RU2000116C1 - Способ получени пробиотика дл животноводства, преимущественно птицеводства - Google Patents

Description

Целью изобретени   вл етс  способ получени  пробиотика Лактин-К дл  направленного формировани  и стабилизации микробного ценоза пищеварительного тракта птиц, увеличени  их продуктивности, снижени  отрицательного воздействи  стрессов..

Это достигаетс  использованием в качестве продуцентов селекционированных культур индигенной микрофлоры пищеварительного тракта птиц Enterococcus faeclum, Lactobaclllus sallvarlus и Lfermentum, которые раздельно выращивают при оптимальных услови х и получают высокие титры клеток в культуральиой жидкости , сухих монокультурах и готовом препарате .

Нормальна  микрофлора цыпл т формируетс  в течение первого мес ца после вылуплени . Состав молочнокислых бактерий в этот период измен етс  от энтерококков до преобладани  определенных видов лактобацилл. Антагонистическа  активность обнаружена у 70% штаммов L.salivarlus, 40% - L.fermentum, 25% - Lbuchnerl и практически у всех энтерококков . Установлено, что отдельные штаммы, обладающие значительной антагонистической активностью, способны адгезировать на эпителиальных клетках тонкого кишечника кур, колонизиру  его,синтезировать витамины группы В и другие биологические активные вещества, устойчивы к действию р да антибиотиков. Штаммы, составл ющие основу препарата, селекционированы по вышеупом нутым признакам и депонированы во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика. Представители селекционированных видов лактобацилл и энтерококков наиболее часто встречаютс  в составе нормальной микрофлоры пищеварительного тракта птиц.

Штамм Е.faeclum ВКПМ В-2579 - факультативный анаэроб, каталазоотрица- тельный, образует аммиак из аргинина, гидролизует эскулин, растет в среде с рН 9,6, 6,5% NaCI. 40% желчи, 4% таурохолата натри , выживает после прогрева при 63°С в течение 30 мин, восстанавливает молоко с лакмусом и метиленовой синью, сбраживает маннозу, галактозу, трегалозу. мальтозу, сахарозу, раффинозу, глюкозу, лактозу, салицин , целлобиозу, фруктору. Растет при температуре 10 и 50°С.

Штамм.синтезирует витамины группы В: тиамин 1,0-1,6 мкг/rCB, рибофлавин 20- 22.5. никотиновую кислоту 450-675, пири- доксин 2 -3,7; угнетает рост патогенных кишечных палочек, сальмонелл, проте , стафилококка , шигелл; синтезирует р д аминокислот , в том числе незаменимые: фенила- ланин 24 мкг/мл, лейцин 29, лизин 5, треонин 11; обладает высоким индексом адгезивности к энтероцитам кишечника цыпл т (4,68 ± 2,67). Устойчив и малочувствителен (диаметр зон угнетени  роста до 10 мм) к действию тетрациклина, олеандомицина, метициллина, оксациллина , аминогликозидных антибиотиков (стрел-, томицина, канамицина).

Штамм обладает антистрессовым и противоопухолевым действием.

Оптимальна  температура дл  роста

37-44°С, рН среды ,5-6,7, концентраци  углеводов (глюкозы, сахарозы) 1,7-2,2%, аминного азота ферментолизата БВК 20-60 мг%. Достигает высокий удельной скорости роста (1.4 ).

Штамм Lsalivarlus ВКПМ В-5001 - факультативный анаэроб, каталазоотрица- тельный, сворачивает и слабо пептонизирует молоко, растет при 40% желчи , гомоферментативный, растет при 45°С.

но не при 20 и 50°С, сбраживает фруктозу, галактозу, лактозу, мальтозу, маннит. маннозу . раффинозу, сахарозу, трегалозу, глюкозу , мелибиозу. Синтезирует витамины группы В: 950 мкг/rCB никотиновой кислоты , 95 рибофлавина, 3,1 пиридоксина, 10 тиамина; аминокислоты: аланин 17 мкг/мл, цистеин 32, лейцин 12, лизин 4; угнетает рост патогенных кишечных палочек, проте , сальмонелл, стафилококков. Адгезирует к

энтероцитам кишечника цыпл т, облада  колонизационной реэистентностью (ИАМ 1,3 ± 0,51). Устойчив и малочувствителен к тетрациклину, олеандомицину, метицилли- ну. оксациллину, аминогликозидам (стрептомицину , канамицину).

Оптимальные услови  дл  роста: температура 42-48°С, Рн среды 5.8-6,0, концентраци  углеводов (глюкозы, сахарозы) 2,2-2.5%, аминного азота ферментолизата

БВК 64-88 мг%. Скорость роста при от и- мальных услови х достигает 1,0 .

Штамм Lfermentum ВКПМ В-5005 - факультативный анаэроб, каталазоотрица- тельный. гетероферментативный,

сворачивает и слабо петонизирует молоко, растет в среде с 4% тауроходата Na. растет при 45°С, но не при 15°С. Сбраживает фруктозу , галактозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, раффинозу, сахарозу, мелибиозу, рибозу.

Синтезирует витамины группы В: 125 мкг/rCB никотиновой кислоты, 35 рибофлавина . 1,0 пиридоксина, 10,5 тиамина, угнетает рост патогенных кишечных палочек, сальмонелл,проте , клебсиелл.

Обладает способностью адгеэировать к энтероцитам кишечника цыпл т (ИАМ 1,42 ± 0,58). Устойчив и малочувствителен к действию тетрациклина, левомицитииа, олеандомицина, пенициллина, оксацилли- на, метициллина.

Оптимальные услови  дл  роста: температура 42-48°С, рН среды 5,8-6,0. концентраци  углеводов (глюкозы, сахарозы) 2,2-2,5%, аминного азота ферментолизата БВК 64-88 мг%. Скорость роста при оптимальных услови х достигает 0,7 «Г .

Культивирование, сепарирование и сушку штаммов осуществл ют раздельно. Раздельное культивирование штаммов позвол ет провести этот процесс при оптимальных дл  каждой культуры параметрах, что обеспечивает получение высокого титра клеток в культуральной жидкости и увеличение выхода готового препарата.

Пример 1.С целью получени  препарата готов т питательную среду, содержащую ферментативные гидролизаты крахмала и БВК в концентраци х, оптималь- ных дл  роста культур. Внос т 0,1% посевного материала и выращивают при оптимальных услови х с посто нной работающей мешалкой, без подачи воздуха; нужное рН поддерживают 20%-ным водным аммиаком. Длительность ферментации в зависимости от культуры 9-18 ч, титр клеток в культуральной жидкости 1-9 млрд/мл. Клетки концентрируют в 10-12 раз с помощью сепарировани  и высушивают на распыли- тельной сушилке при температуре воздуха на входе 95°С и на выходе 65°С дл  энтерококков и 65°С на входе и 40°С на выходе дл  лактобацилл. Влажность порошка не брлее 10%, активность 150-200 млрд.кл/r дл  эн-

0

5

0

5 0 5 0

терококков и 1-10 млрд.кл/r длч лактобацилл .

Препараты сухих монокультур E.faeclum, Lsallvarius, L.fermentum смешивают , чтобы получить соотношение клеток 9-9,8:0.1-1.0:0,1-1.0 и стандартизируют кукурузной мукой или цеолитом о активности 50 и/или 10 млрд.кл/г.

Пример 2. Пробиотик получают, как описано выше, но с использованием при приготовлении питательной среды свекловичной мелассы вместо ферментолизата крахмала (учитыва  содержание сахара в мелассе).

П р и м е р 3. Пробиотик получают, как описано выше, но в питательную среду дополнительно внос т 0,3% кукурузного экстракта в качестве источника ростовых веществ.

Применение лробиотика в птицеводстве обеспечивает формирование и стабилизацию нормального микробного ценоза пищеварительного тракта молодн ка цыпл т , повышение суточных привесов и сохранности , снижение затрат корма и отрицательного действи  стрессов.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  пробиотика дл  животноводства , преимущественно птицеводства , путем раздельного культивировани , сепарировани  и сушки штамма Enterococcus faeclum ВКПМ N В-2575 и молочнокислых бактерий с последующим смешиванием сухих монокультур, отличающийс  тем, что из молочнокислых бактерий используют штаммы Lactobaclllus Sallvarlus ВКПМ N В-5001 и Lactobaclllus fermentum ВКПМ N В-5006, а монокультуры смешивают при соотношении клеток 9- 9,8:0,1-1,0:0,1-10 соответственно.

   Количество молочнокислых бактерий в содержимом зоба 15-дневных цыпл т