RU1805394C - Способ определени функционального состо ни иммунокомпетентных клеток - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине, в частности к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано при контроле эффективности терапии при различных иммунных нарушени х. Цель изобретени  - упрощение и снижение травматичности способа. Цель достигаетс  тем, что пробу цельной крови пациента инкубируют в им-% мунологических планшетах с неспецифиче- екими митогенами или специфическими аллергенами, добавл ют раствор тетрациклин гидрохлорида. После инкубации перенос т суспензию клеток из лунок планшета на предметные стекла и подсчитывают в флюоресцентном микроскопе число флуоресцирующих клеток по отношению к контрольным пробам. 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к медицине, в частности, к иммунологии и аллергологии, может быть использовано в цел х диагностики и контрол  эффективности терапевтического воздействи  при различных иммунопатологических состо ни х.

Цель изобретени  - упрощение способа при сокращении травматичности.

Указанна  цель достигаетс  тем, что у больного забирают кровь из пальца, инкубируют ее в иммунологичёских планшетах с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, флюоресцентным зондом - раствором тетрациклина, перенос т на предметные стекла, готов т мазки и подсчитывают число флюоресцирующих клеток.

Способ осуществл ют.следующим образом .

Кровь пациента, вз тую из пальца, внос т в лунки планшета по 0.025 мл. В лунки

внос т раствор митогёна или аллергена и инкубируют планшет при 37°С в течение 1 ч. Затем в лунки внос т раствор тетрациклина гидрохлорида в конечной концентрации 1,0-2, г/л и инкубируют при 37°С в течение 5-15 мин и перенос т суспензию клеток из лунок на предметные стекла..

Провод т учет результатов, определ   спонтанную, митоген- и аллергенезависи- мую флюоресцентную клетку с определением индекса стимул ции.

П р и м е р. У больного Н. (исследование N; 88/431) отбираем из пальца 0,1 мл крови в капилл р; предварительно обработанный раствором гепарина в обычной концентрации . Кровь вносим по 0,025 мл в лунки планшета дл  иммунологичёских исследований. Вносим в контрольную лунку 0,025 мл забу- ференного раствора Хенкса) рН 7,4 (в опытную соответственно 0,025 мл раствора ФГА в концентрации 20 мкг/мл, а также 0.025 мл

00

о

СП

со о

раствора кортизола (II опыт) и 0,025 мл раствора ст афилоантигена (III опыт). Планшет инкубируем в течение 60 мин при 37°С, после чего вносим в опытные и контрольные лунки по 0,02 мл раствора тетрациклина концентрации 5, г/л. Планшет инкубируем 10 мин. при 37°С, после чего каплю суспензии переносим на предметное стекло , приготавливаем мазки. Учет результатов проводим, на флюоресцентном микроскопе Л ЮМАМ P-5 или аналогичном с использованием длины волны возбуждающего света 380 нм (фильтры ФС-1-2, БС-8-3, СЭЗ-24.4) и света флюоресценции 540 нм (запирающие фильтры ЖС-18, ЖЗС-19). Определ ем число флюоресцирующих зеленым светом лейкоцитов в опытных пробах, по отношению к контрольной и вычисл ем индексы стимул ции - контроль 3%, ФГА - 23,5%, кортизол - 2,6%, стафилоантиген - 14,1%, соответственно индексы стимул ции-7,83, 0,87,4,70.. --.. Способ был применен при исследовании больных, подвергшихс  воздействию

0

5

0

ионизирующей радиации при аварии на Чернобыльской АЭС (таблица).

Обнаруженна  коррел ци  способа реакцией бласт-трансформации с +3Н-тими- диновой меткой и реакцией торможени  миграции лейкоцитов позвол ет рекомендовать способ дл  ранней оценки иммунного статуса при различных нарушени х иммунитета./

Claims (1)

1. Формула изобретени  Способ определени  функционального состо ни  иммунокомпетентиых клеток путем инкубации крови больного с неспецифическими митогенами или специфическими аллергенами, последующей регистрации результатов и подсчета индекса стимул ции по отношению к спонтанному уровню активности , отличающийс  тем, что, с целью упрощени  и снижени  травматичности способа, перед регистрацией в среду внос т Тетрациклин гидрохлорида в концентрации (1,0-2,0) г/л и регистрируют число флуоресцирующих лейкоцитов.

   Функциональное состо ние иммунокомпетентных клеток у больных, пострадавших

   при аварии Чернобыльской АЭС .

   г - коэффициент коррел ции по отношению к предлагаемому способу.

   Продолжение таблицы