RU1587723C - Способ получения экзотоксина а из pseudomonas aeruginosa - Google Patents
Способ получения экзотоксина а из pseudomonas aeruginosa Download PDFInfo
- Publication number
- RU1587723C RU1587723C SU4620050A RU1587723C RU 1587723 C RU1587723 C RU 1587723C SU 4620050 A SU4620050 A SU 4620050A RU 1587723 C RU1587723 C RU 1587723C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nutrient medium
- exotoxin
- cultivation
- glucose
- sodium pyruvate
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к микробиологии, в частности к способу получения экзотоксина а синегнойной палочки. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Способ включает проведение процесса в ферментере на синтетической питательной среде методом многоциклического культивирования. При этом осуществляют перемешивание и аэрацию. Добавляют в питательную среду 0,2% глюкозы на первом цикле культивирования, на втором и последующих циклах культивирования в питательную среду вместо клюкозы вносят пируват натрия концентрации 0,05-0,1 г/л. 7 табл.
Description
Изобретение относится к микробиологии, в частности к способу получения экзотоксина А синегнойной палочки, который может служить антигеном при создании диагностических препаратов, а также в атоксической форме может быть использован в качестве компонента ассоциированной вакцины для профилактики инфекций, обусловленных Pseudomonas aeruginosa.
Цель изобретения повышение выхода целевого продукта.
Изобретение заключается в том, что многоциклическое культивирование проводят в ферментере на синтетической питательной среде в условиях аэрации с добавлением в питательную среду 0,2% глюкозы только в первом цикле культивирования. Во всех последующих циклах культивирования в питательную среду добавляют пируват натрия в количестве 0,05-0,1 г/л.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
П р и м е р 1. Способ получения экзотоксина А синегнойной палочки осуществляют следующим образом.
Агаровую культуру второго пассажа засевают в ферментер до концентрации 1,5-2,0х109 кл/мл в питательную среду следующего состава: 0,3% КН2РО4; 0,2% NH4PO4; 0,3% цитрата натрия; 0,4% цитрата аммония; 0,0001% FeSO4x7H,O; 0,3% глутаминовой кислоты, 0,005% MgSO4x7H2O; 1% молочной кислоты; 0,001% лактата кальция; 7,5% диализата дрожжей, 0,2% глюкозы. Подращивание культуры проводят 3-4 ч при 32оС и аэрации, обеспечивающей 70-90%-ную концентрацию растворенного кислорода (перемешивание 500 об/мин, воздух 14,7 л/мин), когда содержание микробных клеток составляет 10-12х109 мл, начинают первый цикл процесса культивирования путем добавления питательной среды того же состава до исходной концентрации микробных клеток 1,5-2,0х109. Первые три часа культивирование проводят при том же режиме, что и подращивание, после чего концентрацию растворенного кислорода поддерживают на уровне 20-30%
Продолжительность первого цикла составляет 6-8 ч, активность экзотоксина А 100 LD50.
Продолжительность первого цикла составляет 6-8 ч, активность экзотоксина А 100 LD50.
По окончании первого цикла производят слив половины объема культуральной жидкости и доливают до исходного уровня свежую питательную среду того же состава, но содержащую в качестве источника углерода вместо глюкозы пируват натрия в концентрации 0,05-0,1 г/л. Процесс осуществляют в условиях аэрации на уровне 20-30%-ной концентрации растворенного кислорода и перемешивании. "Отъем-долив" производят через каждые 2 ч до получения необходимого количества токсиносодержащей культуральной жидкости. В этих условиях накопление экзотоксина происходит на стадии замедления скорости роста (μ- 3-5 1/ч), а активность его достигает 800 LD50.
В процессе культивирования определяют:
1. Концентрацию микробных клеток по отраслевому оптическому стандарту на 10 ЕД.
1. Концентрацию микробных клеток по отраслевому оптическому стандарту на 10 ЕД.
2. Удельную скорость роста (μ) вычисляют по формуле
μ (Перт С.Д. 1978 г.)
3. Активность токсина оценивают в биологической пробе на белых беспородных мышах массой 18-20 г путем внутрибрюшинного введения 1 мл ряда серийных разведений осветленной культуральной жидкости и в реакции преципитации в агаре с антитоксической моноспецифической сывороткой по Оухтерлони.
μ (Перт С.Д. 1978 г.)
3. Активность токсина оценивают в биологической пробе на белых беспородных мышах массой 18-20 г путем внутрибрюшинного введения 1 мл ряда серийных разведений осветленной культуральной жидкости и в реакции преципитации в агаре с антитоксической моноспецифической сывороткой по Оухтерлони.
4. Среднюю летальную дозу токсина (LD50) рассчитывают по методу Кербера в модификации Ашмарина И.П.
П р и м е р 2. Осуществляют способ культивирования Р.aeruginosa штамма РА-7 в соответствии с примером 1, при этом, начиная со второго и во всех последующих циклах многоциклического процесса, добавляют питательную среду, содержащую вместо глюкозы пируват натрия в количестве 0,01 г/л.
Результаты изучения свойств культуральной жидкости представлены в табл. 1.
Результаты осуществления культивирования P. aeruginosa штамма РА-7 по способу-прототипу представлены в табл.2.
П р и м е р 3. Осуществляют способ культивирования P.aeruginosa штамма РА-7 в соответствии с примером 1, начиная со второго и во всех последующих циклах многоциклического процесса, добавляют питательную среду, содержащую вместо глюкозы пируват натрия в количестве 0,05 г/л.
Результаты изучения свойств культуральной жидкости представлены в табл. 3.
П р и м е р 4. Осуществляют способ культивирования P.aeruginosa штамма РА-7 в соответствии с примером 1, начиная с второго и во всех последующих циклах многоциклического процесса, добавляют питательную среду, содержащую вместо глюкозы пируват натрия в количестве 0,075 г/л.
Результаты изучения свойств культуральной жидкости представлены в табл. 4.
П р и м е р 5. Осуществляют способ культивирования P.aeruginosa штамма РА-7 в соответствии с примером 1, но начиная со второго и во всех последующих циклах многоциклического процесса, добавляют питательную среду, содержащую вместо глюкозы пируват натрия в количестве 0,1 г/л.
Результаты изучения свойств культуральной жидкости представлены в табл. 5.
П р и м е р 6. Осуществляют способ культивирования P.aeruginosa штамма РА-7 в соответствии с примером 1, но начиная со второго и во всех последующих циклах многоциклического процесса, добавляют питательную среду, содержащую вместо глюкозы пируват натрия в количестве 0,15 г/л.
Результаты изучения свойств культуральной жидкости представлены в табл. 6.
Результаты таблиц NN 1-6 свидетельствуют о том, что добавление в питательную среду пирувата натрия в количестве 0,05-0,1 г/л увеличивает содержание экзотоксина А в культуральной жидкости и уменьшает количество микробных клеток. Уменьшение количества пирувата натрия ниже этого уровня не оказывает положительного влияния на содержание токсина в культуральной жидкости. Увеличение содержания пирувата натрия выше этого уровня приводит к ингибированию роста и размножения клеток, вымыванию их в процессе культивирования и полному исчезновению токсина из культуральной жидкости.
Оптимальной дозой содержания пирувата натрия в среде следует считать его концентрацию 0,075 г/л. Такое содержание пирувата натрия в среде обеспечивает максимальное содержание токсина в культуральной жидкости.
П р и м е р 7. Предлагаемый способ получения экзотоксина А Р.aeruginosa сравнивали со способом-прототипом путем изучения биологических свойств культуральной жидкости. Результаты представлены в табл.7.
Таким образом, предлагаемый способ получения экзотоксина А синегнойной палочки повышает выход целевого продукта по сравнению с прототипом в 33 раза по удельной активности токсина в культуральной жидкости.
Claims (1)
- СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКЗОТОКСИНА А ИЗ PSEUDOMONAS AERUGINOSA, включающий полициклическое культивирование штамма РА-7 в жидкой питательной среде с добавлением стимулятора токсинообразования глюкозы на первом цикле, в условиях аэрации и перемешивания, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, на втором и последующем циклах культивирования в качестве стимулятора токсинообразования используют пируват натрия в количестве 0,05 - 0,1 г/л.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4620050 RU1587723C (ru) | 1988-12-13 | 1988-12-13 | Способ получения экзотоксина а из pseudomonas aeruginosa |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4620050 RU1587723C (ru) | 1988-12-13 | 1988-12-13 | Способ получения экзотоксина а из pseudomonas aeruginosa |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU1587723C true RU1587723C (ru) | 1995-05-20 |
Family
ID=30441166
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4620050 RU1587723C (ru) | 1988-12-13 | 1988-12-13 | Способ получения экзотоксина а из pseudomonas aeruginosa |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU1587723C (ru) |
-
1988
- 1988-12-13 RU SU4620050 patent/RU1587723C/ru active
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N 1410527, кл. C 12P 1/04, 1988. * |
Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медицина, 1962. * |
Перт С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1978, с.326. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2433170C1 (ru) | Питательная среда жидкая для культивирования чумного микроба вакцинного штамма ев | |
Leviton et al. | Microbiological synthesis of vitamin B12 by propionic acid bacteria | |
RU1587723C (ru) | Способ получения экзотоксина а из pseudomonas aeruginosa | |
CA1037398A (en) | Production of microorganisms by mixed culture on methane substate | |
JPS59227294A (ja) | シユ−ドモナス属微生物及びその使用方法 | |
US3956337A (en) | Process for the preparation of D-gluconic-δ-lactam | |
Quastel | On the Fermentation of the Unsaturated Dicarboxylic Acids. Part I. Fumaric Acid | |
US2230130A (en) | Method of obtaining microbian enzymes | |
SU904325A1 (ru) | Способ получени L-треонина | |
RU1410527C (ru) | Способ получения экзотоксина а синегнойной палочки | |
Mustafayeva | Brief Historical summary of the causant of listeriosis and its properties | |
SU671738A3 (ru) | Способ получени биомассы микроорганизмов | |
US3282795A (en) | Production of 2-ketogluconic acid by serratia marcescens | |
JPS5944036B2 (ja) | 微生物培養方法 | |
RU2745504C1 (ru) | Питательная среда жидкая для выращивания и сброса биомассы вакционного штамма чумного микроба yersinia pestis ev | |
SU526657A1 (ru) | Питательна среда дл выращивани пекарских дрожжей | |
RU2193061C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микобактерий туберкулеза (мбт-бульон) | |
RU2076903C1 (ru) | Жидкая питательная среда для культивирования бактерий haemophilus pleuropneumoniae | |
RU2031938C1 (ru) | Штамм бактерий yersinia pestis - продуцент фракции i чумного микроба | |
SU497837A1 (ru) | Способ получени внеклеточной неспецифической кислой рибонуклеазы | |
RU2080378C1 (ru) | Питательная среда для накопления фi-антигена jersinia pestis глубинным способом | |
RU2311199C1 (ru) | Вакцина против пастереллеза животных | |
RU1792615C (ru) | Способ культивировани продуцента бета-экзотоксина | |
SU1730143A1 (ru) | Питательна среда дл культивировани FRaNcISeLLa тULаRеN SIS | |
RU2209243C1 (ru) | Штамм candida albicans № 253, используемый для получения антигена |