RO128192B1 - Produs fitoterapeutic antimicrobian şi procedeu de obţinere a acestuia - Google Patents

Description

Invenția se referă la un produs fitoterapeutic antimicrobian, și la procedeul de obținere a acestuia, cu utilizare farmaceutică.

Este cunoscut că părțile aeriene ale speciei Thymus vulgaris L. (Thymi herba) au acțiune antiinfecțioasă, respectiv, acțiune antiseptică și antifungică, prin constituenții fenolici ai uleiului volatil și ai taninului. Uleiul volatil, care conține în principal timol și carvacrol, geraniol, linalol, p-cimen, precum și alte hidrocarburi monoterpenice, alcooli monoterpenici și esteri, demonstrează activitate antimicrobiană față de un spectru larg de bacterii, acțiune antifungică datorată, în special, timolului, antivirală, paraziticidă, antispastică, anestezică locală etc.

Este cunoscut că uleiul din frunzele speciei Salvia officinalis L. (Salviae folium), conținând hidrocarburi mono- și sesquiterpenice, alcooli diterpenici, fenoli, oxizi, aldehide și cetone, esteri derivați ai acidului abietic, cumarine, eteri, trans-lactone, demonstrează acțiune mucolitică, lipolitică, reglatoare a circulației sanguine, colagog-coleretică, antibacterianăfață de Staphylococcus aureus și streptococul β-hemolitic grupa A, și moderată față de Klebsiella sp., Pseudomonas sp., Escherichia coli, activitate antifungică față de Candida albicans, antivirală, cicatrizantă (V. Istudor - Farmacognozie, fitochimie, fitoterapie, voi. 2, Ed. Medicală, București, 2001).

Este cunoscut, de asemenea, că uleiul volatil din somitățile florale provenite de la specia Achillea millefolium L. (Millefolii flores), conținând hidrocarburi mono- și sequiterpenice și oxizi terpenici, demonstrează activitate stomahică, astringentă, antiinflamatoare, calmantă, ușor antiseptică și tonic amară (D. Gr. Constantinescu, E. Hatieganu, F. Busuricu - Plante medicinale utilizate in terapeutică - Ed. Medicală, București, 2004).

R0122182 descrie un produsfitoterapeuticantimicrobian, care conține4,927...6,022% substanță uscată, 0,051...0,062% flavone exprimate în rutozidși 12,746...15,579% alcool sub formă de soluție orală, de culoare brună, cu densitatea d₂₀ ²⁰ 0,950...1,009 și pH 5,35...5,55, și procedeul de obținere a acestuia, care constă în aceea că se extrag principiile active din materialul vegetal uscat și măcinat din Mori radix, cu solvent hidroalcoolic 70% v/v, raport material vegetal/solvent 1/15 m/v, la temperatura de fierbere a amestecului, cu refluxarea solventului, timp de 2 h, cu agitare, după care soluția extractivă se concentrează la un raport material vegetal/soluție concentrată 1/2 m/v, apoi se lasă în repaus timp de 48 h, la temperatura de 6...8°C, substanțele insolubile se îndepărtează prin filtrare, și volumul se completează cu alcool etilic de 20% v/v, la un raport material vegetal/produs fitoterapeutic 1/2m/v.

RO 120529 B1 se referă la o compoziție antioxidantă, pe bază de extracte naturale, pentru tratarea psoriazisului, ce constă în aceea că va cuprinde flavonoide, terpenoide, alantoină și derivați antracenici, extrase la o temperatură cuprinsă în intervalul 3O...6O°C, din plantele: Arctium lappa, Rumex acetosa, Urtica dioica, Viola tricolor, Calendula officinalis, Alchillea millefolium, Equisetum arvense, Chelidonium majus, Salvia officinalis, Hypericum perforatum, Chamomillae flos, Borago officinalis, Cynara scolymus, semințe de strugure negru, Gallium molluga, Aristolochia clematitis, Symphytum officinalis, Roșa centifolia, astfel alese, încât raportul dintre antioxidant/ antifungic/cicatrizant/antihepatic/diuretic/limfatic/antiinflamator/relaxant nervos să fie: 0...3 : 0...3 : 0...3 : 0...1 : 0...1 : 0...1 : 0...3.

RO 122125 B1 descrie un produs fitoterapeutic utilizat în tratamentul afecțiunilor cutaneo-mucoase, și procedeul de preparare a acestuia. Produsul fitoterapeutic sub formă de emulsie de culoare brună, utilizatîn afecțiunile cutaneo-mucoase, constă în aceea că este constituit din 50 părți produs bioactiv, obținut prin prelucrarea soluțiilor extractive din speciile Melissa officinalis, Origanum vulgare, Lycnis coronaria, 1 parte ulei volatil din specia Thymus vulgaris, 4 părți emulgatori și 45 părți apă deionizată, părțile fiind exprimate în greutate, cu

Ro 128192 Β1 un conținut de 0,55...0,10% flavone exprimate în rutozid, și 0,55...0,95% orfo-dihidroxifenoli 1 exprimați în acid cafeic, și la un procedeu de preparare a produsului fitoterapeutic, ce constă în aceea că se omogenizează 50 părți produs bioactiv, rezultat din extracția succesivă a 3 principiilor active din 30 părți Melissae herba, 35 părți Origani herba și 35 părți de Lychnis herba, cu alcool etilic 30%, raport 1/5...1/20 g material vegetal/ml solvent, la temperatura de 5 reflux, timp de 30...120 min, cu agitare, se îndepărtează deșeul de plantă prin filtrare, și se omogenizează soluțiile extractive obținute, se concentrează soluția până la un conținut de 7 0,25...0,50% flavone exprimate în rutozid, și 1,50...2,80% orfo-dihidroxifenoli exprimați în acid cafeic, se purifică soluția extractivă prin adăugare de alcool etilic până la o concentrație 9 de 30%, se îndepărtează substanțele insolubile prin filtrare la presiune redusă, și se completează volumul la 1/2 g plantă/ml produs activ, 1 parte ulei volatil din Thymus herba, 4 părți 11 emulgatori și 45 părți apă deionizată, părțile fiind exprimate în greutate.

RO 125699 B1 prezintă un produs antioxidant de natură vegetală și procedeul de 13 obținere. Produsul constă în aceea că este constituit dintr-un complex de compuși polifenolici cu conținut de 25.. .30% flavonoide exprimate în rutozidă, și 25.. .30% acizi polifenolcarboxilici 15 exprimați în acid cafeic, izolați din amestecul de Crataegi sp. flores et folium, Salviae sp. herba și Cichorii herba, în raport de 1 : 1 : 1 m/m/m, cu 82...160% indice de protecție. 17 Procedeul de obținere constă în aceea că se supune extracției materialul vegetal constituit dintr-un amestec alcătuit din Crataegi sp. flores et folium, Salviae sp. herba și Cichorii herba, 19 în raport de 1 : 1 : 1 m/m/m, timp de 3 h, iar soluția extractivă se separă, se concentrează sub presiune redusă, până la un volum corespunzător unui raport 1 :1 v/m față de materialul 21 vegetal, după care se diluează soluția metanolică, concentrată, cu un volum egal de apă, se elimină alcoolul metilic prin distilare sub presiune redusă, se menține soluția apoasă 23 concentrată la temperatura de 5...10°C, timp de 24 h, apoi se separă reziduul clorofilian, se spală soluția apoasă prin agitare cu solvenți nepolari: clorură de metilen, cloroform, în raport 25 de 1 : 1 v/v, de 3 ori succesiv, iar extractele organice reunite se concentrează sub presiune redusă până la reziduu, sau se atomizează. 27

Problema tehnică obiectivă, pe care urmărește să o rezolve invenția, constă în realizarea unui produs fitoterapeutic cu utilizare în terapia infecților microbiene. 29

Soluția tehnică la această problemă constă în aceea că se asociază într-o compoziție următoarele componente: uleiul volatil din Thymi herba, Salviae folium și Millefolii flores. 31 Produsul fitoterapeutic antimicrobian, conform invenției, conține ulei volatil din plantele Thymi herba, Salviae folium și Millefolii flores având: timol, linalol, tuionă, limonen, 33

3,906...5,858% acizi polifenolcarboxilici exprimați în acid rosmarinic și 2,265...3,397% flavone exprimate în rutozid, identificate gaz-cromatografic, iar procedeul de obținere, 35 conform invenției, constă în aceea că se antrenează uleiul volatil din Thymi herba, Salviae folium și Millefolii flores cu vapori de apă în circuit închis, raport plantă/ solvent = 1/10 m/v 37 la temperatura de fierbere, timp de 2..5 h, cu agitare, se prelucrează extractul apos din Thymiherba rămas după antrenarea uleiului volatil prin concentrare, repaus la 4...6°C, timp 39 de 24 h, și atomizare, urmată de înglobarea în 100 părți în greutate extract atomizat a câte 2 părți în volum ulei volatil din fiecare specie, omogenizarea, pulverizarea și cernerea 41 produsului.

Produsul fitoterapeutic și procedeul de obținere prezintă următoarele avantaje: 43

- se diversifică gama de produse cu utilizare în terapia infecțiilor microbiene cu un produs natural, de origine vegetală, în cazul bacteriilor rezistente la tratamentul clasic; 45

- produsul are o toxicitate redusă;

- tehnologia are un număr redus de faze; 47

- tehnologia este nepoluantă, nu rezultă deșeuri toxice sau ape reziduale.

Ro 128192 Β1

Se prezintă în continuare un exemplu de realizare a invenției.

Exemplul 1. Materialul vegetal utilizat constă în părțile aeriene ale speciei Thymus vulgaris (Thymi herba), uscate și măcinate prin sita III, frunzele speciei Salvia officinalis (Salviae folium), uscate și măcinate prin sita III, și somitățile florale ale speciei Achillea millefolium (Millefolii fiores), uscate și măcinate prin sita III.

Fazele tehnologice parcurse pentru obținerea a 1 kg produs fitoterapeutic sunt următoarele:

Obținerea uleiului volatil din Thymi herba într-un vas de inox de capacitate 250 I, prevăzut cu manta de încălzire, refrigerent de sticlă, sistem de colectare a uleiului volatil în circuit închis, din sticlă, sistem de agitare și ștuț de evacuare, se introduc 12 kg material vegetal, constând din părțile aeriene ale speciei Thymus vulgaris, și 120 I apă distilată (raport plantă/solvent =1/10 m/v), și se încălzește amestecul la fierbere timp de 2 h, cu agitare continuă. După răcirea vaporilor de apă, la trecerea prin refrigerent, se obține uleiul volatil în sistemul de colectare, iar apa se recirculă. Rezultă 48 ml ulei volatil de culoare galbenă, cu miros caracteristic, gust iute-arzător, insolubil în apă/solubil în alcool etilic.

La analiza gaz-cromatografică se observă că uleiul volatil conține în special timol, p-cimen, linalol, carvacrol.

Obținerea uleiului volatil din Salviae folium într-un vas de inox de capacitate 250 I, prevăzut cu manta de încălzire, refrigerent de sticlă, sistem de colectare a uleiului volatil în circuit închis, din sticlă, sistem de agitare și ștuț de evacuare, se introduc 2,5 kg material vegetal, constând din frunzele speciei Salvia officinalis, și 25 I apă distilată (raport plantă/solvent = 1/10 m/v), și se încălzește amestecul la fierbere timp de 5 h, cu agitare continuă. După răcirea vaporilor de apă, la trecerea prin refrigerent, se obține uleiul volatil în sistemul de colectare, iar apa se recirculă. Rezultă 21 ml ulei volatil de culoare slab gălbuie, cu miros caracteristic, gust arzător, insolubil în apă/solubil în alcool concentrat.

La analiza gaz-cromatografică se observă că uleiul volatil conține în special tuionă, camfor, cineol.

Obținerea uleiului volatil din Millefolii fiores într-un vas de inox de capacitate 250 I, prevăzut cu manta de încălzire, refrigerent de sticlă, sistem de colectare a uleiului volatil în circuit închis, din sticlă, sistem de agitare și ștuț de evacuare, se introduc 10 kg material vegetal, constând din inflorescențele speciei Achillea millefolium, și 100 I apă distilată (raport plantă/solvent= 1/10 m/v), și se încălzește amestecul la fierbere timp de 5 h, cu agitare continuă. După răcirea vaporilor de apă la trecerea prin refrigerent, se obține uleiul volatil în sistemul de colectare, iar apa se recirculă. Rezultă 21 ml ulei volatil de culoare albastră, cu miros aromat specific, gust amar, insolubil în apă/solubil în alcool concentrat.

La analiza gaz-cromatografică se observă că uleiul volatil conține în special azulene, cineol, tuină, borneol.

Obținerea extractului atomizat din Thymi herba

Soluția extractivă apoasă, obținută după antrenarea uleiului volatil în circuit închis, din 12 kg material vegetal, după îndepărtarea deșeului de plantă prin filtrare și presare (821), se concentrează la 181 (raport plantă/extract concentrat = 1/1,5 m/v), și soluția concentrată se lasăîn repaus la temperatura de 4. ,.6°C, timp de 24 h, după care se centrifughează. Soluția concentrată limpede se introduce, cu ajutorul unei pompe peristaltice, în echicurent cu aer uscat prin răcire, cu ajutorul unui dezumidificator, într-un atomizor cu încălzire electrică. Se programează temperatura de intrare 130°C și temperatura de ieșire la aproximativ 60°C.

Ro 128192 Β1

Produsul atomizat se colectează în vas cu ajutorul unui ciclon sub formă de pulbere fină. Se 1 obțin 1040 g extract atomizat de culoare brună, cu miros caracteristic și gust amar aromat. Extractul atomizat conține 7,16% acizi polifenolcarboxilici exprimați în acid rosmarinic, și 3 3,257% flavone exprimate în rutozid.

Obținerea produsului fitoterapeutic 5 într-un vas de porțelan, de capacitate 51, se omogenizează 1040 g extract atomizat din Thymi herba cu 20,8 ml ulei volatil din Thymi herba, 20,8 ml ulei volatil din Salviae folium 1 și 20,8 ml ulei volatil din Millefolii flores. După omogenizare, produsul este pulverizat și cernut prin sita VIII. Se obțin 1,010 kg produs sub formă de pulbere fină, de culoare brună, 9 care este condiționat sub formă de capsule de 250 mg. Se obțin 4000 de capsule de uz oral.

Produsul conține timol, linalol, cineol, tuionă, limonen identificați gaz-cromatografic, 11 și 4,882% acizi polifenolcarboxilici exprimați în acid rosmarinic, și 2,831% flavone exprimate în rutozid. 13 în continuare este descrisă pe larg invenția.

Produsul fitoterapeutic, conform invenției, este constituit din 2 părți în volum ulei 15 volatil obținut din Thymi herba, 2 părți în volum ulei volatil din Salviae folium și 2 părți în volum ulei volatil din Millefolii flores, înglobate în 100 părți în greutate extract atomizat, 17 obținut prin prelucrarea soluției extractive apoase din Thymi herba, și se prezintă sub formă de pulbere omogenă, conținând timol, linalol, cineol, tuiona, limonen, 4,882% acizi 19 polifenolcarboxilici exprimați în acid rosmarinic, și 2,821% flavone exprimate în rutozid.

Procedeul de obținere a produsului fitoterapeutic, conform invenției, constă din 21 extracția uleiurilor volatile din Thymi herba, Salviae folium și Millefolii flores, prin antrenare cu vapori de apă în circuit închis, raport plantă/solvent= 1/10m/v, la temperatura de fierbere 23 a amestecului, timp de 2...5 h, colectarea uleiului volatil, îndepărtarea deșeului de plantă prin filtrare și presare, prelucrarea soluției extractive apoase din Thymi herba prin concentrare 25 la un volum de 1,5/1 v/m față de cantitatea de material vegetal, centrifugare pentru îndepărtarea substanțelor insolubile, atomizarea soluției concentrate și înglobarea a câte 2 27 părți în greutate ulei volatil din fiecare specie în extract atomizat.

TESTĂRI FARMACOLOGICE 29

Componenții uleiului volatil demonstrează activitate antimicrobiană, astfel:

- timolul manifestă activitate asupra bacteriilor Gram-pozitive și Gram-negative, ca 31 Escherichia coli, Streptococcus pneumoniae și Streptococcus pyogenes, dar și asupra drojdiilor de tipul Candida (interferează cu formarea și viabilitatea hifelor, inducând alterări 33 morfologice ale membranei). De asemenea, inhibă creșterea miceliilor de Aspergillus flavus și A. niger, și producerea de micotoxine în cazul Aspergillus flavus, A. parasiticus, A. 35 ochraceus și Fusarium moniliforme-,

- cineolul este frecvent activ pe Staphylococcus aureus. 37

La testarea activității antimicrobiene s-a demonstrat că produsul manifestă activitate față de tulpini bacteriene-test Gram-negative (Escherichia coli ATCC 8739 și Pseudomonas 39 aerag/nosa ATCC 9027), Gram-pozitive (Staphylococcus aureus ATCC 25923), levuri (Candida albicans ATCC 10231) și fungi (Aspergillus niger ATCC 16404) la concentrații cuprinse în 41 intervalul 1...5 mg/ml (0,1...0,5%). Tulpinile testate dețin un potențial patogen ridicat. Astfel, bacteria E.coli poate produce infecții digestive sau ale tractului urinar; infecțiile cu Pseudomonas 43 aeruginosa sunt o cauză frecventă de morbiditate și mortalitate a pacienților spitalizați, iar tratamentul a devenit complicat din cauza rezistenței (intrinsenci și dobândite) acestei bacterii 45 și, de aceea, foarte multe aspecte ale tratamentului rămân controversate; Staphylococcus aureus poate produce infecții supurative sau chiar septicemii la om și animale, patogenitatea 47 fiind exercitată atât de structura sa, cât și de enzimele produse; Candida albicans poate

Ro 128192 Β1 determina atât infecții ale mucoaselor, cât și sistemice, în special la persoanele imunocompromise, la care evoluția devine severă; Aspergillus niger produce în special otomicoze sau 3 infecții pulmonare.

La testarea toxicității produsului conform invenției, în experiment acut, prin administrarea orală de 500...7500 mg/kgc la șoarece, nu au fost induse fenomene toxice sau letalitate.

Doza de 7500 mg/kgc la șoarece este corespunzătoare dozei 5000 mg/kgc la șobolan - doză minimă de încadrare în categoria substanțelor practic netoxice.

Claims (2)

1. Revendicări 1

   1. Produs fitoterapeutic antimicrobian, sub formă de pulbere fină, de culoare 3 galben-brun, cu gust amar aromat și miros caracteristic, caracterizat prin aceea că va conține ulei volatil din plantele Thymi herba, Salviae folium și Millefolii flores având: timol, 5 linalol, tuionă, limonen, 3,906...5,858% acizi polifenolcarboxilici exprimați în acid rosmarinic, și 2,265...3,397% flavone exprimate în rutozid, identificate gaz-cromatografic. 7
2. 2. Procedeu de obținere a produsului fitoterapeutic definit în revendicarea 1, caracterizat prin aceea că se antrenează uleiul volatil din Thymi herba, Salviae folium și 9 Millefolii flores cu vapori de apă în circuit închis, raport plantă/solvent = 1/10 m/ν, la temperatura de fierbere, timp de 2..5 h, cu agitare, se prelucrează extractul apos din Thymi 11 herba rămas după antrenarea uleiului volatil prin concentrare, repaus la4...6°C, timp de 24 h și atomizare, urmată de înglobarea, în 100 părți în greutate extract atomizat, a câte 2 părți 13 în volum ulei volatil din fiecare specie, omogenizarea, pulverizarea și cernerea produsului.