RU2005118079A - Флуоресцирующие белки и хромопротеины из видов, не относящихся к aequorea hydrozoa, и способы их получения - Google Patents

Claims (24)

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует флуоресцирующий или хромобелок, выбранная из группы, состоящей из

(a) нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, содержащий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 или 22;

(b) нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19 или 21;

(c) нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях строгости с нуклеиновой кислотой (a) или (b), указанных выше;

(d) нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, который имеет по меньшей мере приблизительно 75% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью (a), указанной выше;

(e) нуклеиновой кислоты, которая имеет по меньшей мере приблизительно 70% идентичность последовательности с нуклеотидной последовательностью (b), указанной выше;

(f) нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, имеющий по меньшей мере одну аминокислотную замену, делецию или инсерцию в аминокислотной последовательности, как показано в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 или 22;

(g) производного или миметика нуклеиновой кислоты (a), (b), (c), (d), (e) или (f), указанных выше;

(h) мутанта нуклеиновой кислоты (a), (b), (c), (d), или (e) указанных выше;

(i) нуклеиновой кислоты, которая отличается от нуклеиновой кислоты (b), (c), (d), (e), (f), (g) или (h), указанных выше, вследствие вырожденности генетического кода; и

(j) фрагмента нуклеиновой кислоты (a) или (b), указанных выше, кодирующего пептид, размером по меньшей мере из 15 аминокислотных остатков.

2. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная нуклеиновая кислота выделена из организма из класса Hydrozoa.

3. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная нуклеиновая кислота выделена из организма из подотряда Anthomedusae.

4. Молекула нуклеиновой кислоты по п.1, где указанная нуклеиновая кислота выделена из рода Phialidium.

5. Вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по п.1.

6. Экспрессирующая кассета, содержащая (a) молекулу нуклеиновой кислоты по п.1; и (b) регуляторные элементы для экспрессии указанной молекулы нуклеиновой кислоты в желательной клетке-хозяине.

7. Клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, вектор по п.5 или экспрессирующую кассету по п.6.

8. Стабильная клеточная линия, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, вектор по п.5 или экспрессирующую кассету по п.6.

9. Трансгенное растение, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, вектор по п. 5 или экспрессирующую кассету по п.6.

10. Трансгенное животное, содержащее молекулу нуклеиновой кислоты по п.1, вектор по п.5 или экспрессирующую кассету по п.6.

11. Способ получения флуоресцирующего или хромобелка, включающий (a) обеспечение молекулы нуклеиновой кислоты по п.1, оперативно связанную с подходящими регулирующими экспрессию элементами, (b) экспрессию флуоресцирующего или хромобелка из указанной молекулы нуклеиновой кислоты, и (c) выделение белка, по существу не содержащего другие белки.

12. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая фрагмент молекулы нуклеиновой кислоты по п.1, где указанный фрагмент кодирует пептид, размером по меньшей мере из 100 аминокислот

13. Молекула нуклеиновой кислоты, имеющая последовательность, которая является по существу такой же как, или идентичной нуклеотидной последовательности по меньшей мере из 300 остатков молекулы нуклеиновой кислоты по п. 1.

14. Выделенный флуоресцирующий или хромобелок, выбранный из группы, состоящей из

(a) белка, включающего аминокислотную последовательность показанную в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 или 22;

(b) белка, кодируемого молекулой нуклеиновой кислоты, содержащий нуклеотидную последовательность показанную в SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19 или 21;

(c) белка, который имеет по меньшей мере приблизительно 75% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью (a) или (b), указанных выше;

(d) мутанта белка (a), (b) или (c), указанных выше;

(e) белка, имеющий по меньшей мере одну аминокислотную замену, делецию или инсерцию в аминокислотной последовательности, показанную в SEQ ID NO: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 или 22;

(f) производного белка (a), (b), (c), (d) или (e), указанных выше;

(g) фрагмента белка (a), (b), (c), (d), (e) или (f), указанных выше, содержащего в себе по меньшей мере 15 аминокислотных остатков; и

(h) белка, имеющего последовательность, которая является в основном такой же как, или идентичной аминокислотной последовательности по меньшей мере из 100 остатков, (a) или (b), указанных выше.

15. Белок слияния, содержащий белок по п.14.

16. Антитело, специфически связывающееся с белком по п.14.

17. Набор, содержащий нуклеиновую кислоту по п.1, вектор по п.5, экспрессирующую кассету по п.6, белок по п.14, белок слияния по п.15 или средства для их получения.

18. Олигонуклеотидный зонд или праймер, содержащий нуклеотидную последовательность, способный к гибридизации с нуклеотидной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21.

19. Способ мечения биологической молекулы, включающий связывание указанной биологической молекулы с белком по п.14.

20. Способ мечения клетки, включающий продуцирование белка по п.14 в клетке.

21. Способ мечения органеллы клетки, включающий продуцирование белка по п.14, слитого с подходящим внутриклеточным сигналом локализации в клетке.

22. Способ анализа биологической молекулы, клетки или органеллы клетки, включающий детекцию флуоресцентного сигнала от белка по п.14 или 15.

23. Способ анализа биологической молекулы, клетки или органеллы клетки, включающий экспрессию молекулы нуклеиновой кислоты по п.1 в клетке.

24. Способ детекции биологической молекулы, включающий детекцию флуоресцентного сигнала от белка по п.14 или 15.