RU1784591C - Штамм бактерий РSеUDомоNаS SYRINGae - деструктор оксипропилированного этилендиамина - Google Patents

Abstract

Использование. лбкальна   очидтка сточных вод химических предпри тий, синтезирующих лапромолы-аЗ от ббдержащие полиспирты, Сущность: штамм Pseudo- monas syrlngae 10 получен методом накопительных культур, где в качестве источника углерода и энергии использовали рксипро- пилированный этилендиаммн. Штамм. Pseudomonas syringae депонирован под номером ВКМ В-1744, осуществл ет полную утилизацию вещества, содержащегос  в локальных стоках в концентрации 0,5-3,13 г/л за 4-12 сут. 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к биотехнологии и касаетс  нового штамма бактерий, ко- торый может -быть использован дл  локальной очистки сточных вод химических предпри тий, синтезирующих лапрамолы - азотсодержащие полиспирты, примен емые в производстве жестких пенополиуретанов .

. -i

Сточные воды, образующиес  при получении азотсодержащих полиспиртов, проход т стадию концентрировани  на специальных мембранных фильтpax и затем подвергаютс  термическому обезвреживанию . Дл  сжигани  концентрата сточных вод расходуетс  природный газ или мазут. Сжигание сопровождаетс  загр знением атмосферы продуктами неполного сгорани  и распространением их в окружающей сре- де- ..-. .-.. ;

Перспективным  вл етс  микробиологический способ очистки стоков, основанный на применении культур микроорганизмов (бактерий), способных использовать полиспирты в качестве единственного источника углерода и энергии с полной минерализацией субстрата. До насто щего времени не удалось обнаружить сведений о штаммах микроорганизмов, способных утилизировать азотсодержащие полиспирты, в частности оксипропилированный этилендм- амии (ОПЭДА) - Лапрамол 294.

Целью изобретений  вл етс  новый штамм бактерий - активный Деструктор ок- сипропилированного этйлёндиамина с условной молекул рной массой 294, способный к полному разложению этого соединени . Использование предлагаемого штамма в очистке стоков экономически боVJ

00

СЛ Ч)

лее выгодно и не приводит к загр знению окружающей среды.

Штамм Pseudomonas syringae ВКМ В- 1744 Д получен методом накопительных культур, где в качестве источника углерода и энергии использовали ОПЭДА. В услови х реального производства Лапрамола 294 брали пробы пыли, на которую попадало вещество, с поверхности химических реак- тор бв и другого технологического оборудо- вани ггары, пола, а также образцы сточных вод - места возможной естественной адаптации и размножени  микроорганизмов-деструкторов ОПЭДА Образцы пыли и стоков суспендировали в 100 мл 0,1 М фосфатного буфера (рН 7,2), а затем вносили (по 25 мл) в колбы (500 мл), содержащие 150 мл питательной среды следующего состава, г/л: Na2HP04 12 Н20 1,5; КН2РО г2Н20 1,0; Nf-ЦМОз 0,2; NaCI 0,1; ОПЭДА 0,5; вода водопроводна  до 1 л, рН 7,2-7,4. Культивирование проводили на качалке (180 об/мин), температура 28-30°С. Через каждые две недели из колб отбирали пробы и определ ли остаточное содержание субстрата с помощью фотометрического метода, модифицированного дл  определени  оксипропи- лированного этилендиамина (2,3). Метод основан на экстракции вещества хлороформом и образовании окрашенного соединени  с ионами роданокобальта. По мере утилизации субстрата в колбы добавл ли

новые порции ОПЭДА до концентрации 0,5 г/л. После нескольких мес цев культивировани  из колб производили рассев микроорганизмов на агаризованную питательную среду (минеральный состав приведен выше

-+15,0 г/л агара). Штамм был представлен наиболее быстрорастущей колонией. В дальнейшем культура подвергалась дополнительной адаптации к ОПЭДА в жидкой среде, содержащей возрастающие количества субстрата (от 0,5 до 3,0 г/л).

Штамм Pseudomonas syringae ВКМ В- 1744 Д идентифицирован по 8-ому изданию Определител  Берги и имеет следующие свойства.

Морфолого-культуральные признаки.

Клетки одиночные, короткие палочки 0,5x1,0 мкм, подвижные (1-3 пол рных жгутика ); грамотрицательные. Не кислото- устойчивые, Деление клеток происходит в одной плоскости, расход тс  клетки беспор дочно . Клеточные включени  отсутствуют .

Рост на плотных средах М со-пептонный агар, 30°С, 3 сут

Штрих

обильный, сплошной с розным краем или слегка волнистым краем, в зкой консистенции, кремового цвета

круглые, 2-3 мм, поверхность гладка , профиль выпуклый, блест щие , край ровный,структура однородна , цвет обратной стороны колонии идентичен цвету самой колонии-кремовый, пигмент в среду не выдел ют, в зкие

Биомасса клеток имеет специфическтй запах. Сусло-агар, 30°С, 3 сут

Штрих

умеренный, сплошной, переход щий в четковид- ный с зубчатым краем, бесцветный, в зкой консистенции

Биомасса клеток имеет слабый запах при комнатной температуре. Минеральна  агармзованна  среда с 3 г/л,ОПЭДА, 30°С, 7 сут

Штрих

скудный, сплошной, переход щий в цепочку отдельных колоний, бесцветный, в зкой консистенции

Колонии

Т

Колонии

круглые, 2-3 мм, поверхность гладка , выпуклые , блест щие, край ровный, структура однородна , слизкие, бесцветные, обратна  сторона колонии того же цвета, пигмент в среду не выдел ют

Колонии

круглые, 1т2 мм, поверхность гладка , выпук- i i лые, блест щие, край ровный, структура од нородна, слизистые, с возрастом более в зкие , бесцветные, пигмент не выдел ют

Биомасса клеток не имеет запаха.

Рост на жидких средах М со-пептонный бульон, 30°С, 3 сут, качалка (180 об/мин)

Характер роста

сильн помутнение среды, рыхлое кольцо корич- без изменений невого цвета на стенке колбы, осадка нет

Культуральна  жидкость имеет специфический запах. Пивное сусло (6-7°Б), 30°С, 3 сут, качалка (180 об/мин)

Характер роста

слабое помутнение среды, рыхлое кольцо корич- без изменений невого цвета на стенке колбы

Минеральна  среда с 3,0 г/л ОПЭДА, 10 сут, качалка

Характер роста

умеренное равномерное помутнение среды, скудный подкисление среды с рН 7,2 до 6, рыхлый осадок серого цветаV

Культуральна  жидкость запаха не имеет.

Физиолого-биохимические свойства.

Аэроб, осуществл ет дыхание, анаэробный тест Хью-Лейфсона отрицательный. Растет при температуре от +8 до +40°С, оптимальна  температура роста 28-30°С Растет в интервале рН 5,0-9,0 Оптимум рН среды дл  про влени  деструктивных свойств 7,0-7,5, Растет в присутствии 7,0% NaCI Поли-/ -оксибутират не накапливает в клетках на средах с соотношением C:N более 10.

Чувствителен к 5 мкг/мл стрептомицина , 40 мкг/мл тетрациклина, рифампицина, налидиксовой кислоты, не чувствителен к 200 мкг/мл амггицилина

Источники углерода

Образует кислоту из D и L-арабинозы, ксилозы, глюкозы, фруктозы, галактозы, сахарозы , мальтозы, маннита на среде, г/л: пептон - 3,0; КаНРО - 0,6, МаС - 2,5: 2 мл 1,6% спиртового раствора бромтамолового синего. Реакци  Фогес-Лроскауэра отрицательна .

Ассимилирует органические кислоты лимонную,  нтарную, пропиновокислую малоновую, адапиновую уксусную, щавелевую , муравьиную, малеиновую, аскорбиновую на среде, г/л: (NH/ib HPOo 0.5 MgS04 7Н20 0,2; NaCI 0,1; агар-агар 15,0, органическа  кислота 2.0: 20 мл 0,04% водного раствора фенолового красного, рН 6,8.

Утилизирует: глицерин, лактозу, пропи- ленгликоль, L-аргинин L-валин, L-аланин, L-сорбит.

Источники азота

Изменение среды

Изменение среды

Изменение среды

Растет с сол ми аммони - пептоном,

0 (, NH-qNOa, NI-MCI; с нитратами- KNOs NaNOa; NaN02 на среде, г/л. глюкоза 20 О К2НР04, КН2Р04 2,0, KCI 0,5; MgSO 7Н20 0,5; агар-агар 15,0, соединени  азота 100 1 мл раствора микроэлементов

5 Разлагает казеин, не гидролизует крахмал и тирозин, разжижает желатину. Образует аммиак, не образует индол и сероводород.

Штамм обладает каталазной, уреазной

0 и нитратредуктазной активностью Восстанавливает нитраты до нитритов на среде МПБ + 0,2 % KNOs He обладает оксидазной, аргининдегидролазной, лецитиназной активностью

5Дл  роста и деструкции оксипропилированного этилендиамина не требует активаторов и стимул торов. Деструктивные свойства сохран ет при хранении на минеральной агаризованной среде при 2-4°С в

0 течение 6 мес цев, лиофильно высушенным в ампулах (криопротектор - 10 %-на  сахароза -г 1 %-ный желатин) в течение 1 года Штамм не токсичен и не патогенен

П р и м е р 1 Посевной материал выра5 щивали на качалке (180 об/мин) в течение 5-6 сут при 30°С на среде следующего состава , г/л NH4N03 1,0, NaH2P04 1 О К2НР04 4,0, MgSO/i 7Н20 0,2 NaCI 0,2 микроэлементы- 1 мл концентрата, ОПЭДА 1,0, вода дистиллированна  до 1 л, рН 7,2- 7,3

Выращенным посевным материалом инокулируют (посевна  доза 109 кл/мл) колбы объемом 1000 мл содержащие 150 мл

питательной среды (элементный состав приведен выше) Количество ОПЭДА в среде 0,5 г/л. Культивирование провод т при 30°С на качалке (180 об/мин). О способности штамма разрушать ОПЭДА суд т по уменьшению концентрации вещества в среде с помощью фотометрического метода.

После 72 ч инкубации концентраци  ОПЭДА снизилась на 63,8 процента.

П р и м е р 2 Услови  аналогичны описанным в примере 1 за исключением того, что в колбы внос т 150 мл реальной сточной воды цеха по производству ОПЭДА, содержащей 1,0 г/л вещества. Добавл ют биоген- ные элементы (соли) из расчета, г/л: ГМНйМОз 1,0; NaCI 0,1; NaH2P04 1,0; К2НР04 4,0; MgS04 7Н20 0,1.

После 120 ч инкубации штаммом разрушено 79,0% ОПЭДА.

0

5

В таблице приведены результаты деструкции вещества в динамике в зависимости от концентрации оксипропилирован- ного этилеидиамина в сточной воде.

Штамм Pseudomonas syringae ВКМ В- 1744 Д осуществл ет полную утилизацию оксипропилированного этилендиамина в концентрации 0,5-3,0 г/л за 4-12 суток.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что с помощью штамма Pseudomonas syringae ВКМ В-1744 Д возможна эффективна  очистка сточных вод от оксипропилированного этилендиамина - Лапрамол 294.

Claims (1)

1. Формула изобретени  Штамм бактерий Pseudomonas syringae ВКМ В-1744 Д - деструктор оксипропилированного этилендиамина.