RU1806186C - Питательна среда дл диагностики бруцеллеза - Google Patents

Abstract

Использование: ветеринарна  и медицинска  микробиологи , бактериологическа  диагностика бруцеллеза. Сущность изобретени  заключаетс  в том, что в питательную среду в качестве белковой основы (источника аминного, общего азота) вводитс  ферментативный гидролизат из отходов производства м сокомбината - плацентар- но-эмбрионально-маточных тканей от коров и свиней как в отдельности, так и в виде их смеси при следующем соотношении ингредиентов , мае. %: гидролизат плацентарно- эмбрионально-маточных тканей (с сухим остатком 9-10%) 1.2-1,6; натрий хлористый 0,4-0,6; глюкоза медицинска  0,9-1,1; глицерин 2,75-3,25; агар-агар 1,75-2,25; вода дистиллированна  остальное. 4 табл,

Description

Изобретение относитс  к ветеринарной и медицинской микробиологии и может быть использовано дл  бактериологической диагностики бруцеллеза человека и животных ,

Целью изобретени   вл етс  улучшение ростовых свойств питательной среды дл  бруцелл, удешевление состава среды и расширение сырьевой базы дл  приготовлени  основы питательной среды.

Это достигаетс  путем применени  в качестве основы питательной среды ферментативного гидролизата из плацентарно- эмбрионально-маточных тканей (отходов производства м сокомбинатов) от убойного крупного рогатого скота и свиней или смеси гидролизатов этих тканей, которые составл ют в общем объеме убойного скота м сокомбинатов от 80 до 90%. В питательную среду дл  выращивани  бруцелл в качестве

белковой основы вводитс  ГПЭМ - гидролизат из плацентарно-эмбрионально-маточ- ных тканей стельных коров и свиней (в отдельности или вместе вз тых в равном объеме) при следующем оптимальном соотношении ингредиентов, мае. %: Гидролизат плацентарно-эмбриональноматочный (сухой остаток

9-10%)1,4

Натрий хлористый, хч 0,5

Глюкоза медицинска  1,0

Глицерин3,0

Агар-агар2,0

Вода дистиллированна  Остальное

Среду кип т т 5-10 мин, фильтруют, разливают в пробирки, колбы, стерилизуют, рН готовой среды составл ет 7,2-7,3.

Предлагаемый гидролизат,  вл  сь продуктом глубокого расщеплени  белков, соел С

00

о о

00

О

со

держит широкий спектр аминокислот, играющих важную роль в метаболизме бруцелл,  вл ющихс  аминогетеротрофными микроорганизмами . Кроме того, указанный гидролизат  вл етс  источником стимул тора роста бактерий за счет содержани  в своем составе биологически активных веществ плацентарной ткани.

Пример 1, Гидролизат плацентарно- эмбрионально-маточный готов т следую- щим образом: ткани плаценты, матки, м гких тканей эмбриона, полученные на м сокомбинате после убо  животных (не позднее 2-3 часов) подвергают ферментативному гидролизу; к 1 кг измельченной на м сорубке ткани добавл ют 1,5 л кип щей воды, перемешивают, подщелачивают 20% раствором щелочи (едкий натр) до рН 8,0, подогревают до 70°С. В отстуженную до 40- 45°С смесь добавл ют 150 г фарша подже- лудочной железы или 20 г панкреатина с активностью 45 ЕД, добавл ют 22,5 мл хлороформа , емкость герметично закрывают и ведут гидролиз при периодическом перемешивании 4-5 суток при , поддер- жива  рН смеси на уровне 7,4-7,6. По окончании гидролиза гидролизат переливают в емкость из нержавеющей стали, кип т т 15 мин. при рН 5,0, отстаивают, фильтруют, стерилизуют, подвергают лио- фильному высушиванию. В гидролизате определ ют общий и аминный азот, уровень пептидов.

Готовый продукт должен соответствовать биохимическим показател м, отражен- ным в табл. 1, из которой видно, что гидролизаты из плацентарно-эмбриональ- но-мэточных тканей коров и свиней мало отличаютс  друг от друга, а по величинам общего и аминного азота превосход т про- тотип - гидролизат кильки,

Пример 2. Дл  изучени  ростовых свойств питательной среды дл  бруцелл на основе гидролизата плацентарно-змбрио- нально-маточного проводились опыты по титрации компонентов питательной среды в зависимости от роста микроорганизмов - известных вирулентных тест-штаммов бруцелл (3 вида рода:-бруцелл, 7 биотипов), полученных из ГИСК им. Тарасёвича, типичных по морфологическим, культурально-биохи- мическим и серологическим свойствам: бруцелла абортус 544; бруцелла суис 1330; бруцелла мелитензис 25; (референтные штаммы) и бруцелла абортус штаммы 271- 2803; 276-720; 275-138; 280-381-К-4 (полевые штаммы).

Дл  приготовлени  микробных взвесей суточные культуры тест-штаммов смывали 0,9% раствором хлористого натри , доводили взвесь до содержани  1 млрд/мл микробных клеток по оптическому стандарту мутности , затем серийными дес тикратными разведени ми доводили до содержани  1 тыс. (101 и 100 (10 ) микробных клеток в 1 мл взвеси. И.з разведени  и 10 взвеси каждого штамма культуры бруцелл высевали по 0,1 мл на чашки Петри с предлагаемой и известными средами. Учет результатов проводили через 72-96-144 часов инкубации посевов при 37°С.

Результаты указанных исследований при разном соотношении компонентов питательной среды на основе ГПЭМ представлены в табл. 2, из которой следует, что при испытании 7 известных вирулентных штаммов бруцелл установлены граничные концентрации компонентов по составу предложенной среды. При этом по наибольшему количеству выросших колоний за оптимальную концентрацию компонентов состава питательной среды авторами прин то , мае. %:

Гидролизат плацен- тарно-эмбрионально- маточный (сухой остаток 9-10%)1,4 Натрий хлористый, х.ч. 0,5 Глюкоза медицинска  1,0 Глицерин 3,0 Агар-агар 2,0 Вода дистиллированна  Остальное Граничные с ним минимальные концентрации составл ют, мае. %: Гидролизат плзцен- тарно-эмбрионально- маточный (сухой остаток 9-10%) 1,2 . Натрий хлористый, х.ч. 0,4 Глюкоза медицинска  0,9 Глицерин 2,75 Агар-агар 1,75 Вода дистиллированна  Остальное Граничные с ним максимальные концентрации составл ют, мае. %: Гидролизат плацента рно-эмбрионально- маточный (сухой остаток 9-10%) . i;e Натрий хлористый, х.ч. 0,6 Глюкоза медицинска  1,1 Глицерин 3,25 Агар-агар 2,25 Вода дистиллированна  Остальное Предложенна  питательна  среда на основе гидролизата плацентарно-эмбрио- нально-маточного по оптимальных концентраци х компонентов по своим ростовым свойствам не уступает составам питательных сред по прототипу.

Пример 3. Проводились специальные исследовани  по изучению ростовых свойств питательных сред дл  вирулентных штаммов бруцелл при использовании в качестве основы среды гидролизата плацен- тарно-эмбрионально-маточного из тканей коров (б), свиней (в) в отдельности и смеси указанных гидролизатов в равном соотношении (1:1, г). Результаты опытов представлены в табл. 3, из которой видно, что по своим ростовым свойствам среды, по предлагаемому изобретению на основе исследованных гидролизатов (б, в, г) практически не отличались друг от друга, по количеству выросших колоний были близки к среде по прототипу, агару Д, однако превосходили его по ускоренному росту колоний бруцелл (на 1-2 суток) и большим размером колоний . Морфологические, тинкториальные и дифференцирующие свойства бруцелл, выращенных на средах по прототипу и предлагаемому изобретению, оставались неизменными.

Пример 4. По определению диагностической эффективности оптимального со- става в сравнении с прототипом исследовалс  патологический материал от крупного рогатого скота (к.р.с.), экспериментально зараженного бруцеллезом, и материал из неблагополучных хоз йств от поголовь  крупного рогатого скота, реагирующего положительно на бруцеллез по РА и РСЖ (колхоз Ередви Цхинвальского района Юго-Осетинской АО). Эффективность питательных сред определ лась по количе- ству выделенных культур бруцелла абортус в процентах к количеству исследованных проб (лимфатические узлы: паховые, подчелюстные , заглоточные, шейные, околоушные , тазовые, предлопаточные, коленной складки, портальный, бронхиальные, пара- аортальные;  ичники, костный мозг, печень, селезенка). Результаты отражены в табл. 4, из которой видно, что по эффективности предложенна  питательна  среда на основе ГПЭМ превосходит среду по прототипу на 7,0-10,7%%.

Технико-экономическа  эффективность данного предложени  заключаетс  в следующем: 1) на питательной среде по изобретению в сравнении с прототипом ускор етс  на 1-2 суток рост культур бруцелл; 2) повышаетс  диагностическа  эффективность по количеству выделенных колоний возбудител  бруцеллеза из патологического материала (на 7,0-10,7%%); 3) расшир етс  сырьева  база непищевого белка дл  изготовлени  питательной основы сред с использованием отходов производства м сокомбинатов, годовой объем которых только на одном м сокомбинате (г. Казань) составл ет 50-60 тонн; 4) в значительно меньшей стоимости сырь  - плацентар- но-эмбрионально-маточного материала (в 3-7-9 раз) в сравнении с общеприн тыми в микробиологической практике источниками белка (рыба-печень-м со) и экономии дефицитных пищевых м соры- бо продукте в.

Все сказанное обусловливает возможность промышленного изготовлени  дл  нужд бактериологических лабораторий основы питательной среды дл  выделени  бруцелл в лиофилизированном состо нии.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Питательна  среда дл  диагностики бруцеллеза, содержаща  питательную основу , агар-агар, натрий хлористый, глюкозу , глицерин и дистиллированную воду, о т- личающа с  тем, что, с целью ускорени  диагностики за счет повышени  ростовых свойств среды, в качестве питательной основы она содержит ферментативный гидролизат плацентарно-эмбрио- нально-маточных тканей коров и/или свиней при следующем соотношении компонентов , мае. %:

   Гидролизат плацен- тарно-эмбрионально- маточных тканей коров и/или свиней1,2-1,6 Натрий хлористый 0.4-0,6 Глюкоза 0,9-1,1 Глицерин 2,75-3,25 Агар-агар 1,75-2,25 Вода дистиллированна  Остальное

   Таблица 1

   Обозначени : а- контропь - агар Л из гидролиэата кильки

   в - агар ив основе гидролиаата из ллацентарно-энбрионэльно-маточных тквнви коров

   (ГПЭН коров)

   g - . -- свиней (ГПЭМ свиней)- - г - н« основе сиеси гидролизатое ГПЭМ коров и свиней (ill)

   Таблица

   Таблица}

   Таблица4