RU192778U1 - Устройство для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев - Google Patents
Устройство для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев Download PDFInfo
- Publication number
- RU192778U1 RU192778U1 RU2018146716U RU2018146716U RU192778U1 RU 192778 U1 RU192778 U1 RU 192778U1 RU 2018146716 U RU2018146716 U RU 2018146716U RU 2018146716 U RU2018146716 U RU 2018146716U RU 192778 U1 RU192778 U1 RU 192778U1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- membrane
- analysis
- vslv
- antibodies specific
- mixture
- Prior art date
Links
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 title claims abstract description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 12
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 title claims abstract description 11
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 title claims abstract description 11
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 title abstract description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 42
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims abstract description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 15
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims abstract description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 5
- 241000219095 Vitis Species 0.000 claims description 9
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 3
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 38
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 239000002131 composite material Substances 0.000 abstract description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 241000546277 Grapevine leafroll-associated virus 3 Species 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 3
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 241000973027 Closteroviridae Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001611015 Ampelovirus Species 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 244000000005 bacterial plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 1
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 1
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- SHFGJEQAOUMGJM-UHFFFAOYSA-N dialuminum dipotassium disodium dioxosilane iron(3+) oxocalcium oxomagnesium oxygen(2-) Chemical compound [O--].[O--].[O--].[O--].[O--].[O--].[O--].[O--].[Na+].[Na+].[Al+3].[Al+3].[K+].[K+].[Fe+3].[Fe+3].O=[Mg].O=[Ca].O=[Si]=O SHFGJEQAOUMGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000005059 dormancy Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000243 photosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 244000000006 viral plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Заявленное устройство предназначено для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев серотипа 3 (ВСЛВ-3). Устройство представляет собой мультимембранный композит с нанесенными иммунореагентами (тест-полоску). Мультимембранный композит состоит из рабочей нитроцеллюлозной мембраны на твердой основе с нанесенными иммунореагентами, стекловолоконной мембраны с нанесенными иммунореагентами, мембраны для впитывания и сепарации исследуемого образца и конечной адсорбирующей мембраны для впитывания компонентов образца после прохождения реакции. Отличительной особенностью заявленного устройства является то, что в контрольную зону нанесена смесь поликлональных козьих антител, специфичных к иммуноглобулинам мыши и кролика. В аналитическую зону нанесена смесь моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3. На стекловолоконную мембрану нанесен конъюгат смеси моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3, с коллоидным золотом. Для проведения анализа не требуется никаких дополнительных приспособлений. Продолжительность анализа составляет 10 мин без учета пробоподготовки. Технической задачей заявленной полезной модели является упрощение процедуры анализа. Технический результат заявленной полезной модели заключается в упрощении процедуры проведения анализа и уменьшении времени анализа.
Description
Полезная модель относится к диагностике вирусных и бактериальных патогенов растений и может быть использована для экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев серотипа 3 (ВСЛВ-3).
Устройство предназначено для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики приоритетного заболевания винограда, вызываемого ВСЛВ-3.
Вирусные болезни винограда - одна из основных угроз при возделывании этой культуры. Виноградники поражает более 60 видов патогенов вирусной природы. Дополнительные риски заражения виноградников обусловлены тем, что виноград является многолетней вегетативно размножаемой культурой. В связи с этим в течение всего срока эксплуатации виноградников происходит накопление патогенов в результате поражения насекомыми-переносчиками, с посадочным материалом при закладке новых виноградников или при прививке, механического распространения вирусов через воду и почву.
Вирусное заболевание скручивание листьев винограда приводит к снижению урожайности на 15-40%. Вирусы скручивание листьев винограда включены в перечень контролируемых патогенов винограда Европейской и Средиземноморской организацией по карантину и защите растений (European and Mediterranean Plant Protection Organization, EPPO). Возбудителями этого заболевания являются вирусы семейства Closteroviridae, часто совместно поражающие растения. На территории РФ представлены преимущественно вирусы скручивания листьев серотипов 1 и 3. ВСЛВ-3 относиться к роду Ampelovirus, семейства Closteroviridae. Частицы ВСЛВ-3 представляют собой нитевидные структуры длиной 1800 и диаметром 12 нм со спиральным расположением повторяющихся белковых субъединиц (10 субъединиц на один оборот спирали, шаг спирали 3,5 нм).
Пораженные ВСЛВ растения отстают в росте. У них уменьшается площадь листовой поверхности, развиваются слабые побеги, что приводит к снижению продолжительности их жизни и урожайности. У пораженного растения изменяется окраска листьев. Из-за отсутствия в них хлорофилла снижается фотосинтетическая активность, в результате чего содержание Сахаров в ягодах уменьшается на 30%. Ягоды становятся мельче, время их созревания увеличивается на 3-4 недели, что приводит к снижению товарной ценности столовых сортов винограда, которые используются для употребления в свежем виде, в производстве изюма и вина. Потери урожая при поражении ВСЛВ зависят от сорта, подвоя, наличия смешанной инфекции, от климатических и почвенных условий и составляют от 20 до 40% ежегодно.
Традиционные подходы к диагностике заболевания винограда основаны на визуальном определении симптомов. Однако вирусные заболевания очень вариабельны по внешней симптоматике, а также могут проходить бессимптомно. Успешное решение задач по контролю вирусных инфекций возможно только с использованием иммунодиагностических подходов, основанных на специфических взаимодействиях антиген - антитело, и молекулярных методов диагностики, основанных на полимеразной цепной реакции (ПЦР). Среди иммунодиагностических методов доминирует иммуноферментный анализ, молекулярно-генетических методов - ПЦР с обратной транскрипцией и количественная ПЦР с обратной транскрипцией. Эти методы характеризуются трудоемкостью, методической сложностью, необходимостью значительных расходов на реагенты и приборное обеспечение, потребностью в квалифицированном персонале и могут быть реализованы только в лабораторных условиях.
Простой формой иммунохимического анализа является иммунохроматографический анализ (ИХА), который обнаруживает присутствие антигена (вируса) в соке (водном экстракте) растения за 10-15 минут.ИХА основан на движении жидкой пробы вдоль мембраны, которое приводит к образованию на разных участках мембраны специфических иммунных комплексов. Конъюгированный со специфическими антителами окрашенный маркер (коллоидное золота) распределяется по мембране, и его наличие в определенных участках по окончании анализа является основанием для вывода о полученных результатах. Использование ИХА для детекции фитопатогенов обеспечивает достижение ряда преимуществ - проведение эффективной диагностики во внелабораторных условиях, экспрессность проведения анализа при минимальной пробоподготовке, проведение анализа в одну стадию без необходимости в дополнительных реагентах и манипуляциях и простоту детектирования и интерпретации результатов анализа.
Несмотря на то, что ИХА активно разрабатывается и применяется для диагностики вирусных и бактериальных патогенов растений, в литературе нет описаний разработки иммунохроматографических тест-системы для диагностики вирусов винограда.
Наиболее близким аналогом является иммунохроматографическая тест-система «GLRaV-3 AgriStrip-magnetio) фирмы Bioreba, Швейцария (http://www.cultek.com/inf/otros/perfil-proveedores/Perfil%20Bioreba/GLRaV3/Bioreba_GLRaV_AgriStrip_magnetic_e_V2.pdf), основанная на реакции антиген-антитело в сочетании с магнитным концентрированием.
Тест-система «GLRaV-3 AgriStrip-magnetic» представляет собой набор, включающий
тест-полоску с нанесенными иммунореагентами,
пробирку с суспензией магнитных частиц (МЧ) с иммобилизованными на них специфичными к ВСЛВ-3 моноклональными антителами,
буферы для экстракции образца и проведения анализа,
пакет для растирания образца и
пипетку.
Тест-полоска «GLRaV-3 AgriStrip-magnetic» представляет собой мультимембранный композит, который состоит из
рабочей мембраны на твердой основе с нанесенными в контрольную зону поликлональными антимышиными антителами и нанесенными в аналитическую зону специфичными к ВСЛВ-3 моноклональными антителами;
мембраны для впитывания и сепарации исследуемого образца;
конечной адсорбирующей мембраны для впитывания компонентов образца после прохождения реакции.
Анализ проводят следующим образом.
1. Гомогенизируют образец ткани виноградной лозы (зрелые осенние листья или соскобы коры во время покоя) в течение 5-7 секунд в экстрагирующем буфере («Extraction Buffer Grapevine» фирмы Bioreba) в пропорции 1:30 (мас./об.).
2. Экстракт переносят в пробирку, содержащую конъюгат МЧ со специфичными к ВСЛВ-3 моноклональными антителами, и инкубируют в течение 7 мин.
3. Осаждают образовавшиеся комплексы МЧ-антитела-вирус с помощью магнита в течение 3 мин на стенки пробирки.
4. Удаляют надосадочную жидкость и ресуспендируют комплексы МЧ-антитела-вирус в буфере.
5. Помещают тест-полоску в ресуспендированный образец и проводят анализ в течение 10-20 мин.
Интерпретация результатов анализа.
1. Если через 10-20 мин на тест-полоске образуется две линии, окрашенные в желтый цвет, то результат анализа считается положительным, т.е. в образце содержится ВСЛВ-3.
2. Если через 10-20 мин на тест-полоске образуется одна желтая линия (контрольная), то результат анализа считается отрицательным, т.е. в образце не содержится ВСЛВ-3 или его концентрация ниже предела обнаружения.
3. Если через 10-20 мин на тест-полоске не образуется ни одной окрашенной линии, то результат анализа считается недействительным.
Суммарное время анализа тест-системы «GLRaV-3 AgriStrip-magnetic» составляет 20-30 мин без подготовки пробы, что в 2-3 раза дольше, чем в предлагаемой нами полезной модели тест-системы. Также анализ с использованием тест-системы «GLRaV-3 AgriStrip-magnetic» предполагает стадию магнитной сепарации, что технически усложняет анализ по сравнению с анализом с использованием предлагаемой нами полезной модели. Технической задачей заявленной полезной модели является упрощение процедуры анализа.
Технический результат заявленной полезной модели состоит в уменьшении времени анализа.
Предлагается устройство для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого ВСЛВ-3. Устройство представляет собой мультимембранный композит с нанесенными иммунореагентами (тест-полоску). Мультимембранный композит состоит из рабочей нитроцеллюлозной мембраны на твердой основе с нанесенными иммунореагентами, стекловолоконной мембраны с нанесенными иммунореагентами, мембраны для впитывания и сепарации исследуемого образца и конечной адсорбирующей мембраны для впитывания компонентов образца после прохождения реакции.
Указанный технический результат достигается тем, что
в контрольную зону (К.З.) нанесена смесь поликлональных козьих антител, специфичных к иммуноглобулинам мыши и кролика;
в аналитическую зону (А.З.) нанесена смесь моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3;
на стекловолоконную мембрану нанесен конъюгат смеси моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3, с коллоидным золотом.
На прилагаемом чертеже (рис. 1) представлено заявляемое устройство, где 1 - твердая основа рабочей мембраны из полистирола, 2 - рабочая нитроцеллюлозная мембрана, 3 -конечная адсорбирующая мембрана для впитывания компонентов образца после прохождения реакции, 4 - стекловолоконная мембрана с нанесенным и высушенным конъюгатом смеси моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3, с коллоидным золотом, 5 - мембрана для впитывания и сепарации исследуемого образца, А - К.З. с нанесенной смесью поликлональных козьих антител, специфичных к иммуноглобулинам мыши и кролика, Б - А.З. с нанесенной смесью моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3.
В таблице 1 приведена характеристика материалов, из которых изготовлены элементы заявляемого устройства.
Анализ проводят следующим образом.
1. Гомогенизируют образец ткани виноградной лозы (зрелые осенние листья или соскобы коры во время покоя) в течение 10-12 с в экстрагирующем буфере (0,2 М трис-буфер, рН 8,2, содержащий 0,8% хлорида натрия, 2,0% поливинилпиролидона PVP-25, 1,0% полиэтиленгликоля, 0,05% твина 20 и 0,02% азида натрия) в пропорции 1:10 (мас./об.). 2.100-120 мкл жидкого экстракта переносят в пробирку.
3. Тест-полоску погружают вертикально нижним концом мембраны для впитывания образца на глубину 0,5-0,6 см в жидкий экстракт и инкубируют при комнатной температуре в течение 1-1,5 мин.
4. Вынимают тест-полоску и помещают ее на сухую горизонтальную поверхность на 8,5-9 мин.
5. Через 10 мин после начала движения жидкости по тест-полоске результат анализа фиксируют визуально или с использованием детектора с видеоцифровой регистрацией. Заявляемое устройство функционирует следующим образом:
Если в образце присутствует ВСЛВ-3, то он с потоком жидкости перемещается по впитывающей мембране (5), доходит до стекловолоконной мембраны (4) и реагирует с конъюгатом коллоидного золота с антителами, специфичными к ВСЛВ-3, с образованием двойного окрашенного комплекса антиген-антитела, меченные коллоидным золотом. Образовавшийся двойной окрашенный комплекс под действием капиллярных сил движется вдоль рабочей нитроцеллюлозной мембраны (2) и взаимодействует с иммобилизованными в А.З. (Б) антителами, специфичными к ВСЛВ-3, с образованием тройного комплекса антитела-антиген-антитела, меченные коллоидным золотом. Избыток не связавшегося двойного окрашенного комплекса продолжает двигаться вдоль рабочей нитроцеллюлозной мембраны (2) и взаимодействует с антивидовыми антителами, иммобилизованными в К.З. (А), с образованием двойного комплекса антивидовые антитела-антитела, меченные коллоидным золотом. Результат анализа интерпретируют следующим образом.
1. Если через 10 мин на тест-полоске образуется две линии, окрашенные в красный цвет (А.З., Б, и К.З., А), то результат анализа считается положительным, т.е. в образце содержится ВСЛВ-3.
2. Если через 10 мин на тест-полоске образуется одна красная линия (К.З., А), то результат анализа считается отрицательным, т.е. в образце не содержится ВСЛВ-3 или его концентрация ниже предела обнаружения.
3. Если через 10 мин на тест-полоске не образуется ни одной окрашенной линии или образуется одна красная линия (А.З., Б), то результат анализа считается недействительным.
Эффективность данного подхода подтверждается следующим представленным ниже примером:
Пример (исследование времени получения положительного результата анализа с использованием заявляемого устройства).
С использованием заявляемого устройства проводят анализ экстракта ткани виноградной лозы, содержащего ВСЛВ-3. 100 мкл экстракта вносят в пробирку. Заявляемое устройство (тест-полоску) погружают вертикально нижним концом мембраны для впитывания образца на глубину 0,5 см в жидкий экстракт и инкубируют при комнатной температуре в течение 1 мин. Вынимают тест-полоску и помещают ее в паз выдвижной каретки детектирующего устройства для видеоцифровой регистрации. Результат анализа оценивают через 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 и 15 с помощью программного обеспечения видеоцифрового детектора. Время анализа контролируют с помощью секундомера. Анализ проводят в пяти повторностях, используя тест-полоски пяти разных серий (полоски №№1-5). Результаты анализа приведены в таблице 2. Интенсивности окрашивания зон связывания нормированы на среднее значение, полученное через 10-15 мин после начала анализа.
Из приведенных экспериментальных данных видно, что через 10 мин после начала анализа интенсивности окрашивания зон связывания достигают 99,0-101,0% и практически не изменяются в течение следующих пяти минут, т.е. время анализа с использованием заявленного устройства составляет 10 мин.
Краткое описание чертежей
На рис. 1 изображена схема устройства для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого ВСЛВ-3. 1 - твердая основа рабочей мембраны из полистирола; 2 - рабочая нитроцеллюлозная мембрана; 3 -конечная адсорбирующая мембрана для впитывания компонентов образца после прохождения реакции; 4 - стекловолоконная мембрана с нанесенным и высушенным конъюгатом коллоидныго золота со смесью моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3; 5 - мембрана для впитывания и сепарации исследуемого образца; А - К.З. с нанесенной смесью поликлональных козьих антител, специфичных к иммуноглобулинам мыши и кролика, Б - А.З. с нанесенной смесью моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3.
Claims (1)
- Устройство для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев, содержащее тест-полоску из полистирола, на которую наклеены нитроцеллюлозная мембрана с нанесенными и высушенными иммунореагентами, мембрана для впитывания и сепарации исследуемого образца, стекловолоконная мембрана с нанесенными и высушенными иммунореагентами и конечная адсорбирующая мембрана для впитывания компонентов образца после прохождения реакции, на нитроцеллюлозную мембрану нанесены контрольная и аналитическая зоны, отличающееся тем, что в контрольную зону нанесена смесь поликлональных козьих антител, специфичных к иммуноглобулинам мыши и кролика, и в аналитическую зону нанесена смесь моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к вирусу скручивания листьев винограда серотипа 3 (ВСЛВ-3), на стекловолоконную мембрану нанесен конъюгат смеси моноклональных мышиных и поликлональных кроличьих антител, специфичных к ВСЛВ-3, с коллоидным золотом.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018146716U RU192778U1 (ru) | 2018-12-26 | 2018-12-26 | Устройство для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2018146716U RU192778U1 (ru) | 2018-12-26 | 2018-12-26 | Устройство для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU192778U1 true RU192778U1 (ru) | 2019-10-01 |
Family
ID=68162638
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018146716U RU192778U1 (ru) | 2018-12-26 | 2018-12-26 | Устройство для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU192778U1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU201487U1 (ru) * | 2020-06-09 | 2020-12-17 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Устройство для мультиплексного иммунохроматографического анализа патогенов вирусной и бактериальной природы с дополнительной стадией усиления сигнала |
| RU202193U1 (ru) * | 2020-06-09 | 2021-02-05 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Устройство для иммунохроматографической высокочувствительной и внелабораторной детекции фитопатогенной бактерии Clavibacter michiganensis, основанное на повышении интенсивности регистрируемого колориметрического сигнала за счет каталитических свойств наномаркера |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018170340A1 (en) * | 2017-03-15 | 2018-09-20 | The Broad Institute, Inc. | Crispr effector system based diagnostics for virus detection |
-
2018
- 2018-12-26 RU RU2018146716U patent/RU192778U1/ru active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2018170340A1 (en) * | 2017-03-15 | 2018-09-20 | The Broad Institute, Inc. | Crispr effector system based diagnostics for virus detection |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| OLMOS A. et al. Modeling the Accuracy of Three Detection Methods of Grapevine leafroll-associated virus 3 During the Dormant Period Using a Bayesian Approach // Phytopathology, 2016, V.106, pp.510-518. * |
| КОНДАКОВА О.А. и др. МОЛЕКУЛЯРНАЯ ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ Y-ВИРУСОМ И ВИРУСОМ СКРУЧИВАНИЯ ЛИСТЬЕВ КАРТОФЕЛЯ МЕТОДОМ ИММУНОХРОМАТОГРАФИИ // Вестник Московского Университета, 2016, N 1, стр.46-51. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU201487U1 (ru) * | 2020-06-09 | 2020-12-17 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Устройство для мультиплексного иммунохроматографического анализа патогенов вирусной и бактериальной природы с дополнительной стадией усиления сигнала |
| RU202193U1 (ru) * | 2020-06-09 | 2021-02-05 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Устройство для иммунохроматографической высокочувствительной и внелабораторной детекции фитопатогенной бактерии Clavibacter michiganensis, основанное на повышении интенсивности регистрируемого колориметрического сигнала за счет каталитических свойств наномаркера |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Xu et al. | Mucosal immunoglobulins at respiratory surfaces mark an ancient association that predates the emergence of tetrapods | |
| JP2894841B2 (ja) | 診断試薬と微生物の間の反応性の制御のための組成物および方法 | |
| RU192778U1 (ru) | Устройство для иммунохроматографической экспрессной внелабораторной диагностики заболевания винограда, вызываемого вирусом скручивания листьев | |
| Curry et al. | Filter-paper blood samples for ELISA detection of Brucella antibodies in caribou | |
| CN205506834U (zh) | 一种快速检测黄曲霉毒素b1和玉米赤霉烯酮的胶体金试纸 | |
| CN104928258A (zh) | 犬细小病毒杂交瘤细胞、及单克隆抗体和应用 | |
| CN112710832A (zh) | 一种基于Fiber2蛋白的检测血清4型禽腺病毒的试纸条 | |
| Oelofsen et al. | Could bats act as reservoir hosts for Rift Valley fever virus? | |
| Weber et al. | Laboratory testing for grapevine diseases | |
| CN101424689B (zh) | 蓝舌病病毒检测试纸条 | |
| Gordon Smith et al. | Immunofluorescent reactions with microfilariae: 1. Diagnostic evaluation | |
| Brzin et al. | Detection of apple proliferation phytoplasma by ELISA and PCR in growing and dormant apple trees | |
| Miller et al. | Horizontal transmission of the Picea glauca foliar endophyte Phialocephala scopiformis CBS 120377 | |
| Pikula et al. | Higher antibody titres against Pseudogymnoascus destructans are associated with less white-nose syndrome skin lesions in Palearctic bats | |
| CN113791215B (zh) | 一种用于非洲猪瘟病毒检测的便携式免疫荧光层析仪 | |
| Asanuma et al. | Use of the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in the detection of Rhizobium both in culture and from root nodules of soybeans and cowpeas | |
| Rema Prathiush et al. | Diagnosis of Echinococcus granulosus infection in dogs by a coproantigen sandwich ELISA | |
| Zhao et al. | Development of an antigen specific colloidal gold immunochromatographic assay for detection of antibody to M. wenyonii in bovine sera | |
| RU201487U1 (ru) | Устройство для мультиплексного иммунохроматографического анализа патогенов вирусной и бактериальной природы с дополнительной стадией усиления сигнала | |
| Shamji et al. | Measurement of Allergen-Specific Inhibitory Antibody Activity | |
| CN204495838U (zh) | 一种检测禽呼肠孤病毒的试纸条 | |
| Sudhakar et al. | Seroprevalence of Trypanosoma evansi in cattle of Karnataka | |
| Wang et al. | Lateral flow immunoassay strips based on europium (III) chelate microparticle for the rapid and sensitive detection of Trichinella spirali s infection in whole blood samples of pigs | |
| Melville | Bluetongue surveillance methods in an endemic area: Australia | |
| Njukeng et al. | Comparison of TAS-ELISA, dot and tissue blot, ISEM and immunocapture RT-PCR assays for the detection of Yam mosaic virus in yam tissues |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB9K | Licence granted or registered (utility model) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20201218 Effective date: 20201218 |