RU2007147435A

RU2007147435A - Способ получения l-аминокислот методом ферментации с использованием бактерий, обладающих повышенной способностью к утилизации глицерина

Info

Publication number: RU2007147435A
Application number: RU2007147435/13A
Authority: RU
Inventors: Константин Вячеславович Рыбак (RU); Константин Вячеславович Рыбак; Екатерина Александровна СЛИВИНСКАЯ (RU); Екатерина Александровна Сливинская; Марина Евгеньевна Шереметьева (RU); Марина Евгеньевна Шереметьева; Юлия Александровна Оводова (RU); Юлия Александровна Оводова; Юрий Иванович Козлов (RU); Юрий Иванович Козлов
Original assignee: Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU); Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ)
Priority date: 2007-12-21
Filing date: 2007-12-21
Publication date: 2009-06-27
Also published as: RU2374322C2

Abstract

1. Способ получения L-аминокислоты, включающий: ! А) выращивание бактерии-продуцента L-аминокислоты семейства Enterobacteriaceae в питательной среде, содержащей глицерин, и ! Б) выделение L-аминокислоты из культуральной жидкости, отличающийся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что содержит глицеринкиназу, в которой ингибирование фруктозо-1,6-дифосфатом по типу обратной связи ослаблено, и указанная глицеринкиназа содержит замену по крайней мере одной аминокилоты на другую в области, соответствующей положениям с 233 по 235 в аминокислотной последовательности глицеринкиназы дикого типа, представленной в SEQ ID NO:4. ! 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная глицеринкиназа дополнительно содержит замену по крайней мере одной аминокислоты на другую в области, соответствующей положениям с 231 по 232. ! 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанная глицеринкиназа включает мутацию, выбранную из группы, состоящей из замены остатка Gly в положении 234 на остаток Asp, замены Lys-Gly-Gly в положениях с 233 по 235 на Arg-Ile-Pro и замены Gly-Gly-Lys-Gly-Gly в положениях с 231 по 235 на Arg-Ala-His-Leu-Ala. ! 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная бактерия далее модифицирована таким образом, что активности вспомогательного белка утилизации глицерина и/или глицерин-3-фосфатдегидрогеназы увеличены. ! 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что экспрессия указанного белка увеличена за счет увеличения числа копий гена или путем такой модификации последовательности, контролирующей экспрессию гена, в результате которой экспрессия гена усиливается. ! 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что �

Claims

1. Способ получения L-аминокислоты, включающий:

А) выращивание бактерии-продуцента L-аминокислоты семейства Enterobacteriaceae в питательной среде, содержащей глицерин, и

Б) выделение L-аминокислоты из культуральной жидкости, отличающийся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что содержит глицеринкиназу, в которой ингибирование фруктозо-1,6-дифосфатом по типу обратной связи ослаблено, и указанная глицеринкиназа содержит замену по крайней мере одной аминокилоты на другую в области, соответствующей положениям с 233 по 235 в аминокислотной последовательности глицеринкиназы дикого типа, представленной в SEQ ID NO:4.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная глицеринкиназа дополнительно содержит замену по крайней мере одной аминокислоты на другую в области, соответствующей положениям с 231 по 232.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанная глицеринкиназа включает мутацию, выбранную из группы, состоящей из замены остатка Gly в положении 234 на остаток Asp, замены Lys-Gly-Gly в положениях с 233 по 235 на Arg-Ile-Pro и замены Gly-Gly-Lys-Gly-Gly в положениях с 231 по 235 на Arg-Ala-His-Leu-Ala.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная бактерия далее модифицирована таким образом, что активности вспомогательного белка утилизации глицерина и/или глицерин-3-фосфатдегидрогеназы увеличены.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что экспрессия указанного белка увеличена за счет увеличения числа копий гена или путем такой модификации последовательности, контролирующей экспрессию гена, в результате которой экспрессия гена усиливается.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что активность триозофосфатизомеразы увеличена.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что активность указанной триозофосфатизомеразы увеличена за счет увеличения количества копий гена или путем изменения последовательности, контролирующей экспрессию гена, таким образом, что экспрессия этого гена усиливается.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из ароматической L-аминокислоты и неароматической L-аминокислоты.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанная ароматическая L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из L-фенилаланина, L-тирозина и L-триптофана.

10. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанная неароматическая L-аминокислота выбрана из группы, состоящей из L-треонина, L-лизина, L-цистеина, L-метионина, L-лейцина, L-изолейцина, L-валина, L-гистидина, L-глицина, L-серина, L-аланина, L-аспарагина, L-аспарагиновой кислоты, L-глутамина, L-глутаминовой кислоты, L-пролина и L-аргинина.

11. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная бактерия принадлежит к роду Escherichia или Pantoea.

12. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют глицерин, полученный как побочный продукт при производстве биодизельного топлива.