RU1782568C - Способ замораживани эмбрионов или йцеклеток - Google Patents

Abstract

Использование: животноводство, а именно консервирование биологических объектов. Сущность изобретени : заполнение цилиндрического контейнера первым воздушным пузырьком осуществл ют при условии соотношени  диаметра воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера 2:1. Замораживание эмбрионов или  йцеклеток провод т в вертикально расположенном контейнере. При замораживании температуру среды с криопротектором и эмбрионом или  йцеклеткой поддерживают выше температуры среды дл  выведени  криопротекторанеменеечемна 15°С. 1 ил., 2 табл.

Description

Изобретение относитс  к сельскому хоз йству , в частности к технике консервировани  биологических объектов, например эмбрионов и  йцеклеток млекопитающих, и может быть применено в центрах и пунктах трансплантации и в биологических лаборатори х .

Известен способ замораживани  эмбрионов в соломинках, по которому заправл ют цилиндрический контейнер средой дл  выведени  криопротектора, первым воздушным пузырьком, средой с криопротектором и эмбрионом или  йцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой дл  выведени  криопротектора, замораживают до - 30°С и перенос т в жидкий азот.

При достижении -7°С камера установки вскрываетс , оттуда извлекаетс  контейнер с эмбрионом или  йцеклеткой, и оператор переохлажденном в жидком азоте пинцетом касаетс  стенки контейнера. Убедившись , что в контейнере образуютс  первые

кристаллы льда, контейнер укладывают на место и провод т посев льда в следующем.

К недостаткам данного способа следует отнести сложность процесса замораживани , возможное изменение режима, что может привести к гибели эмбрионов.

Цель изобретени  - повышение сохранности зародышей после деконсервации, упрощение технологического режима замораживани  и снижение затрат на крио- консервацию эмбрионов и  йцеклеток.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в способе замораживани  эмбрионов или  йцеклеток, включающем заполнение цилиндрического контейнера средой дл  выведени  криопротектора, первым воздушным пузырьком, средой с криопротектором и эмбрионом или  йцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой дл  выведени  криопротектора, замораживание до -30°С и перенос в жидкий азот, заполнение цилиндрического контейнера

Х|

00

ю

СЛ О 00

первым воздушным пузырьком осуществл ют при условии соотношени  диаметра воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера 2:1, а замораживание провод т в вертикально расположенном контейнере, причем при замораживании температуру среды с криопротектором и эмбрионом или  йцеклеткой поддерживают выше температуры среды дл  выведени  криопротектора не менее чем на 15°С.

Вли ние размера первого воздушного пузырька йа протекание искусственной инициации кристаллизации показано в табл. 1,

Дл  прорастани  кристаллов льда при температуре посева льда необходимо, чтобы они уже находились в нижней части. Это достигаетс  тем, что температура там всегда ниже, чем в верхней части контейнера. Веро тность образовани  кристаллов и их прорастани  из нижней-части контейнера в верхнюю показана в табл. 2.

На чертеже изображен контейнер дл  замораживани  эмбрионов по предлагаемому способу.

Пример. Цилиндрический контейнер дл  замораживани  1 с пробкой 2 заправл ют в следующей последовательности: средой дл  выведени  криопротектора 3 на 35 мм, воздушным пузырьком 4 на 2-3 мм (оптимальность такого размера пузырька показала в табл. 1), средой с криопротектором 7 на 30 мм и эмбрионом 6, воздушным пузырьком 8 на 5-10 мм, средой дл  выведени  криопротектора 9. Воздушные пузырьки предназначены дл  разведени  сред дл  выведени  криопротектора 3, 9 и замораживани  7 в течение криоконсерва- ции. Первый воздушный пузырек4 приобретает новое свойство, так как он используетс  не только дл  разделени  сред 3 и 7, но и дл  прорастани  кристаллов льда. Это достигаетс  разделением сред 3 и 7 в йесте касани  поверхности воёдуш ного пузырька 4 размером 2-3 мм с внутренней стенкой контейнера 1. Контакт между двум  средами осуществл етс  тонким слоем жидкости 5, адсорбированным на внутренней поверхности контейнера 1.

Замораживание провод т в вертикально расположенном контейнере. При сниже- нии температуры среды с криопротектором и эмбрионом, расположенной в центральной части контейнера, температуру среды дл  выведени  криопротектора, наход щейс  в нижней части контейнера, поддержива- 0 ют ниже температуры центральной части не меньшее чем на 15°С.

Предложенный способ замораживани  эмбрионов или  йцеклеток обладает р дом преимуществ. Улучшаетс  технологичность режима замораживани , так как не требуетс  вмешательства оператора и доступа к объекту, что исключает нарушение режима замораживани , повышает сохранность эмбрионов после замораживани  - оттаивани , при этом улучшаютс  услови  труда технологов.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ замораживани  эмбрионов или  йцеклеток, включающий заполнение цилиндрического контейнера средой дл  выведений криопротектора, первым воздушным пузырьком, средой с криопротектором и эмбрионом или  йцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой дл  выведени  криопротектора, замораживание до -30°С и перенос в жидкий азот, отличающий- с   тем, что, с целью, повышени  сохранности зародышей после деконсервации, упрощени  технологического режима замораживани  и снижени  затрат, заполнение цилиндрического контейнера первым воздушным пузырьком осуществл ют при условии соотношени  диаметра воздушного пузырька и внутреннего диаметра контейнера 2:1, а замораживание провод т в вертикально расположенном контейнере, причем при замораживании температуру среды с криопротектором и эмбрионом или  йцеклеткой поддерживают выше темпера- туры среды дл  выведени  криопротектора не менее, чем на 15°С.

   Таблица 1

   0

   5

   0

   5

   0

   5

   Таблица 2