JPWO2005053742A1 - Pharmaceutical comprising the antibody compositions - Google Patents

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研也 設楽
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倫平 丹羽
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Abstract

本発明は抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを組み合わせてなる医薬を提供する。 The present invention is of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% in the antibody composition is more, a pharmaceutical comprising a combination of at least one agent.

Description

本発明は抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを組み合わせてなる医薬に関する。 The present invention is of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% in the antibody composition is more, it relates to a pharmaceutical comprising a combination of at least one agent.

抗体依存性細胞障害活性(以下、ADCC活性と略記する)は、NK細胞、単球・マクロファージ、顆粒球など、エフェクター細胞と呼ばれる細胞集団に発現するFcγ受容体に、抗体のFc領域が結合することにより起こる。 Antibody-dependent cellular cytotoxicity (hereinafter, abbreviated as ADCC activity), NK cells, monocytes, macrophages, granulocytes, etc., to the Fcγ receptors expressed on the cell population, referred to as effector cells, binds the Fc region of an antibody caused by it. NK細胞は細胞上のFcγ受容体の一種FcγRIIIaを介して強いADCC活性を誘導する。 NK cells induce strong ADCC activity through a kind FcγRIIIa of Fcγ receptors on cells. FcγRIIIa遺伝子は158番目のアミノ酸に機能的な遺伝子多型が存在し、158番目のアミノ酸がValine(以下Valと称する)のFcγRIIIaはPhenylalanine(以下Pheと称する)のFcγRIIIaよりも強いADCC活性を誘導する[ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション(J.Clin.Invest.),100,1059−1070(1997)]。 FcγRIIIa gene exists functional gene polymorphism 158 amino acids, 158 amino acids is FcγRIIIa of Valine (hereinafter referred to as Val) induces strong ADCC activity than FcγRIIIa of Phenylalanine (hereinafter referred to as Phe) [journal of Clinical Investigations Institute interrogation (J.Clin.Invest.), 100,1059-1070 (1997)]. 近年Val/Valの遺伝子型を有する患者において、その他の遺伝子型の患者よりもRituxanの臨床効果が有意に高いことが示されており[ブラッド(blood),99,754−758(2002)、アースライティス・アンド・リューマティズム(Arthritis Reum.),48,455−459(2003)]、ヒトIgG1サブクラスの抗体医薬の臨床効果にADCC活性が重要な役割を果たすことが示唆されている。 In patients with genotype recent Val / Val, clinical effects of Rituxan than patients other genotypes have been shown to be significantly higher [Blood (blood), 99,754-758 (2002), ground Raitisu and Liu Matti prism (Arthritis Reum.), 48,455-459 (2003)], ADCC activity clinical efficacy of human IgG1 subclass antibodies pharmaceutical have been suggested to play an important role.
抗体などの糖タンパク質の糖鎖は、タンパク質部分との結合様式により、アスパラギンと結合する糖鎖(N−グリコシド結合糖鎖)とセリン、スレオニンなどと結合する糖鎖(O−グリコシル結合糖鎖)の2種類に大別される。 Sugar chain of glycoproteins, such as antibodies, binding style with the protein moiety, a sugar chain which binds carbohydrate which binds to asparagine and (N- glycoside-linked sugar chain) serine, threonine and (O-glycosyl-linked sugar chain) It is roughly classified into two types of. N−グリコシド結合糖鎖は、以下の構造式(I)に示す基本となる共通のコア構造を有する[生物化学実験法23−糖蛋白質糖鎖研究法(学会出版センター)高橋禮子編(1989年)]。 N- glycoside-linked sugar chain, the following structural formula have a common core structure underlying shown in (I) [Biochemical Experimental Methods 23-glycoprotein sugar chain research methods (Gakkai Shuppan Center) Reiko Takahashi eds (1989 )].
上記構造式(I)において、GlcNAcはN−アセチルグルコサミン、Manはマンノースを示す。 In the structural formula (I), GlcNAc is N- acetylglucosamine, Man represents mannose. またアスパラギンと結合する糖鎖の末端を還元末端、反対側を非還元末端という。 The reducing end terminus of the sugar chain which binds to asparagine, opposite that non-reducing end.
抗体分子は重鎖と軽鎖が2分子ずつ会合した4量体として構成される。 Antibody molecule is configured as tetramer heavy and light chains are associated two by two molecules. IgG1型ヒト抗体は、重鎖のFc領域中に存在するN末端から297番目のアスパラギンに上記のコア構造を有する糖鎖が結合している。 IgG1 type human antibody, a sugar chain having a 297 th of the core structure to asparagine from the N-terminus present in the heavy chain Fc region is attached. このコア構造にさらに非還元末端側にN−アセチルグルコサミン、ガラクトース、シアル酸、還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースがそれぞれ付加する可能性があるが、通常これらの成分は均一ではなく、抗体を生産する細胞によって変化する[トレンズ・イン・バイオテクノロジー(Trends Biotechnol.),15,26−32(l997)]。 Further the non-reducing end side to N- acetylglucosamine in the core structure, galactose, sialic acid, fucose to 6-position of the N- acetylglucosamine in the reducing terminal is likely to be added respectively, the normal of these components is not uniform , it varies with cells which produce antibody [Trends-in biotechnology (Trends Biotechnol.), 15,26-32 (l997)]. ヒトIgG1のADCC活性は、この糖鎖中のガラクトース[ヒューマン・アンティボディズ・アンド・ハイブリドーマズ(Hum Antibodies Hybridomas),5,143−151(1994)、ヒューマン・アンティボディズ・アンド・ハイブリドーマズ(Hum Antibodies Hybridomas),6,82−88(1995)]、N−アセチルグルコサミン[ネイチャー・バイオテクノロジー(Nat.Biotechnol.),17,176−180,(1999)、バイオテクノロジー・アンド・バイオエンジニアリング(Biotechnol.Bioeng.),74,288−294,(2001)]、フコース[ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biol.Ch ADCC activity of human IgG1 is, galactose of this in the sugar chain [Human ante body's and hybridoma's (Hum Antibodies Hybridomas), 5,143-151 (1994), Human ante body's and hybridoma's ( Hum Antibodies Hybridomas), 6,82-88 (1995)], N- acetylglucosamine [Nature biotechnology (Nat.Biotechnol.), 17,176-180, (1999), biotechnology and Bioengineering (Biotechnol .Bioeng.), 74,288-294, (2001)], fucose [journal of biological chemistry (J.Biol.Ch em.),277,26733−26740(2002)、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biol.Chem.),278,3466−3473(2003)]の含有量に影響を受けることが報告されている。 em.), 277,26733-26740 (2002), Journal of Biological Chemistry (J.Biol.Chem.), are reported to be affected by the content of 278,3466-3473 (2003)] ing. 中でも最も影響が大きいのはフコースであり、還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースが付加した糖鎖の割合が少ないヒトIgG1型の抗体はADCC活性を顕著に増強する[ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biol.Chem.),277,26733−26740(2002)、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biol.Chem.),278,3466−3473(2003)]。 Among them the most impact greater fucose, 6-position of the ratio is less human IgG1 type of sugar chains in which fucose is added to an antibody of N- acetylglucosamine in the reducing end significantly enhances ADCC activity [Journal of biological chemistry (J.Biol.Chem.), 277,26733-26740 (2002), journal of biological chemistry (J.Biol.Chem.), 278,3466-3473 (2003)]. しかしこれらの報告はいずれも抗体単独でのADCC活性であり、他の薬剤によってフコースの量が少ないヒトIgG1型の抗体のADCC活性がさらに増強するかどうかは知られていない。 However, these reports are ADCC activity of either antibody alone is not known whether ADCC activity of the small amount human IgG1 type fucose by other drugs antibody further enhanced.
一方ADCC活性はエフェクター細胞を刺激するサイトカインによって上昇することが知られている。 Meanwhile ADCC activity is known to be increased by cytokines that stimulate effector cells. 例えばインターロイキン(以下IL)−2[キャンサー・イムノロジー・イムノセラピー(Cancer Immunol.Immunother.),46,213(1998)、キャンサー・イムノロジー・イムノセラピー(Cancer Immunol.Immunother.),51,171(2002)、ブラッド(Blood),93,3922(1999)、ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・キャンサー・リサーチ(Jpn.J.Cancer Res.),87,497(1996)]、IL−12[ブラッド(Blood),93,3922(1999)、ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・キャンサー・リサーチ(Jpn.J.Cancer Res.),87,497(1996)]、IL−15[ブラッド(Blo Such as interleukin (hereinafter IL) -2 [Cancer Immunology Immuno Therapy (Cancer Immunol.Immunother.), 46,213 (1998), Cancer Immunol Immuno Therapy (Cancer Immunol.Immunother.), 51,171 (2002 ), Brad (Blood), 93,3922 (1999), Japanese journal of Cancer research (Jpn.J.Cancer Res.), 87,497 (1996)], IL-12 [Blood (Blood), 93,3922 (1999), Japanese journal of Cancer research (Jpn.J.Cancer Res.), 87,497 (1996)], IL-15 [Brad (Blo od),93,3922(1999)、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディスン(J.Exp.Med),180,1395(1994)]、インターフェロン(以下IFN)−α[キャンサー・イムノロジー・イムノセラピー(Cancer Immunol.Immunother.),46,213(1998)、キャンサー・イムノロジー・イムノセラピー(Cancer Immunol.Immunother.),51,171(2002)]、IFN−γ[キャンサー・イムノロジー・イムノセラピー(Cancer Immunol.Immunother.),46,213(1998)、キャンサー・イムノロジー・イムノセラピー(Cancer Immunol.Immunother.),51,171 od), 93,3922 (1999), Journal of Experimental Medicine (J.Exp.Med), 180,1395 (1994)], interferon (hereinafter referred to as IFN) -α [Cancer Immunology Immuno Therapy ( Cancer Immunol.Immunother.), 46,213 (1998), Cancer Immunol immuno Therapy (Cancer Immunol.Immunother.), 51,171 (2002)], IFN-γ [Cancer Immunology immuno Therapy (Cancer Immunol. Immunother.), 46,213 (1998), Cancer Immunology immuno Therapy (Cancer Immunol.Immunother.), 51,171 2002)、ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・キャンサー・リサーチ(Jpn.J.Cancer Res.),87,497(1996)]、マクロファージ−コロニー刺激因子(以下M−CSF)[キャンサー・イムノロジー・イムノセラピー(Cancer Immunol.Immunother.),46,213(1998)、ブラッド(Blood),93,3922(1999)、ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・キャンサー・リサーチ(Jpn.J.Cancer Res.),87,497(1996)、ジャパニーズ・ジャーナル・オブ・キャンサー・リサーチ(Jpn.J.Cancer Res.),81,79(1990)]等、様々なサイトカインをエフェクター細胞にin vitroで加えて刺激すること 2002), Japanese Journal of Cancer Research (Jpn.J.Cancer Res), 87,497 (1996)], macrophage -. Colony-stimulating factor (hereinafter referred to as M-CSF) [Cancer Immunology Immuno Therapy (Cancer Immunol.Immunother.), 46,213 (1998), Blood (Blood), 93,3922 (1999), Japanese journal of Cancer research (Jpn.J.Cancer Res.), 87,497 (1996) , Japanese journal of Cancer research (Jpn.J.Cancer Res.), 81,79 ( 1990)] , etc., to stimulate added in in vitro a variety of cytokines in effector cells より、ADCC活性を上昇させることが知られている。 More, it is known to increase the ADCC activity.
化学療法剤のような低分子の薬剤がin vitroのADCC活性を増強することは知られていないが、化学療法と抗体との併用により優れた治療効果が得られることが知られている。 The drug of the low molecules such as chemotherapeutic agents to enhance the ADCC activity of the in vitro is unknown, superior therapeutic effect by combination of chemotherapy and antibody are known to be obtained. 抗HER2/neuヒト化抗体rhuMAb HER2(Herceptin、Roche社)はtaxane系抗癌剤との併用療法により乳癌に対して顕著な効果を示すことが知られている[Clinical Therapeutics,21,309(1999)]。 Anti HER2 / neu humanized antibody rhuMAb HER2 (Herceptin, Roche Inc.) is known to exhibit a remarkable effect against breast cancer by combination therapy with taxane-based anticancer agent [Clinical Therapeutics, 21,309 (1999)] . また、抗CD20ヒト型キメラ抗体IDEC−C2B8(Rituxan、IDEC社)は多剤療法との併用療法によりB細胞リンパ腫に対して顕著な効果を示すことが知られている[J. Moreover, anti-CD20 human chimeric antibody IDEC-C2B8 (Rituxan, IDEC, Inc.) is known to exhibit a marked effect on B-cell lymphoma by combination therapy with multiple drug therapy [J. Clin. Clin. Oncol. Oncol. ,17,268(1999)]。 , 17,268 (1999)].

本発明の目的は、高い治療効果を有する抗体組成物と少なくとも1種類の薬剤とを用いる医薬を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a medicament using an antibody composition having a high therapeutic effect and at least one agent.
本発明は、以下の(1)〜(14)に関する。 The present invention relates to the following (1) to (14).
(1) 抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを組み合わせてなる医薬。 (1) of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% in the antibody composition is more, a pharmaceutical including a combination of at least one agent.
(2) 抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを併用して投与するための医薬。 (2) of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% an antibody composition is at least, a medicament for administration in combination with at least one agent.
(3) 抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを同時に又は逐次的に投与するための医薬。 (3) Of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% in the antibody composition is greater, at least one agent at the same time or sequentially medicament for administration.
(4) 抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物を単独で投与した場合よりも、高い治療効果を示すことを特徴とする、上記(1)〜(3)のいずれか1項に記載の医薬。 (4) of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% than when administered in the antibody composition alone is more, high to exhibit a therapeutic effect and wherein said (1) to medicament according to any one of (3).
(5) 高い治療効果を示すことが、高い抗体依存性細胞障害活性を示すことである、上記(4)記載の医薬。 (5) high to exhibit therapeutic effect, it is to show high antibody-dependent cellular cytotoxicity, above (4) The medicament according.
(6) 抗体組成物が、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性を有する細胞から生産される抗体組成物である上記(1)〜(5)のいずれか1項に記載の医薬。 (6) an antibody composition is produced from the cells to 6-position 1-position of fucose N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine is resistant to a lectin which recognizes the bound sugar chain structure α the medicament according to that any one of the above is an antibody composition (1) to (5).
(7) 抗体組成物が、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖である抗体組成物である、上記(1)〜(6)のいずれか1項に記載の医薬。 (7) a sugar chain antibody composition, not of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, bound fucose to N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar it is an antibody composition is, (1) to medicament according to any one of (6).
(8) フコースが結合していない糖鎖が、該フコースの1位がN−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にα結合していない糖鎖である、上記(1)〜(7)のいずれか1項に記載の医薬。 (8) sugar chains in which fucose is not bound is a sugar chain not linked α to the 6-position of the 1-position is N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine of the fucose, the ( 1) the medicament according to any one of (1) to (7).
(9) 抗体組成物が、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素のゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞から生産された抗体組成物である、上記(7)または(8)記載の医薬。 (9) cell antibody composition, to the genome of the enzymes involved in sugar chain modification in which 1-position of fucose is bound α to the 6-position of the N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine is knocked out it is an antibody composition produced from the above (7) or (8) the medicament according.
(10) N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素が、α1,6−フコシルトランスフェラーゼである上記(9)記載の医薬。 (10) an enzyme which 1-position of fucose to 6-position of the N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine are involved in glycosylation of binding α is a α1,6- fucosyltransferase (9 ) the medicament according.
(11) 薬剤が、蛋白質、低分子の薬剤および生物学的応答調節剤からなる群から選ばれる物質である上記(1)〜(10)のいずれか1項に記載の医薬。 (11) drugs, proteins, medicament according to any one of the above is a material selected from the group consisting of drugs and biological response modifiers of the low molecular (1) to (10).
(12) 蛋白質が、サイトカインまたは抗体である、上記(11)記載の医薬。 (12) protein is a cytokine or an antibody, (11) The medicament according.
(13) サイトカインが、IFN−γ、IL−2およびIL−15から選ばれるサイトカインである上記(12)に記載の医薬。 (13) cytokine, IFN-gamma, the pharmaceutical according to (12) is a cytokine selected from IL-2 and IL-15.
(14) 医薬が、腫瘍を伴う疾患に対する治療薬である、上記(1)〜(13)のいずれか1項に記載の医薬。 (14) the pharmaceutical is a therapeutic agent for diseases accompanied by tumors, (1) to medicament according to any one of (13).
本発明の医薬の形態としては、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを組み合わせてなる医薬、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを併用して投与するための医薬、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上であ The form of the medicament of the present invention, among the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, which fucose is not bound to N- acetylglucosamine in the reducing end in the sugar chains sugar antibody composition ratio of the chain is 50% or more, at least one pharmaceutical comprising a combination of drugs, among the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, antibody composition ratio of sugar chains is 50% or more of fucose to N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound, a medicament for administration in combination with at least one agent, antibody compositions der of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% or more contained in the 抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを同時に又は逐次的に投与するための医薬があげられる。 An antibody composition, a medicament for administration of at least one agent at the same time or sequentially and the like.
ここで、組み合わせてなる医薬とは、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを別々に調製し、これらの薬剤を組み合わせて同時にまたは逐次的に投与する医薬であってもよいし、それぞれの薬剤成分を混合させた合剤であってもよい。 Here, the medicine comprising a combination, of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, which fucose is not bound to N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar antibody composition ratio of sugar chains is 50% or more, separately prepared and at least one agent, in combination these agents may be a medicament for administration simultaneously or sequentially, each a mixture obtained by mixing the drug ingredients may be. それぞれの薬剤成分を混合させた合剤には、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物に少なくとも1種類の薬剤を結合させた融合抗体なども包含する。 Each drug ingredient mixture obtained by mixing, of all N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, fucose bound to N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar ratio of to no sugar chains also encompasses such as at least one agent fusion antibody conjugated to an antibody composition is 50% or more.
本発明において、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合とは、該組成物中に含まれるFc領域に結合する全てのN−グリコシド結合複合型糖鎖の合計数に対して、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の数が占める割合をいう。 In the present invention, among the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of sugar chains in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound , the number of all the total number of N- glycoside-linked complex-type oligosaccharide, which fucose is not bound to N- acetylglucosamine in the reducing end in the sugar chains sugar chain bound to the Fc region contained in the composition It refers to the percentage of occupied. 糖鎖の割合は、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合していない糖鎖の割合が好ましい。 Ratio of sugar chains, the ratio of a sugar chain in which the 6-position of N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar 1-position of fucose is not bound α is preferred.
本発明においで、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖とは、該フコースが、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにα結合していない糖鎖をいい、具体的には、該フコースの1位がN−グリコシド結合複合型糖鎖のN−アセチルグルコサミンの6位にα結合していない糖鎖があげられる。 Come to the invention, the sugar chain in which fucose is not bound to N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine, the fucose, N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetyl It means a sugar chain that is not bound α glucosamine, specifically, a sugar chain is not bound α to the 6-position of the 1-position is N- glycoside-linked complex type oligosaccharides N- acetylglucosamine of the fucose and the like .
本発明における抗体組成物としては、N−グリコシド結合複合型糖鎖をFc領域に有する抗体分子を含有してなる組成物であればいかなるものも包含される。 The antibody compositions of the present invention, are also included any substance so long as it is a composition comprising an antibody molecule having a N- glycoside-linked complex-type oligosaccharide in the Fc region.
抗体分子とは、重鎖および軽鎖(以下、それぞれH鎖およびL鎖と表記する)の2種類のポリペプチド鎖がそれぞれ2分子ずつ会合した4量体である。 The antibody molecule heavy and light chain (hereinafter, respectively referred to as H and L chain) a tetramer of two polypeptide chains associated by two molecules each. H鎖のN末端側の約4分の1とL鎖のN末端側の約2分の1(それぞれ100余アミノ酸)はV領域と呼ばれ、多様性に富み、抗原との結合に直接関与する。 About one-half of the N-terminal side of about a quarter of the L chain of the N-terminal side of H chain (more than 100 amino acids, respectively) is referred to as V region, rich in diversity, directly involved in binding to antigen to. V領域以外の部分の大半はC領域と呼ばれる。 The majority of the parts other than the V region is referred to as the C area. 抗体分子はC領域の相同性によりIgG、IgM、IgA、IgD、IgEの各クラスに分類される。 The antibody molecule IgG by homology in the C area, IgM, IgA, IgD, are classified into each class of IgE.
またIgGクラスはC領域の相同性により、さらにIgG1〜IgG4のサブクラスに分類される。 The IgG class by homology C region, are further classified into subclasses IgG1~IgG4.
H鎖はN末端側よりVH、CH1、CH2、CH3の4つのイムノグロブリンドメインに分かれ、CH1とCH2の間にはヒンジ領域と呼ばれる可動性の高いペプチド領域があり、CH1とCH2とが区切られる。 H chains were divided into four immunoglobulin domains VH from the N-terminus side, CH1, CH2, CH3, there is a highly flexible peptide region called hinge region between CH1 and CH2, separated and the CH1 and CH2 . ヒンジ領域以降のCH2とCH3からなる構造単位はFc領域と呼ばれ、N−グリコシド結合型糖鎖が結合している。 A structural unit comprising CH2 and CH3 after the hinge region is called Fc region, N- glycoside-linked sugar chain is attached. また、この領域は、Fcレセプター、補体などが結合する領域である(免疫学イラストレイテッド原書第5版、2000年2月10日発行、南江堂版、抗体工学入門、1994年1月25日初版、地人書館)。 In addition, this area is, Fc receptor, such as complement is the region that binds (Immunology Illustrated Ted original book 5th edition, issued Feb. 10, 2000, Nankodo edition, antibody engineering Introduction, January 25, 1994 first edition, lysophosphatidic Shokan).
抗体などの糖蛋白質の糖鎖は、蛋白質部分との結合様式により、アスパラギンと結合する糖鎖(N−グリコシド結合糖鎖)とセリン、スレオニンなどと結合する糖鎖(O−グリコシル結合糖鎖)の2種類に大別される。 Sugar chain of a glycoprotein such as an antibody, the binding mode of the protein portion, the sugar chain binding sugar chain which binds to asparagine and (N- glycoside-linked sugar chain) serine, threonine and (O-glycosyl-linked sugar chain) It is roughly classified into two types of. N−グリコシド結合糖鎖は、以下の構造式(I)に示す基本となる共通のコア構造を有する[生物化学実験法23−糖蛋白質糖鎖研究法(学会出版センター)高橋禮子編(1989年)]。 N- glycoside-linked sugar chain, the following structural formula have a common core structure underlying shown in (I) [Biochemical Experimental Methods 23-glycoprotein sugar chain research methods (Gakkai Shuppan Center) Reiko Takahashi eds (1989 )].
上記構造式(I)において、アスパラギンと結合する糖鎖の末端を還元末端、反対側を非還元末端という。 In the above structural formula (I), the end of the sugar chain which binds to asparagine reducing end, the opposite side of the non-reducing end.
N−グリコシド結合糖鎖としては、上記構造式(I)のコア構造を有するものであればいかなるものでもよいが、コア構造の非還元末端にマンノースのみが結合するハイマンノース型、コア構造の非還元末端側にガラクトース−N−アセチルグルコサミン(以下、Gal−GlcNAcと表記する)の枝を並行して1ないしは複数本有し、更にGal−GlcNAcの非還元末端側にシアル酸、バイセクティングのN−アセチルグルコサミンなどの構造を有するコンプレックス型(複合型)、コア構造の非還元末端側にハイマンノース型とコンプレックス型の両方の枝を持つハイブリッド型などがあげられる。 The N- glycoside-linked sugar chain may be any as long as it has a core structure of the structural formula (I), but HMT only mannose to the non-reducing end of the core structure are bonded, a non-core structure galactose -N- acetylglucosamine at the reducing end side (hereinafter, Gal-GlcNAc denoted to) branches has one or a plurality of parallel, more sialic acid to the non-reducing terminal side of Gal-GlcNAc, bisecting N - complex type having a structure such as acetyl glucosamine (composite), a hybrid type and the like having a non-reducing terminal branches of both of the high mannose type and complex type of core structure.
抗体分子のFc領域には、N−グリコシド結合糖鎖が1カ所ずつ結合する領域を有しているので、抗体1分子あたり2本の糖鎖が結合している。 The Fc region of an antibody molecule, N- since glycoside-linked sugar chains have a region that binds one by one place, antibody 1 two sugar chains per molecule is attached. 抗体分子に結合するN−グルコシド結合糖鎖としては、前記構造式(I)で示されるコア構造を含むいかなる糖鎖も包含されるので、抗体に結合する2本のN−グルコシド結合糖鎖には多数の糖鎖の組み合わせが存在することになる。 The N- glycoside-linked sugar chains which bind to the antibody molecule, since any sugar chain comprising the core structure represented by the structural formula (I) are included, the two N- glycoside-linked sugar chains bound to the antibody It will be a combination of a number of sugar chains present.
したがって、本発明における抗体組成物は、本発明の効果が得られる範囲であれば、単一の糖鎖構造を有する抗体分子から構成されていてもよいし、複数の異なる糖鎖構造を有する抗体分子から構成されていてもよい。 Accordingly, antibody compositions of the present invention, as long as the effects of the present invention is obtained, it may be composed of an antibody molecule having a single sugar chain structure, an antibody having a plurality of different carbohydrate structures it may be configured from a molecule.
抗体分子としては、抗体のFc領域を含む分子であればいかなる分子も包含される。 As the antibody molecule, any molecule are also encompassed as long as the molecule comprising an Fc region of an antibody. 具体的には、抗体、抗体の断片、Fc領域を含む融合蛋白質などがあげられる。 Specifically, antibodies, fragments of antibodies, and fusion proteins comprising an Fc region thereof.
抗体としては、動物に抗原を免疫し、免疫動物の脾臓細胞より作製したハイブリドーマ細胞が分泌する抗体、遺伝子組換え技術により作製された抗体、すなわち、抗体遺伝子を挿入した抗体発現ベクターを、宿主細胞へ導入することにより取得された抗体などがあげられる。 Antibodies were immunized animals with antigens, antibodies hybridoma cell prepared from a spleen cell of the immunized animal to secrete, antibody produced by gene recombination technology, i.e., an antibody expression vector by inserting an antibody gene, a host cell such as an antibody which has been obtained by the introduction to, and the like. 具体的には、ハイブリドーマが生産する抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体などをあげることができる。 Specifically, mention may be made of an antibody produced by a hybridoma, a humanized antibody, a human antibody and the like.
ハイブリドーマは、ヒト以外の哺乳動物に抗原を免疫して取得されたB細胞と、マウス、ラット等に由来するミエローマ細胞とを細胞融合させて得られる、所望の抗原特異性を有したモノクローナル抗体を生産する細胞をいう。 Hybridomas, and B cells obtained by immunizing antigen to a mammal other than a human, a mouse, and a myeloma cell derived from a rat or the like obtained by cell fusion, a monoclonal antibody having a desired antigen specificity It refers to the production to cell.
ヒト化抗体としては、ヒト型キメラ抗体、ヒト型CDR移植抗体などがあげられる。 The humanized antibody includes a human chimeric antibody, a human CDR-grafted antibody.
ヒト型キメラ抗体は、ヒト以外の動物の抗体H鎖V領域(以下、HVまたはVHとも称す)および抗体L鎖V領域(以下、LVまたはVLとも称す)とヒト抗体のH鎖C領域(以下、CHとも称す)およびヒト抗体のL鎖C領域(以下、CLとも称す)とからなる抗体をいう。 Human chimeric antibodies, non-human animal antibody H chain V region (hereinafter also referred to as HV or VH) and an antibody L chain V region (hereinafter also referred to as LV or VL) and the human antibody H chain C region (hereinafter also referred to as CH) and the human antibody L chain C region (hereinafter, refers to an antibody comprised of also referred) and CL. ヒト以外の動物としては、マウス、ラット、ハムスター、ラビット等、ハイブリドーマを作製することが可能であれば、いかなるものも用いることができる。 As the animal other than human, mouse, rat, hamster, rabbit or the like, a hybridoma can be prepared can be used so long as anything.
ヒト型キメラ抗体は、モノクローナル抗体を生産するハイブリドーマより、VHおよびVLをコードするcDNAを取得し、ヒト抗体CHおよびヒト抗体CLをコードする遺伝子を有する宿主細胞用発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト型キメラ抗体発現ベクターを構築し、宿主細胞へ導入することにより発現させ、製造することができる。 Human chimeric antibody from a hybridoma producing a monoclonal antibody by obtaining cDNA encoding the VH and VL, human inserting them into an expression vector for host cell having genes encoding human antibody CH and human antibody CL construct chimeric antibody expression vector, and expressed by introducing into the host cell, it can be produced.
ヒト型キメラ抗体のCHとしては、ヒトイムノグロブリン(以下、hIgと表記する)に属すればいかなるものでもよいが、hIgGクラスのものが好適であり、更にhIgGクラスに属するhIgG1、hIgG2、hIgG3、hIgG4といったサブクラスのいずれも用いることができる。 As the CH of the human chimeric antibody, a human immunoglobulin (hereinafter referred to as hIg) may be any so long as it belongs to, but it is preferable that the hIgG class, hIgG1 belong more hIgG class, hIgG2, hIgG3, any subclass such hIgG4 can be used. また、ヒト型キメラ抗体のCLとしては、hIgに属すればいかなるものでもよく、κクラスあるいはλクラスのものを用いることができる。 As the CL of human chimeric antibody, any so long as it belongs to hIg, can be used as the κ class or λ class.
ヒト型CDR移植抗体は、ヒト以外の動物の抗体のVHおよびVLのCDRのアミノ酸配列をヒト抗体のVHおよびVLの適切な位置に移植した抗体をいう。 Human CDR-grafted antibody is an antibody in which transplanted the amino acid sequences of CDR of VH and VL of a non-human animal antibody into appropriate positions of VH and VL of a human antibody.
ヒト型CDR移植抗体は、ヒト以外の動物の抗体のVHおよびVLのCDR配列を任意のヒト抗体のVHおよびVLのCDR配列に移植したV領域をコードするcDNAを構築し、ヒト抗体のCHおよびヒト抗体のCLをコードする遺伝子を有する宿主細胞用発現ベクターにそれぞれ挿入してヒト型CDR移植抗体発現ベクターを構築し、該発現ベクターを宿主細胞へ導入することによりヒト型CDR移植抗体を発現させ、製造することができる。 Human CDR-grafted antibody to construct a cDNA encoding the V regions grafted to the CDR sequences of VH and VL of any human antibody CDR sequences of VH and VL of a non-human animal antibody, a human antibody CH and inserting them into an expression vector for host cell having genes encoding CL of a human antibody to construct a human CDR-grafted antibody expression vector, to express the human CDR-grafted antibody by introducing the expression vector into the host cell , it can be produced.
ヒト型CDR移植抗体のCHとしては、hIgに属すればいかなるものでもよいが、hIgGクラスのものが好適であり、更にhIgGクラスに属するhIgG1、hIgG2、hIgG3、hIgG4といったサブクラスのいずれも用いることができる。 The CH of human CDR-grafted antibody may be any so long as it belongs to hIg, are preferred those hIgG class, be used any more hIgG1 belonging to hIgG class, hIgG2, hIgG3, subclasses such hIgG4 it can. また、ヒト型CDR移植抗体のCLとしては、hIgに属すればいかなるものでもよく、κクラスあるいはλクラスのものを用いることができる。 As the CL of human CDR-grafted antibody, any so long as it belongs to hIg, can be used as the κ class or λ class.
ヒト抗体は、元来、ヒト体内に天然に存在する抗体をいうが、最近の遺伝子工学的、細胞工学的、発生工学的な技術の進歩により作製されたヒト抗体ファージライブラリーならびにヒト抗体トランスジェニック非ヒト動物あるいはヒト抗体トランスジェニック植物から得られる抗体等も含まれる。 Human antibody is originally an antibody naturally existing in the human body, but genetic engineering, cell engineering, developmental engineering human antibody phage library and a human antibody transgenic made by advances in technology non-human animal or an antibody such as obtained from a human antibody transgenic plants are also included.
ヒト体内に存在する抗体は、例えば、ヒト末梢血リンパ球を単離し、EBウイルス等を感染させ不死化、クローニングすることにより、該抗体を生産するリンパ球を培養でき、培養物中より該抗体を精製することができる。 Antibodies present in the human body, for example, human peripheral blood lymphocytes are isolated and immortalized infected with EB virus or the like, by cloning, can be cultured lymphocytes producing the antibody, the antibody from the culture it can be purified.
ヒト抗体ファージライブラリーは、ヒトB細胞から調製した抗体遺伝子をファージ遺伝子に挿入することによりFab、一本鎖抗体等の抗体断片をファージ表面に発現させたライブラリーである。 Human antibody phage library is a library Fab, antibody fragments such as single chain antibodies are expressed on the phage surface by inserting an antibody gene prepared from human B cell into a phage gene. 該ライブラリーより、抗原を固定化した基質に対する結合活性を指標として所望の抗原結合活性を有する抗体断片を発現しているファージを回収することができる。 From the library, it can be recovered phage expressing an antibody fragment having the desired antigen binding activity binding activity to an antigen-immobilized substrate as the index. 該抗体断片は、更に遺伝子工学的手法により、2本の完全なH鎖および2本の完全なL鎖からなるヒト抗体分子へも変換することができる。 The antibody fragment can be further by genetic engineering techniques, also converted to two full H chains and two human antibody molecule comprising complete L chains.
ヒト抗体トランスジェニック非ヒト動物は、ヒト抗体遺伝子が細胞内に組込まれた動物をいう。 Human antibodies Transgenic nonhuman animal is an animal in which a human antibody gene is integrated into cells. 具体的には、マウス胚性幹細胞へヒト抗体遺伝子を導入し、該胚性幹細胞を他のマウスの初期胚へ移植後、発生させることによりヒト抗体トランスジェニック非ヒト動物を作製することができる。 Specifically, by introducing a human antibody gene into mouse embryonic stem cells, after transplantation of embryo stem cells into an early embryo of other mouse, it is possible to produce human antibodies transgenic non-human animal by generating. また、動物の受精卵にヒト抗体遺伝子を導入し、該受精卵を発生させることにヒト抗体トランスジェニック非ヒト動物を作製することもできる。 Further, by introducing a human antibody gene into an animal embryo, it is also possible to produce human antibodies transgenic non-human animal to generate the fertilized egg. ヒト抗体トランスジェニック非ヒト動物からのヒト抗体の作製方法は、通常のヒト以外の哺乳動物で行われているハイブリドーマ作製方法によりヒト抗体ハイブリドーマを得、培養することで培養物中にヒト抗体を蓄積させることができる。 A human antibody is prepared from the human antibody transgenic non-human animal to obtain a human antibody hybridoma by a hybridoma preparation method usually carried out in non-human mammals, accumulating human antibodies in culture by culturing it can be.
トランスジェニック非ヒト動物としては、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウマ、マウス、ラット、ニワトリ、サルまたはウサギ等があげられる。 The transgenic non-human animals, cattle, sheep, goats, pigs, horses, mice, rats, chickens, monkeys or rabbits and the like.
抗体の断片は、上記抗体の少なくともFc領域の一部を含んだ断片をいう。 Fragment of an antibody refers to a fragment which comprises at least a part of the Fc region of the antibody. Fc領域とは、抗体のH鎖のC末端側の領域、CH2領域およびCH3領域をいう。 The Fc region, refers to the C-terminal region, CH2 and CH3 regions of an antibody H chain. 少なくともFc領域の一部とは、好ましくはCH2領域を含む断片、より好ましくはCH2領域内に存在する1番目のアスパラギン酸を含む領域をいう。 The at least part of the Fc region, preferably a fragment containing the CH2 region, and more preferably refers to a region including a first aspartic acid present in the CH2 region. IgGクラスのFc領域は、カバット(Kabat)らのEU Index[シーケンシズ・オブ・プロテインズ・オブ・イムノロジカル・インタレスト(Sequences of Proteins of Immunological Interest),5 th Ed. Fc region of IgG class, Kabat (Kabat) et al., EU Index [Shikenshizu of Proteins of Immunological Interest (Sequences of Proteins of Immunological Interest) , 5 th Ed. Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]のナンバリングで226番目のCysからC末端、あるいは230番目のProからC末端までをいう。 It refers to a C-terminal from the numbering in the 226 th Cys of (1991)] or from 230th Pro, to the C-terminus. 抗体の断片としては、H鎖の単量体、H鎖の2量体などがあげられる。 The antibody fragment monomers H chain, such as dimer of H chains. 本発明におけるFc領域としては、天然型およびその変異型を包含する。 The Fc region in the present invention encompasses native and variants thereof.
Fc領域の一部を有する融合蛋白質とは、抗体のFc領域の一部を含んだ抗体あるいは抗体の断片と、酵素、サイトカインなどの蛋白質とを融合させた物質(以下、Fc融合蛋白質と称す)をいう。 The fusion protein with a portion of the Fc region, and an antibody or antibody fragment that contains a portion of the Fc region of an antibody, fused enzyme, a protein such as a cytokine agent (hereinafter, referred to as Fc fusion proteins) the say.
本発明の抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上、好ましくは60%以上、より好ましくは70%以上、さらに好ましくは80%以上、特に好ましくは90%以上であり、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全てのN−グリコシド結合複合型糖鎖が、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖であることが最も好ましい。 Of all the N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition of the present invention, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% or more, preferably 60% or more, more preferably 70% or more, more preferably 80% or more, particularly preferably 90% or more, all N- glycoside binding complex that binds to the Fc region contained in the antibody composition type sugar chain, and most preferably fucose to N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is a sugar chain not linked.
以上のように抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が高ければ高いほど、抗体組成物は、高い抗体依存性細胞障害活性を有する。 Of all the N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition As described above, the ratio of a sugar chain is higher for fucose to N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound the higher the antibody composition has a higher antibody-dependent cellular cytotoxicity.
N−グリコシド結合複合型糖鎖をFc領域に有する抗体分子からなる組成物中に含まれる、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合は、抗体分子からヒドラジン分解や酵素消化などの公知の方法[生物化学実験法23−糖タンパク質糖鎖研究法(学会出版センター)高橋禮子編(1989)]を用い、糖鎖を遊離させ、遊離させた糖鎖を蛍光標識又は同位元素標識し、標識した糖鎖をクロマトグラフィー法にて分離することによって決定することができる。 The N- glycoside-linked complex-type oligosaccharide contained in the composition comprising an antibody molecule having a Fc region, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound, hydrazine from an antibody molecule using a known method such as decomposition and enzyme digestion [biochemical experimental method 23-glycoprotein sugar chain research methods (Gakkai Shuppan Center) Reiko Takahashi eds (1989)], to liberate the sugar chain, fluorescence was released sugar chain label or isotope-labeled, labeled sugar chain can be determined by separating by chromatography. また、遊離させた糖鎖をHPAED−PAD法[ジャーナル・オブ・リキッド・クロマトグラフィー(J.Liq.Chromatogr.),6,1577(1983)]によって分析することによっても決定することができる。 Further, the was released sugar chains HPAED-PAD method [Journal of Liquid Chromatography (J.Liq.Chromatogr.), 6,1577 (1983)] can also be determined by analyzing by.
本発明において、高い治療効果としては、例えば細胞障害活性が高いこと等があげられる。 In the present invention, the high therapeutic effect, for example, cytotoxicity is high that the like.
抗体組成物の有する細胞障害活性としては抗体依存性細胞障害活性(以下、ADCCと略記する)、補体依存性細胞障害活性(モノクローナル・アンティボディズ)、抗原に結合することによる抗原発現細胞の増殖抑制活性などがあげられる。 Antibody-dependent cytotoxic activity as cytotoxic activity possessed by the antibody composition (hereinafter, abbreviated as ADCC), complement-dependent cytotoxicity (Monoclonal Antibodies's), the antigen-expressing cells by binding to antigen such as growth inhibitory activity and the like. 増殖抑制活性には標的細胞のアポトーシス誘導や分化誘導を促進するものも包含される[キャンサー・リサーチ(Cancer Research) 60 ,7170(2000)、ネイチャー・メディスン(Nature Medicine) ,644(1995)、セル・グロース・ディファレンシエーション(Cell Growth Differ.) ,401(1992)]。 [Cancer Research also included those in the growth inhibitory activity of promoting apoptosis induction and differentiation induction of target cells (Cancer Research) 60, 7170 ( 2000), Nature Medicine (Nature Medicine) 1, 644 ( 1995), cell Growth Differentiated instantiation (cell Growth Differ.) 3, 401 (1992)].
ADCC活性とは、生体内で、腫瘍細胞等の細胞表面抗原などに結合した抗体が、抗体Fc領域とエフェクター細胞表面上に存在するFc受容体との結合を介してエフェクター細胞を活性化し、腫瘍細胞等を障害する活性をいう[モノクローナル・アンティボディズ:プリンシプルズ・アンド・アプリケーションズ(Monoclonal Antibodies:Principles and Applications),Wiley−Liss,Inc. The ADCC activity, in vivo, antibodies bound like a cell surface antigen of a tumor cell or the like, to activate effector cells via binding to Fc receptors present on the antibody Fc region and effector cell surface, tumor refers to the activity of damaging cells and the like [monoclonal Antibodies's: Principles and Applications (monoclonal Antibodies: Principles and Applications), Wiley-Liss, Inc. ,Capter2.1(1995)]。 , Capter2.1 (1995)]. エフェクター細胞としては、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、顆粒球等の免疫細胞があげられる。 The effector cells, natural killer cells, macrophages, monocytes, dendritic cells, immune cells, granulocytes and the like. またFc受容体はFcα受容体I、Fcε受容体I、Fcε受容体II、Fcγ受容体I、Fcγ受容体IIa、Fcγ受容体IIb、Fcγ受容体IIc、Fcγ受容体IIIa、Fcγ受容体IIIb、Fc受容体n等のタイプに分かれる。 The Fc receptors Fcα receptor I, Fc epsilon receptor I, Fc epsilon receptor II, Fc.gamma. Receptor I, Fc.gamma. Receptor IIa, Fc.gamma. Receptor IIb, Fc.gamma. Receptor IIc, Fc.gamma. Receptor IIIa, Fc.gamma. Receptor IIIb, divided on the type of Fc receptor n and the like. この内Fcγ受容体IIIaは主にナチュラルキラー細胞上に発現し、ADCC活性に重要なFc受容体の一つである[モノクローナル・アンティボディズ:プリンシプルズ・アンド・プラクティス(Monoclonal Antibodies:principles and practice),ThirdEdition,Acad. The inner Fcγ receptor IIIa is primarily expressed on natural killer cells, is one of the most important Fc receptors on ADCC activity [Monoclonal Antibodies's: Principles and Practice (Monoclonal Antibodies: principles and practice ), ThirdEdition, Acad. Press,1996(以下、モノクローナル・アンティボディズと略す)]。 Press, 1996 (hereinafter referred to as Monoclonal Antibodies's)].
したがって、本発明において、抗体分子のFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物を単独で投与した場合よりも、高い治療効果を示すとは、抗体分子のFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と少なくとも1種類以上の薬剤とを組み合わせることにより、該抗体組成物単独で投与した場合に発揮される治療効果よりも高い治療効果を発揮する医薬をいう。 Accordingly, in the present invention, among the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region of an antibody molecule, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50% than when the antibody composition administered alone is, and exhibits a high therapeutic effect, of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region of an antibody molecule, the reducing terminal of the sugar N- acetyl by the ratio of a sugar chain in which fucose glucosamine is not bound combining at least one or more agents with the antibody composition is 50% or more, than the therapeutic effect exerted when administered with the antibody composition alone It refers to a pharmaceutical that exhibits a high therapeutic effect.
また、本発明の医薬は、抗体分子のFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%未満である抗体組成物と少なくとも1種類の薬剤とを組み合わせてなる医薬よりも、高い治療効果を示す。 The pharmaceutical of the present invention, among the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region of an antibody molecule, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50 % less than a is an antibody composition with than a pharmaceutical including a combination of at least one agent, it exhibits a high therapeutic effect.
本発明の医薬は、薬剤を単独で使用する場合よりも少ない薬剤の量にすることができ、薬剤を単独で高用量を患者に投与した場合に懸念された副作用を低減させることができる。 The medicament of the present invention, the agent can be an amount of less drug than when used alone, the drug alone high doses it is possible to reduce the side effects that are feared when administered to a patient.
N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性を有する細胞(以下、α1,6−フコース/レクチン耐性細胞と称す)としては、酵母、動物細胞、昆虫細胞、植物細胞など抗体組成物を製造することができる細胞であって、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチン耐性を有する細胞であればいかなる細胞でもよい。 Cells 6-position and 1-position of fucose N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine is resistant to a lectin which recognizes the bound sugar chain structure alpha (hereinafter, alpha] l, 6-fucose / lectin-resistant the referred to cells), yeast, animal cells, insect cells, a cell capable of producing an antibody composition, such as a plant cell, N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetyl 6-position of the glucosamine carbohydrate structure 1-position of fucose is bound α and may be any cells as long as the cell has a lectin recognizing resistant.
具体的には、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性を有する、ハイブリドーマ細胞、ヒト抗体およびヒト化抗体を製造するための宿主細胞、ヒト抗体を生産するためのトランスジェニック非ヒト動物を製造するための胚性幹細胞および受精卵細胞、ヒト抗体を生産するためのトランスジェニック植物を製造するための植物カルス細胞、ミエローマ細胞、トランスジェニック非ヒト動物由来の細胞などがあげられる。 Specifically, N- glycoside-linked complex-type oligosaccharide 6-position of the reducing end of N- acetylglucosamine and 1-position of fucose is resistant to a lectin which recognizes the bound sugar chain structure alpha, hybridoma cells, human antibodies and host cells for the production of humanized antibodies, embryonic stem cells and fertilized oocytes for producing transgenic non-human animals for producing human antibodies, for the production of transgenic plants for the production of human antibodies plant callus cells, myeloma cells, such as cells derived from transgenic non-human animal and the like. ミエローマ細胞はハイブリドーマ細胞を製造する際に融合細胞として用いることができる。 Myeloma cells can be used as a fusion cells in producing a hybridoma cell. また、トランスジェニック非ヒト動物に抗原を免疫し、該動物の脾臓細胞を取り出し、ハイブリドーマ細胞を製造するために用いることができる。 Furthermore, immunized with an antigen a transgenic non-human animals, spleen cells of the animal, can be used to produce hybridoma cells.
レクチンに耐性を有する細胞とは、培養培地にレクチンを有効濃度与えて細胞培養を行ったときにも、生育が阻害されない細胞をいう。 The cells resistant to a lectin, when giving an effective concentration of lectin were cell culture the culture medium also refers to a cell in which growth is not inhibited.
本発明において、生育が阻害されないレクチン有効濃度は、細胞株に応じて適宜定めればよいが、通常10μg/ml〜10.0mg/ml、好ましくは0.5〜2.0mg/mlである。 In the present invention, lectin effective concentration that does not inhibit growth, may be appropriately determined according to each cell line, usually 10μg / ml~10.0mg / ml, preferably 0.5-2.0 mg / ml. 親株細胞に変異を導入した場合のレクチンの有効濃度とは、該親株細胞が正常に生育できない濃度以上であり、好ましくは親株細胞が正常に生育できない濃度と同濃度、より好ましくは2〜5倍、さらに好ましくは10倍、最も好ましくは20倍以上の濃度をいう。 The effective concentration of lectin in the case of introducing a mutation into parent cell, not less than the concentration of the parent cell line can not normally grow, preferably equal to the concentration of parent cell can not normally grow, more preferably 2 to 5 times , more preferably 10 fold, most preferably refers to the concentration of more than 20 times.
親株細胞とは、何らかの処理を施す前の細胞、すなわち本発明で用いるα1,6−フコース/レクチン耐性細胞を選択する工程を行う前の細胞、上述した酵素活性を低下または欠失するために遺伝子工学的な処理を行う前の細胞をいう。 The parent cell, cells before performing some processing, i.e. cells before performing the step of selecting α1,6- fucose / lectin-resistant cell used in the present invention, the gene to decrease or deletion of the above-mentioned enzymatic activity It refers to a cell prior to the engineering process.
親株細胞としては、特に限定はないが、種々の細胞株の親株細胞の具体例として、以下に示す細胞があげられる。 The parent cell is not particularly limited, specific examples of the parent strain cells of various cell lines, cells, and the like shown below.
NS0細胞の親株細胞としては、バイオ/テクノロジー(BIO/TECHNOLOGY), 10 ,169(1992)、バイオテクノロジー・バイオエンジニアリング(Biotechnol.Bioeng.), 73 ,261,(2001)等の文献に記載されているNS0細胞があげられる。 The NS0 cell parent cell, Bio / Technology (BIO / TECHNOLOGY), 10, 169 (1992), Biotechnology Bioengineering (Biotechnol.Bioeng.), 73, 261 , are described in the literature such as (2001) NS0 cells are, and the like. また、理化学研究所細胞開発銀行に登録されているNS0細胞株(RCB0213)、あるいはこれら株を生育可能な培地に馴化させた亜株などもあげられる。 In addition, RIKEN Cell Bank has been registered NS0 cell line (RCB0213), or even be mentioned, such as sub-cell lines were acclimated to viable medium these cell lines.
SP2/0−Ag14細胞の親株細胞としては、ジャーナル・オブ・イムノロジー(J.Immunol.), 126 ,317(1981)、ネイチャー(Nature), 276 ,269(1978)、ヒューマン・アンチィボディズ・アンド・ハイブリドーマズ(Human Antibodies and Hybridomas), ,129(1992)等の文献に記載されているSP2/0−Ag14細胞があげられる。 As a parent cell of SP2 / 0-Ag14 cells, Journal of Immunology (J.Immunol.), 126, 317 (1981), Nature (Nature), 276, 269 ( 1978), · Human Anti-I body's and hybridoma's (Human Antibodies and hybridomas), 3 , 129 (1992) SP2 / 0-Ag14 cells described in literatures and the like. また、ATCCに登録されているSP2/0−Ag14細胞(ATCC CRL−1581)あるいはこれら株を生育可能な培地に馴化させた亜株(ATCC CRL−1581.1)などもあげられる。 Further, SP2 / 0-Ag14 cells registered in the ATCC (ATCC CRL-1581) or sub-cell lines obtained by naturalizing the viable media these strains (ATCC CRL-1581.1), etc. may be mentioned.
チャイニーズハムスター卵巣組織由来CHO細胞の親株細胞としては、Journal of Experimental Medicine, 108 ,945(1958)、Proc. The parent cell of Chinese hamster ovary tissue-derived CHO cells, Journal of Experimental Medicine, 108, 945 (1958), Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sei. Sei. USA, 60 ,1275(1968)、Genetics, 55 ,513(1968)、Chromosoma, 41 ,129(1973)、Methods in Cell Science, 18 ,115(1996)、Radiation Research, 148 ,260(1997)、Proc. USA, 60, 1275 (1968) , Genetics, 55, 513 (1968), Chromosoma, 41, 129 (1973), Methods in Cell Science, 18, 115 (1996), Radiation Research, 148, 260 (1997), Proc . Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. USA, 77 ,4216(1980)、Proc. USA, 77, 4216 (1980) , Proc. Natl. Natl. Acad. Acad. Sci. Sci. 60 ,1275(1968)、Cell, ,121(1975)、Molecular Cell Genetics,Appendix I,II(p883−900)等の文献に記載されているCHO細胞などがあげられる。 60, 1275 (1968), Cell , 6, 121 (1975), Molecular Cell Genetics, Appendix I, such as CHO cells, described in the literature, such as II (p883-900) and the like. また、ATCCに登録されているCHO−K1株(ATCC CCL−61)、DUXB11株(ATCCCRL−9096)、Pro−5株(ATCC CRL−1781)や、市販のCHO−S株(Lifetechnologies社 Cat#11619)、あるいはこれら株を生育可能な培地に馴化させた亜株などもあげられる。 Also, CHO-K1 strain registered in the ATCC (ATCC CCL-61), DUXB11 strain (ATCCCRL-9096), Pro-5 strain (ATCC CRL-1781) and a commercially available CHO-S strain (Lifetechnologies Inc. Cat # 11619), or a sub-cell lines obtained by naturalizing these cell lines to viable medium may be mentioned.
ラットミエローマ細胞株YB2/3HL. Rat myeloma cell line YB2 / 3HL. P2. P2. G11.16Ag. G11.16Ag. 20細胞の親株細胞としては、Y3/Ag1.2.3細胞(ATCC CRL−1631)から樹立された株化細胞が包含される。 The parent cell of 20 cells, Y3 / Ag 1.2.3 cells cell lines established from (ATCC CRL-1631) are included. その具体的な例としては、J. As specific examples, J. Cell. Cell. Biol. Biol. 93 ,576(1982)、Methods Enzymol. , 93, 576 (1982), Methods Enzymol. 73B ,1(1981)等の文献に記載されているYB2/3HL. , 73B, 1 are described in the literature (1981), etc. YB2 / 3HL. P2. P2. G11.16Ag. G11.16Ag. 20細胞があげられる。 20 cells, and the like. また、ATCCに登録されているYB2/3HL. In addition, registered in the ATCC YB2 / 3HL. P2. P2. G11.16Ag. G11.16Ag. 20細胞(ATCC CRL−1662)あるいはこれら株を生育可能な培地に馴化させた亜株などもあげられる。 Such as 20 cells (ATCC CRL-1662) or sub-cell lines obtained by naturalizing the viable media these strains may be mentioned.
N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンとしては、該糖鎖構造を認識できるレクチンであれば、いずれのレクチンも包含される。 The 1-position lectin which recognizes the bound sugar chain structure α of 6- and fucose N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine, if a lectin capable of recognizing the sugar chain structure, any also of lectin are included. その具体的な例としては、レンズマメレクチンLCA( Lens Culinaris由来のLentil Agglutinin)、エンドウマメレクチンPSA( Pisum sativum由来のPea Lectin)、ソラマメレクチンVFA( Vicia faba由来のAgglutinin)、ヒイロチャワンタケレクチンAAL( Aleuria aurantia由来のLectin)などがあげられる。 Examples include lentil lectin LCA (Lens culinaris derived Lentil agglutinin), pea lectin PSA (derived from Pisum sativum Pea Lectin), broad bean lectin VFA (Vicia faba derived agglutinin), Aleuria aurantia lectin AAL (Aleuria aurantia origin of Lectin), and the like.
本発明において、α1,6−フコース/レクチン耐性細胞としては、一定の有効濃度のレクチン存在下で生育が阻害されない細胞であれば、いずれでもよいが、例えば、以下にあげる少なくとも1つの蛋白質の活性が親株細胞よりも低下または欠失した細胞などがあげられる。 In the present invention, alpha] l, 6 fucose / lectin-resistant cell, as long as the cell growth is not inhibited by lectin presence of constant effective concentration, can be either, but for example, at least one protein activity listed below There, such as decreased or deleted cells than the parent cell, and the like.
(a)細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースの合成に関与する酵素蛋白質(以下、「GDP−フコース合成酵素」と表記する); (A) an enzyme protein relating to synthesis of an intracellular sugar nucleotide GDP- fucose (hereinafter referred to as "GDP- fucose synthase");
(b)N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素蛋白質(以下、「α1,6−フコース修飾酵素」と表記する); (B) N- enzyme protein glycoside-linked complex-type oligosaccharide 1-position of fucose to 6-position of the reducing end of N- acetylglucosamine are involved in sugar chain modification to bind alpha (hereinafter, "α1,6- fucose modifying enzyme" referred to as);
(c)細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースのゴルジ体への輸送に関与する蛋白質(以下、「GDP−フコース輸送蛋白質」と表記する)。 (C) proteins involved in transport into intracellular sugar nucleotide GDP- fucose Golgi (hereinafter referred to as "GDP- fucose transport protein").
GDP−フコース合成酵素としては、細胞内で糖鎖へのフコースの供給源である糖ヌクレオチドGDP−フコースの合成に関与する酵素であればいかなる酵素も包含し、細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースの合成に影響を与える酵素などがあげられる。 The GDP- fucose synthase, any enzyme as long as it is an enzyme involved in the synthesis of sugar nucleotide GDP- fucose as a supply source of fucose to the sugar chains in the cell also encompasses the synthesis of an intracellular sugar nucleotide, GDP- fucose such as an enzyme that affect, and the like.
細胞内の糖ヌクレオチドGDP−フコースは、de novoの合成経路あるいはSalvage合成経路により供給されている。 Sugar nucleotide GDP- fucose in cells is provided by the synthetic route or Salvage synthetic route de novo. したがって、これら合成経路に関与する酵素はすべてGDP−フコース合成酵素に包含される。 Thus, the enzyme relating to the synthesis pathways are included in all GDP- fucose synthase.
de novoの合成経路に関与するGDP−フコース合成酵素としては、GDP−mannose 4−dehydratase(GDP−マンノース 4−デヒドラターゼ;以下、GMDと表記する)、GDP−keto−6−deoxymannose 3,5−epimerase,4−reductase(GDP−ケト−デオキシマンノース 3,5−エピメラーゼ,4−リダクターゼ;以下、Fxと表記する)などがあげられる。 Involved in the de novo synthesis pathway as the GDP-fucose synthase, GDP-mannose 4-dehydratase (GDP- mannose 4-dehydratase; hereinafter referred to as GMD), GDP-keto-6-deoxymannose 3,5-epimerase , 4-reductase (GDP-keto - deoxymannose 3,5-epimerase, 4-reductase, hereinafter referred to as Fx) mentioned.
Salvage合成経路に関与するGDP−フコース合成酵素としては、GDP−beta−L−fucose pyrophosphorylase(GDP−ベータ−L−フコース−ピロホスフォリラーゼ;以下、GFPPと表記する)、Fucokinase(フコキナーゼ)などがあげられる。 The GDP-fucose synthase involved in Salvage synthesis pathway, GDP-beta-L-fucose pyrophosphorylase (GDP- beta -L--fucose - pyrophosphorylase phosphorylase; hereinafter referred to as GFPP), Fucokinase (fucokinase) and can give. GMDとしては、配列番号1、2または3で表されるアミノ酸配列を有するGMDがあげられる。 The GMD, GMD can be mentioned having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, 2 or 3.
細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースの合成に影響を与える酵素としては、上述の細胞内の糖ヌクレオチドGDP−フコースの合成経路に関与する酵素の活性に影響を与えたり、該酵素の基質となる物質の構造に影響を与える酵素も包含される。 As the enzyme which has influence on the synthesis of an intracellular sugar nucleotide GDP- fucose, or affect the activity of enzymes involved in the synthesis pathway of sugar nucleotide GDP- fucose intracellular above, the substances as the substrate of the enzyme an enzyme which has influence on the structure are also included.
α1,6−フコース修飾酵素としては、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合する反応に関与する酵素であればいかなる酵素も包含される。 The α1,6- fucose modifying enzyme, any enzyme may be included as long as it is an enzyme to 6-position 1-position of fucose N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine is involved in the reaction of binding of α that. N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合する反応に関与する酵素としては、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合する反応に影響を与える酵素であればいかなる酵素も包含される。 Enzymes 6-position and 1-position of fucose N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine is involved in the reaction of binding of alpha, N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine as long as it is an enzyme that affects the reaction to 6-position 1-position of fucose is bound α any enzyme are also included. 具体的には、α1,6−フコシルトランスフェラーゼやα−L−フコシダーゼなどがあげられる。 To be more specific, such as α1,6- fucosyltransferase and α-L- fucosidase and the like. α1,6−フコシルトランスフェラーゼとしては、配列番号4または5で表されるアミノ酸配列を有するα1,6−フコシルトランスフェラーゼがあげられる。 The alpha] l, 6-fucosyltransferase has the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4 or 5 alpha] l, 6-fucosyltransferase and the like.
また、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合する反応に影響を与える酵素としては、上述のN−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する反応に関与する酵素の活性に影響を与えたり、該酵素の基質となる物質の構造に影響を与える酵素も包含される。 As the enzyme to 6-position 1-position of fucose N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine affect the reaction of binding of alpha, above N- glycoside-linked complex type sugar chain or affect the 6-position of of N- acetylglucosamine in 1-position enzyme activities involved in the reaction of binding of α fucose, an enzyme which has influence on the structure of substances as the substrate of the enzyme.
GDP−フコース輸送蛋白質としては、細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースのゴルジ体への輸送に関与する蛋白質であればいかなる蛋白質も包含され、具体的には、GDP−フコーストランスポーターなどがあげられる。 The GDP- fucose transport protein, any proteins as long as a protein involved in transport into the Golgi of an intracellular sugar nucleotide, GDP- fucose are encompassed, specifically, such as GDP- fucose transporter and the like.
また、細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースをゴルジ体内へ輸送する反応に影響を与える蛋白質もGDP−フコース輸送蛋白質に包含され、具体的には上述の細胞内糖ヌクレオチドGDP−フコースのゴルジ体への輸送に関与する蛋白質の活性に影響を与えたり、発現に影響を与える蛋白質などがあげられる。 Further, proteins that affect the reaction to transport intracellular sugar nucleotide GDP- fucose into the Golgi body are also included in the GDP- fucose transport protein, in particular transport to the Golgi of the aforementioned intracellular sugar nucleotide GDP- fucose or affect the activity of proteins involved in, such as proteins and the like that affect the expression.
本発明の製造方法に用いられる細胞を取得する方法としては、α1,6−フコース/レクチン耐性細胞を選択することができる手法であればいかなる手法でも用いることができる。 As a method of obtaining the cells used in the production method of the present invention can be used in any method as long as a method that can be selected α1,6- fucose / lectin-resistant cell. 具体的には、上述した蛋白質の活性を低下または欠失させる手法などがあげられる。 Specifically, such techniques to deleted reduction or deletion of activity of the above protein and the like. 上述の蛋白質の活性を低下または欠失させる手法としては、 As a method for deleted reduction or deletion of activity of the protein described above,
(a)蛋白質の遺伝子を標的した遺伝子破壊の手法; (A) method of the gene of the protein gene disruption that target;
(b)蛋白質の遺伝子のドミナントネガティブ体を導入する手法; (B) a technique for introducing a dominant negative mutant of a gene encoding the protein;
(c)蛋白質についての突然変異を導入する手法; (C) a technique for introducing a mutation of the protein;
(d)蛋白質の遺伝子の転写または翻訳を抑制する手法; (D) Method of inhibiting the transcription or translation of the gene of the protein;
などがあげられる(WO02/31140、WO03/085107、WO03/085118)。 And the like (WO02 / 31140, WO03 / 085107, WO03 / 085118).
本発明において、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素のゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞としては、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素のゲノム遺伝子の発現または機能を完全に抑制された細胞などがあげられる。 In the present invention, the cell to the genome of the enzyme has been knocked out to be involved in sugar chain modification in which 1-position of fucose to 6-position of the N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine that binds alpha, N - like cells was completely suppressed the expression or function of the genomic gene of the enzyme glycosidic bond 1-position of fucose to 6-position of the complex type sugar chain of N- acetylglucosamine are involved in glycosylation of binding α is mentioned It is. したがって、本発明において、ゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞としては、以下に述べる手法を用いて、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素のゲノム遺伝子をノックアウトした細胞があげられる。 Accordingly, in the present invention, the cells genomic gene is knocked out, using the technique described below, N- glycoside-linked complex-type oligosaccharide 1-position of fucose to 6-position of the reducing end of N- acetylglucosamine bound α cells that have knocked out the genome gene of an enzyme involved in sugar chain modification to, and the like.
ゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞の具体的な例としては、標的となる遺伝子のすべてまたは一部がゲノムから削除された細胞があげられる。 Specific examples of cells which genomic gene is knocked out, the cells of all or part of the target gene has been deleted from the genome and the like. このような細胞を取得する方法としては、目的とするゲノムの改変を行うことができれば、いずれの手法でも用いることができるが、遺伝子工学的な手法が望ましい。 As a method for obtaining such cells, if it is possible to perform the modification of the genome of interest, can be used in any technique, genetic engineering techniques is desirable. その具体的な手法としては、上述した酵素の活性を低下または欠失させる手法があげられる。 As the specific method, technique of deleted reduction or deletion of activity of the enzyme described above can be mentioned.
また、上述した、N−グリコシド結合糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性な細胞株を選択する方法を用いることにより、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素のゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞を選択することができる。 Further, described above, by using the method of selecting the N- glycoside-linked sugar chains 6-position and resistant cell lines in 1-position lectin which recognizes the bound sugar chain structure α fucose at the reducing end of N- acetylglucosamine , can be selected genomic gene of an enzyme involved in sugar chain modification in which 1-position of fucose to 6-position of the N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine that binds α has been knocked out cells.
本発明における抗体組成物としては、疾患に関連する細胞に発現する抗原、もしくは疾患に関連する細胞の増殖や転移など、病態形成に関わる抗原などに対する抗体組成物などがあげられる。 The antibody compositions of the present invention, an antigen expressed on cells associated with the disease or disease, such as proliferation or metastasis of the associated cell, such as an antibody composition against such antigens involved in pathogenesis and the like. 具体的にはGD2、GD3、GM2、HER2、CD20、CD22、CD25、CD33、CD52、MAGE、HM1.24、CCケモカイン受容体4(CCR4)、副甲状腺ホルモン関連蛋白(PTHrP)、塩基性線維芽細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子8、塩基性繊維芽細胞増殖因子受容体、線維芽細胞増殖因子8受容体、上皮細胞成長因子受容体(EGFR)、上皮性細胞接着分子(EpCam)、インスリン様増殖因子、インスリン様増殖因子受容体、PMSA、血管内皮細胞増殖因子、血管内皮細胞増殖因子受容体、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、IL−5受容体α鎖などに対する抗体組成物があげられる。 Specifically GD2, GD3, GM2, HER2, CD20, CD22, CD25, CD33, CD52, MAGE, HM1.24, CC chemokine receptor 4 (CCR4), parathyroid hormone related protein (PTHrP), basic fibroblast cell growth factor, fibroblast growth factor 8, basic fibroblast growth factor receptor, fibroblast growth factor 8 receptor, epidermal growth factor receptor (EGFR), epithelial cell adhesion molecule (EpCam), insulin like growth factor, insulin-like growth factor receptor, PMSA, vascular endothelial growth factor, vascular endothelial growth factor receptor, respiratory syncytial virus (RSV), an antibody composition against such IL-5 receptor α chain mentioned It is.
上記の抗体組成物の具体例としては、抗GD2抗体[アンチ・キャンサー・リサーチ(Anticancer Res.), 13 ,331(1993)]、抗GD3抗体[キャンサー・イムノロジー・イムノセラピー(Cancer Immunol.Immunother.), 36 ,260(1993)、WO01/23432、US6437098]、抗GM2抗体[キャンサー・リサーチ(Cancer Res.), 54 ,1511(1994)、US6423511]、抗HER2抗体[プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス(Proc.Natl.Acad.Sci.USA), 89 ,4285(1992)]、抗CD20抗体[ブラッド(Blood), 83 ,435(1994) Specific examples of the antibody compositions, anti-GD2 antibody [Anti Cancer Research (Anticancer Res.), 13, 331 (1993)], anti-GD3 antibody [Cancer Immunol Immuno Therapy (Cancer Immunol.Immunother. ), 36, 260 (1993) , WO01 / 23432, US6437098], anti-GM2 antibody [Cancer research (Cancer Res.), 54, 1511 (1994), US6423511], anti-HER2 antibody [Proceedings of the National Academy of Science (Proc.Natl.Acad.Sci.USA), 89, 4285 ( 1992)], anti-CD20 antibodies [Blood (Blood), 83, 435 ( 1994) 、WO03/55993]、抗CD22抗体[セミナーズ・イン・オンコロジー(Semmin.Oncol.), 30 ,253(2003)]、抗CD25抗体[ヒューマン・アンティボディズ(Human Antibodies), 10 ,127−142(2001)]、抗CD33抗体[ジャーナル・オブ・クリニカル・オンコロジー(J.Clin.Oncol.), 19 ,3244(2001)]、抗CD52抗体[プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス(Proc.Natl.Acad.Sci.USA), 89 ,4285(1992)]、抗MAGE抗体[ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー(British J.Cancer), 83 ,493(2000)]、 , WO03 / 55993], anti-CD22 antibodies [Seminazu-in-Oncology (Semmin.Oncol.), 30, 253 (2003)], anti-CD25 antibodies [Human ante body's (Human Antibodies), 10, 127-142 ( 2001)], anti-CD33 antibodies [journal of Clinical Oncology (J.Clin.Oncol.), 19, 3244 (2001)], anti-CD52 antibodies [Proceedings of the National Academy of Sciences (Proc.Natl.Acad.Sci.USA), 89, 4285 ( 1992)], anti-MAGE antibody [British journal of Cancer (British J.Cancer), 83, 493 (2000)], HM1.24抗体[モレキュラー・イムノロジー(Molecular Immunol.), 36 ,387(1999)]、抗CCR4抗体[WO01/64754、WO03/18635、WO00/42074、WO99/15666、US6245332]、抗副甲状腺ホルモン関連蛋白(PTHrP)抗体[キャンサー(Cancer), 88 ,2909(2000)]、抗線維芽細胞増殖因子8抗体[プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス(Proc.Natl.Acad.Sci.USA), 86 ,9911(1989)、WO03/002608]、抗線維芽細胞増殖因子8受容体抗体[ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J. HM1.24 antibody [Molecular Immunology (Molecular Immunol.), 36, 387 (1999)], anti-CCR4 antibody [WO01 / 64754, WO03 / 18635 , WO00 / 42074, WO99 / 15666, US6245332], related anti-parathyroid hormone protein (PTHrP) antibody [Cancer (Cancer), 88, 2909 ( 2000)], anti-fibroblast growth factor 8 antibody [Proceedings of the National Academy of Science (Proc.Natl.Acad.Sci .USA), 86, 9911 (1989 ), WO03 / 002608], anti-fibroblast growth factor 8 receptor antibody [journal of biological chemistry (J. Biol. Biol. Chem. Chem. ), 265 ,16455(1990)]、抗上皮細胞成長因子受容体抗体[キャンサー・リサーチ(Cancer Res.), 59 ,1236(1999)]、抗上皮性細胞接着分子抗体[プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス(Proc.Natl.Acad.Sci.USA), 76 ,1438(1979)]、抗インスリン様増殖因子抗体[ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス・リサーチ(J.Neurosci.Res.), 40 ,647(1995)、WO03/93317]、抗インスリン様増殖因子受容体抗体[ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス・リサーチ(J.Neurosci.Res.), 40 ,647(1995)]、抗PMSA抗体[ジャーナル・オブ・ ), 265, 16455 (1990)], anti-epidermal growth factor receptor antibody [Cancer Research (Cancer Res.), 59, 1236 (1999)], anti-epithelial cell adhesion molecule antibody [Proceedings of the National Academy of Science (Proc.Natl.Acad.Sci.USA), 76, 1438 ( 1979)], anti-insulin-like growth factor antibody [journal of Neuroscience research (J.Neurosci.Res. ), 40, 647 (1995) , WO03 / 93317], anti-insulin-like growth factor receptor antibody [journal of Neuroscience research (J.Neurosci.Res.), 40, 647 (1995)], anti-PMSA antibody [J. ロロジー(J.Urology),160,2396(1998)]、抗血管内皮細胞増殖因子抗体[キャンサー・リサーチ(Cancer Res.), 57 ,4593(1997)]、抗血管内皮細胞増殖因子受容体抗体[オンコジーン(Oncogene), 19 ,2138(2000)]、抗RSV抗体[アンティバイラル・リサーチ(Antiviral Res.), 47 ,57−77(2000)]、抗IL−5受容体α鎖抗体(US6018032、US6538111)などがあげられる。 Roroji (J.Urology), 160,2396 (1998) ], anti-vascular endothelial cell growth factor antibody [Cancer Research (Cancer Res.), 57, 4593 (1997)], anti-vascular endothelial cell growth factor receptor antibody [ Oncogene (Oncogene), 19, 2138 ( 2000)], anti-RSV antibody [ante viral research (Antiviral Res.), 47, 57-77 (2000)], anti-IL-5 receptor α chain antibody (US6018032, US6538111 ) it is and the like. 具体的な抗体名としては、ハーセプチン(Herceptin)、リツキサン(Rituxan)、キャンパス(Campath)、アバスチン(Avastin)、ベクサー(Bexxar)、リンフォサイド(LymphoCide)、マイロターグ(Mylotarg)、パノレックス(Panorex)、ゼバリン(Zevalin)[ネイチャー・レビューズ・キャンサー(Nat.Rev.Cancer), ,118(2001)]、ゼナパックス(Zenapax)、シムレクト(Simulect)、レミケード(Remicade)、シナジス(Synagis)、レオプロ(ReoPro)[ヒューマン・アンティボディズ(Human Antibodies), 10 ,127−142(2001)]、エンブレ Specific antibodies name, Herceptin (Herceptin), Rituxan (Rituxan), campus (Campath), Avastin (Avastin), Bekusa (Bexxar), Lymphoprep side (LymphoCide), Mylotarg (Mylotarg), Panorex (Panorex), Zevalin (Zevalin) [Nature review's Cancer (Nat.Rev.Cancer), 1, 118 ( 2001)], Zenapax (Zenapax), Simulect (Simulect), Remicade (Remicade), Synagis (Synagis), ReoPro (ReoPro ) [Human ante body's (Human Antibodies), 10, 127-142 (2001)], engine brake (Enbrel)[エキスパート・オピニオン・オン・ファーマコセラピー(Expert Opinion on Pharmacotherapy), ,1137−1148(2001)]、ゾレア(Zolair)[レスピラトリー・メディスン(Respiratory Medicine), 97 ,123−129(2003)]などがあげられる。 (Enbrel) [Expert Opinion on Pharmacology Therapy (Expert Opinion on Pharmacotherapy), 2 , 1137-1148 (2001)], Xolair (Zolair) [Respiratory Medicine (Respiratory Medicine), 97, 123-129 (2003 )] and the like.
本発明において、ADCC活性は、 51 Cr遊離法、lactate dehydrogenase(LDH)遊離法、フローサイトメトリー等によるin vitroの測定系、あるいは動物モデルを用いたin vivoの評価系等で測定することができる。 In the present invention, ADCC activity can be measured with 51 Cr release assay, lactate dehydrogenase (LDH) release assay, flow cytometry measurement systems in vitro by cytometry, etc., or an in vivo using animal model evaluation system, etc. .
本発明において、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物とともに用いられる薬剤としては、サイトカイン、抗体などの蛋白質、低分子の薬剤、生物学的応答調節物質(以下BRMと称する)などがあげられる。 In the present invention, among the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50 the percent by agents used in conjunction with an antibody composition that, cytokines, proteins such as antibodies, low molecular drugs, (hereinafter referred to as BRM) biological response modifiers, and the like.
サイトカインとしては、インターロイキン(IL)類、コロニー刺激因子(CSF)類、インターフェロン(IFN)類、腫瘍壊死因子(TNF)類、ケモカイン類、あるいはこれらの組み合わせがあげられる。 Cytokines, interleukin (IL) such, colony stimulating factors (CSF) such as interferon (IFN), tumor necrosis factor (TNF) such, chemokines, or combination thereof. 具体的には、IFN−α、IFN−β、IFN−γ、TNF−α、TNF−β、IL−1α、IL−1β、IL−2、IL−3、IL−4、IL−6、IL−7、IL−9、IL−12、IL−15、IL−17、IL−18、IL−21、fractalkine、GM−CSF、G−CSF、M−CSF、SCF、あるいはこれらの組み合わせがあげられる。 Specifically, IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, TNF-β, IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL -7, IL-9, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, fractalkine, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, SCF, or a combination thereof . 好ましくはIL−2、IL−15、IFN−α、IFN−γがあげられる。 Preferably IL-2, IL-15, IFN-α, IFN-γ and the like.
低分子の薬剤としては、アミフォスチン(エチオール)[amifostine(ethyol)]、シスプラチン(cisplatin)、ダカルバジン(DTIC)[dacarbazine(DTIC)]、ダクチノマイシン(dactinomycin)、メクロレタミン(ナイトロジェンマスタード)[mechlorethamine(nitrogenmustard)]、ストレプトゾシン(streptozocin)、シクロフォスファミド(cyclophosphamide)、カルムスチン(BCNU)[carmustine(BCNU)]、ロムスチン(CCNU)[lomustine(CCNU)]、ドキソルビシン(アドリアマイシン)[doxorubicin(adriamycin)]、ドキソ Agents of the low-molecular, amifostine (Ethyol) [amifostine (ethyol)], cisplatin (cisplatin), dacarbazine (DTIC) [dacarbazine (DTIC)], dactinomycin (Dactinomycin), mechlorethamine (nitrogen mustard) [mechlorethamine ( nitrogenmustard)], streptozocin (streptozocin), cyclophosphamide (cyclophosphamide), carmustine (BCNU) [carmustine (BCNU)], lomustine (CCNU) [lomustine (CCNU)], doxorubicin (adriamycin) [doxorubicin (adriamycin)] , Dokiso ビシンリポ(ドキシル)[doxorubicinlipo(doxil)]、ゲムシタビン(ゲムザール)[gemcitabine(gemzar)]、ダウノルビシン(daunorubicin)、ダウノルビシンリポ(ダウノゾーム)[daunorubicinlipo(daunoxome)]、プロカルバジン(procarbazine)、マイトマイシン(mitomycin)、シタラビン(cytarabine)、エトポシド(etoposide)、メトトレキセート(methotrexate)、5−フルオロウラシル(5−fluorouracil)、ビンブラスチン(vinblastine)、ビンクリスチン(vincristine)、ブレオマイシン(bleomycin)、パクリタキ Bishinripo (Doxil) [doxorubicinlipo (doxil)], gemcitabine (Gemzar) [gemcitabine (gemzar)], daunorubicin (daunorubicin), daunorubicin lipoprotein (Daunozomu) [daunorubicinlipo (daunoxome)], procarbazine (procarbazine), mitomycin (mitomycin), cytarabine (cytarabine), etoposide (etoposide), methotrexate (methotrexate), 5- fluorouracil (5-fluorouracil), vinblastine (vinblastine), vincristine (vincristine), bleomycin (bleomycin), Pakuritaki ル(タキソール)[paclitaxel(taxol)]、ドセタキセル(タキソテア)[docetaxel(taxotere)]、アルデスロイキン(aldesleukin)、アスパラギナーゼ(asparaginase)、ブスルファン(busulfan)、カルボプラチン(carboplatin)、クラドリビン(cladribine)、カンプトテシン(camptothecin)、CPT−11、10−ヒドロキシ−7−エチル−カンプトテシン(SN38)[10−hydroxy−7−ethyl−camptothecin(SN38)]、フロクスウリジン(floxuridine)、フルダラビン(fludarabine)、ヒドロキシウレア(hydroxyurea)、イホスファミド Le (Taxol) [paclitaxel (taxol)], docetaxel (Takisotea) [docetaxel (taxotere)], aldesleukin (aldesleukin), asparaginase (Asparaginase), busulfan (busulfan), carboplatin (carboplatin), cladribine (cladribine), camptothecin ( camptothecin), CPT-11,10- hydroxy-7-ethyl - camptothecin (SN38) [10-hydroxy-7-ethyl-camptothecin (SN38)], floxuridine (floxuridine), fludarabine (fludarabine), hydroxyurea (hydroxyurea ), ifosfamide (ifosfamide)、イダルビシン(idarubicin)、メスナ(mesna)、イリノテカン(irinotecan)、ミトキサントロン(mitoxantrone)、トポテカン(topotecan)、ロイプロリド(leuprolide)、メゲストロール(megestrol)、メルファラン(melpharan)、メルカプトプリン(mercaptopurine)、プリカマイシン(plicamycin)、ミトタン(mitotane)、ペガスパラガーゼ(pegaspargase)、ペントスタチン(pentostatin)、ピポブロマン(pipobroman)、ストレプトゾシン(streptozocin)、タモキシフェン(tamoxifen)、テニポシド(teni (Ifosfamide), idarubicin (idarubicin), mesna (mesna), irinotecan (irinotecan), mitoxantrone (mitoxantrone), topotecan (topotecan), leuprolide (leuprolide), megestrol (megestrol), melphalan (melpharan), mercapto purine (mercaptopurine), plicamycin (plicamycin), mitotane (mitotane), Pegase para gauze (pegaspargase), pentostatin (pentostatin), pipobroman (pipobroman), streptozocin (streptozocin), tamoxifen (tamoxifen), teniposide (Teni oside)、テストラクトン(testolactone)、チオグアニン(thioguanine)、チオテパ(thiotepa)、ウラシルマスタード(uracil mustard)、ビノレルビン(vinorelbine)、クロラムブシル(chlorambucil)、プレドニゾロン(prednisolone)、ビンデシン(vindesine)、ニムスチン(nimstine)、セムスチン(semustin)、カペシタビン(capecitabine)、トムデックス(tomudex)、アザシチジン(azacytidine)、UFT、オキザロプラチン(oxaloplatin)、ゲフィチニブ(イレッサ)[gefitinib(Iressa)]、イマチニブ(STI571)[i oside), test lactone (testolactone), thioguanine (thioguanine), thiotepa (thiotepa), uracil mustard (uracil mustard), vinorelbine (vinorelbine), chlorambucil (chlorambucil), prednisolone (prednisolone), vindesine (vindesine), nimustine (nimstine) , semustine (semustin), capecitabine (capecitabine), Tom index (tomudex), azacitidine (azacytidine), UFT, oxaloacetic oxaliplatin (oxaloplatin), gefitinib (Iressa) [gefitinib (Iressa)], imatinib (STI571) [i atinib(STI571)]、アムサクリン(amsacrine)、オール−トランスレチノイン酸(all−trans retinoic acid)、サリドマイド(thalidomide)、ベキサロテン(ターグレチン)[bexarotene(targretin)]、デキサメタゾン(dexamethasone)、アナストロゾール(アリミデックス)[anastrozole(Alimidex)]、ロイプリン(leuplin)あるいはこれらの組み合わせがあげられる。 atinib (STI571)], amsacrine (amsacrine), all - trans retinoic acid (all-trans retinoic acid), thalidomide (thalidomide), bexarotene (Targretin) [bexarotene (targretin)], dexamethasone (dexamethasone), anastrozole (Arimidex ) [anastrozole (Alimidex)], Roipurin (leuplin) or a combination thereof. 好ましくは、ビンクリスチン、シクロフォスファミド、エトポシド、メトトレキセートあるいはこれらの組み合わせがあげられる。 Preferably, vincristine, cyclophosphamide, etoposide, methotrexate or combinations thereof.
抗体としては、上述した抗体があげられる。 The antibody, antibody described above and the like.
本発明におけるBRMとしては、BCG、嫌気性コリネバクテリア、ムラミルジペプチド、トレハロースジミコール酸等の細菌製剤、ピラン共重合体、MVE、ポリ I:C、ピリミジン、チモシン、チムリン、チモポエシン、ピシバニール、フコイダン、クレスチン等があげられる。 The BRM in the present invention, BCG, anaerobic corynebacteria, muramyl dipeptide, bacterial agents such as trehalose dimycolate, pyran copolymer, MVE, poly I: C, a pyrimidine, thymosin, thymulin, Chimopoeshin, picibanil, fucoidan , krestin and the like.
本発明の医薬の効果は、例えばin vitroの細胞障害活性測定系によって調べることができる。 Effect of the medicament of the present invention can be examined for example by cytotoxic activity measurement system in vitro. in vitroの細胞障害活性測定系の例としては、ADCC活性の測定系があげられる。 Examples of cytotoxic activity measurement system in vitro, the measurement system of the ADCC activity. ADCC活性は、抗体の存在下で、抗原を発現する標的細胞と、ヒトあるいはその他の動物より採取した末梢血単核球、単球、マクロファージ、顆粒球等のエフェクター細胞を接触させ、障害された標的細胞の度合いを検出し、これを定量することにより測定することができる。 ADCC activity in the presence of the antibody, the target cells expressing the antigen, human or other animals than was collected peripheral blood mononuclear cells, monocytes, macrophages, contacting the effector cells of granulocytes such as has been impaired detecting the degree of target cells, which can be measured by quantifying. 障害された標的細胞の度合いは、 51 Cr遊離法、標的細胞の酵素活性を検出する方法、フローサイトメーターによる検出法などによって検出することができる。 The degree of impaired target cells can be detected 51 Cr release assay, a method of detecting the enzymatic activity of the target cells, such as by detecting method by a flow cytometer. ADCC活性測定系における本発明の免疫担当細胞を活性化させる物質または抗腫瘍活性を有する物質の効果は、ADCC活性測定系中にこれらの物質を添加するか、あるいは標的細胞、またはエフェクター細胞、またはその両者にあらかじめこれらの物質を一定期間曝露してADCC活性に与える影響を観察することにより、測定することができる。 Effects of substances with immunocompetent cells activated thereby agent or anti-tumor activity of the present invention in ADCC activity measurement system, either adding these substances in ADCC activity measurement system, or the target cells or effector cells, or, by observing the effects of these substances in advance in both the fixed period exposure to ADCC activity can be measured.
また本発明の医薬の効果は、動物モデルを用いたin vivo抗腫瘍活性を測定することによっても調べることができる。 The effect of the medicament of the present invention can also be determined by measuring the in vivo antitumor activity using an animal model.
動物モデルとしては、ヌードマウス等の免疫不全マウスにヒト癌組織由来の培養細胞株を移植した異種移植モデル、培養マウス癌細胞株を正常な免疫系を有する野生型マウスへ移植した同系移植モデルなどがあげられる。 As the animal model, immunodeficient mice, such as nude mouse xenograft model transplanted with cultured cell lines derived from human cancer tissues, such as syngeneic transplant model transplanted into wild-type mice with normal immune system cultured mouse cancer cell line and the like.
異種移植モデルはヌードマウス等の免疫不全マウスの皮下、皮内、腹腔内、静脈内等様々な部位にヒト癌細胞株を移植することにより作製することができる。 Xenograft model can be produced by implanting subcutaneously immunodeficient mice such as nude mice, intradermal, intraperitoneal, intravenous and the like at various sites of human cancer cell lines.
上記動物モデルを用いて抗体の単独投与、免疫担当細胞を活性化させる物質または抗腫瘍活性を有する物質の単独投与の効果と、本発明の医薬の効果とを比較することにより、本発明の医薬の抗腫瘍効果を評価することができる。 Single administration of the antibody using the above animal model, by comparing the effect of single administration of substances with substances or anti-tumor activity of activating the immunocompetent cells, and the effect of the medicament of the present invention, the medicament of the present invention it is possible to evaluate the anti-tumor effect of.
本発明の医薬は、単独で投与することも可能ではあるが、通常は薬理学的に許容される一つあるいはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学の技術分野においてよく知られる任意の方法により製造した医薬製剤として提供するのが望ましい。 The medicament of the present invention, although it is possible to be administered alone, usually mixed with one or more carriers that are pharmaceutically acceptable, any well known in the technical field of pharmaceutics it is desirable to provide a pharmaceutical preparation produced by the method.
投与経路は、治療に際して最も効果的なものを使用するのが望ましく、経口投与、または口腔内、気道内、直腸内、皮下、筋肉内および静脈内等の非経口投与をあげることができ、蛋白質製剤の場合、望ましくは静脈内投与をあげることができる。 The route of administration, the most effective it is desirable to use in treatment, oral administration, or buccal, tracheal, rectal, subcutaneous, there may be mentioned a parenteral administration intramuscular and intravenous etc., proteins for formulation, preferably it can be mentioned intravenous administration.
投与形態としては、噴霧剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、座剤、注射剤、軟膏、テープ剤等があげられる。 The dosage form includes sprays, capsules, tablets, granules, syrups, emulsions, suppositories, injections, ointments, tapes and the like.
経口投与に適当な製剤としては、乳剤、シロップ剤、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤等があげられる。 Suitable formulations for oral administration include emulsions, syrups, capsules, tablets, powders, granules and the like.
乳剤およびシロップ剤のような液体調製物は、水、ショ糖、ソルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、p−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類等を添加剤として用いて製造できる。 Liquid preparations such as emulsions and syrups are water, sucrose, sorbitol, sugars fructose, etc., polyethylene glycols, glycols such as propylene glycol, sesame oil, olive oil, oils such as soybean oil, p- hydroxybenzoic acid preservatives such as esters, can be prepared by using strawberry flavor, as an additive flavors such as peppermint.
カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒剤等は、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、マンニトール等の賦形剤、デンプン、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ゼラチン等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤等を添加剤として用いて製造できる。 Capsules, tablets, powders, granules and the like are lactose, dextrose, sucrose, and mannitol, etc., starch, disintegrants such as sodium alginate, a lubricant, such as magnesium stearate, talc, polyvinyl alcohol, hydroxyethyl cellulose, binders such as gelatin, can be prepared by using surfactants such as fatty acid esters, plasticizers such as glycerin or the like as an additive.
非経口投与に適当な製剤としては、注射剤、座剤、噴霧剤等があげられる。 Formulations suitable for parenteral administration, injections, suppositories, sprays and the like.
注射剤は、塩溶液、ブドウ糖溶液、あるいは両者の混合物からなる担体等を用いて調製される。 Injections can be prepared using a carrier such as a salt solution, glucose solution or a mixture thereof.
座剤はカカオ脂、水素化脂肪またはカルボン酸等の担体を用いて調製される。 Suppositories can be prepared using a carrier such as cacao butter, hydrogenated fat or carboxylic acid.
また、噴霧剤は該医薬そのもの、ないしは受容者の口腔および気道粘膜を刺激せず、かつ該医薬を微細な粒子として分散させ吸収を容易にさせる担体等を用いて調製される。 Furthermore, sprays are prepared using the pharmaceutical itself, or does not stimulate oral and airway mucous membrane of a recipient and a carrier or the like for facilitating the absorption by dispersing the medicament as fine particles.
担体として具体的には乳糖、グリセリン等が例示される。 The carrier includes lactose, glycerol and the like. 該医薬および用いる担体の性質により、エアロゾル、ドライパウダー等の製剤が可能である。 Due to the nature of the pharmaceutical and carrier, it is possible to prepare aerosols, dry powders, etc.. また、これらの非経口剤においても経口剤で添加剤として例示した成分を添加することもできる。 Furthermore, it can also be added to the components exemplified as additives for oral preparations in these parenteral preparations.
投与量または投与回数は、目的とする治療効果、投与方法、治療期間、年齢、体重等により異なるが、通常成人1回当たり抗体量として0.1〜20mg/kgである。 Dose or frequency of administration, the desired therapeutic effect, administration method, treating period, age, varies body weight, etc., and it is usually 0.1 to 20 mg / kg as the amount of antibody per adult. 抗体と併用する薬剤は、単独で臨床に用いられる場合の投与量と同用量またはそれより少ない用量である。 Drugs used in combination with the antibody is the dose of the same dose or fewer doses than when used in clinical alone.

第1図は、KM2760−1とKM3060のADCC活性に対する各種サイトカインの増強効果を示す。 1 shows the effect of enhancing the various cytokines on ADCC activity of KM2760-1 and KM3060. 縦軸は細胞障害活性(%)を表す。 The vertical axis represents the cytotoxic activity (%). ■はサイトカイン非添加、□はIL−2添加、斜線はIL−15添加時の細胞障害活性をそれぞれ表す。 ■ the cytokine-added, □ the addition of IL-2, hatching represents respectively cytotoxic activity when IL-15 is added.
第2図は、KM3065とRituxanのADCC活性に対する各種サイトカインの増強効果を示す。 Figure 2 illustrates the enhancement effects of various cytokines on the ADCC activity of KM3065 and Rituxan. 縦軸は細胞障害活性(%)を表す。 The vertical axis represents the cytotoxic activity (%). 図において■はサイトカイン非添加、□はIL−2添加、斜線はIL−15添加時の細胞障害活性をそれぞれ表す。 ■ the cytokine-added in FIG, □ is IL-2 addition, hatching represents respectively cytotoxic activity when IL-15 is added.
第3図は、KM3065とRituxanのADCC活性に対する各種サイトカインの増強効果を示す。 Figure 3 shows the enhancing effect of various cytokines on the ADCC activity of KM3065 and Rituxan. 縦軸は細胞障害活性(%)を表す。 The vertical axis represents the cytotoxic activity (%). 図において■はサイトカイン非添加、□はIFN−α添加、斜線はIFN−γ添加時の細胞障害活性をそれぞれ表す。 ■ the cytokine-added in FIG, □ is IFN-alpha addition, diagonal lines represent respectively the cytotoxic activity upon addition IFN-gamma.
以下、本発明を詳細に説明する。 The present invention will be described in detail. 本願は、2003年12月4日に出願された日本国特許出願2003−406589号の優先権を主張するものであり、当該特許出願の明細書及び/または図面に記載される内容を包含する。 This application claims the priority of Japanese Patent Application No. 2003-406589 filed on Dec. 4, 2003, encompasses the contents disclosed in the specification and / or drawings of the patent application.

in vitro細胞障害活性における抗CCR4抗体とサイトカインの併用効果 combined effect of the anti-CCR4 antibody and cytokines in in vitro cytotoxic activity
in vitro細胞障害活性における抗CCR4ヒト型キメラ抗体KM2760−1およびKM3060(WO02/31140)とサイトカインの併用効果を以下の方法により測定した。 in vitro cytotoxicity KM2760-1 and anti-CCR4 human chimeric antibody in activity KM3060 (WO02 / 31140) and cytokine combination effects were measured by the following methods.
KM2760−1はラットミエローマ細胞株YB2/0細胞に抗CCR4キメラ抗体発現株を導入して得られた細胞株KM2760−1#58−35−16より生産された抗CCR4キメラ抗体である。 KM2760-1 is an anti-CCR4 chimeric antibody produced from the cell line KM2760-1 # 58-35-16 obtained by introducing the anti-CCR4 chimeric antibody expression strain rat myeloma cell line YB2 / 0 cells. KM2760−1#58−35−16株はレクチン耐性能を有し、KM2760−1の全糖鎖中のフコースが結合しない糖鎖含量は87%である。 KM2760-1 # 58-35-16 strain has a lectin-resistant ability, carbohydrate content which fucose is not bound in the total sugar chain of KM2760-1 is 87%. 一方KM3060はCHO/DG44細胞株に抗CCR4キメラ抗体発現株を導入して得られた細胞株5−03より生産された抗CCR4キメラ抗体である。 Meanwhile KM3060 is an anti-CCR4 chimeric antibody produced from the cell line 5-03 obtained by introducing the anti-CCR4 chimeric antibody expression strain CHO / DG44 cell line. KM3060はレクチン耐性能を有さず、KM3060の全糖鎖中のフコースが結合しない糖鎖含量は8%である。 KM3060 has no lectin-resistant ability, carbohydrate content which fucose is not bound in the total sugar chain of KM3060 is 8%. KM2760−1とKM3060は同じアミノ酸配列を有し、抗原結合活性も同等である。 KM2760-1 and KM3060 have the same amino acid sequence, the antigen binding activity comparable.
(a)エフェクター細胞溶液の調製 健常人静脈血50mLを採取し、ヘパリンナトリウム(清水製薬社製)0.5mLを加え穏やかに混ぜた。 Was collected from a healthy person venous blood 50mL Preparation of (a) effector cell suspension, heparin sodium (manufactured by Shimizu Pharmaceutical) 0.5mL was added gently mixed with. これをMONO−POLY分離溶液(大日本製薬株式会社製)を用いて使用説明書に従い、遠心分離(400g、20分間)して単核球層を分離した。 In accordance with the instructions with reference to this MONO-POLY separation solution (Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd.) to separate the mononuclear cell layer was centrifuged (400 g, 20 min). RPMI1640−FCS(5)培地で3回遠心分離して洗浄後、同培地を用いて3×10 細胞/mLの濃度で再懸濁し、エフェクター細胞溶液とした。 After washing RPMI1640-FCS (5) by centrifugation three times with medium, resuspended at 3 × 10 6 cells / mL using the same medium, as the effector cell solution.
(b)エフェクター細胞のサイトカインによる刺激 上記(a)で得られたエフェクター細胞溶液を50μLずつ、96穴U底プレート(Falcon社製)に分注した。 (B) an effector cell solution obtained upon stimulation with cytokines effector cell (a) above by 50 [mu] L, was dispensed into 96-well U-bottom plate (manufactured by Falcon). さらにRPMI1640−FCS(5)で希釈した以下の溶液を50μLずつ添加し、5%CO インキュベーター内にて3日間静置した。 Furthermore a solution of less diluted in RPMI1640-FCS (5) was added in 50 [mu] L, and allowed to stand for 3 days at 5% CO 2 incubator.
(1)RPMI1640−FCS(5)のみ(サイトカイン非添加コントロール) (1) RPMI1640-FCS (5) only (cytokine-loading control)
(2)IL−2(ペプロテック社製)2ng/mL (2) IL-2 (Peprotech Co.) 2 ng / mL
(3)IL−15(ペプロテック社製)2ng/mL (3) IL-15 (Peprotech Co.) 2 ng / mL
(c)標的細胞溶液の調製 G418(ナカライテスク社製)を0.5mg/mLで含むRPMI1640−FCS(10)培地(FCSを10%含むRPMI1640培地(GIBCO BRL社製))で培養したCCR4/EL4細胞(CCR4遺伝子を導入したマウス胸腺腫細胞、WO01/64754)を遠心分離操作及び懸濁によりRPMI1640−FCS(5)培地(FCSを5%含むRPMI1640培地(GIBCO BRL社製))で洗浄した後、RPMI1640−FCS(5)培地によって、2×10 細胞/mLに調製し、標的細胞溶液とした。 (C) a target cell preparation of the solution G418 (manufactured by Nacalai Tesque) were cultured in 0.5mg / mL RPMI1640-FCS containing at (10) medium (RPMI1640 medium containing 10% FCS (GIBCO BRL Co.)) CCR4 / EL4 cells (CCR4 gene murine thymoma cells transfected with, WO01 / 64 754) was washed with centrifugation and suspended by RPMI1640-FCS (5) medium (FCS 5% containing RPMI1640 medium (GIBCO BRL Co.)) after, the RPMI1640-FCS (5) medium and adjusted to 2 × 10 5 cells / mL, and a target cell solution.
(d)細胞障害活性の測定 (b)で調製した96ウェルU字底プレートの各ウェルに(c)で調製した標的細胞溶液の50μL(1×10 細胞/ウェル)を分注した。 (D) was dispensed into each well of a 96-well U-bottom plates prepared by measurement of cytotoxic activity (b) a 50μL of the target cell solution prepared in (c) (1 × 10 4 cells / well) min. このときエフェクター細胞と標的細胞の比は15:1となる。 The ratio of the time effector cells to target cells 15: a 1. 更に、KM2760−1、あるいはKM3060を各最終濃度1ng/mLあるいは100ng/mLとなるように加えて全量を200μLとし、37℃で4時間反応させた。 Furthermore, KM2760-1, or the total amount was added so that the final concentration of 1 ng / mL or 100 ng / mL of KM3060 and 200 [mu] L, was reacted for 4 hours at 37 ° C.. 反応後、プレートを遠心分離し、上清中の乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)活性を、CytoTox96 Non−Radioactive Cytotoxicity Assay(Promega社製)を用いて、添付の説明書にしたがって吸光度データを取得することで測定した。 After the reaction, the plate was centrifuged, lactate dehydrogenase (LDH) activity in the supernatant, determined by using a CytoTox96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay (Promega Corp.), to obtain the absorbance data according to the attached instructions did. 標的細胞自然遊離の吸光度データは、エフェクター細胞溶液、抗体溶液の代わりに培地のみを用いて、また、エフェクター細胞自然遊離の吸光度データは、標的細胞溶液、抗体溶液の代わりに培地のみを用いて、上記と同様の操作を行うことで取得した。 Absorbance data of the target cell spontaneous release, the effector cell solution, by using only the medium instead of the antibody solution, also the absorbance data of effector cells spontaneous release is the target cell solution, using only the medium instead of the antibody solution, It was obtained by performing the same operation as described above. 標的細胞全遊離の吸光度データは、抗体溶液、エフェクター細胞溶液の代わりに培地を用い、反応終了45分前に15μLの9%Triton X−100溶液を添加し、上記と同様の操作を行い、上清のLDH活性を測定することにより求めた。 Absorbance data of the target cell total release, using the medium instead of the antibody solution, the effector cell solution, to the completion of the reaction 45 minutes before the addition of 9% Triton X-100 solution 15 [mu] L, the same operation as described above, the upper and measuring the supernatant of LDH activity. ADCC活性は次式により求めた。 ADCC activity was calculated by the following equation.
第1図に結果を図示した。 It illustrated the results in Figure 1. サイトカイン非添加時のKM2760−1のADCC活性はKM3060のADCC活性よりも高いが、サイトカインの添加によりさらに増強された。 ADCC activity of KM2760-1 during cytokine-added is higher than the ADCC activity of KM3060, but was further enhanced by the addition of cytokines. この結果は、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物の高いADCC活性は、サイトカインによってさらに上昇することを示す。 As a result, out of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50 higher ADCC activity of the antibody composition is at least% indicates that further increased by cytokines.

in vitro細胞障害活性における抗CD20抗体とサイトカインの併用効果 combined effect of anti-CD20 antibodies and cytokines in in vitro cytotoxic activity
in vitro細胞障害活性における抗CD20ヒト型キメラ抗体KM3065(WO03/55993)および市販の抗CD20ヒト型キメラ抗体Rituxan(Genentech社製)とサイトカインの併用効果を実施例1に記載の方法により測定した。 It was measured by a method described in in vitro cytotoxic anti-CD20 human chimeric antibody in activity KM3065 (WO03 / 55993) and carrying out the combined effects of a commercial anti-CD20 human chimeric antibody Rituxan (manufactured by Genentech, Inc.) and cytokine Example 1.
サイトカインはIL−2、IL−15(いずれもPeprotech社製、終濃度1ng/mL)、IFN−α(Peprotech社製、終濃度100ng/mL)、IFN−γ(R&D Systems社製、終濃度100ng/mL)を用いた。 Cytokines IL-2, IL-15 (both Peprotech Inc., final concentration 1ng / mL), IFN-α (Peprotech Co., final concentration 100ng / mL), IFN-γ (R & D Systems, Inc., final concentration 100ng / mL) was used. KM3065はラットミエローマ細胞株YB2/0細胞に抗CD20キメラ抗体発現株を導入して得られた細胞株KM3065より生産された抗CD20キメラ抗体である。 KM3065 is an anti-CD20 chimeric antibody produced from the cell line KM3065 obtained by introducing the anti-CD20 chimeric antibody expression strain rat myeloma cell line YB2 / 0 cells. KM3065株はレクチン耐性能を有し、KM3065の全糖鎖中のフコースが結合しない糖鎖含量は96%である。 The KM3065 strain has a lectin-resistant ability, carbohydrate content which fucose is not bound in the total sugar chain of KM3065 is 96%. 一方Rituxanの全糖鎖中のフコースが結合しない糖鎖含量は6%である。 Meanwhile carbohydrate content which fucose is not bound in the total sugar chain of Rituxan is 6%. KM3065とRituxanは同じアミノ酸配列を有し、抗原結合活性も同等である。 KM3065 and Rituxan have the same amino acid sequence, the antigen binding activity comparable.
第2図および第3図に結果を図示した。 And results are illustrated in FIGS. 2 and 3. サイトカイン非添加時のKM3065のADCC活性はRituxanのADCC活性よりも高いが、サイトカインの添加によりさらに増強された。 ADCC activity of KM3065 upon cytokine-added is higher than the ADCC activity of Rituxan, but was further enhanced by the addition of cytokines. この結果は、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物の高いADCC活性は、サイトカインによってさらに上昇することを示す。 As a result, out of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound 50 higher ADCC activity of the antibody composition is at least% indicates that further increased by cytokines.

抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と少なくとも1種類の薬剤とを用いる医薬は、高い治療効果を有することが期待される。 Of all the N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound is 50% or more pharmaceutical use of an antibody composition and at least one agent is expected to have a high therapeutic effect.

Claims (14)

  1. 抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを組み合わせてなる医薬。 Of all the N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound is 50% or more an antibody composition, a pharmaceutical including a combination of at least one agent.
  2. 抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを併用して投与するための医薬。 Of all the N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound is 50% or more an antibody composition, a medicament for administration in combination with at least one agent.
  3. 抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物と、少なくとも1種類の薬剤とを同時に又は逐次的に投与するための医薬。 Of all the N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound is 50% or more and antibody compositions, at least one agent at the same time or sequentially medicament for administration.
  4. 抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖の割合が50%以上である抗体組成物を単独で投与した場合よりも、高い治療効果を示すことを特徴とする、請求項1〜3のいずれか1項に記載の医薬。 Of all the N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, the ratio of a sugar chain in which fucose N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound is 50% or more than when administering the antibody composition alone, characterized in that it presents a high therapeutic efficacy, a pharmaceutical according to any one of claims 1 to 3.
  5. 高い治療効果を示すことが、高い抗体依存性細胞障害活性を示すことである、請求項4記載の医薬。 To exhibit high therapeutic effect is to exhibit a high antibody-dependent cellular cytotoxicity, claim 4 medicament according.
  6. 抗体組成物が、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位とフコースの1位がα結合した糖鎖構造を認識するレクチンに耐性を有する細胞から生産される抗体組成物である請求項1〜5のいずれか1項に記載の医薬。 Antibody composition is an antibody composition to 6-position 1-position of fucose N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine is produced from a cell resistant to a lectin which recognizes the bound sugar chain structure α those with medicament according to any one of claims 1 to 5,.
  7. 抗体組成物が、抗体組成物中に含まれるFc領域に結合する全N−グリコシド結合複合型糖鎖のうち、糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖である抗体組成物である、請求項1〜6のいずれか1項に記載の医薬。 Antibodies Antibodies composition of the total N- glycoside-linked complex type sugar chains bound to the Fc region contained in the antibody composition, sugar chains in which fucose to N- acetylglucosamine in the reducing terminal of the sugar is not bound a composition, medicament according to any one of claims 1 to 6.
  8. フコースが結合していない糖鎖が、該フコースの1位がN−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にα結合していない糖鎖である、請求項1〜7のいずれか1項に記載の医薬。 Sugar chains in which fucose is not bound is a sugar chain in which 1-position of the fucose is not bound α to the 6-position of the N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine claims 1-7 the medicament according to any one of.
  9. 抗体組成物が、N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素のゲノム遺伝子がノックアウトされた細胞から生産された抗体組成物である、請求項7または8記載の医薬。 Antibody composition, genomic gene of an enzyme involved in sugar chain modification in which 1-position of fucose is bound α to the 6-position of the N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine produced from knockout cells and an antibody composition according to claim 7 or 8 medicament according.
  10. N−グリコシド結合複合型糖鎖還元末端のN−アセチルグルコサミンの6位にフコースの1位がα結合する糖鎖修飾に関与する酵素が、α1,6−フコシルトランスフェラーゼである請求項9記載の医薬。 Enzymes which 1-position of fucose to 6-position of the N- glycoside-linked complex type sugar chain of N- acetylglucosamine are involved in glycosylation of binding α is, alpha] l, 6-fucosyltransferase medicament of claim 9, wherein the glycosyltransferase .
  11. 薬剤が、蛋白質、低分子の薬剤および生物学的応答調節剤からなる群から選ばれる物質である請求項1〜10のいずれか1項に記載の医薬。 Drugs, proteins, pharmaceutical according to any one of claims 1 to 10, a material selected from the group consisting of drugs and biological response modifiers of the small molecule.
  12. 蛋白質が、サイトカインまたは抗体である、請求項11記載の医薬。 Protein is a cytokine or an antibody, according to claim 11 A medicament according.
  13. サイトカインが、IFN−γ、IL−2およびIL−15から選ばれるサイトカインである請求項12に記載の医薬。 Cytokine, IFN-gamma, A medicament according to claim 12, which is a cytokine selected from IL-2 and IL-15.
  14. 医薬が、腫瘍を伴う疾患に対する治療薬である、請求項1〜13のいずれか1項に記載の医薬。 The medicament is a therapeutic agent for diseases accompanied by tumors, medicament according to any one of claims 1 to 13.
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