RU2004251C1 - Способ выделени антигена 8 возбудител мелиоидоза - Google Patents

Description

иммуносорбента и он становитс  непригодным дл  многократного повторного использовани . Применение глицхИН-NaOH буфера, рН 10,5-11.0 во всех случа х обеспечивало эффективное выделение АГ8 и не вли ло на АГ-св зывающую активность иммобилизованных на носителе МКА. Многократное применение (три и более раз) иммуносорбента было продемонстировано во всех опытах по получению высокоочи- щенного антигена.

Таким образом оптимальным десорби- рующим агентом признан глицерин-NaOH буфер, рН 10.5-11,0.

П р и м е р 3. Изучение диапазона воз- можных источников выделени  АГ8.

Дл  выделени  АГ8 использовали различные антигенные смеси: водно-солевые экстракты, формамидные экстракты и экс- трацеллюл рные антигены. В таблице пред- ставлены данные по очистке АГ8.

Установлено, что выход АГ8 зависит от нагрузки на колонку и от насыщенности этим АГ исходного материала. Так, при относительно небольшом содержании суммарного коли- чества Сахаров удельна  концентраци  АГ8 в ЭЦА максимальна. Менее насыщенным АГ 8  вл ютс  водно-солевой и формамидный экстракты . Поэтому при использовании последних в качестве источника АГ8 следует увеличивать нагрузку на колонку исходной антигенной смеси, а при препаративном получении АГ8 наиболее пригодным исходным материалом  вл етс  ЭЦА.

Гомогенность и идентичность образцов АГ8, полученных в опытах, представленных в таблице, была подтверждена с помощью реакции иммунодиффузии в геле и иммуно- электрофореза с гипериммунной поликло- нальной сывороткой.

Пример 4. Сравнительна  оценка иммунохимической гомогенности антигенных препаратов, приготовленных различными способами.

Антигенный состав различных препара- тов, приготовленных с помощью водно-солевой , формамидной экстракции, ионообменной и аффинной хроматографии, изучали с помощью иммуноэлектрофореза с гипериммунной поликлональной козлиной сывороткой против антигенов возбудител  мелиоидоза (см. чертеж). На чертеже показана Иммунофореграмма антигенов Р. pseudomallei III, выделенных различными методами.

1,5 - В СЭ, приготовленный в результате клеток ультразвуком. Концентраци  - 3 мг/мл.

2-формамидный экстракт. Концентраци  - 12,5 мг/мл.

3- АГ, приготовленный после ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-сефадексе А-25. Концентраци  - 12,5 мг/мл.

4- АГ8 очищенный методом аффинной хроматографии с помощью иммобилизованных на сефарозе МКА против данного АГ. Концентраци  -5 мг/мл.

В продольные канавки внесена гипериммунна  козлина  сыворотка против клеток P.pseudomallei 100.

Иммунохимическа  гомогенность АГ8 зарегистрирована при выделении его с помощью моноклонального иммуносорбента методом аффинной хроматографии.

Таким образом, предлагаемый способ очистки АГ8 возбудител  мелиоидоза с помощью моноклонального иммуносорбента позвол ет выдел ть из различных антигенных смесей иммунохимически гомогенный АГ8, пригодный дл  последующего использовани  в иммунохимических и иммунологических исследовани х.

(56) Захарова И.Я., Косенко Л.В. Изучение микробных полисахаридов. Киев, Наукова думка, 1982, с. 25-26.

Журнал микробиологи , эпидемиологи  и микробиологи , 1981, № 4, с. 78-82.

Пивень Н.Н., Смирнова В.И. Выделение , очистка и химический состав поверхностного полисахаридного антигенного комплекса возбудител  мелиоидоза. В кн: Особо опасные инфекционные заболевани : диагностика, профилактика и биологические свойства возбудителей, Сб. науч. работ, Волгоград, 1989, вып. 4, с. 111-117.

Сводна  таблица данных по очистке АГ8 методом аффинной хроматографии.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНА 8 ВОЗБУДИТЕЛЯ МЕЛИОИДОЗА из антигенной смеси, отличающийс  тем, что, с целью повышени  чистоты антигена, антигенную смесь пропускают через колонку с

   Продолжение таблицы

   сорбентом CNBr-сефароза 4В, коньюгиро- ванна  с моноклональными антителами против антигена 8 мелиоидоза, в течение 120 - 150 мин при концентрации антител 2 мг/мл гел  с последующей десорбцией антигена глицин-NaOH буфером, рН 10,5 - 11,0.

   ,

   1

   2 3