Claims (34)
1. Способ диагностики наличия у индивидуума дисфункции гормона роста или восприимчивости к дисфункции гормона роста, включающий1. A method for diagnosing an individual having dysfunction of growth hormone or susceptibility to dysfunction of growth hormone, comprising
a) получение от подлежащего обследованию индивидуума для анализа образца молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей проксимальную промоторную область гена гормона роста (GH1),a) obtaining from the subject to be examined for analysis of a sample of a nucleic acid molecule encoding the proximal promoter region of the growth hormone gene (GH1),
b) обследование указанной молекулы нуклеиновой кислоты на наличие нескольких из следующих шести однонуклеотидных полиморфизмов (SNP): 1, 6, 7, 9, 11 и 14, (описанных в Таблице 1), или их соответствующих гаплотипов (также описанных в Таблице 1), или полиморфизма с нарушением равновесия сцепления,b) examining said nucleic acid molecule for the presence of several of the following six single nucleotide polymorphisms (SNPs): 1, 6, 7, 9, 11 and 14, (described in Table 1), or their corresponding haplotypes (also described in Table 1), or linkage polymorphism,
c) и, если существует несколько указанных SNP или их соответствующих гаплотипов, или их соответствующих полиморфизмов, это означает, что индивидуум может иметь дисфункцию гормона роста или восприимчив к дисфункции гормона роста.c) and if there are several of these SNPs or their respective haplotypes, or their corresponding polymorphisms, this means that the individual may have growth hormone dysfunction or susceptible to growth hormone dysfunction.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что полиморфизм находится в положении 1144 области контроля локуса гена.2. The method according to claim 1, characterized in that the polymorphism is at position 1144 of the control region of the gene locus.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что полиморфизм находится в положении 1194 области контроля локуса гена.3. The method according to claim 1, characterized in that the polymorphism is at position 1194 of the control region of the gene locus.
4. Способ диагностики наличия у индивидуума дисфункции гормона роста или восприимчивости к дисфункции гормона роста, включающий4. A method for diagnosing an individual having dysfunction of growth hormone or susceptibility to dysfunction of growth hormone, comprising
a) получение от подлежащего обследованию индивидуума для анализа образца молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей проксимальную промоторную область гена гормона роста (GH1),a) obtaining from the subject to be examined for analysis of a sample of a nucleic acid molecule encoding the proximal promoter region of the growth hormone gene (GH1),
b) обследование указанной молекулы нуклеиновой кислоты на наличие любого одного или нескольких из следующих гаплотипов, указанных в Таблице 1 под номерами 3, 4, 5, 7, 11, 13, 17, 19, 23, 24, 26 или 29,b) examination of the indicated nucleic acid molecule for the presence of any one or more of the following haplotypes indicated in Table 1 under the numbers 3, 4, 5, 7, 11, 13, 17, 19, 23, 24, 26 or 29,
c) и, если существуют указанные гаплотипы, это означает, что индивидуум может иметь дисфункцию гормона роста или восприимчив к дисфункции гормона роста.c) and if the indicated haplotypes exist, this means that the individual may have growth hormone dysfunction or susceptible to growth hormone dysfunction.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что указанный этап обследования (b) включает амплификацию с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) указанного гена.5. The method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that said examination step (b) comprises amplification by polymerase chain reaction (PCR) of said gene.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что используются один или более из следующих праймеров:6. The method according to claim 5, characterized in that one or more of the following primers are used:
GGG AGC CCC AGC AAT GC (GF1 F) и/или GGG AGC CCC AGC AAT GC (GF1 F) and / or
TGT AGG AAG TCT GGG GTG С (GH1R).TGT AGG AAG TCT GGG GTG C (GH1R).
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что праймеры несут метку для облегчения обнаружения амплифицированного продукта.7. The method according to claim 6, characterized in that the primers carry a label to facilitate the detection of amplified product.
8. Набор, пригодный для применения способов диагностики по п.1 или 4, характеризующийся тем, что этот набор содержит8. A kit suitable for applying the diagnostic methods according to claim 1 or 4, characterized in that the kit contains
a) по меньшей мере, один из следующих праймеров для обнаружения и/или амплифицирования проксимальной промоторной области гена GH1:a) at least one of the following primers for detecting and / or amplifying the proximal promoter region of the GH1 gene:
GGG AGC CCC AGC AAT GC (GF1 F),GGG AGC CCC AGC AAT GC (GF1 F),
TGT AGG AAG TCT GGG GTG С (GH1R) и, по усмотрению,TGT AGG AAG TCT GGG GTG C (GH1R) and optionally
b) один или более из реагентов, необходимых для проведения ПЦР для амплификации нужных участков ДНК пациента.b) one or more of the reagents required for PCR to amplify the desired sections of the patient’s DNA.
9. Набор по п.8, отличающийся тем, что используются дополнительно или альтернативно другие праймеры, комплементарные выбранным участкам гена, содержащим SNP, обозначенные здесь как 1, 6, 7, 9, 11 и 14.9. The kit of claim 8, characterized in that additional or alternatively other primers are used that are complementary to selected regions of the gene containing SNP, designated here as 1, 6, 7, 9, 11 and 14.
10. Вектор, содержащий, по меньшей мере, проксимальную промоторную область гена GH1, характеризующийся тем, что указанная область содержит несколько из следующих SNP: 1, 6, 7, 9, 11 и 14.10. A vector containing at least the proximal promoter region of the GH1 gene, characterized in that the region contains several of the following SNPs: 1, 6, 7, 9, 11 and 14.
11. Вектор по п.10, отличающийся тем, что область содержит, по меньшей мере, SNP №6 и №9.11. The vector according to claim 10, characterized in that the region contains at least SNP No. 6 and No. 9.
12. Вектор по п.10, отличающийся тем, что область содержит, по меньшей мере, SNP№10 и №12.12. The vector according to claim 10, characterized in that the region contains at least SNP No. 10 and No. 12.
13. Вектор по п.10, отличающийся тем, что область содержит, по меньшей мере, SNP №8 и №11.13. The vector according to claim 10, characterized in that the region contains at least SNP No. 8 and No. 11.
14. Вектор по п.10, отличающийся тем, что область характеризуется одним или более из следующих гаплотипов, указанных в Таблице 1 под номерами: 3, 4, 5, 7,11,13, 17, 19, 23, 24, 26 или 29.14. The vector according to claim 10, characterized in that the region is characterized by one or more of the following haplotypes indicated in Table 1 under the numbers: 3, 4, 5, 7,11,13, 17, 19, 23, 24, 26 or 29.
15. Вектор по п.10, отличающийся тем, что он дополнительно содержит слитую конструкцию области контроля локуса с проксимальным промотором гена GH1.15. The vector of claim 10, characterized in that it further comprises a fused design of the locus control region with the proximal promoter of the GH1 gene.
16. Вектор по п.10, отличающийся тем, что проксимальная промоторная область присоединена к кодирующему участку выбранного гена, причем активность проксимального промотора может быть контролироваться.16. The vector of claim 10, wherein the proximal promoter region is attached to the coding region of the selected gene, and the activity of the proximal promoter can be controlled.
17. Вектор по п.16, отличающийся тем, что проксимальная промоторная область присоединена к кодирующему участку гена гомона роста (GH1).17. The vector according to clause 16, characterized in that the proximal promoter region is attached to the coding region of the gene for growth hormone (GH1).
18. Вектор по п.16 или 17, отличающийся тем, что проксимальная промоторная область дополнительно присоединена к метке, посредством чего можно следить за экспрессией указанного гена и, вследствие этого, за активностью проксимальной промоторной области.18. The vector according to clause 16 or 17, characterized in that the proximal promoter region is additionally attached to the label, whereby it is possible to monitor the expression of the specified gene and, consequently, the activity of the proximal promoter region.
19. Вектор по п.18, отличающийся тем, что метка представляет собой белковую метку.19. The vector according to claim 18, wherein the label is a protein label.
20. Вектор по п.10, отличающийся тем, что он дополнительно снабжен, по меньшей мере, одной дополнительной проксимальной промоторной областью гена гомона роста (GH1).20. The vector according to claim 10, characterized in that it is additionally equipped with at least one additional proximal promoter region of the growth hormone gene (GH1).
21. Вектор по п.20, отличающийся тем, что дополнительная проксимальная промоторная область отличается от исходной проксимальной промоторной области.21. The vector according to claim 20, characterized in that the additional proximal promoter region is different from the original proximal promoter region.
22. Вектор по п.21, отличающийся тем, что каждая проксимальная промоторная область присоединена к различной кодирующей последовательности.22. The vector according to item 21, wherein each proximal promoter region is attached to a different coding sequence.
23. Вектор по п.21 или 22, отличающийся тем, что каждая проксимальная промоторная область присоединена непосредственно или опосредованно к различной метке, способной осуществлять контроль за активностью каждого из промоторов.23. The vector according to item 21 or 22, characterized in that each proximal promoter region is attached directly or indirectly to a different label, capable of monitoring the activity of each of the promoters.
24. Клетка-хозяин, трансформированная вектором, как он определен в п.10.24. A host cell transformed with a vector as defined in claim 10.
25. Линия рекомбинантных клеток, которая сконструирована так, чтобы экспрессировать репортерную молекулу, чья экспрессия находится под контролем проксимального промотора гена гормона роста, характеризующаяся тем, что указанный проксимальный промотор содержит несколько из следующих SNP: 1, 6, 7, 9, 11 или 14 и/или один или более из следующих гаплотипов: 3, 4, 5, 7, 11, 13, 17, 19, 23, 24, 26 или 29, представленных в Таблице 1.25. A recombinant cell line that is designed to express a reporter molecule whose expression is controlled by the proximal promoter of the growth hormone gene, characterized in that said proximal promoter contains several of the following SNPs: 1, 6, 7, 9, 11 or 14 and / or one or more of the following haplotypes: 3, 4, 5, 7, 11, 13, 17, 19, 23, 24, 26, or 29, presented in Table 1.
26. Трансгенное животное, не являющееся человеком, у которого гормон роста экспрессируется недостаточно в результате того, что промотор GH1 содержит несколько из следующих SNP: 1, 6, 7, 9, 11 или 14 и/или в результате того, что указанный промотор характеризуется одним из следующих гаплотипов: 3, 4, 5, 7, 11, 13, 17, 19, 23, 24, 26 или 29, представленных в Таблице 1.26. A transgenic non-human animal in which growth hormone is not sufficiently expressed as a result of the fact that the GH1 promoter contains several of the following SNPs: 1, 6, 7, 9, 11 or 14 and / or as a result of the fact that said promoter is characterized one of the following haplotypes: 3, 4, 5, 7, 11, 13, 17, 19, 23, 24, 26 or 29, presented in Table 1.
27. Трансгенное животное, не являющееся человеком, по п.26, отличающееся тем, что промотор характеризуется гаплотипом 23.27. A transgenic non-human animal according to claim 26, characterized in that the promoter is characterized by haplotype 23.
28. Трансгенное животное, не являющееся человеком, по п.26, отличающееся тем, что промотор характеризуется гаплотипом 27.28. A transgenic non-human animal according to claim 26, characterized in that the promoter is characterized by haplotype 27.
29. Трансгенное животное, не являющееся человеком, по п.26, отличающееся тем, что промотор характеризуется гаплотипом 1.29. A transgenic non-human animal according to claim 26, wherein the promoter is characterized by haplotype 1.
30. Искусственная проксимальная промоторная область гена гормона роста (GH1), характеризуемая гаплотипом AGGGGTTAT-ATGGAG.30. Artificial proximal promoter region of the growth hormone gene (GH1), characterized by the haplotype AGGGGTTAT-ATGGAG.
31. Искусственная проксимальная промоторная область гена гормона роста (GH1), характеризуемая гаплотипом AG-TTGTGGGACCACT.31. Artificial proximal promoter region of the growth hormone gene (GH1), characterized by the haplotype AG-TTGTGGGACCACT.
32. Искусственная проксимальная промоторная область гена гормона роста (GH1), характеризуемая гаплотипом AG-TTTTGGGGCCACT.32. Artificial proximal promoter region of the growth hormone gene (GH1), characterized by the haplotype AG-TTTTGGGGCCCCACT.
33. Способ отбора терапевтически активных лекарств, которые могут быть использованы для лечения дисфункции гормона роста, состоящий в приведении клетки или линии клеток, как они определены в п.24 или 25 соответственно, в контакт с потенциальным лекарством и последующем определении того, влияет ли потенциальное лекарство на активность промоторной области гена гормона роста и, таким образом, на экспрессию (в случае линии клеток) репортерной молекулы.33. A method of selecting therapeutically active drugs that can be used to treat growth hormone dysfunction, comprising bringing the cell or cell line as defined in paragraphs 24 or 25, respectively, into contact with a potential drug and then determining whether the potential a medicine for the activity of the promoter region of the growth hormone gene and, thus, for the expression (in the case of a cell line) of a reporter molecule.
34. Способ отбора терапевтически активных лекарств, которые могут быть использованы для лечения дисфункции гормона роста, состоящий в приведении трансгенного животного, не являющееся человеком, как он определен в пп.27 - 30, в контакт с потенциальными лекарствами с последующим контролем роста указанного животного и того, проявляет ли потенциальное лекарство положительное действие на рост животного, с выводом о том, что рост является индикатором терапевтической активности указанного потенциального лекарства.34. A method for selecting therapeutically active drugs that can be used to treat growth hormone dysfunction, comprising bringing a transgenic non-human animal, as defined in paragraphs 27-30, into contact with potential drugs, followed by growth control of said animal and whether the potential drug has a positive effect on the growth of the animal, with the conclusion that growth is an indicator of the therapeutic activity of the indicated potential drug.