RU1806198C - Method of avermectin production - Google Patents
Method of avermectin productionInfo
- Publication number
- RU1806198C RU1806198C SU884355079A SU4355079A RU1806198C RU 1806198 C RU1806198 C RU 1806198C SU 884355079 A SU884355079 A SU 884355079A SU 4355079 A SU4355079 A SU 4355079A RU 1806198 C RU1806198 C RU 1806198C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- acid
- cyclopentyl
- retention time
- alpha
- minutes
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
- C07D493/22—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/01—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing oxygen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
- A01N43/90—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having two or more relevant hetero rings, condensed among themselves or with a common carbocyclic ring system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
- C12P19/623—Avermectin; Milbemycin; Ivermectin; C-076
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Abstract
Область использовани : микробиологическа промышленность, производство антибиотиков. Сущность изобретени : авермектииы В получают при культивировании штамма Streptomyus avermltills АТСС № 53692 в питательной среде в присутствии кэрбоновой кислоты. Используемый штамм вл етс двойным мутантом с отсутствием разветвленно-2-оксокислотнб- дегидрогеназной и В-авермектин-0-метилт- рансферазной активностей. Полученные авермектины В обладают противопарази- тарной активностью широкого спектра действи , 1 з.п,ф-лы.Field of use: microbiological industry, production of antibiotics. SUMMARY OF THE INVENTION: Avermectias B are obtained by culturing strain Streptomyus avermltills ATCC No. 53692 in a nutrient medium in the presence of carboxylic acid. The strain used is a double mutant with the absence of branched-2-oxo-acid-dehydrogenase and B-avermectin-0-methyltransferase activities. The obtained avermectins B possess antiparasitic activity of a wide spectrum of action, 1 zp, f-ly.
Description
елate
сwith
либо во врем инокул ции, либо через некоторые промежутки времени во врем ферментации. Продуцирование авермекти- новых продуктов можно контропировать путем отбора проб из ферментационной среды, провод экстрагирование органическим растворителем с последующим определением продукта методом хроматографии, например , использу жидкостную хроматографию высокого давлени . Инкубацию провод т до тех пор, пока выход продукта не будет максимальным , в общем в течение 4-15 дней.either during inoculation or at certain time intervals during fermentation. The production of avermectin products can be controlled by sampling from a fermentation medium, extraction is carried out with an organic solvent, followed by determination of the product by chromatography, for example, using high pressure liquid chromatography. Incubation is carried out until the product yield is maximized, generally within 4-15 days.
Предпочтительное количество затравочных соединений в каждом случае добавлени (карбонова кислота или соединение, превращающеес в нее) составл ет 0,05- 3,0 г на 1 л. Затравочное соединение можно добавл ть в ферментационную среду непрерывно , через некоторые промежутки времени или однократно. Кислоту (RCOOH) добавл ют как таковую или в виде соли кислоты , такой как соль натриева , литиева или аммониева , или как соединение, превращающеес в кислоту. Кислоту, если она существует в виде твердых частиц, по пред- почтительному варианту раствор ют в подход щем растворителе, таком как вода или (С1-Со)-спирты.The preferred amount of seed compounds in each case of addition (carboxylic acid or a compound turning into it) is 0.05-3.0 g per 1 liter. The seed compound can be added to the fermentation medium continuously, at certain time intervals or once. The acid (RCOOH) is added as such either in the form of an acid salt, such as a sodium, lithium or ammonium salt, or as a compound converting to acid. The acid, if it exists as solid particles, is preferably dissolved in a suitable solvent such as water or (C1-Co) alcohols.
Среды, которые используют дл ферментации , могут представл ть собой, в осо- бенности когда С-25 заместителем вл етс изопропил или (5)-8тор,бутил, общеприн тые среды, содержащие усваиваемые источники углерода, азота и следы элементов. Когда С-25-заместитель-ненатуральна группа, т.е. она не вл етс изопропилом или (5)-втор, бутилом, то ферментационна среда вл етс такой, в которой выбранные ингредиенты не содержат или содержат только минимальные количества затравоч- ных соединений, в которых R-изопропил или (5)-втор. бутил.Media used for fermentation can be, especially when the C-25 substituent is isopropyl or (5) -8 tor, butyl, conventional media containing digestible sources of carbon, nitrogen, and trace elements. When a C-25 substituent is not a natural group, i.e. it is not isopropyl or (5) second, butyl, then the fermentation medium is one in which the selected ingredients do not or only contain minimal amounts of seed compounds in which R is isopropyl or (5) second. butyl.
После ферментации в течение нескольких дней при температуре предпочтительно в интервале 24-33°С ферментационный бульон центрифугируют или фильтруют, и мицелиевый осадок экстрагируют, предпочтительно ацетоном или метанолом. Экстракт в растворитель концентрируют/в целевой продукт затем экстрагируют в не смешивающийс с водой органический растворитель , такой как хлористый метилен, этилацетат, хлороформ, бутенол или мети- лизобулкетон. Экстракт в растворителе концентрируют , и сырой продукт далее очищают до необходимой степени хрома- тографией, например, использу препара- тивную хроматографию с обращенной фазой, жидкостную хроматографию высокого давлени .After fermentation for several days at a temperature preferably in the range of 24-33 ° C., the fermentation broth is centrifuged or filtered, and the mycelium precipitate is extracted, preferably with acetone or methanol. The solvent extract is concentrated (the target product is then extracted into a water-immiscible organic solvent such as methylene chloride, ethyl acetate, chloroform, butenol or methyl isobulketone. The extract in a solvent is concentrated, and the crude product is further purified to the required degree by chromatography, for example, using reverse phase preparative chromatography, high pressure liquid chromatography.
Продукт обычно получают в виде смеси соединений формулы (I), где Р2-4-(альфа-1.- олеандрозил)-альфа-Ьолеандрозилокси, RI- ОН, и двойна св зь отсутствует, или отсутствует RI, а двойна св зь присутствует , и где Ra-H. Соединени , в которых Ra-CHa, no-существу, отсутствуют. Однако пропорции каждого соединени могут соедин тьс в зависимости от использованного конкретного мутанта и затравочного соединени , а также условий проведени .The product is usually prepared as a mixture of compounds of formula (I), where P2-4- (alpha-1.-oleandrosyl) -alpha-oleanedroxyloxy, RI-OH, and the double bond is absent or RI is absent, and the double bond is present. and where is Ra-H. Compounds in which Ra-CHa is not substantially present. However, the proportions of each compound may be combined depending on the particular mutant used and the seed compound, as well as the conditions of the exercise.
Источники группы R, т.е. то, происходит ли она непосредственно от R-OOH, или ее получают из одного из упом нутых предшественников , или из любого предшественника , не вл етс существенным дл получени авермёктинов. Существенным требованием дл процесса согласно изобретению дл их получени вл етс то, чтобы нужна группа R была доступна штаммам Str.avermitllis согласно изобретению в процессе ферментации.Sources of the group R, i.e. whether it comes directly from R-OOH, or is derived from one of the foregoing precursors, or from any precursor, is not essential for the preparation of avermectins. An essential requirement for the process of the invention to produce them is that the desired R group is available to the Str.avermitllis strains of the invention in the fermentation process.
Подход щими вл ютс следующие соединени :Suitable compounds are:
2,3 - диметилмасл на кислота;2,3 - dimethyl oil per acid;
2 - метилгексанова кислота;2 - methylhexanoic acid;
2 - метилпент-4-еноева кислота;2 - methylpent-4-enoic acid;
2 - циклопропиллропионова кислота;2 - cyclopropylpropionic acid;
литиева соль 4,4 - дифторциклогексан- карбоновой кислоты;lithium salt of 4,4 - difluorocyclohexane carboxylic acid;
4 -.метиленцикдогексанкарбонова кислота;4-methylenecyclohexanecarboxylic acid;
3 -метилциклогексанкарбонова кислота (цис/транс);3-methylcyclohexanecarboxylic acid (cis / trans);
1 - циклопентенкарбонова кислота;1 - cyclopentenecarboxylic acid;
1 - циклогексенкарбонова кислота;1 - cyclohexenecarboxylic acid;
тетрагидропиран - 4-карбонова кислота;tetrahydropyran - 4-carboxylic acid;
тиофен - 2-карбонова кислота;thiophene - 2-carboxylic acid;
3 - фурокислота;3 - furoacid;
2 - хлортиофен-4-карбонова кислота;2 - chlorothiophen-4-carboxylic acid;
циклобутанкарбонова кислота;cyclobutanecarboxylic acid;
циклопентанкарбонова кислота; cyclopentanecarboxylic acid;
. циклогексанкарбонова кислота;. cyclohexanecarboxylic acid;
циклогептанкарбонова кислота;cycloheptanecarboxylic acid;
2 - метилциклопропанкарбоновап кислота;2 - methylcyclopropanecarboxylic acid;
3 - цмклогексен-1-карбонова кислота; 2. - метилтиопропионова кислота; 2 - метил-4-метоксимасл на кислота; тиофен - 3- карбонова кислота; гидроксиметилциклопентан; 3-тиофенкарбоксальдегид; 3-циклогексилпропионова кислота; З-циклопентилпропионова кислота; гидроксиметилциклобутан; тетрагидротиофен-3-карбонова кислота; З-циклопентил-1-пропанол; литиева соль 3-метилциклобутанкар- боновой кислоты;3 - cyclohexene-1-carboxylic acid; 2. - methylthiopropionic acid; 2 - methyl-4-methoxybutyric acid; thiophene - 3-carboxylic acid; hydroxymethylcyclopentane; 3-thiophenecarboxaldehyde; 3-cyclohexylpropionic acid; 3-cyclopentylpropionic acid; hydroxymethylcyclobutane; tetrahydrothiophene-3-carboxylic acid; 3-cyclopentyl-1-propanol; lithium salt of 3-methylcyclobutanecarboxylic acid;
3-фторциклобутанкарбонова кислота;3-fluorocyclobutanecarboxylic acid;
литиева соль 3-метилленциклобутан- карбоновой кислоты;lithium salt of 3-methylene cyclobutane carboxylic acid;
2-метил-4-метилтиомасл на кислота;2-methyl-4-methylthiobutyric acid;
тетрагидротиопиран-4-карбонова кислота;tetrahydrothiopyran-4-carboxylic acid;
циклобутилметиламин;cyclobutylmethylamine;
этилциклобутанкарбоксилат;ethylcyclobutanecarboxylate;
4-гидроксиметилциклопентен; этиловый эфир 2-(3-тиофенкарбонил) пропионовой кислоты;4-hydroxymethylcyclopentene; ethyl 2- (3-thiophenecarbonyl) propionic acid;
5-2-метилпентанова кислота; R-метил- пентанова кислота..5-2-methylpentanoic acid; R-methyl-pentanoic acid ..
Изобретение иллюстрируетс следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
П р и м е р 1. Получение двойного мутанта Stavermitills 7881 (АТСС 53692) с недостающими разветвлен но-2-оксокислотодегидроге- назой и В-авермектин-0-метилтрансфе- разой.Example 1. Obtaining a double mutant Stavermitills 7881 (ATCC 53692) with the missing branched but-2-oxo-acid dehydrogenase and B-avermectin-0-methyltransferase.
Стади 1. Исходный штамм Str. avermitllis АТСС 53567 выращивают в виде сливного сло на агаре New Patch. Agar в течение 12 дней при 30°С.Stage 1. The original strain of Str. avermitllis ATCC 53567 is grown as a confluent layer on New Patch agar. Agar for 12 days at 30 ° C.
Споры собирают с трех таких чашек и суспендируют в 20 мл 0,05М трис-малеино- кислотном буфере, рН 9.Spores are collected from three such plates and suspended in 20 ml of 0.05 M Tris-maleic acid buffer, pH 9.
Среда New Patch.Agar имеет следующий состав:The New Patch.Agar environment has the following composition:
V - сок 200 мл СаСОз 3 г Агар 15 г Н20 до 1000мл Питательный бульон 1,0 г/л Ацетат натри -ЗНгО 1,4 г/Л Изовалериа нова кислота 50 мг/л Изомасл на кислота 50 мг/л Метилмасл на кислота 50 мг/л Изолейцин 250 мг/л Лейцин 250 мг/л Валин . 250 мг/л Раствор микроэлементов 1 мл/лV - juice 200 ml CaCO3 3 g Agar 15 g H20 up to 1000 ml Nutrient broth 1.0 g / l Sodium acetate-ZNgO 1.4 g / L Isovalerianic acid 50 mg / l Isomal acid 50 mg / l Methyl oil acid 50 mg / l Isoleucine 250 mg / l Leucine 250 mg / l Valine. 250 mg / l Trace 1 ml / l
Смесь из 8 растительных соков (помидоры , морковь, сельдерей, свекла, петрушка , латук, горчица и шпинат) плюс соль, аскорбинова и лимонна кислота и натуральные вкусовые добавки. A mixture of 8 vegetable juices (tomatoes, carrots, celery, beets, parsley, lettuce, mustard and spinach) plus salt, ascorbic acid and citric acid and natural flavors.
Состав раствора микроэлементов: РеС1з-6Н202,7 г MnSOrHaO 4,2 CuSCU-SHaO 0,5 CaCl2 11,0 Н2РОз 0,62 CaCl2 6H20 0,24 ZnCI2 0,62 Na2Mo04 0,24 The composition of the trace element solution: FeCl3-6H202.7 g MnSOrHaO 4.2 CuSCU-SHaO 0.5 CaCl2 11.0 H2Oz 0.62 CaCl2 6H20 0.24 ZnCI2 0.62 Na2Mo04 0.24
Вышеупом нутое раствор ют в 1 л 0,1 HCI.The above is dissolved in 1 L of 0.1 HCI.
Стади 2.10 мл споровой суспензии добавл ют в ампулу, содержащую 10 мг N-меTHfl-N -HHTpo-N- нитрозогуанидина (НТГ). Ампулу инкубируют на шейкере при 28°С 60 мин, затем тщательно промывают раствором 1 % NaCI.Step 2.10 ml of the spore suspension is added to a vial containing 10 mg of N-meTHfl-N -HHTpo-N-nitrosoguanidine (NTG). The ampoule is incubated on a shaker at 28 ° C for 60 minutes, then washed thoroughly with a solution of 1% NaCI.
Стади 3. Промытые споры суспендируют в 1% растворе NaCI и смешивают с равным объёмом 80% этиленгликол . Суспензию хран т при -20°С и используют в.качестве источника клеток дл скрининга мутантов.Step 3. The washed spores are suspended in a 1% NaCI solution and mixed with an equal volume of 80% ethylene glycol. The suspension was stored at -20 ° C and used as a source of cells for screening mutants.
Эту споровую концентрированную массу распредел ют по чашке УРД (дрожжевой пептидно-декстрозный агар) дл получени около 100 колоний на чашку. КолонииThis spore concentrated mass is dispensed into a cup of URD (yeast peptide-dextrose agar) to obtain about 100 colonies per dish. Colonies
мутагенизйрованой попул ции (обработанной нитрозогуанидином) исходного Str, avermitllls АТСС 535567 собирают и нанос т в виде мазков на агаровую среду, полученную следующим образом (граммы на литр):the mutagenized population (treated with nitrosoguanidine) of the original Str, avermitllls ATCC 535567 is collected and applied as smears on the agar medium obtained as follows (grams per liter):
разбавленный крахмал 80,К2НРСм 1, MgS04 7H20 1, ардамин рН 5, СаСОз 5, Р- 2000 1 мл, FeS04-7H20 0.01; МпС 2-4Н20 0,001. ZnS04 7H20 0,001; бактоагар 17, дистиллированна вода до 980 мл, рН средыdiluted starch 80, K2HRSm 1, MgS04 7H20 1, ardamine pH 5, CaCO3 5, P-2000 1 ml, FeS04-7H20 0.01; MpS 2-4H20 0.001. ZnS04 7H20 0.001; Bactoagar 17, distilled water up to 980 ml, pH of the medium
добавл ют до 7, добавл NaOH перед авто клавированием при 121°С в течение 20 мин. После автоклавировани добавл ют 20 мл 5% концентрированного раствора (±)-2-ме- тилмасл ной кислоты, рН 7.add up to 7, add NaOH before auto keyboard at 121 ° C for 20 minutes. After autoclaving, 20 ml of a 5% concentrated solution of (±) -2-methylbutyric acid, pH 7, are added.
Агаровые культуры инкубируют в течение 8-12 дней при 28°С. Клетки (мицелий) удал ют с поверхности агара, помещают в 250 млк ацетона. 25 мкл ацетоновых экстрактов затем нанос т точками на хроматографические пластины Analtech Silica Gel GF.Agar cultures are incubated for 8-12 days at 28 ° C. Cells (mycelium) were removed from the surface of the agar and placed in 250 ml of acetone. 25 µl of acetone extracts are then spotted on Analtech Silica Gel GF chromatographic plates.
Храмотограмму снимают в течение 30- 40 мин этилацетатом в качестве растворител , затем сушат, затем обрабатывают 5%The chromatogram is removed for 30-40 minutes with ethyl acetate as a solvent, then dried, then treated with 5%
ванилином в этаноле. Пластины помещают в печь при 100°С на 1-3 мин, затем обрабатывают 3% серной кислотой в этаноле и вновь помещают в печь при 100°С на 10-15 мин. Мутанты, лишенные В-авермектин-0метилтрансферазы , идентифицируют по изменению на хроматограмме: по присутствию п тна, соответствующего В-авермек- тиновым компонентам (R f %. 0,54; 0,42 дл В1 и 82 соответственно) и отсутствию п тна , соответствующего А-авермектиновым компонентам (Rf - 0,69; 0,58 дл А1 и А2 соответственно).vanilla in ethanol. The plates are placed in an oven at 100 ° C for 1-3 minutes, then treated with 3% sulfuric acid in ethanol and again placed in an oven at 100 ° C for 10-15 minutes. Mutants lacking B-avermectin-0 methyltransferase are identified by the change in the chromatogram: by the presence of a spot corresponding to the B-avermectin components (R f%. 0.54; 0.42 for B1 and 82, respectively) and the absence of a spot, corresponding A-avermectin components (Rf 0.69; 0.58 for A1 and A2, respectively).
Общие методики высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).General methods for high performance liquid chromatography (HPLC).
Подвижна фаза: 150 мл воды, 70 мл ацетонитрила, добавл ли метанол до получени объема 1л.Mobile phase: 150 ml of water, 70 ml of acetonitrile, methanol was added to give a volume of 1 l.
Колонка: типа Ultra Sphera ОД5 25 см (Beckman Instrum. Фуллертон, СА 926343100 ).Column: type Ultra Sphera OD5 25 cm (Beckman Instrum. Fullerton, CA 926343100).
Поток: 0,75 мл/мин.Flow: 0.75 ml / min.
Детектирование: УФ на 24, нм.Detection: UV at 24 nm.
Ослабление: около 6.Attenuation: about 6.
Разбавитель образца (О): 35 мл ацето- нитрила плюс 390 мл метанола.Sample diluent (O): 35 ml acetonitrile plus 390 ml methanol.
Стандарты 0,5 мг авермектина А2А в колбу емкостью 10 мл и довести метанолом до нужного объема; навесить 0,5 мг испыту- емого продукта в колбу емкостью 10 мл и довести до полного объема метанол.Standards 0.5 mg of Avermectin A2A in a 10 ml flask and bring methanol to the desired volume; Add 0.5 mg of the test product to a 10 ml flask and bring methanol to full volume.
Они представл ют собой стандартные концентрированные растворы: дл стзндар- тного раствора:They are standard concentrated solutions: for stsndartny solution:
вз ть 100 мкл и 100 мкл в ампулу и добавить 800 мкл подвижной фазы.take 100 µl and 100 µl into the vial and add 800 µl of the mobile phase.
Пробы: отобрать 1 мл хорошо перемешанного бульона; удалить возможно боль- ше надосадочной жидкости, не затрагива осадок; добавить 100 мкл воды после высокоэффективной хроматографии к осажденному слою и провести вихревое смешивание дл диспергировани ; добавить 2 мл разбави- тел и тщательно перемешать; профильтровать и подвергнуть высокоэффективной жидкостной хроматографии,Samples: take 1 ml of well-mixed broth; remove possibly more supernatant without affecting the sediment; add 100 µl of water after high performance chromatography to the precipitated layer and swirl to disperse; add 2 ml of diluents and mix thoroughly; filter and subject to high performance liquid chromatography,
Натуральные и ненатуральные авермектины по изобретению подвергают высоко- эффективной жидкостной хроматографии и врем удерживани дл пиков отдельных авермектинов дел т на врем удерживани дл наблюдаемого присутствующего олиго- мицина-А, служащего в качестве внутренне- го стандарта дл данного определени методом БЗЖХ. Олигомицин-А почти всегда наблюдают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в виде побочного продукта ферментации Str.avermltilis и он вл етс единственным продуктом, наблюдаемым с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, который продуцируетс описываемыми мутантами, когда их культивируют в среде, свободной от кислот RCOOH, где R имеет определенное значение, Обычно олигомицин-А имеет врем удерживани 12,5-14 мин. Отношение удерживани (НУ) вл етс более значимой основой дл идентификационного сопоставлени и сравнени выходов авер- мектиновых продуктов. Общий пор док по влени авермектиновых продуктов при высокоэффективной тонкослойной хроматографии - В2, А2, В1 и А1.The natural and non-natural avermectins of the invention are subjected to high performance liquid chromatography and the retention times for the peaks of individual avermectins are divided by the retention times for the observed oligomycin-A present, which serves as the internal standard for this determination by BLC. Oligomycin-A is almost always observed by high performance liquid chromatography as a by-product of Str.avermltilis fermentation, and it is the only product observed by high performance liquid chromatography that is produced by the described mutants when they are cultured in an acid-free RCOOH medium, where R has a specific meaning. Typically, oligomycin-A has a retention time of 12.5-14 minutes. The retention ratio (NU) is a more significant basis for identifying and comparing the yields of avermectin products. The general order of occurrence of avermectin products in high performance thin layer chromatography is B2, A2, B1 and A1.
Натуральный авермектинNatural Avermectin
В2в В2а А2в А2А В1в В1А А1в А1аB2v B2a A2v A2A B1v B1A A1v A1a
енатуральные авермектиныnatural avermectins
Врем удерживани / Врем удерживани (олигомицин А)Retention Time / Retention Time (Oligomycin A)
070070
0,840.84
0,900.90
1,091.09
1,401.40
1,831.83
Claims (2)
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US651287A | 1987-01-23 | 1987-01-23 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU1806198C true RU1806198C (en) | 1993-03-30 |
Family
ID=21721247
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU884355079A RU1806198C (en) | 1987-01-23 | 1988-01-22 | Method of avermectin production |
Country Status (30)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP0276103B1 (en) |
JP (2) | JPH0681757B2 (en) |
KR (2) | KR900004419B1 (en) |
CN (1) | CN1056883C (en) |
AR (1) | AR241798A1 (en) |
AT (2) | ATE96174T1 (en) |
AU (2) | AU595673B2 (en) |
BG (1) | BG51051A3 (en) |
BR (1) | BR8800271A (en) |
CZ (1) | CZ279782B6 (en) |
DD (2) | DD290214A5 (en) |
DE (2) | DE3884973T2 (en) |
DK (2) | DK28988A (en) |
EG (1) | EG18797A (en) |
ES (2) | ES2059498T3 (en) |
FI (2) | FI90088C (en) |
GR (1) | GR3007586T3 (en) |
HU (2) | HU200487B (en) |
IE (2) | IE61483B1 (en) |
IL (2) | IL85118A (en) |
IN (1) | IN167980B (en) |
MA (1) | MA21160A1 (en) |
MY (1) | MY103514A (en) |
NZ (2) | NZ223271A (en) |
PL (2) | PL156763B1 (en) |
PT (2) | PT86583B (en) |
RU (1) | RU1806198C (en) |
SK (1) | SK279351B6 (en) |
YU (1) | YU47878B (en) |
ZA (3) | ZA88448B (en) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4806527A (en) * | 1987-03-16 | 1989-02-21 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US4874749A (en) * | 1987-07-31 | 1989-10-17 | Merck & Co., Inc. | 4"-Deoxy-4-N-methylamino avermectin Bla/Blb |
EP0313297B1 (en) * | 1987-10-23 | 1993-05-19 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectin aglycones and cultures therefor |
GB8807280D0 (en) * | 1988-03-26 | 1988-04-27 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
GB8811036D0 (en) * | 1988-05-10 | 1988-06-15 | Glaxo Group Ltd | Chemical compounds |
GB8813760D0 (en) * | 1988-06-10 | 1988-07-13 | American Cyanamid Co | Chemical process |
GB8815967D0 (en) * | 1988-07-05 | 1988-08-10 | Pfizer Ltd | Antiparasitic agents |
NZ231772A (en) * | 1988-12-23 | 1992-11-25 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives, preparation and parasiticidal compositions thereof |
NZ231773A (en) * | 1988-12-23 | 1992-09-25 | Merck & Co Inc | Avermectin derivatives, preparation and parasiticidal pharmaceutical compositions thereof |
US5015630A (en) * | 1989-01-19 | 1991-05-14 | Merck & Co., Inc. | 5-oxime avermectin derivatives |
US4897383A (en) * | 1989-02-13 | 1990-01-30 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5252474A (en) * | 1989-03-31 | 1993-10-12 | Merck & Co., Inc. | Cloning genes from Streptomyces avermitilis for avermectin biosynthesis and the methods for their use |
US5030622A (en) * | 1989-06-02 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5057499A (en) * | 1989-06-02 | 1991-10-15 | Merck & Co. Inc. | Avermectin derivatives |
US5023241A (en) * | 1989-07-31 | 1991-06-11 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US5830875A (en) * | 1989-10-30 | 1998-11-03 | Merck & Co., Inc. | 24-and 25-substituted avermectin and milbemycin derivatives |
JP2888586B2 (en) * | 1990-03-05 | 1999-05-10 | 社団法人北里研究所 | Microorganism for selective production of specific components of avermectin and its selective production method |
US5169839A (en) * | 1990-05-11 | 1992-12-08 | Merck & Co., Inc. | Derivatives of 3'- and 3"-o-desmethyl avermectin compounds, compositions and methods of treating melmintic and parasitic infections |
US5208222A (en) * | 1991-03-28 | 1993-05-04 | Merck & Co., Inc. | 4"-and 4'-alkylthio avermectin derivatives |
US5240915A (en) * | 1991-10-15 | 1993-08-31 | Merck & Co., Inc. | Avermectin derivatives |
US6103504A (en) * | 1992-03-25 | 2000-08-15 | Pfizer Inc. | Process for production of avermectins and cultures therefor |
US5292647A (en) * | 1992-11-30 | 1994-03-08 | Eli Lilly And Company | Strain of streptomyces for producing avermectins and processes therewith |
CN1038330C (en) * | 1993-07-05 | 1998-05-13 | 塞泰克斯公司 | Production and seperation of avermectin |
PL181778B1 (en) * | 1993-07-30 | 2001-09-28 | Pfizer | Method of obtaining natural avermerctin |
UA45957C2 (en) * | 1993-10-05 | 2002-05-15 | Пфайзер, Інк. | INTERMEDIATE COMPOUNDS FOR THE PREPARATION OF DORAMECTIN, WHICH HAVE ANTI-PARASITIC ACTIVITY, THE METHOD OF OBTAINING THEM, THE METHOD OF PREPARATION OF DORAMECTIN |
FI942725A (en) * | 1993-12-16 | 1995-06-17 | Pfizer | Genes encoding branched chain alpha-keto acid dehydrogenase complex from Streptomyces avermitilis |
US5701591A (en) * | 1995-04-07 | 1997-12-23 | Telecommunications Equipment Corporation | Multi-function interactive communications system with circularly/elliptically polarized signal transmission and reception |
NZ518657A (en) * | 1998-02-13 | 2003-10-31 | Pfizer Prod Inc | Streptomyces hygroscopicus directing the ratio of B2:B1 avermectins |
ATE341632T1 (en) * | 1999-08-12 | 2006-10-15 | Pfizer Prod Inc | STREPTOMYCES AVERMITILIS GENE REGULATING THE RATIO OF B2:B1 AVERMECTINS |
KR100415395B1 (en) * | 2000-08-02 | 2004-01-16 | 한국생명공학연구원 | Streptomyces avermitilis mutant, which avermectin B C-5-O-methyltransferase gene is destroyed and a method for preparing it |
AU2003245052B2 (en) | 2002-02-12 | 2008-07-31 | Zoetis Services Llc | Streptomyces avermitilis gene directing the ratio of B2:B1 avermectins |
WO2023203038A1 (en) | 2022-04-19 | 2023-10-26 | Syngenta Crop Protection Ag | Insect, acarina and nematode pest control |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE434277B (en) | 1976-04-19 | 1984-07-16 | Merck & Co Inc | SET TO MAKE NEW ANTIHELMINTICALLY EFFECTIVE ASSOCIATIONS BY CULTIVATING STREPTOMYCS AVERMITILIS |
NZ188459A (en) * | 1977-10-03 | 1982-09-07 | Merck & Co Inc | Derivatives of c-076 compounds and pesticidal compositions |
US4429042A (en) | 1978-09-08 | 1984-01-31 | Merck & Co., Inc. | Strain of Streptomyces for producing antiparasitic compounds |
ES8800986A1 (en) * | 1985-07-27 | 1987-12-01 | Pfizer | Antiparasitic avermectin and milbemycin derivatives and process for their preparation. |
GB8606120D0 (en) * | 1986-03-12 | 1986-04-16 | Glaxo Group Ltd | Process |
-
1987
- 1987-12-10 IN IN1059/DEL/87A patent/IN167980B/en unknown
-
1988
- 1988-01-18 DE DE88300354T patent/DE3884973T2/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 EP EP88300354A patent/EP0276103B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 ES ES88300354T patent/ES2059498T3/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-18 IL IL85118A patent/IL85118A/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-18 AT AT88300354T patent/ATE96174T1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-18 BG BG82657A patent/BG51051A3/en unknown
- 1988-01-19 MA MA21397A patent/MA21160A1/en unknown
- 1988-01-19 MY MYPI88000037A patent/MY103514A/en unknown
- 1988-01-20 AT AT88300426T patent/ATE87927T1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-20 DE DE8888300426T patent/DE3879975T2/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-20 EP EP88300426A patent/EP0276131B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-20 ES ES88300426T patent/ES2053719T3/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-21 CZ CS88407A patent/CZ279782B6/en unknown
- 1988-01-21 IL IL85165A patent/IL85165A/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-21 PT PT86583A patent/PT86583B/en unknown
- 1988-01-21 EG EG3588A patent/EG18797A/en active
- 1988-01-21 PL PL1988270238A patent/PL156763B1/en unknown
- 1988-01-21 PT PT86584A patent/PT86584B/en unknown
- 1988-01-21 SK SK407-88A patent/SK279351B6/en unknown
- 1988-01-21 PL PL1988270239A patent/PL156764B1/en unknown
- 1988-01-22 DK DK028988A patent/DK28988A/en not_active Application Discontinuation
- 1988-01-22 FI FI880281A patent/FI90088C/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 NZ NZ223271A patent/NZ223271A/en unknown
- 1988-01-22 DD DD88312393A patent/DD290214A5/en unknown
- 1988-01-22 JP JP63012462A patent/JPH0681757B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-22 ZA ZA88448A patent/ZA88448B/en unknown
- 1988-01-22 CN CN88100649A patent/CN1056883C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-22 HU HU88261A patent/HU200487B/en unknown
- 1988-01-22 KR KR1019880000470A patent/KR900004419B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 ZA ZA88447A patent/ZA88447B/en unknown
- 1988-01-22 IE IE16088A patent/IE61483B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 ZA ZA88449A patent/ZA88449B/en unknown
- 1988-01-22 DK DK198800290A patent/DK175720B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 IE IE16188A patent/IE61066B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 DD DD88312394A patent/DD267512A5/en unknown
- 1988-01-22 AU AU10696/88A patent/AU595673B2/en not_active Expired
- 1988-01-22 AR AR88309888A patent/AR241798A1/en active
- 1988-01-22 YU YU11988A patent/YU47878B/en unknown
- 1988-01-22 FI FI880280A patent/FI90091C/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-22 RU SU884355079A patent/RU1806198C/en active
- 1988-01-22 NZ NZ223272A patent/NZ223272A/en unknown
- 1988-01-22 HU HU88260D patent/HU201973B/en unknown
- 1988-01-23 KR KR1019880000506A patent/KR910002225B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-01-23 JP JP63011881A patent/JPH0817693B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-01-25 BR BRPI8800271-3A patent/BR8800271A/en not_active IP Right Cessation
-
1991
- 1991-02-15 AU AU71110/91A patent/AU631298B2/en not_active Expired
-
1993
- 1993-04-08 GR GR930400638T patent/GR3007586T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ПатентСША№4310519, кл.А61 К31/71, 1982. Патент GB № 4429042, кл. А 61 К 31/71, 1983. Патент СССР N 1560059, кл. С 12 Р 17/08, 1986. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU1806198C (en) | Method of avermectin production | |
HU182069B (en) | Process for preparing monacoline k, a compound with antihypercholesteremic activity | |
US7202063B1 (en) | Processes for the production of rhamnolipids | |
NZ208062A (en) | Producing ethanol by fermenting a xylose-containing substance | |
EP0111683A1 (en) | Improved strain of Clostridium acetobutylicum and process for its preparation | |
JPS58165786A (en) | Variant of clostridium acetobutylicum with high productivity of buthanol and acetone and preparation thereof | |
EP3112470A1 (en) | Method for producing antimicrobial agents | |
HU182267B (en) | Process for preparing the antibiotic c-15003 p-3 | |
KR960016874B1 (en) | Microbial process for the production of trans-4-hydroxy-l-proline | |
PL122463B1 (en) | Process for preparing novel c-15003 p-3 antibiotic | |
EP0478061A1 (en) | Antiviral agent | |
CA2015940A1 (en) | Antifungal agent | |
JPH01193265A (en) | Novel antitumor antibiotic sf2587 substance and its production | |
US3884762A (en) | Fermentation process for the preparation of ergot alkaloids | |
US5276055A (en) | Antibiotic agents | |
Venkata Dasu et al. | Studies on production of griseofulvin | |
HU189515B (en) | Process for preparing new 20-dihydro-20,23-dideoxy-tylonolide /tylactone/ and esters thereof | |
Yoshikawa et al. | Terminal steps in the biosynthesis of herbicidins, nucleoside antibiotics | |
RU2080382C1 (en) | Strain of bacterium clostridium acetobutylicum - a producer of normal butyl alcohol and acetone | |
KR850001939B1 (en) | Process for preparing a-32724 antibiotics | |
US3954970A (en) | Actinomycin complex from micromonospora | |
Boeck et al. | A32390A, A NEW BIOLOGICALLY ACTIVE METABOLITE I. DISCOVERY AND FERMENTATION STUDIES | |
US5304485A (en) | Antibiotic producing microorganism | |
Lešová et al. | Factors affecting the production of (–)‐mitorubrinic acid by Penicillium funiculosum | |
JPH0691831B2 (en) | Microbiological production of 13β-13-deoxy-22,23-dihydroavermectin-Bla / Blb aglycone |