Claims (30)
1. Гликопротеиновая композиция с гомогенным профилем N-гликозилирования, где, по меньшей мере, 90% N-гликановыми типами, присутствующими в указанном профиле, являются GlcNAc2Man3GlcNAc2 (GO), указанный профиль, включающий небольшое количество предшественника N-гликановых типов, где указанный предшественник N-гликановых типов выбирается из группы, состоящей из Man3GlcNAc2, GlcNaclMan3GlcNAc2, где GlcNacl прикреплен к 1,3 маннозному плечу (MGn), GlcNaclMan3GlcNAc2, где GlcNacl прикреплен к 1,6 маннозному плечу (GnM), и любой комбинации из них.1. A glycoprotein composition with a homogeneous N-glycosylation profile, where at least 90% of the N-glycan types present in said profile are GlcNAc2Man3GlcNAc2 (GO), said profile comprising a small amount of an N-glycan type precursor, wherein said precursor N-glycan types are selected from the group consisting of Man3GlcNAc2, GlcNaclMan3GlcNAc2, where GlcNacl is attached to the 1.3 mannose arm (MGn), GlcNaclMan3GlcNAc2, where GlcNacl is attached to the 1.6 mannose arm (GnM thereof), and any combination.
2. В основном гомогенная гликопротеиновая композиция, в которой, по меньшей мере, 90% гликопротеина, присутствующего в композиции, представлено GO-гликоформой, включающая небольшое количество предшественника гликоформы.2. A substantially homogeneous glycoprotein composition in which at least 90% of the glycoprotein present in the composition is represented by GO-glycoform, comprising a small amount of a glycoform precursor.
3. Гликопротеиновая композиция по п.1 или 2, в которой указанный гликопротеин представляет собой иммуноглобулин.3. The glycoprotein composition according to claim 1 or 2, wherein said glycoprotein is an immunoglobulin.
4. Гликопротеиновая композиция по п.3, в которой указанный иммуноглобулин включает Fc область, выбранную из группы, состоящей из IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4 области.4. The glycoprotein composition according to claim 3, wherein said immunoglobulin comprises an Fc region selected from the group consisting of IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 region.
5. Гликопротеиновая композиция по п.3, в которой указанный иммуноглобулин представляет собой моноклональное антитело.5. The glycoprotein composition of claim 3, wherein said immunoglobulin is a monoclonal antibody.
6. Гликопротеиновая композиция по п.5, в которой указанное моноклональное антитело связывает антиген, выбранный из группы, состоящей из CD20 и ERBB2 (HER2).6. The glycoprotein composition according to claim 5, wherein said monoclonal antibody binds an antigen selected from the group consisting of CD20 and ERBB2 (HER2).
7. Гликопротеиновая композиция по п.3, в которой указанный иммуноглобулин проявляет повышенное сродство к связыванию для FcγRIII.7. The glycoprotein composition according to claim 3, wherein said immunoglobulin exhibits an increased binding affinity for FcγRIII.
8. Гликопротеиновая композиция по п.3, в которой указанный иммуноглобулин проявляет повышенную антителозависимую клеточную цитотоксичную (ADCC) активность.8. The glycoprotein composition according to claim 3, wherein said immunoglobulin exhibits increased antibody-dependent cellular cytotoxic (ADCC) activity.
9. Гликопротеиновая композиция по п.3, в которой указанный иммуноглобулин проявляет сниженную комплементзависимую цитотоксичную (CDC) активность.9. The glycoprotein composition according to claim 3, wherein said immunoglobulin exhibits reduced complement dependent cytotoxic (CDC) activity.
10. Фармацевтическая композиция, включающая гликопротеиновую композицию по любому из пп.1-9.10. A pharmaceutical composition comprising a glycoprotein composition according to any one of claims 1 to 9.
11. Клетка-хозяин, включающая гликопротеиновую композицию по любому из пп.1-9.11. A host cell comprising a glycoprotein composition according to any one of claims 1 to 9.
12. Клетка-хозяин по п.11, представляющая собой растительную клетку-хозяина.12. A host cell according to claim 11, which is a plant host cell.
13. Клетка-хозяин по п.12, в которой указанным растением является ряска.13. The host cell of claim 12, wherein said plant is duckweed.
14. Способ изменения профиля N-гликозилирования гетерологичного полипептида, образованного в растении ряска или растительной клетке или клубеньке ряски, включающий:14. A method of changing the profile of N-glycosylation of a heterologous polypeptide formed in a duckweed plant or plant cell or duckweed nodule, comprising:
(a) введение в указанное растение ряска или растительную клетку или клубенек ряски полинуклеотидную конструкцию, включающую первую полинуклеотидную последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование α1,3-фукозилтрансферазы (FucT) в указанном растении ряска или растительной клетке или клубеньке ряски, и в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность функционально связанна с промотором, который функционален в растительной клетке, указанная первая полинуклеотидная последовательность включается в 5'-3' направлении и функционально связывает:(a) introducing into said plant duckweed or a plant cell or duckweed nodule, a polynucleotide construct comprising a first polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of α1,3-fucosyl transferase (FucT) in said duckweed plant or plant cell or duckweed nodule, and in which said first polynucleotide sequence operably linked to a promoter that is functional in a plant cell, said first polynucleotide sequence included It is placed in the 5'-3 'direction and functionally connects:
(i) FucT прямой фрагмент, указанный FucT прямой фрагмент, включающий от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательностей с полинуклеотидной последовательностью от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2;(i) a FucT direct fragment, said FucT direct fragment comprising from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2;
(ii) спейсерную последовательность, включающую от около 200 до около 700 полинуклеотидов, непосредственно дальше от указанного FucT прямого фрагмента;(ii) a spacer sequence comprising from about 200 to about 700 polynucleotides, immediately further from said FucT direct fragment;
(iii) и FucT обратный фрагмент, указанный FucT обратный фрагмент, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным FucT прямым фрагментом, так, что указанная первая полинуклеотидная последовательность транскрибируется как РНК молекула, способная образовывать шпильковую РНК структуру; или(iii) and a FucT inverse fragment, said FucT inverse fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said FucT direct fragment, so that said first polynucleotide sequence is transcribed as an RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure; or
(i) смысловой полинуклеотидной последовательностью, включающей, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов, имеющих, по меньшей мере, 90% идентичности последовательностей с полинуклеотидной последовательностью из, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов из SEQ ID NO:1; и(i) a sense polynucleotide sequence comprising at least 19 adjacent polynucleotides having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of at least 19 neighboring polynucleotides from SEQ ID NO: 1; and
(ii) антисмысловой полинуклеотидной последовательностью, включающей, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов, имеющих, по меньшей мере, 90% идентичности последовательностей с комплементом полинуклеотидной последовательности, состоящей из, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов указанной смысловой полинукдеотидной последовательности; в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность транскрибирована как небольшая шпильковая РНК, имеющая длину стебля из спаренных оснований менее чем около 200 пар оснований; и(ii) an antisense polynucleotide sequence comprising at least 19 adjacent polynucleotides having at least 90% sequence identity with the complement of the polynucleotide sequence consisting of at least 19 neighboring polynucleotides of the indicated sense polynucleotide sequence; wherein said first polynucleotide sequence is transcribed as a small hairpin RNA having a stem length from paired bases of less than about 200 base pairs; and
(b) культивирование указанного растения ряски или растительной клетки или клубенька ряски при условиях, пригодных для экспрессия указанного гетерологичного полипептида.(b) cultivating said duckweed plant or plant cell or duckweed nodule under conditions suitable for expression of said heterologous polypeptide.
15. Способ изменения профиля N-гликозилирования гетерологичного полипептида, продуцированного в растении ряске или растительной клетке или клубеньке ряски, включающий:15. A method of changing the N-glycosylation profile of a heterologous polypeptide produced in a duckweed plant or plant cell or duckweed nodule, comprising:
(а) введение в указанное растение ряски или растительную клетку или клубенек ряски полинуклеотидной конструкции, включающей первую полинуклеотидную последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование β1,2-ксилозилтрансферазы (XyIT) в указанном растении ряске или растительной клетке или клубеньке ряски, и в котором указанная первая полинуклеотидная последовательность функционально связана с промотором, который является функциональным в растительной клетке, указанная первая полинуклеотидная последовательность, включающая в направлении 5'-3' и функционально связанная:(a) introducing into said plant duckweed or a plant cell or duckweed nodule of a polynucleotide construct comprising a first polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of β1,2-xylosyl transferase (XyIT) in said plant, duckweed or plant cell or duckweed nodule, and in which said first polynucleotide sequence is operably linked to a promoter that is functional in a plant cell, said first polynucleotide sequence NOSTA comprising in the 5'-3 'and operably linked:
(i) прямой фрагмент XyIT, указанный прямой фрагмент XyIT, включающий от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью, состоящей из от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов из SEQ ID NO:6 или SEQ ID NO:21;(i) a direct XyIT fragment, said direct XyIT fragment comprising from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence consisting of from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides of SEQ ID NO : 6 or SEQ ID NO: 21;
(ii) спейсерную последовательность, включающую от около 200 до около 700 полинуклеотидов, непосредственно ниже указанного прямого фрагмента XyIT;(ii) a spacer sequence comprising from about 200 to about 700 polynucleotides, immediately below said direct XyIT fragment;
(iii) обратный фрагмент XyIT, указанный обратный фрагмент XyIT, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным прямым фрагментом XyIT, так, что указанная первая полинуклеотидная последовательность транскрибируется как РНК RNA молекула, способная формировать шпильковую РНК структуру; или(iii) an inverse XyIT fragment, said inverse XyIT fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said direct XyIT fragment, such that said first polynucleotide sequence is transcribed as an RNA RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure; or
(i) смысловую полинуклеотидную последовательность, включающую, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью, состоящей, по меньшей мере, из 19 соседних полинуклеотидов из SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:19; и(i) a sense polynucleotide sequence comprising at least 19 adjacent polynucleotides having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence consisting of at least 19 neighboring polynucleotides of SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 19; and
(ii) антисмысловую полинуклеотидную последовательность, включающую, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с комплементом полинуклеотидной последовательности, состоящей из, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов указанной смысловой полинуклеотидной последовательности из вышеуказанного пункта(а); в котором указанная полинуклеотидная последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование указанного XyIT, транскрибирована как малая шпильковая РНК, имеющая стебель из спаренных оснований длиной менее около 200 пар оснований; и(ii) an antisense polynucleotide sequence comprising at least 19 adjacent polynucleotides, having at least 90% sequence identity with the complement of the polynucleotide sequence consisting of at least 19 neighboring polynucleotides of the indicated sense polynucleotide sequence from the above item ( but); wherein said polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of said XyIT is transcribed as a small hairpin RNA having a paired base stem less than about 200 base pairs in length; and
(b) культивирование указанного растения ряски или растительной клетки или клубенька ряски при условиях, пригодных для экспрессия указанного гетерологичного полипептида.(b) cultivating said duckweed plant or plant cell or duckweed nodule under conditions suitable for expression of said heterologous polypeptide.
16. Способ изменения профиля N-гликозилирования гетерологичного полипептида, продуцированного в растение ряску или растительную клетку или клубенек ряски, включающий:16. A method of changing the N-glycosylation profile of a heterologous polypeptide produced in a duckweed plant or plant cell or duckweed nodule, comprising:
(а) введение в указанное растение ряску или растительную клетку или клубенек ряски полинуклеотидной конструкции, включающей слитый полинуклеотид, который способен ингибировать экспрессию или функционирование α1,3-фукозилтрансферазы (FucT) и β1,2-ксилозилтрансферазы (XyIT) в указанном растении ряске или растительной клетке или клубеньке ряски, в котором указанный слитой полинуклеотид функционально связан с промотором, который функционален в растительной клетке, указанный слитой полинуклеотид, включающий в направлении 5'-3' и функционально связанный:(a) introducing into said plant duckweed or a plant cell or duckweed nodule of a polynucleotide construct comprising a fusion polynucleotide that is capable of inhibiting the expression or functioning of α1,3-fucosyl transferase (FucT) and β1,2-xylosyl transferase (XyIT) in said duckweed or plant a duckweed cell or nodule in which said fusion polynucleotide is operably linked to a promoter that is functional in a plant cell, said fusion polynucleotide including in the 5'-3 'direction and is operably linked busy:
(i) химерный прямой фрагмент, указанный химерный прямой фрагмент включающий или:(i) a chimeric direct fragment, the specified chimeric direct fragment comprising or:
(a) первый фрагмент, включающий от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью, включающей от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов полинуклеотида, кодирующего указанный FucT; и(a) a first fragment comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides of a polynucleotide encoding said FucT; and
(b) второй фрагмент, включающий от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов полинуклеотида, кодирующего указанный XyIT; или(b) a second fragment comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides of a polynucleotide encoding said XyIT; or
(a) первый фрагмент, включающий от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью, включающей от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов полинуклеотида, кодирующего указанный XyIT; и(a) a first fragment comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides of a polynucleotide encoding said XyIT; and
(b) второй фрагмент, включающий от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов полинуклеотида, кодирующего указанный FucT;(b) a second fragment comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides of a polynucleotide encoding said FucT;
(ii) спейсерную последовательность, включающую от около 200 до около 700 полинуклеотидов, непосредственно ниже указанного второго фрагмента указанного химерного прямого фрагмента;(ii) a spacer sequence comprising from about 200 to about 700 polynucleotides, immediately below said second fragment of said chimeric direct fragment;
(iii) и обратный фрагмент, указанный обратный фрагмент, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным химерным прямым фрагментом, так, что указанный слитой полинуклеотид транскрибируется как РНК молекула, способный формировать шпильковую РНК структуру; и(iii) and a reverse fragment, said reverse fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said chimeric direct fragment, such that said fusion polynucleotide is transcribed as an RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure; and
(b) культивирование указанного растения ряски или растительной клетки или клубенька ряски при условиях, пригодных для экспрессии указанного гетерологичного полипептида.(b) cultivating said duckweed plant or plant cell or duckweed nodule under conditions suitable for expression of said heterologous polypeptide.
17. Нуклеотидная конструкция, включающая первую полинуклеотидную последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование α1,3-фукозилтрансферазы (FucT) в растении, и вторую полинуклеотидную последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование β1,2-ксилозилтрансферазы (XyIT) в растении, в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность функционально связана с первым промотором, который функционален в растительной клетке, и в которой указанная вторая полинуклеотидная последовательность функционально связана со вторым промотором, который функционален в растительной клетке, в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность включает в направлении 5'-3' и функционально связана:17. A nucleotide construct comprising a first polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of α1,3-fucosyltransferase (FucT) in a plant, and a second polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of β1,2-xylosyltransferase (XyIT) in a plant, in wherein said first polynucleotide sequence is operably linked to a first promoter that is functional in a plant cell, and in which said second polynucleotide posi edovatelnost operably linked to a second promoter that is functional in a plant cell, wherein said first polynucleotide sequence comprising in the 5 'to 3' and operably linked to:
(a) FucT прямой фрагмент, указанный FucT прямой фрагмент, включающий от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов, имеющих, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов из SEQ ID NO:1 или SEQ ID NO:2;(a) a FucT direct fragment, said FucT direct fragment comprising from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides from SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2;
(b) спейсерную последовательность, включающую полинуклеотидный фрагмент последовательности, указанной в SEQ ID NO:1;(b) a spacer sequence comprising a polynucleotide fragment of the sequence indicated in SEQ ID NO: 1;
(c) и FucT обратный фрагмент, указанный FucT обратный фрагмент, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным FucT прямым фрагментом, так, что указанная первая полинуклеотидная последовательность транскрибируется как РНК молекула, способная формировать шпильковую РНК структуру; или(c) and a FucT inverse fragment, said FucT inverse fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said FucT direct fragment, such that said first polynucleotide sequence is transcribed as an RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure; or
(a) смысловую полинуклеотидную последовательность, включающую, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов из SEQ ID NO:1; и(a) a sense polynucleotide sequence comprising at least 19 neighboring polynucleotides having at least 90% sequence identity with the polynucleotide sequence of at least 19 neighboring polynucleotides from SEQ ID NO: 1; and
(b) антисмысловую полинуклеотидную последовательность, включающую, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с комплементом полинуклеотидной последовательность из, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов указанной смысловой полинуклеотидной последовательности; в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность транскрибируется как малая шпильковая РНК, имеющая стебель из спаренных оснований длиной менее около 200 пар оснований.(b) an antisense polynucleotide sequence comprising at least 19 adjacent polynucleotides having at least 90% sequence identity with the complement polynucleotide sequence of at least 19 neighboring polynucleotides of the indicated sense polynucleotide sequence; in which the specified first polynucleotide sequence is transcribed as a small hairpin RNA having a stalk of paired bases with a length of less than about 200 base pairs.
18. Нуклеотидная конструкция, включающая первую полинуклеотидную последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование α1,3-фукозилтрансферазы (FucT) в растении, и вторую полинуклеотидную последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование β1,2-ксилозилтрансферазы (XyIT) в растении, в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность функционально связана с первым промотором, который функционален в растительной клетке, и в которой указанная вторая полинуклеотидная последовательность функционально связана со вторым промотором, который функционален в растительной клетке, в которой указанная вторая полинуклеотидная последовательность включает в направлении 5'-3' и функционально связана или:18. A nucleotide construct comprising a first polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of α1,3-fucosyltransferase (FucT) in a plant, and a second polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of β1,2-xylosyltransferase (XyIT) in a plant, in wherein said first polynucleotide sequence is operably linked to a first promoter that is functional in a plant cell, and in which said second polynucleotide posi edovatelnost operably linked to a second promoter that is functional in a plant cell, wherein said second polynucleotide sequence comprises in the direction of 5 'to 3' and operably linked, or:
(a) XyIT прямой фрагмент, указанный XyIT прямой фрагмент, включающий от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов из SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:19 или SEQ ID NO:20;(a) an XyIT direct fragment, the indicated XyIT direct fragment comprising from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides from SEQ ID NO: 4 , SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 19 or SEQ ID NO: 20;
(b) спейсерной последовательности, включающей полинуклеотидный фрагмент последовательности, указанной в SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:19;(b) a spacer sequence comprising a polynucleotide fragment of the sequence indicated in SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 19;
(c) и XyIT обратный фрагмент, указанный XyIT обратный фрагмент, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным XyIT прямым фрагментом, так, что такая указанная вторая полинуклеотидная последовательность транскрибируется как РНК молекула, способная формировать шпильковую РНК структуру, или(c) and an XyIT inverse fragment, said XyIT inverse fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said XyIT direct fragment, such that said second polynucleotide sequence is transcribed as an RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure, or
(a) смысловую полинуклеотидную последовательность, включающую, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов, имеющая, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов из SEQ ID NO:4 или SEQ ID NO:19; и(a) a sense polynucleotide sequence comprising at least 19 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of at least 19 neighboring polynucleotides from SEQ ID NO: 4 or SEQ ID NO: 19; and
(b) антисмысловую полинуклеотидную последовательность, включающую, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов, имеющую, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с комплементом полинуклеотидной последовательности, состоящей из, по меньшей мере, 19 соседних полинуклеотидов указанной смысловой полинуклеотидной последовательности вышеуказанного пункта (а);(b) an antisense polynucleotide sequence comprising at least 19 adjacent polynucleotides, having at least 90% sequence identity with the complement of the polynucleotide sequence consisting of at least 19 neighboring polynucleotides of the indicated sense polynucleotide sequence of the above item (a );
где указанная вторая полинуклеотидная последовательность транскрибируется как малая шпильковая РНК, имеющая стебель из спаренных оснований длиной менее около 200 пар оснований.where the specified second polynucleotide sequence is transcribed as a small hairpin RNA having a stalk of paired bases with a length of less than about 200 base pairs.
19. Нуклеотидная конструкция, включающая слитой полинуклеотид, который способен ингибировать экспрессию или функционирование α1,3-фукозилтрансферазы (FucT) и β1,2-ксилозилтрансферазы (XyIT) в указанном растении ряске или растительной клетке или клубеньке ряски, в которой указанный слитой полинуклеотид функционально связан с промотором, который функционален в растительной клетке, указанный слитой полинуклеотид, включающий в направлении 5'-3' и функционально связанный:19. A nucleotide construct comprising a fusion polynucleotide that is capable of inhibiting the expression or functioning of α1,3-fucosyltransferase (FucT) and β1,2-xylosyltransferase (XyIT) in said duckweed plant or plant cell or duckweed nodule in which said fusion polynucleotide is functional with a promoter that is functional in the plant cell, the indicated fusion polynucleotide, including in the direction of 5'-3 'and functionally linked:
(a) химерный прямой фрагмент, указанный химерный прямой фрагмент, включающий:(a) a chimeric direct fragment, the specified chimeric direct fragment, including:
(i) первый фрагмент, включающий от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов из полинуклеотида, кодирующего указанный FucT; и(i) a first fragment comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides from a polynucleotide encoding said FucT; and
(ii) второй фрагмент, включающий от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательность из от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов из полинуклеотида, кодирующего указанный XyIT;(ii) a second fragment comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides from a polynucleotide encoding said XyIT;
(b) спейсерную последовательность включающую фрагмент указанного полинуклеотида, кодирующего указанный XyIT, указанный фрагмент состоит из от около 200 до около 700 полинуклеотидов в длину(b) a spacer sequence comprising a fragment of the specified polynucleotide encoding the specified XyIT, the specified fragment consists of from about 200 to about 700 polynucleotides in length
(c) и обратный фрагмент, указанный обратный фрагмент, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным химерным прямьм фрагментом, так, что указанный слитой полинуклеотид транскрибируется как РНК молекула, способная формировать шпильковую РНК структуру; или(c) and a reverse fragment, said reverse fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said chimeric straight fragment, such that said fused polynucleotide is transcribed as an RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure; or
(а) химерный прямой фрагмент, указанный химерный прямой фрагмент, включающий:(a) a chimeric direct fragment, the specified chimeric direct fragment, including:
(i) первый фрагмент, включающий от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов из полинуклеотида. кодирующего указанный XyIT; и(i) a first fragment comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides from the polynucleotide. encoding the specified XyIT; and
(ii) второй фрагмент, включающий от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательность из от около 500 до около 650 соседних полинуклеотидов из полинуклеотида, кодирующего указанный FucT;(ii) a second fragment comprising from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 650 neighboring polynucleotides from a polynucleotide encoding said FucT;
(b) спейсерную последовательность включающую фрагмент указанного полинуклеотида, кодирующего указанный XyIT, указанный фрагмент состоит из от около 200 до около 700 полинуклеотидов в длину(b) a spacer sequence comprising a fragment of the specified polynucleotide encoding the specified XyIT, the specified fragment consists of from about 200 to about 700 polynucleotides in length
(c) и обратный фрагмент, указанный обратный фрагмент, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным химерным прямым фрагментом, так, что указанный слитой полинуклеотид транскрибируется как РНК молекула, способная формировать шпильковую РНК структуру.(c) and a reverse fragment, said reverse fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said chimeric direct fragment, such that said fusion polynucleotide is transcribed as an RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure.
20. Нуклеотидная конструкция, включающая первую полинуклеотидную последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование α1,3-фукозилтрансферазы (FucT) в растении, в котором указанная первая полинуклеотидная последовательность включает в направлении 5'-3' и функционально связана:20. A nucleotide construct comprising a first polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of α1,3-fucosyltransferase (FucT) in a plant in which said first polynucleotide sequence comprises in the 5′-3 ′ direction and is operably linked:
(a) FucT прямой фрагмент, указанный FucT прямой фрагмент, включающий от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов полинуклеотида, кодирующего указанный FucT;(a) a FucT direct fragment, said FucT direct fragment comprising from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides of a polynucleotide encoding said FucT;
(b) спейсерную последовательность, включающую фрагмент указанного полинуклеотида, кодирующего указанный FucT, указанный фрагмент состоит из от около 200 до около 700 полинуклеотидов в длину; и(b) a spacer sequence comprising a fragment of said polynucleotide encoding said FucT, said fragment consisting of about 200 to about 700 polynucleotides in length; and
(c) и FucT обратный фрагмент, указанный FucT обратный фрагмент, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным FucT прямым фрагментом, так, что указанная первая полинуклеотидная последовательность транскрибируется как РНК молекула, способная формировать шпильковую РНК структуру; в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность функционально связана с промотором, который функционален в растительной клетке.(c) and a FucT inverse fragment, said FucT inverse fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said FucT direct fragment, such that said first polynucleotide sequence is transcribed as an RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure; wherein said first polynucleotide sequence is operably linked to a promoter that is functional in a plant cell.
21. Нуклеотидная конструкция, включающая первую полинуклеотидную последовательность, которая способна ингибировать экспрессию или функционирование β1,2-ксилозилтрансферазы (XyIT) в растении, в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность включает в направлении 5'-3' и функционально связана:21. A nucleotide construct comprising a first polynucleotide sequence that is capable of inhibiting the expression or functioning of β1,2-xylosyltransferase (XyIT) in a plant in which said first polynucleotide sequence includes in the 5'-3 'direction and is operably linked:
(a) XyIT прямой фрагмент, указанный ХуIT прямой фрагмент, включающий от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов, имеющий, по меньшей мере, 90% идентичности последовательности с полинуклеотидной последовательностью из от около 500 до около 800 соседних полинуклеотидов полинуклеотида, кодирующего указанный XyIT;(a) an XyIT direct fragment, an XyIT direct fragment comprising from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides, having at least 90% sequence identity with a polynucleotide sequence of from about 500 to about 800 neighboring polynucleotides of a polynucleotide encoding said XyIT;
(b) спейсерную последовательность, включающую фрагмент указанного полинуклеотида, кодирующего указанный XyIT, указанный фрагмент состоит из от около 200 до около 700 полинуклеотидов в длину; и(b) a spacer sequence comprising a fragment of said polynucleotide encoding said XyIT, said fragment consisting of about 200 to about 700 polynucleotides in length; and
(c) и XyIT обратный фрагмент, указанный XyIT обратный фрагмент, имеющий достаточную длину и достаточную комплементарность с указанным XyIT прямым фрагментом, так, что указанная первая полинуклеотидная последовательность транскрибируется как РНК молекула, способная формировать шпильковую РНК структуру; в которой указанная первая полинуклеотидная последовательность функционально связана с промотором, который функционален в растительной клетке.(c) and an XyIT inverse fragment, said XyIT inverse fragment having sufficient length and sufficient complementarity with said XyIT direct fragment, such that said first polynucleotide sequence is transcribed as an RNA molecule capable of forming a hairpin RNA structure; wherein said first polynucleotide sequence is operably linked to a promoter that is functional in a plant cell.
22. Нуклеотидная конструкция по любому из пп.17-21, дополнительно включающая, по меньшей мере, один полинуклеотид, кодирующий представляющий интерес полипептид, в которой указанный полинуклеотид, кодирующий указанный полипептид, представляющий интерес, функционально связан с промотором, который функционален в растительной клетке.22. The nucleotide construct according to any one of claims 17 to 21, further comprising at least one polynucleotide encoding a polypeptide of interest, wherein said polynucleotide encoding said polypeptide of interest is operably linked to a promoter that is functional in a plant cell .
23. Способ стабильного трансформирования высшего растения для экспрессирования гетерологичного полипептида, представляющего интерес, имеющего измененный профиль N-гликозилирования, включающий введение в указанное высшее растение нуклеотидной конструкция по п.22.23. A method for stably transforming a higher plant to express a heterologous polypeptide of interest, having an altered N-glycosylation profile, comprising introducing the nucleotide construct of claim 22 into the higher plant.
24. Способ получения гетерологичного гликопротеина млекопитающих в высшем растении, в котором указанный гетерологичный гликопротеин млекопитающих имеет снижение прикрепления α1,3-фукозных остатков и β1,2-ксилозных остатков к N-гликанам указанного гликопротеина, когда продуцируется в указанном высшем растении, включающий:24. A method of producing a mammalian heterologous glycoprotein in a higher plant, wherein said mammalian heterologous glycoprotein has a decrease in the attachment of α1,3-fucose residues and β1,2-xylose residues to the N-glycans of said glycoprotein when produced in said higher plant, comprising:
(a) введение в указанное растение экспрессионной кассеты, включающей последовательность, кодирующую полипептид млекопитающих, который посттрансляционно образован как указанный гликопротеин, и полинуклеотид, включающий нуклеотидную конструкцию по любому из пп.17-19; и(a) introducing into said plant an expression cassette comprising a sequence encoding a mammalian polypeptide that is post-translationally formed as said glycoprotein, and a polynucleotide comprising the nucleotide construct according to any one of claims 17-19; and
(b) культивирование указанного растения при условиях, пригодных для экспрессии указанного гликопротеина.(b) culturing said plant under conditions suitable for expression of said glycoprotein.
25. Способ снижения гетерогенности профиля N-гликозилирования гликопротеина, продуцированного в высшем растении, включающий введение в указанное растение нуклеотидной конструкции по любому из пп.17-21, и культивирование указанного растения при условиях, пригодных для экспрессии указанного гликопротеина.25. A method of reducing the heterogeneity of the N-glycosylation profile of a glycoprotein produced in a higher plant, comprising introducing into the said plant a nucleotide construct according to any one of claims 17-21, and culturing said plant under conditions suitable for expression of said glycoprotein.
26. Способ снижения одного или более побочных эффектов, связанных с активацией комплемента при введении антитела, включающий введение указанного антитела в форме в основном гомогенной антительной композиции, в которой, по меньшей мере, 90% указанного антитела, присутствующего в композиции, представлено GO-гликоформой, указанная композиция, включающая небольшое количество указанного антитела, представленного предшественником гликоформы, в котором указанное антитело в указанной композиции снижает активность комплементзависимой цитотоксичности (CDC).26. A method of reducing one or more side effects associated with complement activation upon administration of an antibody, comprising administering said antibody in the form of a substantially homogeneous antibody composition in which at least 90% of said antibody present in the composition is represented by GO-glycoform , said composition comprising a small amount of said antibody represented by a glycoform precursor, wherein said antibody in said composition reduces the activity of a complement dependent cytotox chnosti (CDC).
27. Способ по п.26, в котором указанное антитело является моноклональным антителом.27. The method of claim 26, wherein said antibody is a monoclonal antibody.
28. Способ по п.27, в котором указанное моноклональное антитело связывает CD20 антиген.28. The method of claim 27, wherein said monoclonal antibody binds a CD20 antigen.
29. Способ по любому из пп.26-28, в котором указанное антитело проявляет повышенное сродство к связыванию для FcγRIII.29. The method according to any one of claims 26 to 28, wherein said antibody exhibits increased binding affinity for FcγRIII.
30. Композиция, включающая гликопротеин, полученный в соответствии со способом по любому из пп.24 и 25.
30. A composition comprising a glycoprotein obtained in accordance with the method according to any one of paragraphs.24 and 25.