RO106563B1 - Derivați de 13-alchil-23-imino si 13-haIo-23-imino ai compușilor LL-F28249 si utilizarea acestora ca agent endo - si ectoparazitici, insecticizi, acaricizi, nematocizi - Google Patents

Abstract

Invenția se refera la derivați de 13-alchil-23-imino ai 13-halo-23-imino ai compușilor LL-F28249 si la utilizarea acestora ca agenți endo- si ectoparazitici, insecticizi, acaricizi si nematocizi. Compușii de mai sus au următoarea formula structurala:

Description

Invenția de față se referă la derivați de 13-alchil-23-imino și 13-halo-23-imino ai compușilor LL-F28249 și la utilizarea acestora ca agenți endo- și ecto-parazitici. insecticizi, acaricizi și nematocizi. Acești compuși se utilizează la controlul endoși ectoparaziților (infecțiilor și infestărilor) la animalele cu sânge cald și la controlul muștelor domestice. De asemenea. ei pot fi aplicați la o mare varietate de culturi și medii înconjurătoare agricole în care culturile sunt crescute sau în creștere. pentru protejarea lor de efectul dăunător. produs de insecte, acarieni și nematocide.

Denumirea LL-F28249 este utilizată pentru a descrie compușii produși prin fermentarea bulionului de Streptomyces cyaneogriseus. subspeciile noncianogenus, depozitate în colecția NRR.L sub numărul de acces 15773. Caracteristicile morfologice ale numiților compuși și metodele de protejare ale acestora sunt descrise în cererea de brevet US nr. 732252 depusă la 10 mai, 1985.

Compușii conform prezentei invenții au formula structurală:

în care: R, reprezintă metil, etil sau izopropil. R₇ reprezintă hidrogen și R₈ reprezintă OR·,, sau când sunt luați împreună cu atomul de carbon, la care ei sunt atașați. R_? și R_g reprezintă o legătură C = O; R, reprezintă hidrogen, alchil cu I la 4 atomi de carbon, sau C-R₄; R₄ reprezintă hidrogen, alchil cu I la 4 atomi de carbon, haloalchil cu 1 la 4 atomi de carbon, alcoxi cu 1 la 4 atomi de carbon, fenoxi, alcoximetil cu 1 la 4 atomi de carbon, fenoximetil sau fenil. facultativ, substituit cu 1-nitro. 1-3 halogeni. 1-3-alchili cu I la 4 atomi de carbon sau alcoxi cu 1 la 4 atomi de carbon în număr de 1 la 3;

R3 reprezintă hidrogen, metil sau etil;

X reprezintă fluor, brom, clor sau iod; W reprezintă oxigen sau N=Y; Y este reprezentat de OR_S sau NHR₆; R_s este reprezentat de alchil cu I la 4 atomi de carbon sau acil cu 1 la 4 atomi de carbon; și R_fe este reprezentat de acil cu 1 la 4 atomi de carbon; și linia întreruptă din figură la triunghiul arătat cu oxigen la carbonii 26 și 27 indică prezența, fie a unei duble legături, fie a unei legături epoxidice.

1VVJVJ

O grupare preferată de compuși 13-halo-23-imino-LL-F28249 are formula structurală arătată mai sus în care R_t reprezintă izopropil; R₇ reprezintă hidrogen și R_g este OR->; R-, este hidrogen, aichil cu 1 5 la 4 atomi de carbon, sau -C(O)-R₄ este hidrogen, metil, clormetil, diclormetil, triclormetil. sau metoximetil; R₃ este metil; X este fluor; W este N = Y; Y este OR₅; și R_s este aichil cu 1 la 4 atomi de carbon.

Compușii conform invenției pot avea structura conform formulei:

în care: Rj reprezintă aichil cu 1 la 4 atomi de carbon; R-, reprezintă hidrogen, metil sau etil: R₃ reprezintă hidrogen, aichil cu 1 la 4 atomi de carbon; sau 10 C-R₅; unde R₅ este hidrogen, aichil cu 1 la 4 atomi de carbon, haloalchil cu 1 la 4 atomi de carbon, alcoxi cu 1 la 4 atomi de carbon, fenoxi. alcoximetil cu 1 la 4 atomi de carbon, fenoximetil, sau fenil facultativ substituit cu 1-nitro, 1-3-halogeni, 1-3-alchili cu 1 la 4 atomi de carbon, sau 1-3-alcoxi cu 1 la 4 atomi de carbon; R₄ este metil, etil sau izopropil;

R₆ este hidrogen, aichil cu I la 4 atomi 20 de carbon alcoximetil cu 1 la 4 atomi de carbon alchinil cu 1 la 4 atomi de carbon, benzii sau fenil; X este oxigen, NOR₆ sau

NNHR₇; R₇ este acil cu 1 la 4 atomi de carbon, aichil cu 1 la 4 atomi de carbon sau benzoil.

O grupare preferată de compuși 13-alchiI-23-imino-LL-F28249 are formula structurală arătată mai sus, dar în care:Rj reprezintă metil sau etil sau izopropil; R₂ reprezintă metil; R₃ reprezintă hidrogen, aichil cu 1 la 4 atomi de carbon, sau -C(O)-R_s; R₅ reprezintă hidrogen, alchiloximetil cu 1 la 4 atomi de carbon, halometil cu 1 la 4 atomi de carbon sau formil; R₄ este izopropil; X este NOR₆; și R₆ este aichil cu 1 la 4 atomi de carbon.

Compușii LL-F28249 au următoarea formulă structurală:

Component	Ri	r2	r3	R7
LL-F28249 alfa	CH(CH3)2	H	ch3	ch3
LL-F28249 beta	metil	hidrogen	metil	metil
LL-F28249 gama	metil	metil	metil	metil
LL-F28249 epsilon	CH(CH3)2	hidrogen	hidrogen	metil
LL-F28249 dzeta	ch2ch3	hidrogen	metil	metil
LL-F28249 theta	CH(CH3)2	hidrogen	metil	etil
LL-F28249 iota	CH(CH3)2	hidrogen	etil	metil
LL-F28249 lamda	CH(CH,)2	metil	metil	metil

Compușii conform invenției sunt eficienți agenți antiendoparazitici și antiectoparazitici și pot fi utilizați la protejarea animalelor cu sânge cald împotriva infecțiilor și infestărilor cu sus-numiții agenți (peste). Ei pot fi de asemenea aplicați la o largă varietate de culturi agricole și medii înconjurătoare, în care culturile sunt crescute sau crescute sub protecție, față de daunele cauzate de insecte, acaride și nematode. Compușii sunt puternic eficienți pentru controlul muștelor de casă când sunt aplicați în habitat, sursă de alimentare, sau mediul de creștere al muștelor.

S-a descoperit că modificările chimice ale pozițiilor 5, 13, 23, 26 și 27 ale compușilor LL-F28249, prezentați mai sus, măresc activitatea endo- și ectoinsecticidă-parazicidă, insecticidă, acaricidă și nematocidă a numiților compuși. în mod mai particular, derivații 13-halo-23-imino ai compușilor 5-hidroxi și 5-0-substituit-LLF28249 și 26,27 -epoxi-LL-F28249 și derivaților 13-alchil -23-imino ai 5-hidroxiși 5-0-substituit LL-F28249 demonstrează activitate potențială endoectocidă și insec10 ticidă.

Funcționalizarea la poziția 13 a derivaților arătați mai sus 13-halo-23-imino ai LL - F28249 este datorată oxidării grupărilor hidroxi de la pozițiile 5 și 23 cu dicro15 mat de piridină în dimetilformamidă obținându-se 5,23-dioxi-LL-F28249 (I) urmată de reacția cu dioxid de seleniu și acid formic pentru a da 13-(formiloxi)-5,23106563

-dioxo-F28249 (compusul II). Compusul (II) astfel obținut este transformat în compusul (III) - 13-hidroxi-5,23-dioxo-LL-F28249 via hidroliza acidă și apoi reacționat cu diamino sulf trifluorură (DAST). pentru a se obține 13-fluoro5.23- dioxo-LL-F28249 (compusul IV). Compusul (IV) reacționează secvențial cu hidroclorură de metoxilamină și borohidrură de sodiu, pentru a da compusul 13-fluoro-23-metoxiimino-LL-F28249 (compusul VI).

Utilizând LL-F28249 alfa ca materie primă de plecare, secvența de reacție descrisă mai sus este ilustrată în diagrama de principiu I, de mai jos.

Compusul (III) este utilizat ca intermediar comun, care reacționează cu agenții de halogenare, cum ar fi tribromura de fosfor și clorura de tionil, pentru a da 13-bromo- sau 13-cloro- sau 13-iodo-5.23- dioxo-LL-F28249, compuși reprezentați de compusul cu formula (IV) în care F este Br sau Cl sau I. și apoi reacționat secvențial cu o alcoxilamină, sau hidroxilamină și borohidrură de sodiu pentru a da compusul corespunzător 13-halo-23 imino-LL-F28249 reprezentat de compusul (V) în care F este Br, Cl sau I așa cum se arată în schema procesului tehnologic I de mai jos.

Reacția părții 5-hidroxi, pentru a da noi compuși 5-alchiloxi- și 5-aciloxi -13-halo-23-imono-LL-F28249, este realizată prin reacționarea compusului (VI) cu un agent de alchilare sau acilare așa cum se ilustrează în schema procesului tehnologic de principiu II în care Rj, R^, X și Y au semnificațiile menționate anterior.

Alternativ, compușii conform prezentei invenții, se pot prepara prin reacția materialului de pornire LL-F28249 cu halogenură de acid, cum ar fi p-nitrobenzoilclorura urmată de oxidarea grupării 23-hidroxilice și funcționalizarea carbonului 13, pentru a da compusul intermediar(VII), așa cum se ilustrează în schema de principiu a procesului tehnologic (III).

Compusul (VII) este tratat cu un agent de halogenare, cum ar fi diaminosulftrifluorura, clorura de tionil sau tribromura de fosfor urmată de reacționarea cu o alcoxil sau hidroxilamină pentru a da compușii doriți 13-halo-23-imino-5-(aciloxi)-LL— F28249 ca și compușii (VIII). Facultativ, compusul (VIII) este hidrolizat în bază, pentru a da compușii corespunzători 13-halo-23-imino-LL-28249. Secvența de reacție este prezentată în schema de principiu a procesului tehnologic din diagrama IV, unde R|, R_?, R₄, X și Y au semnificațiile menționate anterior. Avantajos, derivații epoxidici 26, 27 ai compușilor 13-halo-23— imino-LL-F28249 sunt preparați prin reacționarea precursorului 13-halo-23-oxi- cu acid m-cloroperbenzoic, urmat de tratamentul produsului epoxidic 26, 27 cu un alcoxil-, aciloxil-, sau hidroxiloximă pentru a da compușii doriți (IX). cum se ilustrează în diagrama de principiu V.

(1)

HCOOH

SeO₂

(III) (II)

ORST

12

Diagrama II

(VII)

14

Diagrama IV

16

Diagrama V

(IX)

Rp R₂, R₃. X și Y sunt asemenea celor descriși mai sus.

Derivații 13-alchil-23-imino ai compușilor LL-F28249 conform prezentei invenții pot fi preparați prin reacționarea com- 5 pușilor LL-F28249 cu anhidrida acetică pentru a da compusul 5-acetoxi-LL— F28249 (II). Reacționarea compusului 5-acetoxi-LL-F28249 cu carbonați de calciu și metil oxalil clorură urmată de tratarea cu acid ciorhidric 5-acetoxi-23{[(metoxicarbonil)-carbonil]oxi} LL-F28249 (compusul III). Compusul (III) astfel obținut este transformat în 5-acetoxi-13-i>era-hidroxi-23- {[(metoxicarbonil) carbonil]oxi}-LL-F28249 (compusul IV) prin tratarea cu acid formic și dioxid de seleniu urmată de reacționarea cu acid ciorhidric. Reacționând compusul de formula (IV) cu etilcloroformiat, piridină și 4-dimetilaminopiridină se obține 5-acetoxi-13-bera-[(etoxicarbonil)oxi]-23-{[-etoxicarbonil)carbonil]-oxi} LL-F28249 (compusul V). Reacționarea compusului de formula (V) cu trialchilaluminiu duce la obținerea 5-acetoxi-13-hera-alchil-LL— F28249 (compusul VI). Compusul de formula (VI) este transformat în 5-acetoxi-13foe(a-alchil-23-oxo-LL-F28249 (compusul VII) prin tratarea cu 4-metilmorfolin-N-oxid și tetrapropilamoniu perruthenat și apoi reacționat cu alcoxi amin hidroclorură pentru a da 5-acetoxi-13-be?a-alchil-23-(Oalciloxima)-LL-F28249 (compusul VIII). Reacționarea compusului (VIII) cu o bază tare, cum ar fi hidroxidul de sodiu, duce la obținerea compusului (I) dorit 13-beta-alchil-2-(O-alchiloxima)-LL-F28249. Schema de reacție este ilustrată în schema de principiu a procesului tehnologic (diagrama VI).

Diagrama VI

o (II)

Digrama VI (continuare)

O

o-C-CHo ii °

O (III)

li

O (IV) piridine

22

Diagrama VI (continuare)

(VI)

2J

Diagrama VI (continuare)

NOR₆

(I)

S-a descoperit că, compușii conform prezentei invenții sunt puternic eficienți cu agenți endo- și ectoparaziticizi cu utilitate în tratarea animalelor cu sânge cald. De asemenea, s-a descoperit că numiții compuși sunt excelenți agenți insecticizi, nematocizi și acaricizi, utili în controlul numitelor infectări (peste) și în protejarea culturilor agricole față de daunele provocate de numiții agenți (peste).

Pentru utilizarea la tratamentul animalelor cu sânge cald cum ar fi vitele cornute, oile. porcinele, caii. câinii sau alte animale, compușii conform prezentei invenții pot fi administrați oral. în unitatea de doză sub formă de capsulă, bol sau tabletă, sau sub formă de drenaj lichid. Doza de administrare la animal este normal, o soluție suspensie sau dispersie de compus activ de obicei în apă, împreună cu un agent de menținere în suspensie, cum ar fi bentonită și un agent de umectare sau alt excipient și agent antispumare.

Formulările sub doză de administrare

Ia animal (doză mare) în general conțin de la 0,001 la 0,5% greutate compus activ. Capsulele și holurile cuprind ingredientul activ amestecat cu agentul purtător cum ar fi amidonul, talcul, stearatul de magneziu sau de calciu fosfat.

Unde se dorește, se pot administra derivații LL-F28249 sub formă uscată, formă de unitate de doză solidă, capsule, boluri sau tablete conținând cantitatea dorită de compus activ. Aceste forme de dozare se prepară prin amestecarea intimă a ingredientului activ ca diluanții corespunzători din divizați, materialul de umplutură, agen15 ții de dezaglomerare și/sau liganzii cum ar fi amidonul, lactoza. talcul, magneziu stearat. gume vegetale și altele. Asemenea formulări de unități de doze pot varia larg, funcție de greutatea lor totală și conținutul agentului parazitic. depinzând de factori cum ar fi tipul animalului gazdă ce urmează a fi tratat, severitatea și tipul infectării și greutatea animalului gazdă.

Când compusul activ urmează să fie administrat prin alimentația animalului, hrana este intim amestecată cu compusul activ sau utilizat ca un adjuvant peste hrană. ca peleți ce se pot adăuga la hrana finită sau se pot administra separat, după cum se dorește. Alternativ, compușii antiparazitici conform prezentei invenții pot fi administrați la animale parenteral, de exemplu, prin injecții intraruminale. intramusculare. intracecale. sau prin injecții subcutanate. în care caz ingredientul activ este dizolvat sau dispersat în lichid purtător. Pentru administrarea parenterală. materialul activ este amestecat cu vehiculantul admis, preferabil un ulei vegetal. cum ar fi uleiul de arahide, cel de semințe de bumbac sau altele. Alți vehiculanți parenterali cum ar fi preparatele organice ce utilizează solchetal. propilen glicol. glicerol. formal și compozițiile parenterale apoase pot fi utilizate de asemenea. în prepararea formulărilor parenterale pentru administrarea la animalele cu sânge cald.

în aceste formulări compusul aditiv sau compușii sunt dizolvați sau suspendați în formulare în cantitate suficientă, pentru a asigura de la 0.005% la 5% în greutate de compus activ în numita formulare.

Compușii conform prezentei invenții sunt utili pentru tratarea endoparaziților la animalele cu sânge cald. cum ar fi tratarea împotriva helminților. Numiții compuși sunt. de asemenea, utili pentru prevenirea și tratarea bolilor cauzate de octoparaziți. de exemplu, octoparaziții artropozi cum ar fi căpușele, chicheriță de cal. păduchi, purici și alte insecte mușcătoare ale animalelor domestice și găinilor.

Mai mult. compușii 13-halo-23-imino— LL-F28249 descriși aici sunt insecticide excelente, nematocide și acaricide utilepentru protejarea culturilor în creștere sau recoltate față de atacul mai sus numiților agenți. Compușii conform prezentei invenții pot fi formulați în granule compacte uscate, compoziții sub formă de praf, pulberi umectabile. prafuri concen26 trate, microemulsii și altele, toate acestea depunându-se pe sol. aplicări sub formă de soluții apoase și/sau altfel pe frunze și asigurând protecția cerută pentru plante. Astfel de compoziții includ compușii conform prezentei invenții amestecați cu suporturi purtătoare solide sau lichide, acceptate din punct de vedere agricol.

S-a descoperit de asemenea că. compușii conform prezentei invenții prezintă proprietăți surprinzătoare insecticide, nematocide și acaricide. făcându-le utile pentru controlarea insectelor, nematocidelor și acarienilor cât și pentru protejarea culturilor agricole, pomilor, arbuștilor, grânelor depozitate și plantelor ornamentale față de daunele cauzate de insecte, nematode și acarieni.

Pentru aplicare industrială, compușii conform prezentei invenții pot fi formulați în granule compacte uscate, compoziții sub forma de praf, pulberi umectabile. prafuri, concentrate de prafuri microemulsie și altele, toate acestea depunându-se pe sol, sub formă de soluții apoase și/sau pe frunze și asigurând protecția cerută plantelor. Astfel de compoziții includ compușii invenției amestecați cu suporții lichizi și solizi acceptați în agricultură.

în aceste compoziții compușii sunt intim amestecați sau măcinați împreună în cantități suficiente să asigure de la 3 la 20% greutate compus activ în numita compoziție.

Compozițiile conform prezentei invenții sunt utile în combaterea dăunătorilor agricoli ce aduc daune culturilor, în timp ce cresc sau sunt depozitate. Compușii sunt aplicați utilizând tehnicile comune cum ar fi. pulverizarea, prăfuirea. aplicarea de emulsii, pulberi umectabile, pulberi ce se depun și altele asupra culturilor în creștere sau depozitate față de dăunătorii de infestare.

încă alți compuși ai prezentei invenții sunt neașteptat de eficienți în controlul muștelor din locuințe, surse de alimente sau medii de creștere ale muștelor. Compușii pot fi aplicați sub formă de pulberi, spray-uri, emulsii, pulberi umectabile, spălabile, microemulsii. compoziții granulare și altele conform descrierii anterioare pentru locuințe, surse de alimente sau medii de creștere ale muștelor.

Invenția de față prezintă avantajul obținerii unor compuși care sunt utilizați ca agenți endo- și ectoparazitici insecticizi, acaricizi și nematocizi cu eficiență mărită.

Se dau în continuare exemple de realizare a invenției, dar nu limitative, cu mențiunea că părțile sunt date în greutate.

Exemplul 1. Prepararea 5,23-dioxoLL-F28249-alfa

Un amestec de LL F28249-alfa (10,0 g, 0,016 moli) și pământ diatomitic (160,0 g) în dimetilformamidă, sub azot, se tratează în porțiuni cu dicromat de piridină (58,0 g, 0.15 moli), se amestecă timp de 4 h la temperatura camerei, se tratează cu 1 1 de eter dietilic, se amestecă timp de 15 min și se filtrează. Filtratul este spălat cu apă, după aceea cu saramură și se usucă pe sulfat de magneziu anhidru și se concentrează în vacuum pentru a da un ulei galben rezidual. Reziduul este cromatografiat (silice, clorură de metilen:izopropanol 99:1 ca eluent) pentru a oferi produsul din titlu ca un solid galben luminos (4,84 g, 49,7%), identificat prin ’NMRH, ¹³CNMR și analize spectrale.

Exemplul 2. Prepararea I3-(formiloxi)-5.23-dioxo-LL-F28249-alfa

Un amestec de 5,23-dioxo-LL-F28249alfa (2.6 g, 4.3 mmoli în 88% acid formic, sub pernă de azot. este tratat cu dioxid de seleniu (1.0 g, 9.0 mmoli). amestecat la 50°C timp de 2 h, răcit la temperatura camerei, tratat cu 3 volume daâclorură de metilen, amestecat timp de 10 min și filtrat prin pământ diatomitic.

Filtratul este separat și faza organică este concentrată în vacuum, pentru a da un solid de culoare brun deschisă. Cromatografierea pe coloana de developare (silice, hexan: acetat de etil, 2=1 ca eluent) a reziduului oferă produsul din titlu ca un solid bej (1,3 g, 43%) identificat prin ’HNMR și ^l3CNMR spectroscopie.

Exemplul 3. Prepararea 13-hidroxi5,23-dioxi-LL-F28249-alfa

Un amestec de 13-(formiloxi)-5,23-dioxo-LL-F28249-«//fl (800 mg, 1,1 mmoli), metanol și dioxan la 0-5°C se tratează cu 20 ml de 1,2 N acid clorhidric, se agită la temperatura camerei timp de 4 h, se lasă să stea la 40°C, timp de 16 h și se concentrează sub vacuum. Reziduul se reia cu acetat de etil, se spală cu bicarbonat de sodiu și apoi cu saramură, se usucă pe sulfat de magneziu și se concentrează în vacuum, pentru a da compusul din titlu sub forma unui sold de culoare bej (700 mg, 91 %), identificat prin ’HNMR, și ^1;>CNMR, și analize spectrale.

Exemplul 4. Prepararea I3-fluoro-5,23dioxo-LL-F28249-a!fa și 13-fluoro-23-oxoLL-F28249-alfa

Un amestec de 13-hidroxi-5,23-dioxoLL-F28249 alfa (100 mg, 0,15 mmoli) în metilen clorură la -40°C, sub pemă de azot, se tratează cu dimetilaminosulf trifluorură: (40 μ], 29.4 mg, 0,22 mmoli) întro seringă și se agită la -40°C la -30°C, timp de 3 h. Amestecul de reacție este vărsat în apă cu gheață și fazele sunt separate. Faza apoasă este extrasă cu acetat de etil. Fazele organice sunt combinate, spălate cu apă și saramură, uscate pe sulfat de magneziu și concentrate în vacuum pentru a da produsul din titlu ca un solid galben. 112 mg. Analiza cromatografică în fază lichidă de presiune ridicată (NPLC) indică 57% 13-fluoro-5,23 dioxoLL-F28249-rt//rz și 13% -fluoro-23-oxo-LL-F28249-ii(/ii. prezent în amestec. Cromatografierea pe coloană (silice, hexani: acetat de etil, 4:1 ca eluent) a amestecului de produs oferă compusul pur 13-fluoro5.23-dioxo-LL-F28249-«//a ca un solid galben, identificat prin 'H. ^I?C și ^l9F NMR și analize spectrale de masă.

Exemplu] 5. Prepararea 13-flitoro-23-(O-metiloxiinei )-LL-F28249-alfa

Un amestec de 13-fluoro-5,23-dioxoLL-F28249-o//u (30 mg, 0,05 mmoli) în etanol absolut la -10°C la -5°C. sub atmosferă de azot, se tratează cu imidazol (10 mg, 0,15 mmoli) după care se adaugă metoxilamin hidroclorură (12,5 mg. 0,15 mmoli). se agită timp de 2 h la - 10°C...-5°C. se tratează cu borohidrură de sodiu (612.0 mg, 0,30 mmoli) și se agită timp de 1 h la temperatura între -10°C și -5°C. Amestecul de reacție este călit cu apă. se agită timp de 15 min la temperatura ambiantă și se concentrează în vacuum. Reziduul rezultat este dispersat în acetat de etil și apă, fazele sunt separate și faza organică se spală cu apă, după care cu saramură, se usucă pe sulfat de magneziu anhidru, și se concentrează în vacuum, pentru a da un reziduu. Reziduul se cromatografiază pe coloană (silicagel. hexani: eter. 4:1 ca eluent) pentru a furniza produsul din titlu ea un solid alb, identificat prin ’n. ^,?C și ^l9F NMR și analize spectrale de masă.

Exemplul 6. Prepararea 13-fluoro-5-(formiloxi )-23-( 0-metiloxim)-LLF28249alfa.

Un amestec de 13-fluoro-23-(O-O-metiloximă)LL-F28249-a//â (80 mg), 0.12 mmoli) în piridină uscată la 0°C, sub pernă de azot, se tratează cu 1.0 ml de amestec de anhidridă și acid acetic și acid formic, se agită la temperatura camerei timp de 1/2 h, apoi se varsă pe un amestec de gheață și soluția saturată de bicarbonat de sodiu. Amestecul de reacție se extrage cu eter. extractul eteric se spală eu soluție diluată de acid clorhidric rece. apoi cu apă și soluție saturată de bicarbonat de sodiu. Faza organică se usucă pe sulfat de sodiu și se concentrează în vacuum. Reziduul rezultat se cromatografiază (silice, metilen clorură: acetat de etil. 40:1 ca eluent) pentru a se obține compusul din titlu ca un solid alb (34,4 mg, 42%) identificat prin ’h și ^,3CNMR și analize spectrale masă.

Exemplul 7. Prepararea 5-(dicloroacetoxi)-I3-fluoro-( O-metiloxim)-LL-F-28249-alfa

Un amestec sub agitare conținând 13-fluoro-23-(0-metil-oxină (2,9 mg, 0,024 mmoli) în clorură de metilen la 5-10°C, sub pernă de azot, se tratează cu piridină (50 ÎL. 0,62 mmoli) urmată de diclorură de acetil (0,02 ÎL, 0.208 mmoli). După 2 h la temperatura 5-10°C. amestecul de reacție se toarnă peste soluție saturată de bicarbonat de sodiu și gheață și se extrage cu eter. Faza organică este spălată secvențial cu acid clorhidric diluat (0,5%), apă și soluție saturată de bicarbonat de sodiu, se usucă pe sulfat de sodiu și se concentrează sub vacuum. Reziduul se cromatografiază (silice. 0,25% la 0,5% izopropanol în clorură de metilen) gradient de eluție, pentru a da produsul din titlu ca un solid de culoare albă, identificat prin 'h și ^l3C NMR și analize spectrale de masă.

Exemplul 8. Prepararea l3-fluoro-23-(O-metiloximei)-5-tri-cloromeetoxi)-LL-F28249-alfa

Un amestec sub agitare compus din 13-fluoro-23-(O-metiloximă)-LL-F28249 alfa (80 mg, 0,12 mmoli) și dimetii-aminopiridină (2,9 mg, 0,024 mmoli) în clorură de metilen. Ia 5-10°C sub pernă de azot, se tratează ca piridină (50 ÎL. 0,62 mmoli) urmată de clorură de tricloroacetil (20 IL, 0.18 mmoli). După 1 1/4 h la 5-10°C, amestecul de reacție se toarnă peste bicarbonatul de sodiu și gheață și se extrage ca eter. Faza organică se spală secvențial cu a'^-' .torhidric diluat (0,5%). apă și soluție saturată de bicarbonat de sodiu, se usucă .Ί pe sulfat de sodiu și se concentrează pentru a da un reziduu sub formă de spumă. Concentrarea se face sub vacuum. Reziduul se cromatografiază (silice. 0,10% la 0,25% izopropanol în metilen clorură, gradient de eluție), obținându-se produsul din titlu sub forma unui solid alb (63,4 mg, 66%) identificat prin 'H și ^,3C NMR și analize spectrale de masă.

Exemplul 9. Prepararea 5-[(-p-nitrobenzoil)oxi]-LL-F28249-aIfa

Un amestec de LL-F28249-alfa (6,36 g,

10,4 mmoli) și piridină (1.98 g, 25 mmoli) în clorură de metilen la 20°-25°C se tratează cu p-nitrobenzoil clorură (2,45 g, 13,2 moli), se agită timp de 4 h. se lasă să stea timp de 16 h și se tratează cu soluție saturată de bicarbonat de sodiu și clorură de metilen. Amestecul de reacție se agită timp de 5 min și se separă fazele. Faza organică se spală secvențial cu soluție saturată de bicarbonat de sodiu, acid clorhidric 5%. și saramură, și se usucă pe sulfat de magneziu și se concentrează sub vacuum, pentru a da produsul din titlu ca un solid spumos alb, (7,9 g, 93.5% puritate) prin analiză cromatografică lichidă) identificat prin ’HNMR și analize spectrale de masă și microanaliză.

Exemplul 10. Prepararea 5-[(p-nitrobenzoil )oxi ]-23-oxo-LL-F-28249-alfa.

Un amestec de 5-[(p-nitrobenzoil)-oxi]-LL-28249 alfa-(6,3 g. 8.4 mmoli) în dimetilformamidă se tratează cu piridin dicromat și se agită timp de 6 h, se varsă în apă. se agită timp de 15 min și se filtrează. Turta filtrată se spală cu apă, se usucă cu aer, se reia în acetat de etil la reflux, se tratează cu pământ diatomitic și se filtrează. Filtratul este concentrat în vacuum pentru a da un reziduu de culoare roșie-brună solid. Reziduul este recristalizat din n propanol. pentru a da produsul din titlu ca și cristale albe (3,3 g, 51,7%) identificat prin *HNMR analize spectrale de masă.

Exemplul 11. Prepararea 13-hidroxi-5-[(p-nitrobenzoil)oxi]-23-oxo-LL-F-28249-alfa

Un amestec sub agitare conținând 5[(/?-nitrobenzoil)-oxi]-23-oxo-LL-F28249alfa. (1.25 g. 1.36 mmoli) și dioxid de seleniu (0,78 g, 7,02 mmoli) în 20 ml de 9:1 trifluoretanol: apă se încălzește la 40°C timp de 4 h, se răcește la temperatura camerei și se filtrează prin pământul diatomitic. Filtratul este concentrat în vacuum; reziduul rezultat se reia cu clorură de metilen și se filtrează pentru a îndepărta orice dioxid de seleniu rezidual și filtratul se concentrează în vacuum; reziduul rezultat se cromatografiază pe (silice, metilen clorură/etil acetat ca eluent) pentru a da produsul din titlu ca un solid alb (236 mg, 58,7%) identificat prin *Η, ¹³C și APT NMR analize spectrale de masă.

Exemplul 12. Prepararea 13-flιιoro-5l(p-nitrobenzoil)oxi]-23-oxo-LL-F28249alfa

Un amestec de l3-hidroxi-5-[(p-nitrobenzoil)-oxi]-28-oxo-LL-28249-a//a (0,5 mmoli) în clorură de metilen, sub presiune de azot, la -70°C se tratează cu dimetilamino sulf trifluorură (în picături) (80 IL, 0,60 mmoli) într-o seringă. După 20 min la -70°C, amestecul de reacție se călește cu 1/2 ml de apă și 1 ml de metanol și se agită timp de 15 min la -78°C până la 0°C. se lasă să se încălzească la temperatua camerei și se concentrează în vacuum. Reziduul se cromatografiază (silice, metilen clorură/etil acetat ca diluent) pentru a da produsul din titlu ca un solid alb (236 mg, 58,7%) identificat prin 'H, ⁱ³C și APT NMR și analize spectrale de masă.

Exemplul 13. Prepararea 13-fluoro-23-oxo-LL-F28249-alfa

Un amestec de 13-fluoro-5-[(/’-ni^trobenzoil)oxi]-23-oxo-LL-F28249-a//b (187 mg,

0.24 mmoli) în dioxan la 5ⁿC se tratează în picături cu hidroxid de sodiu 1 N (0,35 ml,

0,35 mmoli), se agită la temperatura 10 la 15°C timp de 3 h. se diluează cu acetat de etil și apă și se amestecă bine. Fazele se separă și faza organică se spală cu apă, se usucă pe sulfat de sodiu și se concentrează în vacuum. Reziduul se cromatografiază (silice, acetat de etikhexan, 1:2 - 1:1 gradient de eluție) pentru a da produsul din titlu ca o pulbere albă (117 mg, 78%), identificat prin ^!H NMR și ^{| 3}CNMR și analize spectrale de masă.

Exemplul 14. Prepararea 26,27-epo.xi13-fluoro-23-o.xi-LL-F28249-a!fa (I) și 3.4: 26,27-diepo.xi- / 3-fltioro-23-o.xo-LLF28249-alfa (II)

Un amestec sub agitare conținând 13-f]uoro-23-oxo-LL-F28249-ii//ii (62.8 mg, 0.10 mmoli) în clorură de metilen la 5-10°C se tratează cu acid w-clorbenzoic purificat (41,7 mg, 0,24 mmoli), se agită timp de 3 h la temperatura 5-l0°C și se călește cu soluție 10% de bicarbonat de sodiu. Fazele sunt separate și faza organică se concentrează la vacuum. Reziduul rezultat se cromatografiază (silice, hexani: acetat de etil gradient de eluție, 2:1-1 1:1) pentru a da produsul din titlu sub formă de amestec. Amestecul este purificat în continuare prin cromatografie preparativă, de fază reversă, lichidă de înaltă performanță (HPLC) (C-18 coloană, acetonitrol:-apă, 65:35) pentru a oferi produsul din titlu (I) ca o pulbere albă (18 mg, 29%) și produsul din titlu (II) ca o pulbere albă (16 mg, 26%). Ambii compuși (I) și (II) sunt identificați prin ^!H și ^l3C NMR și analize spectrale de masă.

Exemplul 15. Prepararea 26.27-epo.xi13-fliioro-23-(O-metiloximei)-LL-F28249 -alfa

Un amestec de 26.27-epoxi-13-fluoro-23-oxo-LL-F28249-ii//b (7.6 mg. 0.012 mmoli). hidroxilamină hidroclorură (4.5 mg. 0.05 mmoli) și acetat de sodiu (6.6 mg. 0.08 mmoli) în metanol se agită la temperatura camerei timp de 6 h și se concentrează la vacuum. Reziduul se repartizează între apă și clorură de metilen. Faza organică se separă și se concentrează în vacuum. Reziduul rezultat se cromatografiază (silice, acetat de etil: hexani 1:1) pentru a oferi produsul din titlu ca o pulbere albă (6,0 mg, 76%) identificată prin ’H și 18

C NMR și analize spectrale de masă.

Exemplul 16. Prepararea 13-cloro5.23- dio.xo-LL-F28249-alfa

Un amestec de 13-hidroxi-5,23-dioxoLL-F28249 alfa (70 mg. 0,10 mmoli) în clorură de metilen, sub pernă de azot, la temperatura 5...I0°C se tratează în picături cu clorură de tionil (30 IL 18,4 mg, 0.15 mmoli) într-o seringă, se agită la 5...10°C timp de 2 h și Ia temperatura camerei timp de 16 h și se concentrează în vacuum. Reziduul semisolid rezultat se cromatografiază (silice, hexan: acetat de etil, 75:25) pentru a oferi compusul din titlu, ca un solid de culoare bej (38,5 mg, 60%) identificat prin ’HNMR și analize spectrale de masă.

Exemplul 17. Prepararea 13-bromo5.23- dio.xo-LL-F28249-alfa.

Un amestec de 13-hidroxi-5.23-dioxo— LL-F28249-a//a (97 mg, 0,15 mmoli) în benzen, sub pernă de azot, la 5°-10°C se tratează în picături cu tribromură de fosfor (20 IL, 57,6 mg, 0.21 mmoli) într-o seringă, se agită timp de 1 h la 5°-l0°C și apoi se varsă în apă și se extrage cu acetat de etil. Faza organică se spală cu saramură, se usucă pe sulfat de magneziu și se concentrează în vacuum. Reziduul semi-solid se cromatografiază de două ori (silice, hexani: acetat de etil, 9:1) pentru a oferi produsul din titlu ca un solid galben identificat prin analize spectrale de masă.

Exemplul 18. Evaluarea activității a ntiparazitice a compușilor de testat

Activitatea antiparazitică a compușilor conform prezentei invenții față de helminți, acarieni și artropode. ectoparaziți.la diferite concentrații ale ingredientului activ se de106563 termină în exemplele de test care urmează. Rezultatele acestor teste sunt prinse în rezumat în tabelul 1.

Evaluarea compușilor de testare pentru controlul Trichostrongylus colubriformis 5 la animalele cu sânge cald în aceste teste ingredientul activ se dizolvă în polietilen glicol și dimetilsulfoxid (PEG:DMSO) (1:2 v/v) în cantitate

Testul compușilor in evaluai suficientă să asigure tratamentele care să asigure livrarea de la 0,0156 la 0,1250 mg/kg corp animal compus de testare.

Pentru evaluarea compușilor testați, exemplare de (gerbils) masculi în vârstă de 5 săptămâni sunt infectate cu 400-600 larve de T-columbriformis de proveniență ovină în ziua 0.

activității antiparazitice Tabelul 1

Compuși	T. colubriformis (mg/kg)	P. ctiniculi (pg/cm-)	M. domestica (ppm)
0.125	0.0625	0,0313	0.0156	4.0	1,0	0,1	0,01	10	1,0
13-Fluoro-23-(0-mctiloximâ)-LLF28249-alfa	100	100	83	66	100	100	100	96	100	62
13-Fluoro-5-(formiloxi )-23-(0metiloximă)-LL-F28249-alfa	100	86	82	-	100	100	100	38	-	-
26,27-Epoxi-l 3-fluoro-23-(0-metiloximă)-LL-F28249-alfa	100	100	100	98	100	100	100	7	79	-
5-(Dicloroacetoxi)-13-fluoro-23(O-mctiloximă)-LL-F28249-alfa	100	83	59	-	100	100	100	57	15	-
13-Fluoro-23-(0-metiloximă)-5- (tricloro-acetoxi)-LL-F28249-alfa	99	77	17		100	100	100	79

în ziua a șaptea exemplarele asupra cărora s-a efectuat testul (gerbels) au fost cântărite și tratamentul a fost inițiat. Compușii de test au fost administrați prin gavage în ziua a 7-a după tratament. (Gerbilii) au fost sacrificați în ziua a 1 l-a după tratament, și viermii rămași au fost numărați. Procentul de eficacitate a fost calculat prin comparare cu viermii numărați la animalele tratate față de animalele netratate, infectate ca și control după următoarea formulă:

Media control - medie tratate Medie control

Trei repetări per tratament au fost apli- 15 cate la aceste evaluări.

Datele obținute sunt prezentate în sumar în tabelul 1.

Evaluarea compușilor de test pentru controlarea Psoroptes citniculi (Câpuși 20 de ureche) în preziua testului, sau în dimineața testului, compușii se dizolvă în acetonă și se diluează la concentrațiile dorite. Concentrațiile trebuie calculate astfel încât 25 400 1 conțin cantitatea ce urmează a fi plasată pe fiecare filtru (hârtie de filtru).

400 1 din această soluție este pipetată pe vârful (3.7 cm diametru) și baza (3.5 cm diametru) hârtiei de filtru disc care este 30 . x 100 - % Eficiență apoi plasată pe un platou ceramic pentru a se usca. (Notă: aceasta poate fi efectuată sub un acoperământ). Există latură aspră și moale pe hârtia de filtru. Soluția de testare trebuie să fie aplicată pe partea aspră care este plasată în sus în timpul uscării. Când este uscată, cele două discuri sunt plasate în cutia Petri cu părțile aspre fixate separat printr-o bucățică mică de hârtie îndoită sub forma unui tampon. Cutiile Petri sunt ținute la temperatura camerei peste noapte dacă sunt preparate înainte de ziua testului. Un standard de 0.01. 0,1 și 1.0 IL/cm² este efectuat pentru fiecare test. Coaja, conținând căpușele, se colectează din urechile infestate cu paraziții la șoareci în dimineața testului. Acest material este plasat în cutii Petri mari sub măritor de iluminat. Căpușele migrează ușor din coji și sunt ușor colectate la punctul respectiv cu ajutorul unui ac de dise- 5 cție, un bețișor sau o pereche de pensete fine. Partea de sus a hârtiei de filtru din fiecare cutie Petri. îndepărtată și 12 căpușe sunt plasate pe discul de la bază și hârtia de deasupra este repusă. înainte de 10 repunerea capacului cutiei Petri, marginile cutiei sunt umplute cu vaselină pentru a prinde orice căpușă care scapă.

Pentru evaluarea testelor se execută patru experiențe cu fiecare doză ce se 15 numără 2 la 4 h și 2 la 24 h.

După ce căpușele sunt adăugate la cutii, cutiile din fiecare experiență sunt plasate în tăvi. care sunt apoi introduse în saci de plastic, cu câteva prosoape umede 20 și ținute la temperatura camerei.

După 4 sau 24 h, cutiile sunt examinate în scopul de evaluare după cum urmează:

Total de căpușe moarte Total număr de căpușe

Datele obținute sunt prezentate în rezu- 25 mat în tabelul I.

Evaluarea compușilor de testat pentru eficiența în controlul combaterii muștelor (Musca domestica).

în acest sistem de testare, larvele de 30 muscă domestică abia apărute sunt crescute pe un mediu nedefinit de lapte complet fermentat și sânge de vită uscat. Compușii de testat sunt adăugați la lapte și se determină activitatea prin numărul 35 de larve metamorfozate. Testul este efectuat într-un dispozitiv medical de 31.1 g (1 oz) din plastic. Șervețelul de hârtie (Scott C-Fold. 150) se taie în bucăți de aproximativ 3.5 x 10 cm. Trei din aceste 40 bucățele sunt împăturite conform stilului și introduse în fiecare cornet de hârtie. Cu 24 h înainte de inițierea lestului 0,5 1 (1/2 galon) de lapte integral se împarte în cinci pahare de câte 1 litru și se introduc în in- 45 cubator la 39°C. în dimineața testului, lap38

1. Se deschide cu atenție cutia, se îndepărtează hârtia de filtru de deasupra și se pune bine.

2. Se desenează un cerc mic de aproximativ 1/2 cm diametru pe hârtia de filtru de la bază cu ajutorul unui pix moale.

3. Utilizând o pipetă, ușor se umezește aria din jurul cercului.

4. Se transferă căpușele din cutie în acest cerc. Se urmărește cu atenție deasupra hârtiei și pe hârtia de bază să nu fie alte căpușe.

5. Se numără și se înregistrează numărul de căpușe din cerc.

6. Se înlocuiește capacul de deasupra și se pun de o parte cutiile.

7. După minimum 15 min. se numără căpușele rămase în interiorul cercului (acestea sunt căpușe moarte).

8. Se calculează și se înregistrează numărul de căpușe vii.

9. Se calculează procentul de eficiență după cum urmează:

100 = % Eficiență tele fermentat este îndepărtat din incubator, amestecat și turnat în pahare mici(IOO ml). Se adaugă în ele 1 la 2 g de sânge bovin uscat cu amestecare în scopul distribuirii sângelui și se introduce din nou la incubare.

Dozele de compuși de testat sunt astfel calculate încât să se asigure cantitatea de 0,1 ml de compus de testat la 100 ml lapte. Compușii trebuie dizolvați în acetonă. 100 ml de acetonă se adaugă la fiecare pahar de un litru pentru control.

Fiecare pahar este îndepărtat din incubator și plasat pe un suport și agitat magnetic. Compusul de testat este adăugat cu amestecare completă. Apoi se îndepărtează porțiuni de câte 20 ml și se adaugă în vasele (dispozitivele) de testare etichetate(4 repetări/tratament). Utilizând o pensulă fină de pictură, se transferă 20 larve în fiecare vas care apoi este închis ermetic în sacul de plastic cu câteva găuri în el.

Sacii ce conțin vasele sunt introduși pe o tavă plată în etuvă incubator la 27C pentru o săptămână.

Tăvile sunt scoase din incubator și se numără nimfele (pupele) în fiecare sac. Șervețelul de hârtie este îndepărtat și exaNumărul de nimfe din Numărul de vase,

Rezultatele finale exprimate ca procentaj de inhibare a transformării în nimfe este corectat pentru controlul mortalității folosind formula lui Abbott. Datele obținute sunt prezentate în tabelul 1.

Exemplul 19. Evaluarea activității insecticide și acaricide a compușilor de testat în evaluările care urmează, soluțiile de testare sunt preparate prin dizolvarea compusului de testat în 35% acetonă în apă la o concentrație de 10000 ppm. Diluțiile ulterioare se fac cu apă dacă sunt necesare.

Heliothis virescens. ou. viermele tutunului

Frunze tinere de tutun sunt scufundate în soluția de testare sub agitare timp de 3 s. Dimensiunea frunzelor este de 6-7 cm lungime. Ouăle sunt colectate pe o bucată de tifon și tifonul se taie în bucățele pătrate de 10-20 mm conținând aproximativ 50-100 ouă (după 6-30 h). O bucățică pătrată de tifon cu ouă este de asemenea scufundată în soluția de testare și pusă pe frunza tratată. Combinația se pune sub o capotă pentru uscare, apoi se introduce în paharele de hârtie de 248 g(8 oz), în care s-a introdus în prealabil, un fitil dentar umed de lungime aproximativ 5 cm. Se pune un capac din plastic transparent peste cutie (pahar) și tratamentul se menține timp de 3 zile înainte de a face numărătoarea mortalității.

Heliothis virescens, stadiu trei de dezvoltare, viermele tutunului

Cotiledoane de tutun se scufundă în soluția de testare și se lasă să se usuce sub acoperiș. Când s-au uscat, fiecare este tăiat în patru bucăți (pătrate) și 10 bucăți minat cu atenție ca să nu fi rămas nici o nimfă în ceașcă. Multe din nimfe vor fi pierdute în sac. Procentajul de eficiență se calculează în felul următor:

vase de tratament

- x 100 'tratament x 20 sunt introduse, individual, în pahare medicinale din plastic de 30 ml capacitate conținând fitil dentar de 5-7 mm lungime, umed. Se adaugă o omidă în stadiul trei de dez10 voltare în fiecare pahar, și se acoperă cu un capac de carton. Tratamentul este menținut timp de 3 zile înainte de numărătoarea mortalității și estimarea reducerii produse de alimentare (roadere).

Spondoptera aridania, larve stadiu trei de dezvoltare, viermele de armată (Southern armyworm)

O frunză de fasole specia Sieva lima crescută la 7-8 cm lungime este scufundată în soluția de testat cu agitare timp de 3 s și apoi uscată sub acoperiș. Frunza este apoi plasată în cutie Petri de 100 x 10 mm conținând hârtie de filtru umedă la bază și 10 omizi în stadiul trei de dezvoltare. Observațiile privind mortalitatea reducerea alimentării, sau interferența cu năpârlirea se fac în ziua a treia și a cincea.

Aphis fabae, stadii mixte, afida fasolei Ghivece conținând câte o plantă de Nasturtium (năsturel, călțunaș) Tropaeolum sp. de înălțime aproximativ 5 cm, se infestează cu aproximativ 100-200 afide, o zi înaintea testului. Fiecare ghiveci este pulverizat cu soluția de testare de două ori prin rotirea unei mese sub capac cu 4 rpm, utilizând un atomizor De Vilbias. Vârful pulverizatorului este ținut aproximativ 15 cm distanță față de plantă, și jetul de pulverizare este direcționat astfel încât să dea acoperirea completă peste plantă și afide. Ghivecele pulverizate, sunt așezate la locurile lor pe tăvi emailate albe și ținute 2 zile, după care se face estimarea mortalității.

Empoasca abruptă, adulji. insecte sări41

1UODO2) toare pe cartofi

O frunză de fasole specia Sieva lima de aproximativ 5 cm lungime este scufundată în soluția de testare timp de 3 s cu agitare și plasată sub acoperiș pentru uscare. Frunza este apoi plasată în cutie Petri de 100 x 10 mm conținând hârtie de filtru umedă la bază. Aproximativ 10 exemplare adulte de Empoască se adaugă la fiecare cutie Petri și tratamentul se continuă timp de 3 zile după care se face numărătoarea mortalității.

Tetranychus urticae (tulpină P-rezistentă), păianjen săritor bipătat

Plante de fasole specia Sieva lima cu primele frunze crescute la 7-8 cm sunt selectate și replantate câte una pe ghiveci.

O bucățică mică din frunza cu colonia

Scara

- nici un efect = 10- 25% mortalitate = 26 - 35% mortalitate = 36 - 45% mortalitate = 46 - 55% mortalitate principală de păianjeni se taie și se introduce pe fiecare frunză a plantelor. Acest lucru este făcut cu aproximativ 2 h înainte de tratament, pentru a lăsa păianjenii să se miște pe plantele de testare și să depună ouă. Dimensiunea pieselor tăiate este variată pentru a obține aproximativ 100 păianjeni per frunză. La timpul tratamentului. bucata de frunză utilizată pentru transferarea păianjenilor este îndepărtată și scuturată. Plantele infectate sunt scufundate în soluția de testare timp de 3 s cu agitare și fixate sub acoperiș să se usuce. Plantele sunt ținute 2 zile înainte de estimarea πιοτί 5 ții adulților utilizând prima frunză. A doua frunză este ținută pe plantă pentru încă 5 zile înainte de observarea morții ouălelor și/sau nimfelor noi apărute, e evaluare = 56 - 65% mortalitate = 66 - 75% mortalitate = 76 - 85% mortalitate = 86 - 99% mortalitate = 100% mortalitate

Datele obținute sunt prezentate în rezumat în tabelul 2.

Testul compușilor în evaluarea activității insecticide și acaricide Tabelul 2

Compuși	Tobacco	Budworm	Bouthern	Armyworm	Bean	P-resistant (ppm	Mites )
egg (ppm)	3rdinstar (ppm)	Day 3 (ppm)	Day 5 (ppm)	Aphid (ppm)	Lcafhopper (ppm)
	100	10	100	10	10	1	10	10	100	10	1000	100	10
13-Fluoro-23-(O- meliloximă)-LL· F28249-fl//«	8	0	9	9	9	4	9	7	7	6	9	5	8
5-(Dicloroacc- ioxi)-13-iluoro- 23-(O-metiloxi- mă)-LL-F28249- alfa	0	0	9	9	9	5	9	9	7	0	9	9	8
13-Fluoro-23-(Omeiiloximăl-5(tricloro-acetoxi)LL-F28249-a//ă	8	0	9	9	4	3	9	9	0	0	9	9	8
13-Fluoro-5(formiloxi)-23(O-metiloximă)LL-F28249-u//«	0	0	9	8	9	1	9	9	0	0	9	9	8

Exemplul 20. Prepararea 5-Acetoxi-LL-F28249-alfa

La o soluție la 0°C de LL-F28249-fl//a (32,57 g, 39,3 mmoli) și piridină (200 ml) se adaugă anhidridă acetică (20 ml, 212 mmoli). Amestecul de reacție se agită timp de 3 zile la 0°C. Concentrarea în vacuum a amestecului de reacție duce la obținerea unui reziduu galben. Reziduul este dizolvat în acetat de etil, spălat cu apă, acid clorhidric diluat, apă, soluție 10% bicarbonat de sodiu și saramură, uscat pe sulfat de sodiu anhidru și concentrat în vacuum pentru a da compusul din titlu ca un produs spumă galbenă (35,47 g), identificat prin analize spectrale NMR.

Exemplul 21. Prepararea 5-acetoxi-23-{[(metoxicarbonil )carbonil ] oxi J-LL-F 28249-alfa

La un amestec de 5-acetoxi-LL-F28249-a//« (35,47 g, 53,1 mmoli), carbonat de calciu (11,04 g, 110,3 mmoli) și clorură de metilen se adaugă oxalil clorură (8,0 ml, 87 mmoli). Amestecul de reacție este agitat timp de 2 h la temperatura camerei. Amestecul de reacție este apoi răcit la 0°C și i se adaugă soluție 2 N de acid clorhidric (60 ml) ușor. Se adaugă apă la amestec și se lasă să se separe straturile. Stratul organic este diluat cu clorură de metilen, spălat secvențial cu apă, soluție 10% bicarbonat de sodiu, apă și saramură, uscat pe sulfat de sodiu anhidru și concentrat în vacuum pentru a da o spumă galbenă (41,28 g), identificată prin NMR.

Exemplul 22. Prepararea 5-acetoxi-23-beta-hieroxi-23-[(metoxi-carbonil)carbonil ]oxi-LL-F28249-alfa

La un amestec de 5-acetoxi-23-[(metoxicarbonil) carbonil oxi]-LL-F28249-«//rz (41.28 g, 55,71 mmoli) și soluție de acid formic 88% (200 ml) se adaugă dioxid de seleniu (8,6 g, 77,5 mmoli). Amestecul de reacție se agită la temperatura camerei timp de 90 min, apoi amestecul se diluează cu acetat de etil și se filtrează prin pământ diatomitic. Filtratul este răcit în baie cu gheață/acetonă. Apoi se adaugă soluție 20% hidroxid de sodiu (550 ml) și apoi se agită încet cu răcirea filtratului, în continuare. Stratul organic este separat și spălat secvențial cu soluție 10% bicarbonat de sodiu, apă. saramură, se usucă pe sulfat de sodiu anhidru și se concentrează în vacuum pentru a da o spumă oranj. Spuma este dizolvată în metanol și i se adaugă acid clorhidric 2 N (25 ml). Amestecul de reacție se agită la temperatura camerei timp de 2 1/2 h, apoi se adaugă soluție 10% bicarbonat de sodiu (30 ml). Concentrarea amestecului în vacuum duce la obținerea unui reziduu roșu închis. Reziduul este dizolvat în acetat de etil, spălat secvențial cu apă, soluție 10% bicarbonat de sodiu și saramură, se usucă pe sulfat de sodiu anhidru și se concentrează în vacuum pentru a da o spumă oranj. Spuma este cromatografiată utilizând silicagel și amestec de hexani/acetat de etil (1:1) ca eluent obținându-se compusul din titlu ca o pulbere albă (11,50 g), identificată prin analize spectrale NMR.

Exemplul 23. Prepararea 5-acetoxi-l 3 beta-( etoxicarbonil )oxi/-23-[metoxicarbonil)carbonil-oxi]-LL-F28249-alfa

Un amestec de 5-acetoxi-l3 bera-hidroxi-23-[(metoxicarbonil) carbonil-oxi] -LL-F28249-a//a (0,51 g, 0,67 mmoli) în clorură de metilen, sub pernă de azot. se tratează cu cloroformiat de etil (0,23 g, 2,12 mmoli). piridină (0.25 g, 3,16 mmoli) și 4-dimetilaminio-piridină (0,05 g, 0,41 mmoli) la temperatura camerei. Agitarea este continuată la temperatura camerei timp de 2 h, apoi amestecul de reacție este diluat cu acetat de etil. spălat secvențial cu apă, acid clorhidric 5%, apă, soluție 10% bicarbonat de sodiu și saramură, uscat pe sulfat de sodiu anhidru și concentrat în vacuum pentru a da un reziduu. Reziduul se croma1UO3O3 lografiază pe silicagel și se eluează cu amestec de hexani/acetat de etil (3:1), pentru a da compusul din titlu cu o pulbere albă (0,33 g, 59%) identificată prin analize spectrale de masă 'HNMR și ¹³CNMR.

Exemplul 24. Prapararea 5-acetoxi-13 beta-metil-LL- F 28249-alfa.

Un amestec la -78°C de 5-acetoxi-13 beta-[(etoxi-carbonil)oxi] -23-{[(metoxicarbonil) carbonil] oxi}-LL-F28249-«//i:/ (0.26 g, 0,31 mmoli) în clorură de metilen, sub pernă de azot. se tratează pe parcursul a două minute cu trimetil aluminiu (0,46 g, 6.4 mmoli). Agitarea este continuată timp de 15 min la -78°C. apoi amestecul de reacție este încălzit la 0^(,C și ținut la 0°C cu baie de gheață timp de 30 min. după care baia de gheață se îndepărtează și amestecul de reacție este agitat în continuare la temperatura camerei timp de încă 4 h.

în timp ce se răcește pe baia de gheață. încet, se adaugă apa (0,5 ml). După ce încetează emanația gazoasă, amestecul de reacție este turnat într-un amestec compus din acetat de etil și soluție 2 normală de acid clorhidric. Stratul de acetat de etil este separat și spălat secvențial cu apă. soluție 10% de bicarbonat de sodiu și saramură uscat pe sulfat de sodiu anhidru și concentrat în vacuum să dea reziduul. Reziduul este cromatografiat utilizând silicagel și eluent amestec de metilen clorură/acetonitril (9:1) obținându-se compusul din titlu ca o pulbere albă (0.144 g. 56%) identificat prin analize spectrale de masă ’HNMR și ^l3CNMR.

Urmând procedeul din exemplul 5. dar substituind trietilaluminiul cu trimetilaluminiu se obține 5-acetoxi-13-/??M-etil-LL-F28249-n//fl.

Exemplul 25. Prepararea 5-aceloxi-13 bera-meril-3-oxo-LL-F28249-alfa

La un amestec de 5-acetoxi-]3-beta

-metil-LL-F28249-ci//u (0,18 g, 0,28 mmoli), câteva bucățele de site moleculare de 4 A și acetonitril se adaugă 4-metil-morfoIin-N-oxidul (0.131 g, 1.12 mmoli). După agitarea timp de 15 min la temperatura camerei se adaugă tetrapropilamoniu perruthenat (0.047 g, 0,13 mmoli) și se continuă agitarea timp de una oră. Amestecul de reacție este filtrat prin pământ diatomitic, diluat cu acetat de etil și spălat secvențial cu apă, acid clorhidric diluat, apă, soluție 10% bicarbonat de sodiu și saramură, se usucă pe sulfat de sodiu anhidru și se concentrează în vacuum pentru a da un reziduu. Reziduul este cromatografiat utilizând silicagel și amestec clorură de metilen/acetonitril (19:1) ca eluent pentru a da compusul din titlu ca o pulbere albă (0.108 grame. 57%) identificat prin *NMR. ¹³CNMR și analize spectrale de masă.

Urmând procedeul din exemplul 6, dar utilizând 5-acetoxi -1 3-be/fl-etil-LL-F28249-fl//a pentru 5-acetoxi-13-beta— metil-LL-F28249-a//« se obține 5-acetoxi-13-Z?6r«-etil-23-oxo-LL-F28249-<:z(/<3.

Exemplul 26. Prepararea 5-acetoxi-13-beta-metil-23 -(O-metiloximei)-LLF28249-alfa

Un amestec de 5-acetoxi- I3-6eta-metiI-23-OXO-LL-F28249 alfa (0.144 g, 0,22 mmoli). acetat de sodiu (0,096 g, 1,17 mmoli), metoxilamin hidroclorură (0.092 g, 1.1 mmoli) și metanol se agită timp de o oră la temperatura camerei' Amestecul de reacție se diluează cu acetat de etil, se spală secvențial cu apă și saramură, se usucă pe sulfat de sodiu anhidru și se concentrează în vacuum pentru a da un reziduu. Reziduul se cromatografiază utilizând silicagel și hexani/acetat de etil (4:1) ca eluent obținându-se compusul din titlu ca un solid de culoare albă (0,125 g, 83%), identificat prin ’HNMR, ⁱ³CNMR și analize spectrale de masă. Urmând procedeul din cadru! exemplului 7. substituind 5-acetoxi-13-bi'm-etil-23-oxo-LL-F28249-«//t/în locul lui 5-acetoxi-13-/>t’Zii-metil-23-oxo-LL-F28249-fl//h, se obține 5-acetoxi-13-bi7a-etil-23-(0-metiloxima)-LL-F28249alfa.

Exemplul 27. Prepararea 13 beta- 5 -metil-23-(0-metiloxima)-LL-F28249-alfa

La o soluție răcită la 0°C conținând 5-acetoxi-13 metil-Z?<?ra-23-(0-metiloximă)-LL-F28249-a//i7 (0,11 g, 0,16 mmoli) și metanol se adaugă hidroxid de sodiu (0,5 10 ml, 0,50 mmoli). Agitarea se continuă la 0°C timp de 2 h, apoi amestecul de reacție se diluează cu acetat de etil, se spală secvențial cu apă și saramură și se usucă pe sulfat de sodiu anhidru și se concen- 15 trează în vacuum pentru a obține un reziduu. Reziduul se cromatografiază utilizând silicagel și hexani/acetat de etil (3:1) ca diluant pentru a obține compusul din titlu ca o spumă albă (0,079 g. 77%), 20 identificat prin ’NMR și ^I3CNMR și analize spectrale de masă.

Urmând procedeul din exemplul 8. utilizând însă 5-acetoxi-13-Z?eZfl-etil-23-(0-metioximă)-LL-F-28249 alfa în locul 25 5-acetoxi-13-/?efi7-metil-23-(O-metiloximă)-LL-F28249-«//a se obține 13-beta-et il-23(0-metil oximă)LL-F28249-alfa.

Exemplul 28. Evaluarea activității 30

Medie control - medie tratată medie control în aceste experiențe se utilizează trei repetări per tratament în scopul stabilirii eficienței.

Datele obținute sunt prezentate în rezumat în tabelul I. 35

Evaluarea compușilor de testat pentru controlul Psoroptes cuniculi (larve de ureche) în ziua dinaintea testului, în dimineața testului, compușii de testare sunt dizolvați 40 în acetonă și diluați la concentrațiile dorite. Concentrațiile trebuie calculate astfel ca să conțină 400 pl pentru fiecare antiparazitice a compușilor de testat

Activitatea antiparazitică a compușilor conform prezentei invenții la diferite concentrații ale ingredientului se determină prin următoarele exemple de testare. Rezultatele acestor teste sunt date în rezumat în tabelul 1.

Evaluarea compușilor de testat pentru controlul Trichostrogylus colubriformis la animalele cu sânge cald în aceste teste ingredientul activ este dizolvat în polietilenglicol și dimetilsulfoxid (PEG:DMSO) (1:2 v/v) în cantitate suficientă să asigure tratamentele ce livrează de la 0,0156 la 0.1250 mg/kg de compus de testare la animal.

Pentru evaluarea compușilor de testare masculi în vârstă de 5 săptămâni de gerbili se infestează cu 400-600 larve de T.colubriformis de origine ovină în ziua 0. în ziua a 7-a, gerbilii sunt cântăriți și tratamentul inițiat. Compușii sunt administrați prin îndopare în ziua a 7-a după tratament. Gerbilii sunt sacrificați în a 11-a zi după tratament, și viermii rămași sunt numărați. Procentajul eficienței este calculat prin comparare cu viermii numărați la animalele tratate cu cei de la animalele de control netratate infectate utilizând formula de calcul:

x 100 = % eficiență cantitate ce se plasează pe fiecare hârtie de filtru. 400 μΙ din această soluție se pipetează pe discul de deasupra (3,7 cm diametru) și pe cel de la bază (de sub el) (3,5 cm diametru) de hârtie de filtru ce se pune apoi pe un platou ceramic pentru a se usca. (Notă: acest lucru se poate efectua sub o hotă acoperită). Hârtia de filtru are o parte netedă și una cu asperități. Soluția de testat trebuie s» se aplice pe partea cu asperități ce se plasează în sus în timpul uscării. Când s-au uscat, cele două discuri sunt plasate în cutie Petri cu partea aspră una spre cealaltă, separate printr-o bucățică mică de hârtie îndoită evantai. Cutiile Petri sunt ținute la temperatura camerei peste noapte, dacă s-au pregătit înainte de testare. Câte o soluție standard 5 de 0,01, 0,1 și 1,0 μΐ/crn* se introduce pentru fiecare exemplar de testare.

Coji (conținând căpușe) se colectează din urechile infestate ale șoarecilor în dimineața testului. Acest material se intro- 10 duce în cutiile Petri mari sub iluminare cu mărire. Căpușele migrează din coji și se colectează ușor cu vârful unui ac de disecție sau cu o pereche de pensete.

Vârful hârtiei de filtru din fiecare cutie 15 este îndepărtat și se introduc 12 căpușe pe discul de dedesubt și se repune discul de hârtie de deasupra care a fost îndepărtat. înainte de repunerea capacului cutiei Petri marginile cutiei sunt date cu vaseli- 20 nă pentru a capta orice căpușe ce ar putea scăpa.

Pentru evaluările corecte se efectuează de patru ori testul pentru fiecare doză, iar numărătorile se efectuează la 2 și 4 h și 25 la 2 și 24 h.

După ce s-au adăugat căpușele în cutiile Petri, pentru fiecare experiență

Numărul total de căpușe moarte x 100 = % eficiență

Numărul total de căpușe Datele obținute sunt prezentate în tabelul 3.

Evaluarea activității atiparazitice a compușilor de test

Tabelul 3

Compus	T.Colubriformis mg/kg	P. Cuniculi microorgantsme/cm
	0.125	0,0625	0,0313	0.0156	4,0	1.0	0,1	0,01
13-/7ew-metil 23-(O-metiloxim)-LL-F-28249-ii//u 13-/>em-etil-23-(O-metiloxim)LL-F-28249-λΖ/λ	99 95	98	53	17	100 91	98	98	100

acestea se introduc în tăvi care se introduc la rândul lor în saci de plastic cu câteva șervețele umede și sunt ținute la temperatura camerei.

După 4 sau 24 h, cutiile sunt examinate în scopul de discernare după cum urmează:

1. Se deschide cutia cu atenție, se îndepărtează hârtia de filtru de deasupra și se pune de o parte.

2. Se desenează un cerc mic aproximativ 1/2 cm în diametru pe hârtia de filtru de dedesubt utilizând un creion moale.

3. Utilizând un dispozitiv de pipetare, ușor. se umezește zona din jurul cercului.

4. Se transferă toate căpușele din cutie în acest cerc. Se urmărește cu atenție - pe acoperiș, hârtia de filtru de deasupra și cea de dedesubt să nu fie alte căpușe.

5. Se numără și se înregistrează numărul de căpușe din cerc.

6. Se repune capacul și se pune de o parte cutia Petri.

7. După aproximativ 15 min, se numără căpușele rămase în cerc (acestea sunt căpușele moarte).

8. Se calculează și înregistrează numărul de căpușe vii.

9. Se calculează procentul de eficiență după cum urmează:

Exemplul 29. Evaluarea activitălii insecticide și acaricide a compușilor de testat în următoarele evaluări, soluțiile de testare sunt preparate prin dizolvarea compusului de test în acetonă 35% în apă la o concentrație de 10.000 ppm. Diluțiile următoare sunt făcute cu apă. dacă se cere.

Heliothis virescens. ou, viermele mugurelul de tutun

O frunză tânără de bumbac de aproximativ 6-7 cm lungime se scufundă în soluția de testat cu agitare timp de aproximativ 3 s. Ouăle se colectează cu un tifon și tifonul este tăiat în pătrate de la 20 mm conținând aproximativ 50 - 100 ouă fiecare (6 - 30 h vârstă). Un pătrat de tifon cu ouă este de asemenea scufundat în soluția de testare și plasat pe frunza netratată. Combinația este plasată sub un acoperiș pentru uscare, apoi plasată pe un cornet de hârtie de 8 oz, în care s-a introdus un fitil dentar umed de 5 cm lungime. Se acoperă cu un plastic transparent și totul se păstrează 3 zile, după care se numără exemplarele pentru stabilirea mortalității.

Aphis fabae, fază mixată, afida fasolei

Ghivece conținând plante unice de nastrutium (Tropaeolum sp.) de înălțime aproximativ 5 cm. sunt infestate cu aproximativ 100-200 afide 1 zi înainte de test. Fiecare ghiveci este pulverizat cu soluția de testare timp de două rotiri pe un podiu rotativ cu 4 rpm sub un acoperiș, utilizând un atomizor De Vilbiss. Tipul pulverizatorului este astfel încât vârful este direcționat să acopere complet plantele cu soluția stropită cât și afidele. Ghivecele pulverizate sunt puse de o parte pe tăvi emailate albe și ținute două zile, după care se estimează mortalitatea.

Tetranichus urticae (tulpină P-rezistenlă) păianjen săritor bipătat

Plante de fasole varietatea Sieva lima cu primele frunze crescute la 7-8 cm sunt selectate și replantate câte una în fiecare ghiveci. Din frunză se taie o bucată mică din zona coloniei principale a exemplarelor de căpușe (păianjeni) și se plasează pe fiecare frunză a plantelor ce urmează a fi testate. Acest lucru se face cu aproximativ 2 h înainte de tratament, pentru a permite căpușelor să se miște pe plantele ce urmează a fi testate și de a depune ouă. Dimensiunea pieselor tăiate este variabilă funcție de numărul de căpușe dar astfel încât să se asi20 gure aproximativ 100 exemplare per frunză. La timpul tratamentului, bucata de frunză utilizată pentru transferarea căpușelor este îndepărtată și aruncată. Plantele infestate cu căpușe (păianjeni) sunt cufun25 date în soluția de testare timp de 3 s cu agitare și puse la uscat sub acoperiș. Plantele sunt ținute timp de 2 zile îninte de a estima moartea exemplarelor adulte folosind prima frunză. A doua frunză este ținută pe plantă încă cinci zile, după care se face observarea constatativă a morții ouălelor și/sau nimfelor noi apărute.

= nici un efect = 10- 25% mortalitate = 26 - 35% mortalitate = 36 - 45% mortalitate = 46 - 55 % mortalitate

Scara de evaluare

- 56 - 65% mortalitate

- 66 - 75% mortalitate = 76 - 85% mortalitate = 86 - 99% mortalitate = 100% mortalitate

Datele obținute sunt prezentate în rezumat în tabelul 4.

Tabelul 4

Evaluarea activității insecticide și acaricide a compușilor de testat
Compus testat	Viermele tutunului ouă. ppm	Afidă de fasole, ppm	Căpușe rezistente P, ppm
	100	10	10	1	0,1
13-he?a-metil-23- (O-metiloximă)- LL-F28249-u//a 13-beta-et'\ 1-23-(0metiloximă)-LL-F-	8	8	9	9	9
28249-«//«	9	9	5	9	8

Revendicări

Claims (3)

1. Revendicări

   1. Derivați de 13-alchil-23 imino și i 3-halo-23-imino ai compușilor LL-F28249, caracterizați prin aceea că au formula structurală I ;

   în care:

   R| este metil, etil sau izopropil;

   R₇ este hidrogen și R₈ este OR₂, sau când sunt luați împreună cu atomul de C la care sunt atașați. R₇ și R₈ reprezintă C = O,

   Rt este hidrogen, alchil C,-C₄. sau

   O ~

   I!

   -C-R₄ :

   R₄ este hidrogen, alchil -C,-C₄. haloalchil -C|-C₄. alcoxi -C|-C₄. fenoxi, alcoximetil -C₍-C₄, fenoximetil. sau fenil eventual substituit cu 1-nitro, 1-3 halogeni,

   5 1-3 alchil -C,-C₄, sau 1-3 alcoxi -C,-C₄;

   R₃ este hidrogen, metil sau etil;

   X esle alchil -C[-C₄ sau halogen; W este oxigen sau N-Y:

   Y este OR_S sau NHR₆;

   10 R_s este hidrogen, alchil -C,-C₄, alcoximetil-C|-C₄, alcanoil-Cj-C₄, benzii, fenil, sau acil-C|-C₄;

   R₆ este acil-C]-C₄, alchil -Cj-C₄ sau benzoil; și figura triunghiulară punctată cu

   15 oxigen la C_?6 - C-,₇ indică că acolo este

   55 56 prezentă fie o legătură dublă, fie un epoxid; cu condițiile că atunci când X este halogen, R₅ este alchil Cj-Cj sau acil-Cj-C₄, iar R₆ este acil; și atunci când X este alchil -Cj-C₄. C^-C-,η este prezent ca legătură dublă.
2. 2. Compus, conform revendicării 1. caracterizat prin aceea că se utilizează în prevenirea, tratamentul sau controlul unei infecții endo sau ectoparazitică la animale cu sânge cald, prin administrarea unei doze de 0,02 ... 0,50 mg/kg corp compus cu formula I.
3. 3. Metodă de protecție a culturilor, arborilor, arbuștilor, a cerealelor depozitate și a plantelor ornamentale de atacul moli5 melor produse de insecte, acaride și nematode, caracterizată prin aceea că se aplică pe culturile, arborii, arbuștii, cerealele depozitate și plantele ornamentale a un compus având formula structurală din

   10 revendicarea 1, într-o cantitate de cca. 5,0 până la 200 g/ha.