fractionation of proteins with ammonium sulfate and subsequent purification of the enzyme by preparative electrophoresis, characterized in that after extraction of the enzyme from the placenta with 3M potassium chloride and heating of the primary extract for 10 min at 65 ° C, repeated heat treatment of the extract is carried out in the presence of cadmium sulfate of 0.14% concentration for 1-3 minutes at 65 ° C, followed by cooling to foreheads under a stream of water, ammonium sulfate is added to the extract to 30% saturation, the precipitate is separated by centrifugation, the supernatant, bypassing the dialysis stage, is subjected to hydrophobic chromatography on a phenyl-sepharose column, the enzyme is eluted from the column with 0.02 M Tris-glycine electrode pH buffer 8.6, and the enzyme-containing eluate is subjected to preparative electrophoresis in 7% polyacrylamide gel.
RU2011144738/15A 2011-11-03 2011-11-03 Method for preparing and cleaning placental alkaline phosphatase RU2492868C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011144738/15A RU2492868C2 (en) 2011-11-03 2011-11-03 Method for preparing and cleaning placental alkaline phosphatase

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2011144738/15A RU2492868C2 (en) 2011-11-03 2011-11-03 Method for preparing and cleaning placental alkaline phosphatase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2011144738A true RU2011144738A (en) 2013-05-10
RU2492868C2 RU2492868C2 (en) 2013-09-20

Family

ID=48788663

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2011144738/15A RU2492868C2 (en) 2011-11-03 2011-11-03 Method for preparing and cleaning placental alkaline phosphatase

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2492868C2 (en)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0712434B2 (en) * 1987-11-27 1995-02-15 日東化学工業株式会社 Method for producing oxide catalyst containing phosphorus and antimony
SU1576563A1 (en) * 1988-03-15 1990-07-07 Научно-производственное объединение "Фермент" Method of obtaining alkaline phosphatase
RU2016899C1 (en) * 1991-06-19 1994-07-30 Научно-исследовательский институт текстильных материалов Method of alkaline phosphatase preparing

Also Published As

Publication number Publication date
RU2492868C2 (en) 2013-09-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA201890039A1 (en) ANTIBODIES SPECIFIC TO HYPERPHOSPHORYLATED TAU-PROTEIN, AND METHODS OF THEIR APPLICATION
ZA201903994B (en) Ion exchange membrane chromatography
EA201070987A1 (en) PURIFIED HYBRID PROTEINS OF IMMUNOGLOBULIN AND METHODS OF THEIR PURIFICATION
PH12015502408A1 (en) Purification of iduronate-2-sulfatase
MX344268B (en) Processes for purification of proteins.
EA201590826A1 (en) WAYS OF CLEANING ARYLSULFATASE A
EA201890172A1 (en) TAU-BINDING ANTIBODIES
EA201891878A1 (en) CLEANING PROTEINS
MX2017011121A (en) Use of alkaline washes during chromatography to remove impurities.
EA201990593A1 (en) CONTINUOUS METHOD FOR REDUCING THE THERAPEUTIC PROTEIN HETEROGENEITY
MX342235B (en) Optimized method for antibody capturing by mixed mode chromatography.
BR112018001511A2 (en) - use of low conductivity aqueous solution and methods of producing and purifying human igg1 or igg4 isotype antibody
MX2020000288A (en) Chromatography.
NZ722057A (en) Method for purifying antibody having low isoelectric point
MA38296B2 (en) Selective nox-1 inhibitor peptides and their uses
EA201591796A1 (en) ANTIBODIES TO CD52
RU2011144738A (en) METHOD FOR PRODUCING AND CLEANING PLACENTAL ALKALINE PHOSPHATASE
MX2020008000A (en) Protein purification process.
MX2021005685A (en) Viral inactivation methods for continuous manufacturing of antibodies.
RU2524668C1 (en) Method for recovery of sperm-specific human antitrypsin
MX2021016092A (en) Methods for protein purification.
RU2011135454A (en) METHOD FOR PRODUCING PROTEIN CONCENTRATE FROM FISH WASTE
UA94554U (en) METHOD OF EXTRACTION OF PROTEINS FROM SUNFLOWER MEAL
MX2022013176A (en) Anti-cd19 antibodies and uses thereof.
NZ764254A (en) Antibody purification

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20131104