RU1807402C

RU1807402C - Method of coloring proteum flagellums for microscopical investigation

Info

Publication number: RU1807402C
Authority: RU
Inventors: Наталья Сергеевна Шеховцова; Людмила Валентиновна Розова; Сергей Александрович Паевский
Original assignee: Всесоюзный Курганский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия"
Priority date: 1990-12-04
Filing date: 1990-12-04
Publication date: 1993-04-07

Abstract

Использование: в клинической микробиологии и может примен тьс дл окраски жгутиков у проте при определении их топологии . Сущность изобретени : последовательно фиксируют препарат водным раствором , содержащим 1 % уксусной кислоты и 2 % формалина, протравливают водным раствором , содержащим 1 % фенола и 5 % танина , без подогревани с последующей его импрегнацией, которую провод т в два этапа: на первом этапе препарат пропитывают 25 %-ным раствором азотнокислого серебра в течение 10 мин и окисл ют 0,5 %-ным раствором формалина, а на втором этапе провод т через смесь, состо щую из 25 %- ного раствора аммиаката серебра и 40 %-но- го едкого натри , вз тых в соотношении 100 : 1, и затем восстанавливают 1 % -ным раствором формалина. Способ позвол ет повысить контрастность, результативность исследовани ..Usage: in clinical microbiology and can be used for staining flagella in proteas in determining their topology. The essence of the invention: sequentially fix the preparation with an aqueous solution containing 1% acetic acid and 2% formalin, etch with an aqueous solution containing 1% phenol and 5% tannin, without heating, followed by impregnation, which is carried out in two stages: at the first stage, the preparation impregnated with a 25% solution of silver nitrate for 10 minutes and oxidized with a 0.5% solution of formalin, and in the second step, it is passed through a mixture consisting of a 25% solution of silver ammonia and 40% sodium hydroxide taken in a ratio of 100: 1, and then reduced with a 1% formalin solution. The method allows to increase the contrast, research efficiency ..

Description

Изобретение относитс к клинической микробиологии и может быть использовано дл окраски жгутиков у проте .The invention relates to clinical microbiology and can be used for staining flagellum proteins.

Целью изобретени вл етс повышение контрастности и результативности способа .The aim of the invention is to increase the contrast and efficiency of the method.

Способ осуществл ют следующим образом .The method is carried out as follows.

Взвесь ро щейс культуры проте помещают на заранее подготовленное чистое, обезжиренное предметное стекло и высушивают препарат при температуре 20 ± 5° С, а затем фиксируют водным раствором, содержащим 1 % уксусной кислоты и 2 % формалина в течение 10 мин. Раствор сливают , промывают препарат проточной водой в течение 15 мин (не допуска пр мого тока воды на препарат). После этого препарат протравливают водным раствором, содержащим 1 % фенола и 5 % танина в течениеA suspension of the growing protea culture is placed on a previously prepared clean, defatted glass slide and the preparation is dried at a temperature of 20 ± 5 ° С, and then fixed with an aqueous solution containing 1% acetic acid and 2% formalin for 10 min. The solution is drained, the preparation is washed with running water for 15 minutes (no direct flow of water to the preparation is allowed). After this, the drug is etched with an aqueous solution containing 1% phenol and 5% tannin for

15 мин, промывают проточной водой в течение 20 мин и высушивают при комнатной температуре.15 minutes, washed with running water for 20 minutes and dried at room temperature.

Импреграцию препарата провод т в два этапа. На первом этапе окраски на препарат наслаивают 25 %-ный раствор азотнокислого серебра и выдерживают в нем в течение 10 мин при комнатной температуре. Раствор сливают и наслаивают 0,5 %-ный раствор формалина на полторы минуты.Impregnation of the drug is carried out in two stages. At the first stage of coloring, a 25% solution of silver nitrate is layered on the preparation and kept in it for 10 min at room temperature. The solution is drained and layered with a 0.5% formalin solution for one and a half minutes.

На втором этапе после удалени раствора формалина на препарат наслаивают смесь аммиаката серебра на 1,5 мин. Готовитс указанна смесь следующим образом: берут в соотношении 100 : 1 25 %-ный раствор азотнокислого серебра и 40 %-ный раствор едкого натри и довод т полученную смесь до состо ни легкой опэлесценции и 25-27 % -ным раствором аммиака. Аммиасо оIn a second step, after removal of the formalin solution, a silver ammonia mixture is layered on the preparation for 1.5 minutes. This mixture is prepared as follows: a 25% silver nitrate solution and a 40% sodium hydroxide solution are taken in a ratio of 100: 1, and the resulting mixture is brought to a state of slight opalescence and a 25-27% ammonia solution. Ammiaso about

44

&&

гоgo

кат серебра сливают с препарата и наслаивают 1 %-ный раствор формалина на 1 мин. Ополаскивают дистиллированной водой, высушивают при комнатной температуре, с последующим заключением препарата в канадский бальзам под покровное стекло.silver cat is drained from the preparation and a 1% formalin solution is layered for 1 min. Rinse with distilled water, dry at room temperature, followed by the conclusion of the drug in a Canadian balm under a coverslip.

Выполнение способа обеспечивает повышение контрастности окраски жгутиков проте и повышает результативность метода .The implementation of the method provides an increase in the contrast of the color of the flagella prote and increases the effectiveness of the method.

На окрашенном препарате четко прослеживаютс темно-коричневые клетки проте разных размеров и их жгутиков, расположенные перитрихиально. Причем, не зависимо от размера клеток жгутики окрашены контрастно, У единичных клеток они отсутствовали.On the stained preparation, dark brown prote cells of different sizes and their flagella located peritrichously are clearly visible. Moreover, regardless of the size of the cells, the flagella are stained in contrast, they were absent in single cells.

Достигаема четкость вы влени морфологической картины проте в серии опытов позволила изучить его на разных этапах роени , вы вить вли ние антибиотиков и других бактериоцидных средств на изменение характера жгутиковани , а также зависимость жгутиковани от этапов роени и величины клеток.The achieved clarity of revealing the morphological picture of the protein in a series of experiments made it possible to study it at different stages of swarming, to reveal the effect of antibiotics and other bactericidal agents on the change in the nature of flagging, as well as the dependence of flagging on the stages of swarming and cell size.

Claims

SUMMARY OF THE INVENTION A method for staining protein flagella for microscopic examination by sequentially fixing the test preparation with an aqueous solution containing 1% acetic acid and 2% formalin, etching with an aqueous solution containing 1% phenol and 5% tannin, followed by silver impregnation, characterized in that in order to increase contrast and efficiency, fixation is carried out for 10 minutes, etching for 15 minutes at a temperature of 20 ± 5 ° С, and impregnation is carried out in two stages, and at the first stage the impregnated solution is impregnated with a 25% silver nitrate solution for 10 minutes, followed by oxidation with a 0.5% formalin solution, and the second is passed through a mixture consisting of a 25% silver nitrate solution and a 40% caustic solution sodium, taken in a ratio of 100: 1. which is brought to a state of slight opalescence with a 25-27% solution of ammonia 5 ammonia, then reduced with a 1% solution of formalin ..:.

0

5

0