RU198611U1 - Blood sample preparation device for liquid biopsy with recombinant protein - Google Patents
Blood sample preparation device for liquid biopsy with recombinant protein Download PDFInfo
- Publication number
- RU198611U1 RU198611U1 RU2019122078U RU2019122078U RU198611U1 RU 198611 U1 RU198611 U1 RU 198611U1 RU 2019122078 U RU2019122078 U RU 2019122078U RU 2019122078 U RU2019122078 U RU 2019122078U RU 198611 U1 RU198611 U1 RU 198611U1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tube
- blood
- dna
- recombinant protein
- liquid biopsy
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61J—CONTAINERS SPECIALLY ADAPTED FOR MEDICAL OR PHARMACEUTICAL PURPOSES; DEVICES OR METHODS SPECIALLY ADAPTED FOR BRINGING PHARMACEUTICAL PRODUCTS INTO PARTICULAR PHYSICAL OR ADMINISTERING FORMS; DEVICES FOR ADMINISTERING FOOD OR MEDICINES ORALLY; BABY COMFORTERS; DEVICES FOR RECEIVING SPITTLE
- A61J1/00—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes
- A61J1/05—Containers specially adapted for medical or pharmaceutical purposes for collecting, storing or administering blood, plasma or medical fluids ; Infusion or perfusion containers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Устройство для пробоподготовки крови при проведении жидкостной биопсии с рекомбинантным белком относится к медицине, точнее к клинической лабораторной диагностике, и может найти применение для диагностики онкологических заболеваний.Оно представляет собой вакуумную пробирку со штрих-кодом и защитной крышкой в сборе с резиновой пробкой, на стенки которой нанесена смесь ЭДТА К2 и рекомбинантного белка RecA в концентрации от 1 до 5 мкМ с учетом заполнения пробирки кровью, с последующей стерилизацией пробирки радиационным методом.Устройство обеспечивает повышение степени сохранности свободной внеклеточной ДНК в плазме крови и увеличении срока хранения забранного биоматериала.Полезная модель разработана в ООО «Корвэй» и прошла апробацию в Клинике высоких медицинских технологий им. Н.И. Пирогова Санкт-Петербургского государственного университета.A device for blood sample preparation for liquid biopsy with recombinant protein refers to medicine, more precisely to clinical laboratory diagnostics, and can be used for the diagnosis of oncological diseases.It is a vacuum tube with a barcode and a protective cap assembled with a rubber stopper, on the walls which was applied with a mixture of EDTA K2 and recombinant RecA protein at a concentration of 1 to 5 μM, taking into account filling the tube with blood, followed by sterilization of the tube by the radiation method. The device provides an increase in the degree of preservation of free extracellular DNA in blood plasma and an increase in the shelf life of the collected biomaterial. in LLC "Corvey" and was tested in the Clinic of high medical technologies named after N.I. Pirogov St. Petersburg State University.
Description
Полезная модель относится к медицине, точнее к клинической лабораторной диагностике и онкологии, и может найти применение для диагностики онкологических заболеваний.The useful model relates to medicine, more precisely to clinical laboratory diagnostics and oncology, and can be used for the diagnosis of oncological diseases.
Настоящая полезная модель касается совершенствования устройства для пробоподготовки крови с целью проведения диагностической процедуры жидкостной биопсии.This utility model concerns the improvement of a blood sample preparation device for the purpose of performing a diagnostic liquid biopsy procedure.
На основе проведенного поиска по патентной и научно-технической литературе по выпуску и использованию пробирок для пробоподготовки крови для проведения диагностической процедуры жидкостной биопсии выявлены следующие материалы:Based on the search carried out in the patent and scientific and technical literature on the production and use of tubes for blood sample preparation for the diagnostic procedure of liquid biopsy, the following materials were identified:
Патент 2 352 636, 2007142152/13, 14.11.2007 ФГУП "АзНИИРХ". «Способ хранения ДНК», в соответствии с которым образец ДНК помещают в бидистиллированную воду, содержащую консервант в виде сульфата марганца в концентрации 0,08125-8,125 мМ, и хранят при температуре -20°С.Patent 2 352 636, 2007142152/13, 14.11.2007 FSUE "AzNIIRKH". "DNA storage method", according to which a DNA sample is placed in bidistilled water containing a preservative in the form of manganese sulfate at a concentration of 0.08125-8.125 mM, and stored at a temperature of -20 ° C.
Патент 2 647 468, 2013154967, 27.06.2012. Патентообладатель(и): СЕЛЛЕСТИС ЛИМИТЕД (AU). Способ анализа клеточно-опосредованного иммунного ответа с повышенной чувствительностью.Patent 2 647 468, 2013154967, 27.06.2012. Patentee (s): SELESTIS LIMITED (AU). Method for analysis of cell-mediated immune response with increased sensitivity.
Способ включает совместную инкубацию образца, включающего лимфоциты от субъекта, по меньшей мере, с двумя наборами пептидов, полученных из белкового антигена, при этом пептиды охватывают весь белковый антиген или его часть, и заключается в измерении активности клеточно-опосредованного иммунного ответа у субъекта, при этом указанный способ.The method includes co-incubating a sample containing lymphocytes from a subject with at least two sets of peptides derived from a protein antigen, wherein the peptides encompass all or part of the protein antigen, and consists in measuring the activity of a cell-mediated immune response in a subject, when this is the specified way.
Патент HUE034488 (Т2) - 2018-02-28. [US] STRECK INC+. Устройство коллекции крови для стабилизации Cell-free ДНК-плазмы.Patent HUE034488 (T2) - 2018-02-28. [US] STRECK INC +. Blood collection device for cell-free DNA plasma stabilization.
В патенте описаны способ и устройство для стабилизации биологического образца, включающего в себя, по крайней мере, одну циркулирующую внеклеточную нуклеиновую кислоту от субъекта. Устройство содержит консервант, антикоагулянт и гасящий агент.The patent discloses a method and apparatus for stabilizing a biological sample including at least one circulating extracellular nucleic acid from a subject. The device contains a preservative, anticoagulant and quenching agent.
Патент CN107574225 (А) - 2018-01-12. BEIJING NGS BIOTECH СО LTD+. Предохранение внеклеточной ДНК, вакуумная пробирка для сбора крови и метод изготовления вакуумной пробирки для сбора крови.Patent CN107574225 (A) - 2018-01-12. BEIJING NGS BIOTECH CO LTD +. Extracellular DNA preservation, vacuum blood collection tube and vacuum blood collection tube manufacturing method.
Изобретение описывает консервант внеклеточной ДНК (cell free DNA, cfDNA) из крови и вакуумную пробирку для сбора крови, состоящую из консерванта cfDNA крови, содержащего следующие компоненты по весовым частям: 1-200 частей EDTA, 1-500 частей имидазол, 1-200 частей глицеральдегида, 1-1000 частей хлорида натрия, 1-500 частей гидрохлорида гуанидина, 1-1000 частей SDS и 5000-7000 частей очищенной воды. Длительность хранения образца крови при комнатной температуре существенно продлевается, вакуумная пробирка для сбора крови достаточно удобна для транспортировки образца плазмы на большие расстояния.The invention describes a preservative for extracellular DNA (cell free DNA, cfDNA) from blood and a vacuum tube for collecting blood, consisting of a blood cfDNA preservative containing the following components by weight: 1-200 parts EDTA, 1-500 parts imidazole, 1-200 parts glyceraldehyde, 1-1000 parts of sodium chloride, 1-500 parts of guanidine hydrochloride, 1-1000 parts of SDS and 5000-7000 parts of purified water. The storage time of the blood sample at room temperature is significantly extended, and the vacuum blood collection tube is convenient enough for transporting the plasma sample over long distances.
Патент CN107760673 (А) - 2018-03-06. NANTONG PUHUI PRECISION MEDICINE TECH СО LTD+. Стабилизатор свободной ДНК и пробирка для отбора проб для детектирования свободной ДНК.Patent CN107760673 (A) - 2018-03-06. NANTONG PUHUI PRECISION MEDICINE TECH CO LTD +. Free DNA stabilizer and sampling tube for free DNA detection.
Стабилизатор содержит два раствора. Первый включает буферную жидкость, антикоагулянт, стабилизатор клеток, ингибитор метаболизма и растворитель; второй - буферную жидкость, антикоагулянт, биосовместимый с кровью реагент, стабилизатор свободной ДНК и консервант. В этом режиме свободная ДНК в крови может стабильно сохраняться при нормальной температуре в режиме реализации, предусмотренной изобретением.The stabilizer contains two solutions. The first includes a buffer fluid, an anticoagulant, a cell stabilizer, a metabolic inhibitor, and a solvent; the second is a buffer liquid, an anticoagulant, a blood biocompatible reagent, a free DNA stabilizer and a preservative. In this mode, free DNA in the blood can be stably maintained at normal temperature in the implementation mode provided by the invention.
Патент CN106701743 (А) - 2017-05-24GUANGZHOU HESHI BIOTECHNOLOGY СО LTD+. Пробирка для сбора крови для защиты и стабилизации свободной ДНК.Patent CN106701743 (A) - 2017-05-24 GUANGZHOU HESHI BIOTECHNOLOGY CO LTD +. Collection tube to protect and stabilize free DNA.
В изобретении описана пробирка для сбора крови для защиты и стабилизации свободной ДНК, включающая герметизирующую капсулу и защитный агент из EDTA-3K, идоксуридина, глицина, bestain, AEBSF и т.д. при концентрации соответственно 50 г/л, 550 г/л, 30 г/л, 1 мг/л, 0,172 г/л, 0,24 г/л. Свободная ДНК в крови в этой пробирке может быть сохранена в течение 14 дней при нормальной температуре.The invention describes a blood collection tube for protecting and stabilizing free DNA, comprising a sealing capsule and a protective agent of EDTA-3K, idoxuridine, glycine, bestain, AEBSF, etc. at a concentration of 50 g / l, 550 g / l, 30 g / l, 1 mg / l, 0.172 g / l, 0.24 g / l, respectively. Free DNA in the blood in this tube can be stored for 14 days at normal temperature.
Патент CN106834101 (А) - 2017-06-13. GUANGZHOU HESHI BIOTECHNOLOGY СО LTD+. Пробирка для сбора крови для защиты и стабилизации вирусной ДНК.Patent CN106834101 (A) - 2017-06-13. GUANGZHOU HESHI BIOTECHNOLOGY CO LTD +. Blood collection tube to protect and stabilize viral DNA.
Описана пробирка для сбора крови для защиты и стабилизации вирусной ДНК, содержащая добавку, которую готовят путем растворения гуанидин изотиоцианата, защитного агента вируса ДНК chelex-100, идоксуридина, глицина в воде в определенных пропорциях. ДНК вируса в крови может быть стабильно сохранена в течение 15 дней при комнатной температуре.A blood collection tube for the protection and stabilization of viral DNA is described, containing an additive prepared by dissolving guanidine isothiocyanate, a protective agent of the chelex-100 DNA virus, idoxuridine, glycine in water in certain proportions. The DNA of the virus in the blood can be stored stably for 15 days at room temperature.
Результаты поиска по фирмам, выпускающим пробирки для жидкостной биопсии:Search Results for Liquid Biopsy Tubes:
- Greiner Bio-one Preanalytics, Австрия - пробирки VACUETTE® K2ЭДТА и VACUETTE® K3ЭДТА для определения вирусных маркеров в венозной крови.- Greiner Bio-one Preanalytics, Austria - VACUETTE ® K 2 EDTA and VACUETTE ® K 3 EDTA tubes for the determination of viral markers in venous blood.
- 
- RUSTECH, Германия - пробирки с ЭДТА для гематологических исследований.- RUSTECH, Germany - tubes with EDTA for hematological research.
- Roche, Швейцария - пробирки для анализа внеклеточной ДНК Cell-Free DNA Collection Tube. Консервация внеклеточной ДНК за счет состава специальной формулы, предотвращающего лизис клеток.- Roche, Switzerland - Cell-Free DNA Collection Tube. Preservation of extracellular DNA due to the composition of a special formula that prevents cell lysis.
- STRECK, США - пробирки CELL-FREE DNA ВСТ (blood collection tubes). Уникальный консервирующий состав предотвращает выброс геномной ДНК, позволяя изолировать внеклеточную ДНК высокого качества. Пробирка предназначена только для научных целей.- STRECK, USA - CELL-FREE DNA ВСТ (blood collection tubes) tubes. The unique preservative composition prevents the release of genomic DNA, allowing the isolation of high quality extracellular DNA. The tube is for scientific purposes only.
- Nor gen Biotech, Канада - пробирки cf-DNA/cf-RNA Preservative Tubes. Для венозной крови и консервации свободной внеклеточной циркулирующей ДНК/РНК. Предотвращает апоптоз клеток крови и фрагментацию геномной ДНК.- Nor gen Biotech, Canada - cf-DNA / cf-RNA Preservative Tubes. For venous blood and preservation of free extracellular circulating DNA / RNA. Prevents apoptosis of blood cells and genomic DNA fragmentation.
- Qiagen, Нидерланды - пробирки PAXgene Blood ccfDNA Tubes для сохранения и исследования циркулирующей свободной внеклеточной ДНК. Только для исследовательских целей.- Qiagen, The Netherlands - PAXgene Blood ccfDNA Tubes for preservation and research of circulating free extracellular DNA. For research purposes only.
- Guangzhou Improve Medical Instruments, Китай - ImproGene Cell Free DNA Tube. Изделие представляет собой вакуумную пробирку для сбора крови для стандартизации преаналитической фазы жидкостных биопсийных анализов с целью повышения точности лабораторных исследований. Содержит антикоагулянт и консервант, которые стабилизируют клетки крови in vitro.- Guangzhou Improve Medical Instruments, China - ImproGene Cell Free DNA Tube. The product is a vacuum blood collection tube for standardizing the preanalytical phase of liquid biopsy analyzes to improve the accuracy of laboratory tests. Contains anticoagulant and preservative that stabilize blood cells in vitro.
На основе анализа представленных документов не обнаружено пробирок для проведения жидкостной биопсии с содержанием в них рекомбинантных белков.Based on the analysis of the documents submitted, no test tubes for liquid biopsy containing recombinant proteins were found.
В качестве прототипа для настоящей полезной модели нами взято устройство для стабилизации внеклеточной плазмидной ДНК фирмы Guangjou Improve Medical Instruments, Китай. Устройство представляет собой вакуумную пробирку со штрих-кодом и защитной крышкой фиолетового цвета в сборе с резиновой пробкой. На стенки пробирки нанесены этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) К2, 6-аминокапроновая кислота, глицин и инозитол.As a prototype for this utility model, we have taken a device for stabilizing extracellular plasmid DNA from Guangjou Improve Medical Instruments, China. The device is a vacuum tube with a barcode and a purple protective cap assembled with a rubber stopper. Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) K2, 6-aminocaproic acid, glycine and inositol were applied to the walls of the test tube.
Пробирка предназначена для исследования плазмы крови в различных медицинских целях, в том числе для жидкостной биопсии.The test tube is designed for the study of blood plasma for various medical purposes, including liquid biopsy.
Использование нами этой пробирки показало, что заявленный химический состав для стабилизации внеклеточной ДНК не обеспечивает полного сохранения свободной внеклеточной ДНК, необходимой для проведения с нею дальнейших диагностических манипуляций.Our use of this test tube showed that the claimed chemical composition for stabilizing extracellular DNA does not provide complete preservation of free extracellular DNA, which is necessary for carrying out further diagnostic manipulations with it.
Технический результат настоящей ПМ состоит в повышении степени сохранности свободной внеклеточной ДНК за счет содержания в устройстве рекомбинантного белка, связывающего свободную ДНК.The technical result of this PM is to increase the degree of preservation of free extracellular DNA due to the content in the device of a recombinant protein that binds free DNA.
Этот результат достигается тем, что в известном устройстве, представляющем собой вакуумную пробирку со штрих-кодом и защитной крышкой фиолетового цвета в сборе с резиновой пробкой и нанесенной на стенки пробирки этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) с последующей стерилизацией пробирки радиационным методом, согласно ПМ, оно дополнительно содержит рекомбинантный белок RecA, связывающий свободную ДНК, в концентрации от 1 до 5 мкМ.This result is achieved by the fact that in the known device, which is a vacuum tube with a barcode and a protective violet cap complete with a rubber stopper and ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) applied to the tube walls, followed by sterilization of the tube by the radiation method, according to PM, it is additionally contains recombinant protein RecA, which binds free DNA, at a concentration of 1 to 5 μM.
Дополнительное использование в устройстве рекомбинантного белка RecA, выбранного нами исходя и его уникального протективного свойства в отношении нуклеиновых кислот, основанного на его фундаментальных биологических свойствах, обеспечивающих сохранность ДНК, как нами показано в проведенных экспериментах, обеспечивает лучшую сохранность свободной ДНК в течение времени.The additional use of the recombinant RecA protein in the device, which we have chosen on the basis of its unique protective property against nucleic acids, based on its fundamental biological properties, ensuring the preservation of DNA, as we have shown in our experiments, provides a better preservation of free DNA over time.
Приводим основные свойства рекомбинантного белка RecA, послуживших основанием для его использования при проведении жидкостной биопсии.Here are the main properties of the recombinant RecA protein, which served as the basis for its use in liquid biopsy.
Белок RecA является ключевым участником основного процесса гомологичной рекомбинации, обеспечивая поиск гомологичных молекул ДНК, их спаривание, и обмен одною из цепей сцепленного гетеродуплекса (на модели бактерии Е. coli).The RecA protein is a key participant in the main process of homologous recombination, providing the search for homologous DNA molecules, their pairing, and the exchange of one of the chains of the linked heteroduplex (in the model of E. coli bacteria).
Белок RecA в присутствии аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) связывается с однонитевой ДНК (онДНК), полимеризуется из отдельных субъединиц, и формирует правозакрученный спиральный филамент.In the presence of adenosine triphosphoric acid (ATP), the RecA protein binds to single-stranded DNA (ssDNA), polymerizes from individual subunits, and forms a right-handed helical filament.
Белок RecAEc состоит из 352 аминокислот, имеет молекулярный вес 37.842 Да, и обладает сайтами связывания с тремя нитями ДНК, АТФ и другими RecA мономерами.The RecAEc protein consists of 352 amino acids, has a molecular weight of 37.842 Da, and has binding sites for three DNA strands, ATP, and other RecA monomers.
У млекопитающих, в частности у человека, имеется как минимум семь RecA-гомологов. По результатам генетического и биохимического анализа этих белков и их генов, в основном проведенных на дрожжах, мыши и человеке, все RecA-гомологи можно разбить на три подсемейства (подгруппы): Rad51, Dmc1 и Rad55-57. При этом подсемейство Rad51 является истинным гомологом белка RecA в эукариотических клетках, Dmc1 подсемейство работает во время мейоза, а белки Rad55-57 играют дополнительную и регуляторную роль для двух предыдущих подсемейств. Как и белок RecA, эти аналоги так же можно использовать для обеспечения сохранности свободной ДНК в течение времени.Mammals, in particular humans, have at least seven RecA homologues. Based on the results of genetic and biochemical analysis of these proteins and their genes, mainly carried out on yeast, mice, and humans, all RecA homologues can be divided into three subfamilies (subgroups): Rad51, Dmc1, and Rad55-57. Moreover, the Rad51 subfamily is a true homologue of the RecA protein in eukaryotic cells, the Dmc1 subfamily works during meiosis, and the Rad55-57 proteins play an additional and regulatory role for the two previous subfamilies. Like the RecA protein, these analogs can also be used to ensure the preservation of free DNA over time.
Для проверки заявленных свойств пробирки была проведена серия экспериментов.A series of experiments was carried out to test the claimed properties of the test tube.
В качестве референтных изделий были использованы пробирка для стабилизации внеклеточной плазмидной ДНК фирмы Guangjou Improve Medical Instruments, Китай, и пробирка LIND-VAC для гематологических исследований производства InterVacTechnology, Эстония.A test tube for stabilizing extracellular plasmid DNA from Guangjou Improve Medical Instruments, China, and a LIND-VAC tube for hematological studies manufactured by InterVacTechnology, Estonia were used as reference products.
Согласно данным производителя, пробирка LIND-VAC содержит консервант ЭДТА К2. Пробирка Guangjou Improve содержит ЭДТА К2 и дополнительные компоненты: 6-аминокапроновую кислоту, глицин, инозитолAccording to the manufacturer's data, the LIND-VAC tube contains the preservative EDTA K2. Guangjou Improve tube contains EDTA K2 and additional components: 6-aminocaproic acid, glycine, inositol
Все исследуемые пробирки содержали идентичный набор компонентов, в заявляемую нами был добавлен рекомбинантный белок RecA производства Merck (Sigma-Aldrich), каталожный номер SRP2090. Конечная концентрация рекомбинантного белка с учетом заполнения пробирки венозной кровью составляла 1-5 мкМ. Эти концентрации найдены нами опытным путем. При концентрации белка RecA менее 1 мкМ улучшение сохранности свободной ДНК не достоверно, концентрация более 5 мкМ признана нами нецелесообразной.All test tubes contained an identical set of components, and the recombinant RecA protein produced by Merck (Sigma-Aldrich), catalog number SRP2090, was added to the claimed one. The final concentration of the recombinant protein, taking into account filling the tube with venous blood, was 1-5 μM. We found these concentrations empirically. When the concentration of the RecA protein is less than 1 μM, the improvement in the preservation of free DNA is not significant, and the concentration of more than 5 μM was considered inappropriate by us.
Исследовался мультикопийный фрагмент Y хромосомы плода в крови беременной женщины методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Именно такой фрагмент ДНК отвечает всем критериям применения метода «жидкостная биопсия». В эксперименте использовался набор реактивов R1-H803-S3/9 и амплификатор DT-Prime производства ООО «ДНК-технология», Москва. В качестве биоматериала использовался архивный материал.The multicopy fragment of the Y chromosome of the fetus in the blood of a pregnant woman was investigated by the method of polymerase chain reaction in real time. It is this DNA fragment that meets all the criteria for applying the "liquid biopsy" method. The experiment used a set of reagents R1-H803-S3 / 9 and an amplifier DT-Prime manufactured by OOO DNA-technology, Moscow. Archival material was used as a biomaterial.
Всего было проведено три серии экспериментов для демонстрации эффективности использования пробирки при длительном сроке хранения образцов крови, содержащих рекомбинантный белок. Первая часть исследований была проведена непосредственно после забора крови, вторая - через 7 суток хранения при A total of three series of experiments were carried out to demonstrate the effectiveness of using the tube for long-term storage of blood samples containing the recombinant protein. The first part of the research was carried out immediately after blood collection, the second - after 7 days of storage at
комнатной температуре, третья - после 21 суток хранения. В каждом случае исследовались одни и те же 16 образцов крови беременных женщин. В качестве критерия оценки эффективности применения пробирки использовалось отклонение числа положительных результатов обнаружения мультикопийного фрагмента Y хромосомы плода в крови беременной женщины по сравнению с результатом, полученным в первые сутки после забора крови.room temperature, third - after 21 days of storage. In each case, the same 16 blood samples from pregnant women were examined. As a criterion for evaluating the effectiveness of the use of a test tube, the deviation of the number of positive results of the detection of a multicopy fragment of the Y chromosome of the fetus in the blood of a pregnant woman was used in comparison with the result obtained on the first day after blood collection.
Результаты экспериментальных исследований представлены в Таблице 1.The results of experimental studies are presented in Table 1.
Из таблицы следует, что в течение 7 суток хранения при комнатной температуре генотипирование мультикопийного фрагмента Y хромосомы плода в крови беременных женщин во всех 48 реакциях показало одинаковые результаты. Фрагменты Y хромосомы выявлены в одних и тех же девяти образцах, что It follows from the table that within 7 days of storage at room temperature, genotyping of the multicopy fragment of the Y chromosome of the fetus in the blood of pregnant women in all 48 reactions showed the same results. Fragments of the Y chromosome were identified in the same nine samples that
подтверждает пригодность всех трех типов пробирок для выполнения данного исследования в течение данного срока.confirms the suitability of all three types of tubes for performing this study within a given period.
Однако, при увеличении срока хранения пробирок с кровью до 21 суток при комнатной температуре результаты генотипирования значительно различаются. Только заявляемая нами пробирка показала результаты, идентичные полученным при анализе свежих биоматериалов. В остальных случаях обнаружены ложноотрицательные результаты, что можно объяснить как деградацией свободной внеклеточной ДНК, так и чрезмерным количеством геномной ДНК лейкоцитов крови, попадающей в плазму в результате разрушения клеточной стенки. При этом свое действие продемонстрировал как белок RecA, так и его аналог Rad51. Отсутствие ложноотрицательных результатов при использовании заявляемой пробирки мы объясняем формированием нуклеопротеинового филамента из белка RecA, предохраняющего фрагменты свободной внеклеточной ДНК от внешних повреждающих воздействий.However, when the shelf life of blood tubes is increased to 21 days at room temperature, the results of genotyping differ significantly. Only the test tube declared by us showed the results identical to those obtained in the analysis of fresh biomaterials. In other cases, false negative results were found, which can be explained by both degradation of free extracellular DNA and an excessive amount of genomic DNA of blood leukocytes entering the plasma as a result of destruction of the cell wall. At the same time, both the RecA protein and its analogue Rad51 demonstrated their action. We explain the absence of false-negative results when using the claimed test tube by the formation of a nucleoprotein filament from the RecA protein, which protects fragments of free extracellular DNA from external damaging influences.
Таким образом, использование в пробирках консервирующего состава с добавлением рекомбинантного белка, обладающего сродством к однонитевой ДНК, имеет преимущество перед консервирующим составом только с ЭДТА или с ЭДТА и добавками, предотвращающими лизис клеток.Thus, the use of a preservative composition in vitro with the addition of a recombinant protein having an affinity for single-stranded DNA has an advantage over a preservative composition with EDTA alone or with EDTA and additives that prevent cell lysis.
Предлагаемое устройство по сравнению с известными аналогами имеет ряд преимуществ.The proposed device has a number of advantages in comparison with known analogs.
1. Повышает время хранения пробирок с забранной венозной кровью для последующих анализов методами жидкостной биопсии.1. Increases the storage time of tubes with collected venous blood for subsequent analyzes by liquid biopsy methods.
2. Обеспечивает значительно лучшую сохранность именно фрагментов внеклеточной ДНК, что особенно важно для исследований в области онкологии и перинатологии.2. Provides significantly better preservation of exactly extracellular DNA fragments, which is especially important for research in the field of oncology and perinatology.
3. За счет использования в качестве антикоагулянта ЭДТА устройство может быть использовано в генетических исследованиях, когда требуется дополнительная точность в определении нуклеотидных последовательностей нуклеиновых кислот (например, вирусных).3. Due to the use of EDTA as an anticoagulant, the device can be used in genetic studies when additional precision is required in the determination of nucleotide sequences of nucleic acids (for example, viral).
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019122078U RU198611U1 (en) | 2019-07-10 | 2019-07-10 | Blood sample preparation device for liquid biopsy with recombinant protein |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019122078U RU198611U1 (en) | 2019-07-10 | 2019-07-10 | Blood sample preparation device for liquid biopsy with recombinant protein |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU198611U1 true RU198611U1 (en) | 2020-07-21 |
Family
ID=71740929
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019122078U RU198611U1 (en) | 2019-07-10 | 2019-07-10 | Blood sample preparation device for liquid biopsy with recombinant protein |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU198611U1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20140227687A1 (en) * | 2011-09-26 | 2014-08-14 | Preanalytix Gmbh | Stabilisation and isolation of extracellular nucleic acids |
| WO2015031994A1 (en) * | 2013-09-03 | 2015-03-12 | Dna Genotek Inc. | Method and composition for nucleic acid storage from blood fractions |
| CN106701743A (en) * | 2016-12-26 | 2017-05-24 | 广州和实生物技术有限公司 | Blood collection tube for protecting and stabilizing free DNA |
| RU2623049C2 (en) * | 2011-03-04 | 2017-06-21 | Бектон, Дикинсон энд Кампани | Devices for blood intake, containing lysophospholipase inhibitor |
| CN107574225A (en) * | 2017-08-29 | 2018-01-12 | 北京恩吉思生物科技有限公司 | A kind of blood cfDNA preservative agents, vacuum blood collection tube and preparation method thereof |
-
2019
- 2019-07-10 RU RU2019122078U patent/RU198611U1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2623049C2 (en) * | 2011-03-04 | 2017-06-21 | Бектон, Дикинсон энд Кампани | Devices for blood intake, containing lysophospholipase inhibitor |
| US20140227687A1 (en) * | 2011-09-26 | 2014-08-14 | Preanalytix Gmbh | Stabilisation and isolation of extracellular nucleic acids |
| WO2015031994A1 (en) * | 2013-09-03 | 2015-03-12 | Dna Genotek Inc. | Method and composition for nucleic acid storage from blood fractions |
| CN106701743A (en) * | 2016-12-26 | 2017-05-24 | 广州和实生物技术有限公司 | Blood collection tube for protecting and stabilizing free DNA |
| CN107574225A (en) * | 2017-08-29 | 2018-01-12 | 北京恩吉思生物科技有限公司 | A kind of blood cfDNA preservative agents, vacuum blood collection tube and preparation method thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230348971A1 (en) | Transposition into native chromatin for personal epigenomics | |
| CN111549101A (en) | Preservation solution for biological sample nucleic acid detection and application | |
| US8097419B2 (en) | Compositions and method for rapid, real-time detection of influenza A virus (H1N1) swine 2009 | |
| EP2935613B1 (en) | Target capture system | |
| PT2814981T (en) | Blood collection device for stabilizing cell-free plasma dna | |
| EP3436606B1 (en) | Plasma derived cell-free mitochondrial deoxyribonucleic acid | |
| US11781193B2 (en) | Markers of active HIV reservoir | |
| JP2006505283A (en) | High-speed automated nucleic acid isolation and quantification method | |
| CN105648087A (en) | Specific primers and probes for bovine-derived real-time fluorescent PCR (polymerase chain reaction) detection | |
| Anderson et al. | Quantification of HIV DNA using droplet digital PCR techniques | |
| CN110938603A (en) | Universal virus sample preservation buffer solution and preparation method thereof | |
| CN102304578B (en) | Kit for detecting cysticercus cellulosae, swine trichinella and swine toxoplasmosis and application | |
| Prenni et al. | Preliminary characterization of the murine membrane reticulocyte proteome | |
| RU198611U1 (en) | Blood sample preparation device for liquid biopsy with recombinant protein | |
| WO2015031994A1 (en) | Method and composition for nucleic acid storage from blood fractions | |
| JP6815334B2 (en) | Automated methods for the isolation of nucleic acids | |
| Pandey et al. | A whole-tissue RNA-seq toolkit for organism-wide studies of gene expression with PME-seq | |
| CN115058426B (en) | Nucleic acid molecular probe for specifically recognizing SARS-CoV-19, screening method, detection product and application thereof | |
| CN103589753B (en) | Specificity suppresses the shRNA Lentiviral of people's SIRT1 gene expression and construction method thereof and application | |
| RU2525059C2 (en) | Kit for detecting q fever agent in biological material by real time polymerase chain reaction (rt pcr) | |
| KR102291584B1 (en) | Molecular diagnosis method for disease diagnosis of companion animals and livestock | |
| CN117165580B (en) | Composition for stabilizing nucleic acid in sample, preparation method and application thereof | |
| Bao et al. | Lentivirus-mediated gene transfer of small interfering RNA against the chemokine receptor CXCR3 suppresses cytokine indicators of acute graft rejection in a rat model | |
| RU2726432C1 (en) | Test system for determining dna of nodular dermatitis virus (lsdv) in biological material of animals by pcr with electrophoretic detection of amplification products in agarose gel | |
| US20240150810A1 (en) | Immune enhancers |