Claims (4)
1. Способ размораживания криоконсервированного образца пуповинной крови, включающий подготовку отмывочного буфера и размещение его в пакете, выборку пакета из криохранилища с криоконсервированным образцом пуповинной крови и размораживание последнего в водяной бане до жидкого состояния образца, подсоединение через порт пакета с пуповинной кровью с портом пакета буфера и внесение буфера в пакет с кровью, после отмывки с буфером через второй порт пакета с кровью размещают в пустой пакет содержимое из первого пакета, затем берут дозу конечного продукта на определение количества и жизнеспобности клеток на проточном цитометре и проверку на микробиологическую стерильность и документальное оформление результатов полученного продукта, отличающийся тем, что при подготовке отмывочного буфера, выполненного в виде смеси подогретого до температуры 37°С физиологического раствора и раствора 2,5% альбумина человеческого рекомбинатного, рассчитывают его объем - Vотм.б по формуле Vотм.б. = 240 мл - Vзамор.обр. + Vкон.прод., где 240 мл - начальный объем отмывочного буфера, Vзамор.обр. - объем замороженного криоконсервированного образца пуповинной крови, Vкон.прод. - объем конечного продукта, причем при размораживании двух образцов пуповинной крови начальный объем отмывочного буфера равен 460 мл, в подготовленный гемакон после удаления антикоагулянта CPDA и помещения в него отмывочного буфера с рассчитанным объемом в ламинарном шкафу подсоединяют к порту гемакона и к порту пустого двойного гемакона набор для сепарации клеток CS-600, предварительно убедившись в его стерильности, достают из криохранилища выбранный по РЕГИСТРУ образец пуповинной крови, расположенный в запечатанном пакете, размещенном в термоусадочном пакете, зарегистрировав документально, оставляют последний при комнатной температуре на 4-6 мин и размораживают его содержимое в водяной бане при температуре 37°С в течение 9-11 11 мин, до полного размораживания образца, после оттаивания образца до жидкой фракции подсоединяют оба порта пакета образца к набору для сепарации клеток CS-600 и устанавливают последние в сепаратор, в котором в его программу вводят параметры начального объема, соотношения начального объема к объему отмывочного буфера, конечного объема, и производят в автоматическом режиме процедуру отмывки образца, причем в первом пакете двойного гемакона добавляют 0,5 мл гепарина, после окончания сепарации распределив по мешкам полученные фракции лейкоцитов, эритроцитов и плазмы отбирают из первого мешка двойного гемакона лейкоцитарный концентрат, в котором находятся гемопоэтические стволовые клетки пуповинной крови, причем при обработке двух образцов из первого мешка берут половину лейкоцитарного концентрата, вторую часть последнего перекачивают во второй гемакон, из мешка лейкоцитов берут 0,5 мл, проверяя жизнеспособность полученных гемопоэтических стволовых клеток с использованием набора реагентов Stem Kit, содержащего моноклональные антитела CD45FITC/CD34PE, CD45FITC/ISO Clonic ContralPE флуоросферы, краситель 7AAD и лидирующий раствор NH4Cl.1. A method of thawing a cryopreserved umbilical cord blood sample, including preparing a wash buffer and placing it in a bag, taking a bag from a cryopreservation with a cryopreserved umbilical cord blood sample and thawing the latter in a water bath to the liquid state of the sample, connecting the umbilical cord blood packet port to the buffer packet port and adding the buffer to the blood bag, after washing with the buffer, the contents of the first bag are placed in an empty bag through the second port of the blood bag, then a dose of horse is taken product for determining the number and viability of cells on a flow cytometer and checking for microbiological sterility and documenting the results of the obtained product, characterized in that when preparing a wash buffer made in the form of a mixture of physiological saline and a solution of 2.5% heated to a temperature of 37 ° C human recombinant albumin, calculate its volume - Vmt.b according to the formula Vmt.b. = 240 ml - V freeze. + Vcon.prod., Where 240 ml is the initial volume of washing buffer, Vzam.obr. - volume of frozen cryopreserved cord blood sample, Vcon.prod. - the volume of the final product, and when thawing two cord blood samples, the initial volume of the washing buffer is 460 ml, in the prepared hemacon after removing the CPDA anticoagulant and placing the washing buffer with the calculated volume in the laminar cabinet, connect to the hemacon port and to the empty double gemacon port to separate CS-600 cells, after making sure that it is sterile, a cord sample selected in the REGISTER from the cryogenic storage is located in a sealed bag placed in t in a shrink bag, having documented, leave the latter at room temperature for 4-6 minutes and thaw its contents in a water bath at 37 ° C for 9-11 11 minutes, until the sample is completely thawed, after thawing the sample to the liquid fraction, connect both ports package the sample to the CS-600 cell separation kit and install the latter into the separator, in which the parameters of the initial volume, the ratio of the initial volume to the volume of the wash buffer, the final volume are introduced into its program and are automatically math mode, the sample is washed, with 0.5 ml of heparin added in the first double hemacone package, after the separation is completed, the resulting fractions of leukocytes, erythrocytes and plasma are bagged and the leukocyte concentrate containing hematopoietic umbilical cord blood stem cells is taken from the first bag of double hemacone, moreover, when processing two samples from the first bag, half of the leukocyte concentrate is taken, the second part of the last is pumped into the second hemacon, 0.5 ml is taken from the leukocyte bag, p overa viability derived hematopoietic stem cells using a kit Stem Kit reagents comprising monoclonal antibodies CD45FITC / CD34PE, CD45FITC / ISO Clonic ContralPE fluorospheres, dye 7AAD and leading solution NH 4 Cl.
2. Способ размораживания криоконсервированного образца пуповинной крови по п.1, отличающийся тем, что в программе сеаратора устанавливают параметры начального объема образца в диапазоне 10-100 мл, соотношение начального объема к объему отмывочного буфера и к объему конечного продукта в дипазоне 50-150 мл.2. The method of thawing a cryopreserved cord blood sample according to claim 1, characterized in that the initial volume of the sample is set in the range of 10-100 ml in the separator program, the ratio of the initial volume to the volume of washing buffer and to the volume of the final product in the range of 50-150 ml .
3. Способ размораживания криоконсервированного образца пуповинной крови по п.1, отличающийся тем, что жизнеспособность гемопоэтических стволовых клеток должна быть не менее 84%.3. The method of thawing a cryopreserved cord blood sample according to claim 1, characterized in that the viability of hematopoietic stem cells should be at least 84%.
4. Способ размораживания криоконсервированного образца пуповинной крови по п.1, отличающийся тем, что при оформлении документации на трансплантат на мешке с конечным продуктом гемопоэтических стволовых клеток регистрируют название продукта, название банка, осуществившего процедуру размораживания, состав раствора лейкоцитарного концентрата, дату и время проведения процедуры размораживания и получения гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови, при подготовке документации проведенной процедуры оформляют также протокол, паспорт лейкоцитарной фракции пуповинной крови, готовой к трансплантации, и заполняют приложение к паспорту.
4. The method for thawing a cryopreserved cord blood sample according to claim 1, characterized in that when registering the transplant on a bag with the final product of hematopoietic stem cells, the name of the product, the name of the bank that performed the defrosting procedure, the composition of the leukocyte concentrate solution, the date and time of the test are recorded thawing and receiving hematopoietic cord blood stem cells; in the preparation of the documentation for the procedure also draw up a protocol, passport RT leukocyte fraction of umbilical cord blood, ready for transplantation, and fill out the application to the passport.