Claims (18)
1. Биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что он представляет собой суспензию, содержащую культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток в 0,9%-ном растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-3,0·106 в 1 мл биотрансплантата, интегрированных на фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой измельченной до размера 100-200 мкм бесклеточной матрице в растворе фармацевтически приемлемого биосовместимого биодеградируемого препарата гиалуроновой кислоты.1. Biograft for the correction of soft tissue defects, characterized in that it is a suspension containing cultures of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells in a 0.9% solution of sodium chloride at a concentration of 0.6-3.0 · 10 6 in 1 ml of biotransplant integrated on a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable, cell-free matrix sized to 100-200 microns, in a solution of a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable preparation of hyaluronic acid.
2. Биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей по п.1, характеризующийся тем, что объемное соотношение суспензии культуры клеток, бесклеточной матрицы и препарата гиалуроновой кислоты составляет 4:1:1 соответственно.2. Biograft for the correction of soft tissue defects according to claim 1, characterized in that the volume ratio of the suspension of cell culture, cell-free matrix and the preparation of hyaluronic acid is 4: 1: 1, respectively.
3. Биотрансплантат по п.1, характеризующийся тем, что в качестве фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой бесклеточной матрицы используют препарат «Сайметра».3. The biograft according to claim 1, characterized in that the drug "Saymetra" is used as a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable cell-free matrix.
4. Биотрансплантат по п.1, характеризующийся тем, что он содержит суспензию культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток, выделенных из ткани органа, соответствующего поврежденному.4. The biograft according to claim 1, characterized in that it contains a suspension of a culture of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells isolated from tissue of an organ corresponding to a damaged one.
5. Биотрансплантат по п.1, характеризующийся тем, что он содержит суспензию культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток, выделенных из кожи, или слизистой оболочки, или крайней плоти, или пуповины новорожденного, или костного мозга, или жировой ткани, или пульпы зуба.5. The biograft according to claim 1, characterized in that it contains a suspension of a culture of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells isolated from the skin or mucous membrane, or foreskin, or the umbilical cord of a newborn, or bone marrow, or adipose tissue, or pulp of the tooth.
6. Способ получения биотрансплантата для коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что биоптат промывают растворами антибиотиков и антимикотика в среде ДМЕМ и переносят в среду ДМЕМ, содержащую 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 40 мкг/мл гентамицина и коллагеназы II типа, инкубацию биоптата проводят при 37°С 16-17 ч, полученный клеточный осадок ресуспендируют в среде для культивирования ДМЕМ, 10-20% ЭТС, 40 мкг/мл гентамицина, высевают и культивируют в течение 2-3 недель до получения первичной культуры, затем клетки трипсинизируют и культивируют, после чего среду с 10-20% ЭТС заменяют на среду без сыворотки или на среду ДМЕМ 90% и 10% аутологичной сыворотки и выдерживают 8-14 ч при 37°С, после культивирования клетки собирают с помощью 0,25% трипсин - ЭДТА, отмывают трехкратно путем центрифугирования - ресуспендирования и суспендируют в 0,9%-ном растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-3,0·106 в 1 мл биотрансплантата, интегрируют на фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой измельченной до размера 100-200 мкм бесклеточной матрице и культивируют для адгезии фибробластподобных клеток 1-2 ч при 37°С, после чего соединяют с фармацевтически приемлемым биосовместимым биодеградируемым препаратом гиалуроновой кислоты.6. A method of obtaining a biograft for the correction of soft tissue defects, characterized in that the biopsy is washed with solutions of antibiotics and antimycotics in a DMEM medium and transferred to a DMEM medium containing 10% fetal calf serum, 40 μg / ml gentamicin and type II collagenase, the biopsy is incubated at 37 ° C for 16-17 hours, the resulting cell pellet is resuspended in DMEM cultivation medium, 10-20% ETS, 40 μg / ml gentamicin, seeded and cultured for 2-3 weeks until the primary culture is obtained, then the cells are trypsinized and cultured, after which the medium with 10-20% ETS is replaced with medium without serum or with DMEM 90% and 10% autologous serum and incubated for 8-14 hours at 37 ° C, after cultivation, cells are harvested using 0.25% trypsin - EDTA, washed three times by centrifugation - resuspension and suspended in a 0.9% solution of sodium chloride in a concentration of 0.6-3.0 · 10 6 in 1 ml of biotransplant, integrated on a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable crushed to a size of 100-200 μm cell-free matrix and cultured for fibroblas adhesion like cells 1-2 hours at 37 ° C, and then combined with a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable preparation of hyaluronic acid.
7. Биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что он представляет собой суспензию, содержащую культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток в 0,9%-ном растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-4,2·106 в 1 мл биотрансплантата, интегрированных на фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой измельченной до размера 100-200 мкм бесклеточной матрице.7. Biograft for the correction of soft tissue defects, characterized in that it is a suspension containing cultures of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells in a 0.9% sodium chloride solution at a concentration of 0.6-4.2 · 10 6 in 1 ml of biograft integrated on a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable crushed cell-free matrix to a size of 100-200 microns.
8. Биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей по п.7, характеризующийся тем, что объемное соотношение суспензии культуры клеток и бесклеточной матрицы составляет 5:1 соответственно.8. Biograft for the correction of soft tissue defects according to claim 7, characterized in that the volume ratio of the suspension of cell culture and cell-free matrix is 5: 1, respectively.
9. Биотрансплантат по п.7, характеризующийся тем, что в качестве фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой бесклеточной матрицы используют препарат «Сайметра».9. The biograft according to claim 7, characterized in that the drug "Saymetra" is used as a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable cell-free matrix.
10. Биотрансплантат по п.7, характеризующийся тем, что он содержит суспензию культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток, выделенных из ткани органа, соответствующего поврежденному.10. The biograft according to claim 7, characterized in that it contains a suspension of a culture of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells isolated from tissue of an organ corresponding to a damaged one.
11. Биотрансплантат по п.7, характеризующийся тем, что он содержит суспензию культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток, выделенных из кожи, или слизистой оболочки, или крайней плоти, или пуповины новорожденного, или костного мозга, или жировой ткани, или пульпы зуба.11. The biograft according to claim 7, characterized in that it contains a suspension of a culture of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells isolated from the skin or mucous membrane, or prepuce, or the umbilical cord of a newborn, or bone marrow, or adipose tissue, or pulp of the tooth.
12. Способ получения биотрансплантата для коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что биоптат промывают растворами антибиотиков и антимикотика в среде ДМЕМ и переносят в среду ДМЕМ, содержащую 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 40 мкг/мл гентамицина и коллагеназы II типа, инкубацию биоптата проводят при 37°С 16-17 ч, полученный клеточный осадок ресуспендируют в среде для культивирования ДМЕМ, 10-20% ЭТС, 40 мкг/мл гентамицина, высевают и культивируют в течение 2-3 недель до получения первичной культуры, затем клетки трипсинизируют и культивируют, после чего среду с 10-20% ЭТС заменяют на среду без сыворотки или на среду ДМЕМ 90% и 10% аутологичной сыворотки и выдерживают 8-14 ч при 37°С, после культивирования клетки собирают с помощью 0,25% трипсин - ЭДТА, отмывают трехкратно путем центрифугирования - ресуспендирования и суспендируют в 0,9%-ном растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-4,2·106 в 1 мл биотрансплантата, затем суспензию клеток интегрируют на фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой измельченной до размера 100-200 мкм бесклеточной матрице и культивируют для адгезии фибробластподобных клеток 1-2 ч при 37°С.12. A method of obtaining a biograft for the correction of soft tissue defects, characterized in that the biopsy is washed with solutions of antibiotics and antimycotics in DMEM medium and transferred to DMEM medium containing 10% fetal calf serum, 40 μg / ml gentamicin and type II collagenase, biopsy is incubated at 37 ° C for 16-17 hours, the resulting cell pellet is resuspended in DMEM cultivation medium, 10-20% ETS, 40 μg / ml gentamicin, seeded and cultured for 2-3 weeks until the primary culture is obtained, then the cells are trypsinized and cultured, after which the medium with 10-20% ETS is replaced with medium without serum or with DMEM 90% and 10% autologous serum and incubated for 8-14 hours at 37 ° C, after cultivation, cells are harvested using 0.25% trypsin - EDTA, washed three times by centrifugation - resuspension and suspended in a 0.9% solution of sodium chloride at a concentration of 0.6-4.2 · 10 6 in 1 ml of biotransplant, then the cell suspension is integrated into a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable crushed to size 100-200 μm cell-free matrix and cultured t for fibroblast cell adhesion 1-2 hours at 37 ° C.
13. Биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что он представляет собой суспензию, содержащую культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток в 0,9%-ном растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-5,5·106 в 1 мл биотрансплантата в растворе фармацевтически приемлемого биосовместимого биодеградируемого препарата гиалуроновой кислоты или препарата коллагена.13. Biograft for the correction of soft tissue defects, characterized in that it is a suspension containing cultures of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells in a 0.9% sodium chloride solution at a concentration of 0.6-5.5 · 10 6 in 1 ml of biotransplant in a solution of a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable preparation of hyaluronic acid or collagen preparation.
14. Биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей по п.13, характеризующийся тем, что объемное соотношение суспензии культуры клеток и препарата гиалуроновой кислоты или препарата коллагена составляет 5:1 соответственно.14. Biograft for the correction of soft tissue defects according to item 13, characterized in that the volume ratio of the suspension of cell culture and the preparation of hyaluronic acid or collagen preparation is 5: 1, respectively.
15. Биотрансплантат по п.13, характеризующийся тем, что он содержит суспензию культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток, выделенных из ткани органа, соответствующего поврежденному.15. The biograft according to item 13, characterized in that it contains a suspension of a culture of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells isolated from tissue of an organ corresponding to damaged.
16. Биотрансплантат по п.13, характеризующийся тем, что он содержит суспензию культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток, выделенных из кожи, или слизистой оболочки, или крайней плоти, или пуповины новорожденного, или костного мозга, или жировой ткани, или пульпы зуба.16. The biograft according to item 13, characterized in that it contains a suspension of a culture of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells isolated from the skin or mucous membrane, or prepuce, or the umbilical cord of a newborn, or bone marrow, or adipose tissue, or pulp of the tooth.
17. Способ получения биотрансплантата для коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что биоптат промывают растворами антибиотиков и антимикотика в среде ДМЕМ и переносят в среду ДМЕМ, содержащую 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 40 мкг/мл гентамицина и коллагеназы II типа, инкубацию биоптата проводят при 37°С 16-17 ч, полученный клеточный осадок ресуспендируют в среде для культивирования ДМЕМ, 10-20% ЭТС, 40 мкг/мл гентамицина, высевают и культивируют в течение 2-3 недель до получения первичной культуры, затем клетки трипсинизируют и культивируют, после чего среду с 10-20% ЭТС заменяют на среду без сыворотки или на среду ДМЕМ 90% и 10% аутологичной сыворотки и выдерживают 8-14 ч при 37°С, после культивирования клетки собирают с помощью 0,25% трипсин - ЭДТА, отмывают трехкратно путем центрифугирования - ресуспендирования и суспендируют в 0,9%-ном растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-5,5·106 в 1 мл биотрансплантата, после чего соединяют с фармацевтически приемлемым биосовместимым биодеградируемым препаратом гиалуроновой кислоты или препаратом коллагена.17. A method of obtaining a biograft for the correction of soft tissue defects, characterized in that the biopsy is washed with solutions of antibiotics and antimycotics in DMEM medium and transferred to DMEM medium containing 10% fetal calf serum, 40 μg / ml gentamicin and type II collagenase, biopsy is incubated at 37 ° C for 16-17 hours, the resulting cell pellet is resuspended in DMEM cultivation medium, 10-20% ETS, 40 μg / ml gentamicin, seeded and cultured for 2-3 weeks until the primary culture is obtained, then the cells are trypsinized and cultured, after which the medium with 10-20% ETS is replaced with medium without serum or with DMEM 90% and 10% autologous serum and incubated for 8-14 hours at 37 ° C, after cultivation, cells are harvested using 0.25% trypsin - EDTA, washed three times by centrifugation - resuspension and suspended in a 0.9% solution of sodium chloride at a concentration of 0.6-5.5 · 10 6 in 1 ml of biotransplant, then combined with a pharmaceutically acceptable biocompatible biodegradable hyaluronic acid preparation or collagen preparation.
18. Способ коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что биотрансплантат, представляющий собой суспензию культуры аутологичных или аллогенных фибробластов, или фибробластоподобных клеток в количестве 3,6-60·106 клеток на курс лечения, вводят в область дефекта инъекционным путем двукратно с интервалом 3-6 недель.
18. A method for the correction of soft tissue defects, characterized in that the biograft, which is a suspension of a culture of autologous or allogeneic fibroblasts, or fibroblast-like cells in the amount of 3.6-60 · 10 6 cells per treatment course, is injected into the defect area twice twice with an interval 3-6 weeks.