RO126409B1 - Mediu de cultură pentru diferenţierea ciupercilor fitopatogene toxigene din genul fusarium - Google Patents
Mediu de cultură pentru diferenţierea ciupercilor fitopatogene toxigene din genul fusarium Download PDFInfo
- Publication number
- RO126409B1 RO126409B1 ROA200901074A RO200901074A RO126409B1 RO 126409 B1 RO126409 B1 RO 126409B1 RO A200901074 A ROA200901074 A RO A200901074A RO 200901074 A RO200901074 A RO 200901074A RO 126409 B1 RO126409 B1 RO 126409B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- parts
- differentiation
- fusarium
- culture medium
- fungi
- Prior art date
Links
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 title claims abstract description 24
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 22
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims abstract description 17
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 7
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 title claims description 10
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims abstract description 7
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 claims abstract description 4
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims abstract description 3
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 231100000033 toxigenic Toxicity 0.000 claims description 12
- 230000001551 toxigenic effect Effects 0.000 claims description 12
- LKPLKUMXSAEKID-UHFFFAOYSA-N pentachloronitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl LKPLKUMXSAEKID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 claims description 6
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 claims description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 claims description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 claims description 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 6
- 239000010462 extra virgin olive oil Substances 0.000 abstract description 3
- 235000021010 extra-virgin olive oil Nutrition 0.000 abstract description 3
- QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N 0.000 abstract description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 abstract 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- CEOCDNVZRAIOQZ-UHFFFAOYSA-N pentachlorobenzene Chemical compound ClC1=CC(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl CEOCDNVZRAIOQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 abstract 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 abstract 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 241000223195 Fusarium graminearum Species 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940043267 rhodamine b Drugs 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710158368 Extracellular lipase Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 2
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 2
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 101710128940 Triacylglycerol lipase Proteins 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 2
- ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N iprodione Chemical compound O=C1N(C(=O)NC(C)C)CC(=O)N1C1=CC(Cl)=CC(Cl)=C1 ONUFESLQCSAYKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 description 2
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 2
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 description 1
- KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N Chlorine Chemical compound ClCl KZBUYRJDOAKODT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 1
- 239000005867 Iprodione Substances 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241001123663 Penicillium expansum Species 0.000 description 1
- 241000228453 Pyrenophora Species 0.000 description 1
- 241000221696 Sclerotinia sclerotiorum Species 0.000 description 1
- 241000332749 Setosphaeria turcica Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241001415849 Strigiformes Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229940086745 ampicillin 100 mg/ml Drugs 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N benomyl Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)NCCCC)C(NC(=O)OC)=NC2=C1 RIOXQFHNBCKOKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N benzoxaprofen Natural products N=1C2=CC(C(C(O)=O)C)=CC=C2OC=1C1=CC=C(Cl)C=C1 MITFXPHMIHQXPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000006787 czapek-dox agar Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229940004812 dicloran Drugs 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940002712 malachite green oxalate Drugs 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 1
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Invenția se referă la un mediu de cultură, pentru diferențierea ciupercilorfitopatogene, toxigene, din genul Fusarium, destinat estimării riscului de infecție a boabelor de grâu în curs de formare, cu ciuperci toxigene și de contaminare ulterioară cu micotoxine.
Sunt cunoscute o serie de medii și de metode prin care sunt determinate fitopatogenitatea și/sau toxigenitatea unor populații/izolate de ciuperci din genul Fusarium.
MD 3540 F1 descrie o metodă de identificare a fitopatogenității unor izolate de ciuperci din genul Fusarium. Metoda propusă implică cultivarea izolatelor de ciuperci toxigene pe mediu nutritiv Czapek și determinarea activității β-glucuronidazice în filtratele culturii de 5 zile. Se consideră ca fiind fitopatogene acele izolate la care activitatea βglucuronidazică este cuprinsă între 0,652 și 1,183 U/ml. Metoda descrisă nu oferă soluții pentru diferențierea și/sau izolarea rapidă a tulpinilor de ciuperci fitopatogene din genul Fusarium și, în special, a celor care sunt și toxigene.
TW 541337 B descrie un mediu selectiv pentru detectarea ciupercii patogene Fusarium oxysporum f. sp. Ulii, care este util pentru obținerea acesteia din sol sau pentru a o diferenția față de alte specii de Fusarium. Este constituit din mediul de bază Komada, pentacloronitrobenzen, oxgall, Na2B4O7-10H2O, sulfat de streptomicină și benomyl.
Schmale și colab. (2006, Genetic structura ofatmosphericpopulations of Gibberella zeae, PhytopathologyQQ, 1021-1026), descriu un mediu pentru diferențierea și identificarea rapidă a sporilor atmosferici de Fusarium graminearum/Gibberella zeae, depuși gravimetric pe suprafața plăcilor Petri deschise și expuse peste noapte. Această soluție tehnică permite izolarea rapidă a ciupercilor din genul Fusarium, dar nu permite diferențierea celor fitopatogene și/sau toxigene.
Problema tehnică pe care o rezolvă invenția este de a realiza o compoziție de mediu prin care să se realizeze izolarea și diferențierea rapidă a ciupercilor fitopatogene, toxigene, din genul Fusarium.
Mediul de cultură pentru diferențierea ciupercilor fitopatogene, toxigene, din genul Fusarium, conform invenției, este alcătuit din: 32...34 părți ulei de măsline extravirgin, 0,095...1,05 părți fosfat monopotasic KH2PO4; 0,095...1,05 părți azotat de potasiu KNO3; 0,095...1,05 părți sulfat de streptomicină; 0,740...0,760 părți pentacloronitrobenzen; 0,47...0,52 părți MgSO4.7H2O; 0,47...0,52 părți clorură de potasiu KCI; 0,340...0,360 părți sulfat de neomicină; 0,240 ...0,270 părți polietilenglicol sorbitan monooleat; 0,019...0,021 părți Rodamină B, 19...21 părți agar și până la 1000 părți apă, părțile fiind exprimate în greutate.
Mediul realizat conform invenției prezintă următoarele avantaje:
- selectivitate ridicată, datorită biocidelor incluse în mediu, streptomicină, neomicină, pentacloronitrobenzen, care limitează dezvoltarea bacteriilor și a ciupercilor microscopice care nu aparțin genului Fusarium-,
- capacitate ridicată de a diferenția fusariile producătoare de lipaze extracelulare, care sunt fitopatogene și toxigene, pentru că lipazele secretate reprezintă, pentru ciupercile din genul Fusarium, atât un factor de virulență, cât și un factor implicat în biosinteza micotoxinelor.
- realizarea testelor de diferențiere ușor, fără a fi necesară aparatură complexă, reactivi costisitori și/sau personal cu înaltă calificare;
- realizarea testelor de identificare a hazardului microbiologic care generează riscul de contaminare a alimentelor cu fusariotoxine.
Se dă, în continuare, un exemplu de realizare a invenției.
RO 126409 Β1
Exemplu. într-un flacon Erlenmayer de 500 ml, gradat, se introduc, pe rând, 0,1 g 1 KH2PO4, 0,1 g KNO3, 0,05 g MgSO4, 0,05 g KCI. Se adaugă 90 ml apă distilată. Se încălzește la fierbere, până la dizolvarea completă a tuturor ingredientelor și apoi se menține 3 pe baie de apă la 5O...55°C. Peste soluția menținută la 55°C, se adaugă 0,075 mg pentacloronitrobenzen. Se verificăpH-ul, care trebuie să fie de 7,0±0,1. Se corectează, dacă 5 este nevoie, cu soluții de KOH 1 N sau H2SO41 N. Se aduce volumul final la 100 ml, se astupă paharul Erlenmayer cu dop de vată, și apoi se autoclavează la 121°C, timp de 20 min. 7 Mediul autoclavat se răcește la 60°C, după care se adaugă 10 ml emulsie lipidică, sterilă, cu rodamină B. Se omogenizează în condiții aseptice, pe baie de apă termostatată la 60°C și 9 se menține apoi aproximativ 10 min, la 6O...62°C, pentru eliminarea spumei formate. Mediul se răcește apoi la circa 55°C și se adaugă câte 1 ml de soluții de antibiotice sterilizate prin 11 filtrare, respectiv, 1 ml soluție de sulfat de streptomicină 0,1 g /ml și 1 ml soluție de sulfat de neomicină 0,035 g/ml. 13
Prepararea emulsiei lipidice sterile se realizează după cum urmează: într-un Erlenmeyer de 250 ml, se aduc: 250 pi de Tween 80 (polietilenglicol sorbitan monooleat), 15 30 ml de ulei de măsline extravirgin și 50 ml de apă distilată. Se omogenizează emulsia la waring blender, se lasă să se disperseze spuma, se corectează pH -ui la 7,0, se acoperă cu 17 dop de vată fixat cu folie și apoi se sterilizează la 121°C, timp de 30 min. Se răcește la circa 60°C, se trece pe baie de apă termostatată la 6O...62°C și se adaugă 20 ml soluție de 19 rodamină B 1 mg/ml, sterilizată prin ultrafiltrare.
Selectivitatea mediului realizat conform invenției a fost analizată cu cea a mediilor de 21 mai jos.
Czapek-Dox-Iprodione-Dicloran Agar (CZID) (Abildgren et al., 1987), obținut din 23 Czapek Dox agar (Merck) 35 g; CuSO4-5H2O 0,005 g; ZnSO4-7H2O 0,001 g cloramfenicol 0,05 g; dicloran 0,002 g; apă până la 1000 ml. Mediul s-a autoclavat la 121°C, timp de 30 25 min. Când mediul s-a răcit la circa 55°C, s-a adăugat câte 1 ml din soluții sterile care conțineau: penicilină 50 mg/ml; sulfat de streptomicină 50 mg/ml; Rovral (iprodione)6 mg/ml; 27
Spezieller Nahrstoffarmer Agar (SNA) (Nirenberg, 1981); KH2PO4 1 g; KNO3 1 g; MgSO4-7H2O 0,5 g; KCI 0,5 g; glucoză 0,2 g; zaharoză 0,2 g; agar 20 g Malachit Green Agar 29 (MGA) (Castello et al., 1997); Peptonă 15 g; KH2PO4 1 g ; MgSO4-7H2O 0,5 g; Malachite Green sare oxalat,10 ml soluție 25 mg%, 2,5 mg; ampicilină 0,5 g. Mediul s-a autoclavat la 31 121°C, timp de 30 min. Când mediul s-a răcit la circa 55°C, s-au adăugat 2 ml dintr-o soluție stoc rifampicină, rezultată prin dizolvarea a 0,5 g în 100 ml 95% etanol. 33
Mediu Fusarium selectiv (FS) (Nash și Snyder, 1962) cu următoarea compoziție: bactopeptonă 15 g, mediu pulbere cartof glucoză agar (Difco) 39 g; KH2PO4 1 g; 35 MgSO4-7H2O 0,5 g, pentacloronitrobenzen 0,2 g, agar 15 g. Mediul s-a autoclavat la 121°C, timp de 30 min. Când mediul s-a răcit la circa 55°C, s-a adăugat câte 1 ml din soluții sterile 37 care conțineau: sulfat de streptomicină 300 mg/ml, ampicilină 100 mg/ml.
Mediu Fusarium selectiv modificat (FSM) (Schmale et al. 2006), cu următoarea 39 compoziție: 15 g bactopeptonă, KH2PO4 1 g; MgSO4-7H2O 0,5 g, pentacloronitrobenzen 0,750 g, agar 15 g. S-a răcit la 55°C, după care s-au adăugat câte 10 ml de soluții de 41 antibiotice sterilizate prin filtrare, 10 ml soluție de sulfat de streptomicină 0,1 g /ml și 10 ml soluție de sulfat de neomicină 0,035 g/ml. 43
RO 126409 Β1
Tabelul 1
Selectivitatea mediilor de cultură testate pentru fusariile toxigene
| Mediu | Aprecierea selectivității | ||||
| Fusarium/ Asperg. | Fusarium/ Drechslera | Fusarium/ Mucor | Fusarium/ Penicillium | Fusarium/ Rhisopus | |
| CZID | 5 | 5 | 3 | 5 | 4 |
| SNA | 4 | 4 | 5 | 3 | 5 |
| FS | 3 | 3 | 4 | 4 | 3 |
| FSM | 1 | 2 | 2 | 1 | 2 |
| cf. ex. | 2 | 1 | 1 | 2 | 2 |
Note pe o scara de la 1 la 5, prin compararea creșterii între diferitele specii de ciuperci microscopice pe fiecare dintre medii.
Selectivitatea mediilor a fost testată prin inocularea plăcilor Petri 67x15 mm cu amestecuri de suspensii de spori de Fusarium graminearum, în combinație cu Aspergillus flavus, Sclerotinia sclerotiorum, Drechslera turcica, Botrytis cinerea, Mucor mucede, Penicillium expansum. Mediul s-a incubat timp de 7 zile și a fost comparată creșterea diferitelor specii de ciuperci microscopice pe fiecare dintre medii. Notele acordate diferitelor medii testate, în cadrul acestei etape, în privința selectivității pentru ciupercile fitopatogene din grupul Fusarium graminearum, sunt prezentate în tabelul 1. Se remarcă faptul că selectivitatea mediilor FS, FSM, conform exemplului este apropiată. în toate cazurile, factorul major de selectivitate este pentacloronitrobenzen, un fungicid care este inactiv față de ciupercile microscopice din genul Fusarium. Mediul conform invenției mai este selectiv și prin compoziția sa minimală.
Capacitatea mediilor de a permite diferențierea rapidă a sporilor atmosferici de fusarii toxigene a fost testată prin expunerea în aer liber a mediilor comparate, fiecare dispus într-o serie de 5 plăci Petri deschise (90 mm în diametru; suprafața = 283 mm2). Plăcile au fost amplasate pe un suport în formă de T, la nivelul inflorescențelor de grâu și porumb (fig. 1, a, b), și lăsate peste noapte. Apoi s-au închis, s-au preluat din câmp în laborator și s-au incubat timp de 24 h, la 25°C și la întuneric. Numărul de colonii puse în evidență rapid, pentru diferitelor medii, sunt prezentate în tabelul 2.
Tabelul 2
Capacitatea mediilor de cultură testate pentru diferențierea rapidă a sporilor atmosferici, prelevați după expunere în aer liber
| Mediu | Număr total de colonii | Colonii identificate ca Fusarium |
| CZID | 128±20 | 44±4 |
| SNA | 108±24 | 42±8 |
| FS | 84±16 | 36±8 |
| FSM | 64±20 | 48±4 |
| MSF | 56±12 | 48±8 |
RO 126409 Β1
Datele prezentate în tabelele 1 și 2 demonstrează o selectivitate ridicată a mediului 1 MSF, realizat în cadrul acestei etape, în a izola specific din aer sporii de F. graminearum/Gibberella zeae. în plus, acest mediu are caracteristica de a izola exclusiv 3 ciuperci microscopice din genul Fusarium care produc o lipază extracelulară, deci care au un potențial toxigenic ridicat. Ciupercile care produc lipază se evidențiază printr-un halou 5 produs pe mediul (care este opalescent și ușor rozaliu, datorită complexului ulei de măsline rodamină B). Acest halou este fluorescent la iluminare cu lumina ultravioletă. 7
Claims (5)
1 Revendicare
3 Mediu de cultură pentru diferențierea ciupercilor fitopatogene, toxigene, din genul
Fusarium, caracterizat prin aceea că este alcătuit din: 32...34 părți ulei de măsline
5 extravirgin, 0,095...1,05 părți fosfat monopotasic KH2PO4; 0,095...1,05 părți azotat de potasiu KNO3; 0,095...1,05 părți sulfat de streptomicină; 0,740...0,760 părți pentacloronitrobenzen;
7 0,47...0,52 părți MgSO4.7H2O; 0,47...0,52 părți clorură de potasiu KCI; 0,340...0,360 părți sulfat de neomicină; 0,240 ...0,270 părți polietilen glicol sorbitan monooleat; 0,019... 0,021
9 părți Rodamină B, 19...21 părți agar și până la 1000 de părți apă, părțile fiind exprimate în greutate.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA200901074A RO126409B1 (ro) | 2009-12-22 | 2009-12-22 | Mediu de cultură pentru diferenţierea ciupercilor fitopatogene toxigene din genul fusarium |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ROA200901074A RO126409B1 (ro) | 2009-12-22 | 2009-12-22 | Mediu de cultură pentru diferenţierea ciupercilor fitopatogene toxigene din genul fusarium |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO126409A2 RO126409A2 (ro) | 2011-06-30 |
| RO126409B1 true RO126409B1 (ro) | 2012-12-28 |
Family
ID=44502369
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ROA200901074A RO126409B1 (ro) | 2009-12-22 | 2009-12-22 | Mediu de cultură pentru diferenţierea ciupercilor fitopatogene toxigene din genul fusarium |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RO (1) | RO126409B1 (ro) |
-
2009
- 2009-12-22 RO ROA200901074A patent/RO126409B1/ro unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RO126409A2 (ro) | 2011-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Pritsch et al. | A rapid and highly sensitive method for measuring enzyme activities in single mycorrhizal tips using 4-methylumbelliferone-labelled fluorogenic substrates in a microplate system | |
| Weaver et al. | Potential for preventing spread of fungi in air‐conditioning systems constructed using copper instead of aluminium | |
| Pitt et al. | Methods for isolation, enumeration and identification | |
| Thrane et al. | Vital fluorescent stains for detection of stress in Pythium ultimum and Rhizoctonia solani challenged with viscosinamide from Pseudomonas fluorescens DR54 | |
| Kemp et al. | Survival and growth of micro-organisms on air filtration media during initial loading | |
| Zhang et al. | The autophagy gene BbATG5, involved in the formation of the autophagosome, contributes to cell differentiation and growth but is dispensable for pathogenesis in the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana | |
| Vyzantiadis et al. | From the patient to the clinical mycology laboratory: how can we optimise microscopy and culture methods for mould identification? | |
| Afonso et al. | In vitro assessment of inter-kingdom biofilm formation by bacteria and filamentous fungi isolated from a drinking water distribution system | |
| Gomoiu et al. | Fungal spores viability on the International Space Station | |
| Devi et al. | Screening of suitable culture media for growth, cultural and morphological characters of Pycnidia forming fungi | |
| Louw et al. | Postharvest decay of nectarine and plum caused by Penicillium spp. | |
| Tomičić et al. | Probiotic yeast Saccharomyces boulardii (nom. nud.) modulates adhesive properties of Candida glabrata | |
| Ashour et al. | Microbiological environmental monitoring in pharmaceutical facility | |
| Mello et al. | Conidial germination in Scedosporium apiospermum, S. aurantiacum, S. minutisporum and Lomentospora prolificans: influence of growth conditions and antifungal susceptibility profiles | |
| Kneipp et al. | Surface phosphatase in Rhinocladiella aquaspersa: biochemical properties and its involvement with adhesion | |
| Punithavathy et al. | Antifungal susceptibility testing of Candida tropicalis biofilms against fluconazole using calorimetric indicator resazurin | |
| RO126409B1 (ro) | Mediu de cultură pentru diferenţierea ciupercilor fitopatogene toxigene din genul fusarium | |
| Ramírez-Granillo et al. | Microbial warfare on three fronts: mixed biofilm of Aspergillus fumigatus and Staphylococcus aureus on primary cultures of human limbo-corneal fibroblasts | |
| CA2279378C (en) | Method of selectively determining a fungal biomass | |
| Pitt et al. | Methods for enumeration, isolation and identification | |
| Lewis Ivey et al. | Use of the vital stain FUN-1 indicates viability of Phytophthora capsici propagules and can be used to predict maximum zoospore production | |
| Hobson | The effects of diffusates from the spores of Aspergillus fumigatus and A. terreus on human neutrophils, Naegleria gruberi and Acanthamoeba castellanii | |
| Biles et al. | Differential chlorate inhibition of Chaetomium globosum germination, hyphal growth, and perithecia synthesis | |
| Nazir et al. | Inhibitory effects of antifungal drugs on biofilm producing Aspergillus spp. recovered from drinking water system | |
| Granjo et al. | Morphogenesis and growth kinetics of Fusarium verticillioides |