PT98433B

PT98433B - Processo para o diagnostico da presenca de cancro em seres humanos usando um ensaio de ressonancia magnetica nuclear

Info

Publication number: PT98433B
Application number: PT98433A
Authority: PT
Inventors: Eric T Fossel
Original assignee: Beth Israel Hospital
Priority date: 1990-07-24
Filing date: 1991-07-24
Publication date: 1999-01-29
Also published as: FI930177A0; AU8413991A; NZ239080A; WO1992001419A1; PT98433A; ZA915771B; CA2087171A1; JPH05509162A; IE912581A1; FI930177A

Description

HISTORIAL DA INVENÇÃO

Campo Técnico da Invenção

A presente invenção refere-se a um processo de diagnóstico e a um dispositivo para detectar a presença de cancro num paciente vivo.

Estado da Técnica

São bem conhecidas pelo estado da técnica as experiências de utilização de ressonância magnética nuclear (RMN) para ajudar a alcançar o diagnóstico clínico de cancro.

Damadian foi o primeiro a prpôr um uso médico da ressonância magnética nuclear (RMN) e fê-lo para detectar a malignidade de tecidos. Ver R. Damadian, Tumor Detection By Nuclear Magnetic Resonance, Science 171:1151-1153 (1971). A Memória Descritiva da Patente Americana US 3.789.832 publicada em nome de Damadian engloba um dispositivo e um processo para a aplicação de ressonância magnética nuclear a amostras removidas por cirurgia, para medição de T e T^ para tempos de relaxe protónico, cujos valores, comparados com os valores obtidos com tecidos saudáveis, foram considerados como indicadores de presença de cancro. As Patentes Americanas US 4.411.270 e US 4.354.499, emitidas em nome de Damadian, descrevem um dispositivo e um processo para detectar cancro com imagem de RMN e visualizando os espécimenes do conjunto corporal.

Vários outros investigadores registaram também que os tempos

de	relaxe	da ressonância	magnética nuclear	(Ti	) para os
protões da	água em orgãos	de	animais	que	são	portadores
de	tumor,	possuem valores	mais	elevados	do	que	os valores

de T^ correspondente à estrutura da água em orgãos de animais

saudáveis .	Veja-se Frey et al. , J. Natl.	Câncer Inst. 49,
903 (1972);	Inch et al, J. Natl. Câncer Inst	. 52, 353 (1974);
Iijima et	al, Physiol. Chem. and Physics	5, 431 (1973);
e Hazlewood	et al, J. Natl. Câncer Inst. 52,	1849 (1974).

Hoje, apesar das incertezas no que se refere mecanísticos, que ocorrem em alterações e

em de sabido células sinal jjft 1 detalhes of and

The s

que as modificações biofísicas, malignas, resultam frequentemente de ressonância magnética nuclear (RMN) protónica. Ver D.G. Taylor et al, A Review

Magnetic Resonance Response of Biological Tissue Applicability to The Diagnosis os Câncer by NMR Radiology, Computed Tomography, 5:122-133 (1981). Tais alterações formam a base física para detectar tumores por imagem de RMN protónica. Ver R. Zimmerman et al, Cerebral NMR: Diagnostic Evaluation of Brain Tumors by Parcial Saturation Technique with Resistive NMR, Neuroradiology 27:9-15 (1985) e K.Ohtomo, Hepatic Tumors: Differentiation by Transverse Ralaxation Time (Τ^) °f Magnetic Resonance Imaging, Radiology 155:421423 (1985). No entanto, a imagem RMN não é apropriada para aplicações intensivas como um teste de visualisação para a malignidade devido a factores económicos e de acesso.

Os estudos de RNM protótica em tumores excisados, bem como em plasma ou soro, de pacientes e animais experimentais apresentaram frequentemente fiferenças nos parâmetros de relaxe T , T^ e t^ * sendo T^ * uma combinação do T^ * de relaxe intrínseco e o relaxe induzido em campos magnéticos in-homogénicos, como uma função de malignidade. Tais descobertas foram registadas pelos seguintes:

L. McLachlan, Cancer-induced Decreases in Human Plasma

Proton NMR Relaxation Rates, Phys.__Med.__Biol. 25:309-315 (1980) ;

F. Smith et al, Nuclear Magnetic Resonance Imaging of the Pancreas, Radiology 142:677-680 (1982);

P. Beall et al, The Systemic Effect of Elevated Tissue

L ' 'S·' and Serum Relaxation Times for Water in Animais and Humans with Cancers, NMR__Basic__Principies__and__Progress , P. Diehl et al, Eds. 19:39-57 (1981);

R. Floyd, Time Course of Tissue Water Proton Spinlattice

Relaxation in Mice Developing Ascites Tumor, Câncer__Res^

34: 89-91 (1974);

C. Hazlewood et al, Relationship Between Hydration and Proton Nuclear Magnetic Resonance Relaxation Times in Tissues of Tumor Bearing and Nontumor Bearing Mice: Implications for Câncer Detection, J_A__Natl.__Câncer__Inst. 52:1849-1853 (1974); e

R. Klimek et al, A Discussion of Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Relaxation Time of Tumors in Terms of Their Interpretation as Self-organizing Dissipative Structures, and of

Their Study of NMR Zeugmatographic Imaging, Ginekol__Pol.

52: 493-502 (1981).

No entanto, devido à sobreposição extensiva às pequenas diferenças entre o significado estas metodologias não são clinicamente úteis.

de grupos e dos grupos,

Enquanto a maior parte das técnicas anteriores acima mencionadas descrevem aplicações de RMN a análises de tecidos, é também conhecido o uso como objecto de fluídos corporais para tais análises. Tal é descrito, por exemplo, por Beall et al., supra.

As técnicas anteriores e processos que abaixo se referem baseiam-se na observação do sinal RMN compósito, que emana de todos os protões em amostras de tecido ou sangue. Este sinal compósito é dominado pelos protões da água, obscurecendo

o sinal RMN de outros constituintes da amostra que compreendem protões. De facto, as técnicas anteriores acreditavam que a correlação entre amlignidade e alterações observadas nos parâmetros RMN se devia ao facto de haverem alterações na estrutura da água, segundo Frey et al., supra.

Noutras aplicações de espectroscopia RMN protónica, -se a forma de suprimir o sinal do dissolvente água), numa amostra.

descobriu(tal como

Descobriu-se que os componentes do espectro RMN, que possuíam um valor previsível significativo, podiam ser mascarados por meio de outros materiais na amostra. Eliminando a máscara, como tal eliminando o sinal da água, o espectro previamente mascarado destes componentes era revelado. Na Memória Descritiva da Patente Americana 4.912.050 intitulada Process for the Screening of Câncer Using Nuclear Magnetic Resonance, (Processo para a Visualização de Cancro usando Ressonância Magnética Nuclear), emitida para Eric T. Fossei, em 27 de Março de 1990, foram incorporadas tais descobertas num processo credível de diagnóstico de presença de cancro num paciente vivo. De acordo com essa invenção, uma amostra de um fluído orgânico dum paciente é submetida a espectroscopia de ressonância magnética nuclear para produzir um espectro de ressonância magnética nuclear. Selecciona-se a linha de ressonância gerada por um componente, que não ê a água, da amostra e mede-se a espessura completa desta linha de ressonância, por exemplo, a meio da sua altura. A espessura completa então medida provou ser uma medida estatisticamente válida para a presença ou ausência de cancro no paciente.

ensaio acima descrito de RMN protónica do plasma com água suprimida, descrimina pessoas com cancros não tratados

das outras pessoas, com uma precisão superior a 90%. Nenhum outro ensaio não-invasivo para o cancro atingiu valores de precisão próximos deste nível. Foram também obtidos, no entanto, resultados positivos falsos. De acordo com uma invenção mais recente, a Memória Descritiva da Patente Americana n² 4.918.021 ('021) intitulada Process for the Detectation of Câncer emitida para Eric T. Fossei em 17 de Abril de 1990, descobriu-se que a fonte maioritária de resultados positivos falsos correspondia a pessoas que possuiam níveis elevados de triglicéridos no plasma. Consequen temente, de acordo com a Patente '021, um processo e dispositivo foram desenvolvidos para aperfeiçoar a precisão dum processo não invasivo para determinar a presença de cancro num paciente vivo usando RMN C-13.

No passado, de acordo com os ensinamentos da Patente '021, no caso de se obter uma leitura positiva de acordo com a presente invenção, determina-se o nível de triglicéridos. Se o nível de triglicéridos fôr elevado, o fluído corporal do paciente é então submetido a uma espectroscopia de ressonância magnética nuclear. 0 espectro de ressonância dos espectros C-13 do plasma descrimina os resultados positivos, verdadeiros e falsos, para determinar a presença ou ausência de cancro no paciente com um grau de precisão mais elevado do que aquele que era previamente possível. 0 RMN C-13 apresenta-se como taxa de ácidos gordos com uma ligação dupla versus ácidos gordos com duas ligações duplas. No entanto, a C-13 ê onorosa e, como tempo de processamento, requer um tempo relativamente longo.

A presente invenção é um processo aperfeiçoado para a visualização da presença de cancro que eliminará a necessidade

5-SÍ3 de recorrer ao C-13, para visualizar os positivos falsos como é descrito pela Patente '021. A vantagem da presente invenção consiste em tempo relativamente curto de decurso do ensaio e diminuição relativa de custos.

Estes e outros objectivos e características da presente invenção tornar-se-ão evidentes para os peritos na técnica a partir da leitura da descrição da invenção, feita em conjunto com os desenhos que se seguem.

SUMARIO DA INVENÇÃO

Consequentemente, o principal objectivo da presente invenção ê o de desenvolver um processo para confirmar um diagnóstico por um processo de RMN protónica, com supressão de água, sobre a presença de cancro em pacientes vivos.

Um outro objectivo da presente invenção é o de desenvolver um processo para diferenciação de resultados positivos falsos e verdadeiros num ensaio de RMN protónica, com supressão de água, no diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo.

Um outro objectivo da invenção é ainda o de desenvolver um processo para detectar a presença de cancro num paciente, o qual pode ser realizado numa amostra dum fluído orgânico dum paciente.

Mais um objectivo da presente invenção é o de incrementar um processo para o diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo, o qual ê mais preciso do que os processos previamente conhecidos.

De acordo com a presente invenção, uma amostra dum fluído orgânico dum paciente é submetida a espectroscopia de ressonância magnética nuclear, para produzir um espectro de ressonância magnética nuclear. A linha de ressonância produzida por um componente que não é a água, da amostra é seleccionada, e a área sob o pico da linha de ressonância ou a intensidade do pico é medida. A área ou intensidade então medida, comparada com o controlo padrão, confere uma indicação estatisticamente fiel da presença ou ausência do cancro no paciente.

Norrnalmente, a proporção das ressonâncias H-l a 2,0 ppm (alílico) aos de 2,8 ppm (bis-alílico) está compreendida entre 2,0 e 2,5. Este aumenta porque, em pessoas normais, a proporção de ácidos gordos poli-insaturados para ácidos gordos mono-insaturados é superior a 9:1.

2.0 2.8	2.0	2.0	2.0
ppm ppm	ppm	PPm	PPm
Ligações duplas de	ácido	Ligações	duplas de ácido
linoleico			oleico

ácido gordo poli-insaturado mais abundante nas lipoproteínas plasmáticas é o ácido linoleico e o ácido gordo mono-insaturado mais abundante ê o ácido oleico. Em pacientes com cancro, onde ocorre a peroxidação dos lípidos, haverá uma diminuição do ácido linoleico e de outros ácidos gordos poli-insaturados, relativamente aos ácidos gordos monossaturados, porque eles são mais reactivos com radicais livres, do que os ácidos gordos mossaturados. Tal origina uma diminuição na ressonância a 2,8 ppm e um aumento da proporção das

das ressonâncias 2,0 ppm/2,8 ppm. As taxas elevadas acima de 2,5 indicam a presença de cancro. A ressonância a 2,0 e a 2,8 ppm estão ilustradas na Figura 2.

Nas realizações preferidas, o fluído orgânico é: sangue, fluído da espinha dorsal, ou plasma da medula óssea; no entanto, o plasma sanguíneo ou o soro são espeeialmente vantajosos. Os resultados positivos falsos nos espectros da RMN protónica inicial, devido a hipertriglicéridemia, podem ser distinguidos nos espectros resultantes das lipoproteínas peroxidadas, medindo a proporção das referidas lipoproteínas e comparando-as com um padrão.

Breve Descrição dos Desenhos

A Figura 1 é um espectro	RMN 360	MHz típico	de	componentes
diferentes de água duma	amostra	de plasma	de	um controlo
saudável de acordo com a	presente	invenção;
A Figura 2 é uma vista	ampliada	de leitura	da	amostra da

Figura 1, apresentando a região do espectro que compreende as ressonâncias a 2,0 ppm e a 2,8 ppm; e

A Figura 3 mostra os resultados do estudo realizado usando o processo da presente invenção.

Descrição das Realizações Preferidas

No início da invenção descrevem-se os seus aspectos globais mais vastos, seguindo-se agora uma descrição mais detalhada. A presente invenção é um processo para detectar a presença de cancro num paciente vivo. De acordo com a presente invenção uma amostra dum fluído orgânico dum paciente é submetida a espectrometria de ressonância magnética nuclear para produzir um espectro de ressonância magnética nuclear. Devido ao facto de os componentes do espectro RMN, que possuem um valor significante previsível, poderem ser mascarados por outros materiais na amostra, a máscara ê eliminada para produzir o espectro RMN. Selecciona-se a linha de ressonância produzida por um componente, diferente de água, da amostra e mede-se a espessura total desta linha de ressonân cia, por exemplo, a meio da sua altura, para se obter uma medida credível da presença ou ausência de cancro no paciente. A técnica acima é descrita na Patente '050 de Fossei, cujos ensinamentos são aqui incorporados como refrência.

No caso de serem obtidas leituras positivas, esta leitura pode indicar a presença de cancro num paciente, ou pode ser uma leitura positiva falsa. Descobriu-se que uma fonte maioritária de leituras positivas falsas corresponde a pessoas com níveis elevados de triglicéridos plasmáticos.

Portanto, a fim de diferenciar as leituras positivas falsas das verdadeiras, as amostras previamente ensaiadas são submetidas a uma segunda espectrocopia de RMN protónica, para os que possuem níveis elevados de triglicéridos. Os resultados falsos devido â hipertriglicéridemia e, pelo contrário, a presença de cancro num paciente, podem ser determinados com precisão a partir das proporções resultantes das lipoproteínas peroxidadas, como se descobriu nos espectros resultantes em comparação com o padrão.

Numa realização importante da presente invenção, a espectroscopia de RMN protónica é inicialmente realizada numa amostra a ser ensaiada. 0 espectro de RMN protónica, diferente de água, obtido em plasma sanguíneo, é dominado pelas ressonâncias dos lípidos de lipoproteínas plasmáticos. Tal como se ensina, de acordo com a Patente '050 de Fossei, sem a supressão de água, estas ressonâncias diferentes de água são virtualmente sobreponíveis com a água. Sinais próximos permitem a observação de ressonâncias de algumas moléculas associadas a componentes de fluídos corporais diferentes de água, a campos magnéticos elevados, mesmo em presença de ressonância de água. No entanto, a capacidade dos espectrómetros RMN modernos de suprimirem quase totalmente a ressonância protónica da água, facilitaria a leitura. 0 espectro RMN protónica, diferente de água, do plasma, é essencialmente o das lipoproteínas plasmáticas e de algumas moléculas de baixo peso molecular.

processo da presente invenção opera em qualquer fluído orgânico que compreenda lípidos, sangue ou plasma da medula óssea. Podem ser usados plasma, sangue, ou soro. Enquanto o ensaio pode ser realizado em um qualquer fluído corporal que compreenda lípidos, os trabalhos até aqui realizados apenas focavam o plasma sanguíneo. No sangue os lípidos, inclusivé colesterol, triglicéridos e fosfolípidos estão presentes sob a forma de lipoproteínas. Os ensaios para o cancro serão tipicamente realizados in__vitro, de preferência em soro ou plasma.

fluído seleccionado, dum paciente ou doutras pessoas suspeitas, para ser visualizado para o cancro é exposto a um campo magnético e a energia da radio-frequência para produzir um sinal de ressonância magnética nuclear que é então processado para obter um valor para o parâmetro seleccionado, por exemplo, ^^/2.’ P^ara protões metil-lipídicos

ou metileno-lipídicos. Um intervalo relativamente largo de frequências pode ser usado, por exemplo, 60 MHz e mais elevados; 360 MHz ou mais é uma frequência preferida. Se o custo não é um factor, a frequência preferida ê de 500 MHz .

A Figura 1 mostra um espectro protónico com supressão de água dum controlo saudável, e a Figura 2 mostra um espectro ampliado da mesma amostra .-apresentando a região de 2.0 ppm a 2,8 ppm (partes por milhão de frequência de ressonância). As ressonâncias na região de 2,o a 2,8 ppm aumentam para o grupo de ácidos gordos dos lípidos lipoproteicos. Consequentemente, nas realizações preferidas, a presente invenção usa uma das numerosas técnicas convencionais para supressão de água, isto é, técnicas para supressão de água no sinal da RMN protónica. Têm sido descritas numerosas técnicas para suprimir o sinal da RMN protónica da água noutros contextos. Estas técnicas foram reveladas por Fossei na Patente ¹050.

De acordo com os ensinamentos da Patente '050 de Fossei, a espessura da linha a meio da altura das moléculas de ressonância, por exemplo, grupos metilo e metileno, associados com os lípidos das lipoproteinas plasmáticas é tratada como sendo a variável de interesse. A espessura total da meia altura (espessura da linha) duma linha de ressonância RMN é inversamente proporcional ao tempo de relaxe spin-spin aparente (T^*), isto é W= 1 ψ * valor detectado para o parâmetro seleccionado é então comparado com o parâmetro correspondente para os controlos saudáveis. Numa realização preferida, os valores para metilo

e metileno são mediados e um valor médio de 33Hz ou menos e uma frequência protónica de 360 MHz (8,45T) ou 400 MHz (9,40T) é tomado como indicador de malignidade.

Se se obtiver uma leitura positiva do espectro de ressonância com água suprimida duma amostra de plasma dum paciente, realiza-se um segundo nível de ensaio para confirmar o diagnóstico. Primeiro, realiza-se um ensaio convencional, geralmente denominado análise de triglicéridos, para determinar o teor de triglicéridos do paciente. Se o nível de triglicéridos for normal, a leitura positiva da espectroscopia RMN protónica, com água suprimida, é verdadeiramente positiva e indica a presença de cancro no paciente. Se o teor de triglicéridos é superior ao normal, realiza-se um segundo espectro de RMN protónica na amostra de plasma obtida a partir do paciente, no sentido de diferenciar se o resultado é falsamente positivo ou verdadeiramente positivo.

Os resultados positivos falsos devidos à hipertriglicêridemia podem ser confiavelmente distinguidos dos resultados positivos verdadeiros por diferenças substanciais na proporção de lipoproteínas peroxidadas no espectro resultante. Portanto, a amostra de plasma já obtida no paciente suspeito, e a ser visualizada é exposta a um campo magnético e a uma energia de frequência radio para produzir um sinal magnético nuclear, que é então processado para se obter um segundo valor de RMN protónica.

de Fossei '021 região olefínica, dois picos, um aproximadamente separados entre

De acordo com os ensinamentos da Patente (ou Carbono 13), inicialmente examina-se a 120ppm - 140ppm, do espectro. Aparecerão a aproximadamente 128-129ppm e outro a 130-131ppm, aparecendo os referidos picos

si por cerca de 2 ppm a proporção de ressonância na região principal de 128 ppm à de 130 ppm é indicativa. Na leitura de plasma dos controlos normais e de pessoas com doenças que não cancro, a proporção da altura dessas duas ressonâncias (128/130 ppm) é de 0,9 ou superior, isto é, o pico de ressonân cia a 128 ppm é aproximadamente igual ou mais alto do que a 130 ppm. As alturas dos picos são medidas com uma régua ou computador desde o centro da linha de referência ao topo do pico. Nas leituras do plasma de pacientes com cancro não tratado, a proporção das alturas dos picos é inferior a 0,9, ou o pico de ressonância a 130 ppm é mais alto pelo menos 10%, do que o pico a 128 ppm. Deve notar-se que, em pacientes com hipertriglicéridemia, a proporção das alturas de ressonância (128/130 ppm) é a igual aos valores de controlo normal.

As alterações na região olefínica dos espectros de pacientes çom cancro não tratado podem ser explicadas pelo aumento das lipoproteínas peroxidadas.

ácido oleico é um ácido gordo monossaturado e é produzido pelo organismo humano. 0 ácido linoleico é um ácido gordo poli-insaturado, possuindo duas ligações duplas e não é produzido pelo organismo humano, mas sim obtido pelo consumo. A dieta de ácidos gordos inclui ácidos gordos poli-insaturados, tais como ácido linoleico. 0 pico de ressonância na região principal de 130-131 ppm evidencia, quer o ácido oleico, quer o ácido linoleico no paciente.

Descobriu-se que a altura destes picos de ressonância, em relação um ao outro, está afectada por certas condições do paciente. Por exemplo, pessoas com níveis triglicéridos elevados possuem uma elevada proporção de ácido linoleico para os níveis de ácido oleico. Nos pacientes com cancro não tratado descobriu-se que possuem níveis baixos de ácido linoleico no seu organismo, presumivelmente porque o cancro origina uma oxidação de ácidos gordos poli-insaturados, incluindo o ácido linoleico. Este facto é consistente com a hipótese de que os lípidos são oxidados por radicais hidroxilo livres em pacientes com cancro, pois os ácidos gordos poli-insaturados são mais susceptíveis à oxidação.

Consequentemente, se o paciente possuir, quer triglicéridos elevados, quer um cancro não tratado, o pico de ressonância a 130 ppm será superior, reflectindo a diminuição de ácido linoleico em ambos os picos. Se, no entanto, o pico a 128 ppm não ê mais pequeno do que a 130 ppm em mais do que 7%, não ocorreu depressão, ou depressão insignificante dos níveis de ácido linoleico e o resultado positivo obtido do espectro da RMN protónica é confirmado como resultado positivo falso e não se revela a presença de cancro.

Além disso, a região espectral entre 48 ppm e 80 ppm é bastante mais complexa num plasma de cancro não tratado, do que num controlo normal ou num plasma com hipertrigliceridemia. Por mais complexo entenda-se como existindo mais picos de ressonância na região. Um pico de ressonância é contado se a sua altura for 50% ou mais superior ao ruído de fundo durante o período de ensaio normal. Tal como os peritos na técnica sabem, são colhidos os dados mais vastos, os ruídos desaparecerão e os picos revelar-se-ão mais claramente .

Estes parâmetros incluem o tamanho do tubo de amostra, a espessura da vibração, a taxa de repetição de vibração, e a multiplicação exponencial da queda de indução livre

por diferentes factores. Por exemplo, é óbvio para o perito nesta técnica que, quanto maior for a amostra ensaiada, tanto mais que rapidamente será obtido o espectro de qualidade adequada. Outras alterações para as condições aqui dadas serão evidentes para o perito nesta técnica.

Ê possível, como com o RMN C-13 consoante é praticado na Patente '021 de Fossei, que a espectroscopia de acordo com o processo da presente invenção possa ser realizada inicialmente num paciente como processo de diagnóstico da presença de cancro, sem que primeiro se realize a espectros copia RMN protónica, tal como aqui é descrita. Isto ainda não foi, no entanto ensaiado.

Qualquer moderno espectrómetro RMN convencional pode ser usado na prática da presente invenção. Nas realizações preferidas, ê usado um espectrómetro RMN com um íman em resistência de campo constante e o sinal RMN é transformado segundo Fourier, com a linha de largura total a meio da altura para as ressonâncias protónicas dos grupos metilo e metileno e então as ressonâncias RMN protónicas das lipoproteínas a 2,0 e 2,8 ppm, que são os parâmetros RMN de interesse

Tal como se nota na Patente '050 de Fossei, a preparação e execução correctas da amostra são essenciais para realizar uma medição bem sucedida sobre plasma. 0 sangue é colhido em tubos que compreendem 70 1 de uma solução de Na^EDTA a 15%.

sangue foi mantido a 4°C atê ser centrifugado. 0 plasma foi separado e armazenado a 4 C atê se realizarem as análises RMN. As amostras de plasma nunca congelaram, pois o congelamento destrói a integridade estrutural dos lípidos lipoproteicos. As amostras que não revelaram qualquer sinal visível de hemólises foram excluídas.

Na forma de realização preferida, numa resistência de campo magnético

obtiveram-se de 360 MHz espectros ou mais.

Outros ensaios foram conduzidos com sucesso a temperaturas compreendidas entre 30°C e 37°C. As amostras foram iluminadas individualmente na área de decadência de indução isenta

de protões, atê	à largura	total a meio	da altura	de ressonân-
cia da água ser	de 4Hz ou	inferior. Ê	óbvio	que	a iluminação
cuidadosa é um	componente assumido	para	uma	boa técnica

laboratorial de RMN. Além disso, em condições experimentais, os resultados rigorosos requerem uma revisão cuidadosa dum registo médico do paciente para chegar â classificação do paciente.

De acordo com

Patente '050 de Fossei, o espectrómetro compreende meios para seleccionar pelo menos um e, de preferência, uma pluralidade tal como duas linhas de ressonância RMN no espectro RMN da amostra e, na primeira fase da presente invenção, medindo a largura da linha ou linhas então seleccionadas. De preferência, a largura da linha é medida a meio da altura da linha, mas tal não é necessário e a largura da linha pode ser medida a uma qualquer fracção pré-determinada da altura da linha em questão. Prefere-se a medição a meio da linha de altura, porque esta é uma medida padrão realizado no campo na espectrometria RMN. 0 espectrómetro compreende também meios para a medição dos picos seleccionados, úteis para o exame do segundo espectro da RMN protónica. 0 espectrómetro é também de construção convencional e compreen de, além de toda a sua outra estrutura, um meio para armazenar valores ou intervalos de valores. Na forma de realização intensidade, preferida, medida ou é uma area derivada ou que directamente partir duma pluralidade medições directas, ê comparada com um valor ou de valores que se esperam obter com pacientes de tais intervalo normais, isto ê, pacientes isentos de cancro. De acordo com a invenção, o espectrómetro compreende também meios para classificar as áreas medidas ou derivadas das ressonâncias 2,0 ppm ou 2,8 ppm ou intensidades de 2,0 ppm ou 2,8 ppm e número de picos como normal (isto ê, isentos de cancro) ou anormais (isto é, cancerosos) com base na Tal pode ser feito por comparação, subtracção, de qualquer outra operação matemática adequada.

informação memorizada.

ou através

Na realização preferida, os meios de selecção e medição são prê-ajustados para medir as áreas ou intensidades das ressonâncias a 2,0 ppm e 2,8 ppm das lipoproteínas peroxidadas no espectro. Tal pode incluir a supressão do sinal da água do espectro RMN da amostra, ou pode alternativamente ser feita directamente quando o espectrómetro é suficientemente sensível para o fazer.

EXEMPLO

Neste exemplo, aplicou-se o processo da presente invenção a um grupo de 40 pacientes. As amostras foram ensaiadas de acordo com o processo da presente invenção. Os resultados são apresentados na Figura 3 e apresentam os grupos dessas amostras que apresentam malignidade. Mediu-se a área das linhas de ressonância de acordo com o processo da presente invenção. Os resultados revelam que a proporção das amostras ensaiadas (2,0 ppm a 2,8 ppm) é um indicador de presença de cancro.

A invenção pode ser realizada por meio de outras formas específicas sem que se saia do âmbito ou das características essenciais da presente invenção.

As realizações presentes são, consequentemente, consideradas em todos os aspectos como sendo ilustrativas e não restritivas, sendo o âmbito da invenção indicado pelas reivindicações anexadas, mais do que por esta descrição, e todas as alterações que se enquadrem no significado e no campo ou equivalência das reivindicações são, consequentemente, entendidas como sendo abrangidas pelas citadas reivindicações.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1-. Processo para o diagnóstico da presença de cancro em seres humanos, caracterizado pelo facto de compreender as seguintes operações:

a) submeter-se uma amostra de um componente do sangue de um paciente a ser diagnosticado a um ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear protónica de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear de que foram suprimidos os sinais indesejáveis;

b) escolher-se no referido espectro uma linha de ressonância das lipoproteínas dos picos dos lípidos;

c) medir-se a largura completa da semialtura da mencionada linha de ressonância;

d) classificar-se a largura completa medida ou na categoria de larguras completas normais ou na categoria de larguras completas anormais em comparação com um padrão pré-determinado indicando a presença de larguras anormais a presença de cancro;

e) para as leituras da largura completa das linhas do espectro classificadas como anormais na operação c), determinar-se o nível de triglicéridos da amostra do componente do sangue;

f) classificar-se o nível de triglicéridos assim medido na categoria de níveis normais ou de níveis acima do normal;

g) para as amostras que têm níveis de triglicéridos superiores ao normal, submeter-se a amostra do componente de sangue a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear protónica para se obter um espectro de ressonância magnética nuclear;

h) escolher-se uma linha de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do citado espectro;

i) medir-se a área por baixo da referida linha de ressonân- cia; e j ) classificar-se o espectro de ressonância nuclear magnêti-

ca na categoria de espectro normal ou na categoria de espectro anormal em resultado da comparação com um padrão pré-determi-

nado, s endo um de cancro. espectro anormal indicativo da presença 2^â . Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de a mencionada operação a) incluir a supressão do sinal de água • 3^. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado

pelo facto de a mencionada operação a) compreender a obtenção de uma amostra de sangue do paciente, se separarem os glóbulos vermelhos dessa amostra e se submeter o plasma resultante da amostra de sangue a um ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear.
4^â. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de a frequência da ressonância protónica ser maior do que 60 MHz.
5- . Processo de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo facto de a frequência da ressonância protónica ser igual ou maior do que 360 MHz.
6- . Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de, no segundo espectro de ressonância magnética nuclear protónica, o quociente entre as áreas das ressonâncias de 2,0 ppm/2,8 ppm ser utilizado como indicativo de presença de cancro.
7-. Processo para diagnosticar a presença de paciente vivo, caracterizado pelo facto de as seguintes operações:

cancro num compreender

a) submeter-se uma amostra de um componente do sangue de um paciente a ser diagnosticado a um ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear protónica de maneira obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear de que foram suprimidos os sinais indesejáveis;

b) no referido espectro, escolher-se uma linha de ressonância de lipoproteínas para os picos dos lipidos;

c) medir-se a largura completa a meia-altura da mencionada linha de ressonância;

d) classificar-se a largura completa determinada ou numa categoria de larguras completas normais ou numa categoria de larguras completas anormais em comparação com um padrão prê-determinado, sendo as larguras completas consideradas como anormais indicativas da presença de cancro;

e) para as leituras da largura completa medidas classificadas como anormais na operação d), medir-se o nível de triglicéridos do componente do sangue;

f) classificar-se o nível de triglicéridos assim determinado na categoria de níveis normais ou na categoria de níveis anormais;

g) para as amostras que têm níveis de triglicéridos superiores aos valores normais, submeter-se a amostra do componente do sangue a um segundo ensaio de espectrocospia de ressonância magnética nuclear protónica de maneira a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear protónica;

h) escolher-se uma linha de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do citado espectro;

i) medir-se a intensidade da referida linha de ressonância;e

j) classificar-se o espectro de ressonância magnética nuclear numa categoria de espectros normais ou numa categoria de espectros anormais em comparação com um padrão pré-determinado para o qual um espectro anormal indica a presença de cancro.
8^â. Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo facto de a referida operação a) incluir a supressão do sinal da água.
9-. Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo facto de a mencionada operação a) compreender a obtenção duma amostra de sangue do paciente, a separação dos glóbulos vermelhos dessa amostra e o ensaio da espectroscopia de ressonância magnética nuclear do citado plasma obtido a partir da amostra de sangue.
10^â. Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo facto de o ensaio de ressonância protónica se realizar a frequências superiores a 60 MHz.

ll². Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo facto de o ensaio de ressonância protónica se realizar a uma frequência igual ou maior do que 360 MHz.
12² . Processo de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância magnética nuclear protónica em que o quociente da intensidade das ressonâncias a 2,0 ppm/2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.
13^ã. Processo para o diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo, caracterizado pelo facto de compreender as seguintes operações:

categoria de larguras de categoria de larguras de comparação com um padrão

a) submeter-se uma amostra de um componente do sangue retirada de um paciente a ser examinado a um ensaio de espectrocospia de ressonância magnética nuclear para se obter um espectro de ressonância magnética nuclear de que se suprimiram os sinais indesejáveis;

b) escolher-se uma pluralidade de linhas de ressonância de lipoproteínas de picos de lipidos do referido espectro;

c) medir-se a largura completa a meia altura de cada uma das mencionadas linhas de ressonância;

d) derivar-se de todas as larguras completas assim medidas uma largura da linha compósita;

e) classificar-se a largura da linha compósita assim linhas compósitas linhas compósitas anormais em comparação com um padrão pró-determinado de modo que as larguras de linha compósitas anormais indiquem a presença de cancro;

f) para as larguras das linhas compósitas medidas classificadas como larguras de linhas compósitas anormais, medirem-se os níveis de triglicéridos da amostra do componente do sangue;

g) classificar-se o nível de triglicéridos ou na categoria dos níveis normais ou na níveis acima dos valores normais;

h) para as amostras de componente do sangue que têm níveis de triglicéridos acima dos valores normais, submeter-se a amostra do componente de sangue que têm níveis de triglicéridos acima dos valores normais, submeter-se a amostra do componente do sangue a um segundo ensaio de espectrocospia de ressonância magnética nuclear protónica de modo a obterse um espectro de ressonância magnética nuclear;

assim medido categoria dos

i) escolher-se uma pluralidade de linhas de ressonância de lipoproteínas na correspondente região do referido espectro ;

j ) medir-se a área por baixo da linha para cada uma das mencionadas linhas de ressonância; e

k) classificar-se o segundo espectro de ressonância magnética nuclear protónica numa categoria de espectros normais ou numa categoria de espectros anormais em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual o espectro anormal indica a presença de cancro.

142

Processo de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo facto de a citada operação de derivação compreender a operação que consiste em calcular o quociente entre as duas áreas abaixo da curva a 2,0 ppm/2,8 ppm das linhas de ressonância.
15^â . Processo de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo facto de a referida pluralidade ser igual a 2.
16^â. Processo de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância magnética nuclear protónica a 2,0 ppm e 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.
17-. Processo para o diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo, caracterizado pelo facto de compreender as seguintes operações:

a) submeter-se uma amostra de um componente do sangue de um paciente a ser diagnosticado relativamente à presença de cancro a um ensaio de espectroscopia de ressonância nuclear magnética de maneira a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear de que se suprimiram os sinais indesejáveis;

b) escolher-se uma pluralidade de linhas de ressonância de lipoproteínas de picos de lípidos no mencionado espectro;

c) medir-se todas as larguras totais a meia altura de cada uma das citadas linhas de ressonância;

d) a partirn de todas as larguras completas assim medidas derivar-se uma largura das linhas compósitas;

e) classificar-se a largura da linha compósita assim derivada ou numa categoria de larguras de linhas compósitas normais ou numa categoria de larguras compósitas anormais em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual as larguras de linhas compósitas anormais indicam a presença de cancro;

f) para as larguras de linhas compósitas medidas classificadas como larguras de linhas compósitas anormais, medirem-se os níveis de triglicêridos da amostra do componente do sangue;

g) classificar-se o nível de triglicêridos assim medido ou na categoria dos níveis normais ou na categoria de níveis acima do normal;

h) para as amostras de componentes do sangue que têm níveis de triglicêridos acima do normal, submeter-se a amostra do componente do sangue a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear protónica de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

i) escolher-se uma pluralidade de linhas de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do referido espectro;

j ) medir-se a intensidade de cada uma das mencionadas linhas de ressonância; e

k) classificar-se o segundo espectro de ressonância magnética nuclear protónica ou numa categoria de normal ou numa categoria de anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual um espectro anormal indica a presença de cancro.
18- . Processo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo facto de a citada operação de derivação compreender a operação que consiste em calcular o quociente entre as duas áreas abaixo da curva 2,0 ppm/2,8 ppm das linhas de ressonância.
19- . Processo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo facto de a referida pluralidade ser igual a 2.
20^â. Processo de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância magnética

nuclear protónica de 2,0 e 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro. 21^. Processo para o diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo, caracterizado pelo facto de compreender as seguintes operações: a) submeter-se uma amostra de um paciente a ser diagnostica-

do relativamente à presença de cancro a um ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de maneira a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

b) escolher-se uma linha de ressonância de um componente diferente de água da referida amostra no mencionado espectro;

c) medir-se a largura total a meia altura da citada linha de ressonância;

d) classificar-se a largura total da linha assim medida ou numa categoria de larguras de categoria de larguras de linhas linhas normais ou numa anormais em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual as larguras totais anormais indicam a presença de cancro;

e) para as larguras totais de linhas medidas classificadas como larguras anormais, medirem-se os níveis de triglicéridos da amostra do componente do sangue;

f) classificar-se o nível de triglicéridos assim medido ou na categoria dos níveis normais ou na categoria dos níveis acima do normal;

g) para as amostras que têm níveis de triglicéridos acima do normal, submeter-se a amostra a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

h) escolher-se uma linha de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do referido espectro;

i) medir-se a área da mencionada linha de ressonância; e

j) classificar-se o espectro de ressonância magnética nuclear ou numa categoria de espectro normal ou numa categoria de espectro anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual um espectro anormal indica a presença de cancro.

22^ã . Processo de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o componente diferente de água ser um lípido. 23- . Processo de acordo com a reivindicação 21, caracterizado

pelo facto de a amostra ser plasma sanguíneo, fluído da espinha dorsal ou plasma de medula dos ossos e a referida linha de ressonância escolhida ser dos grupos alílicos e/ou bis-alílicos dos lípidos de lipoproteínas.
24^â . Processo de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância a 2,0 ppm e a 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.
25^â. Processo para o diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo, caracterizado pelo facto de compreender as seguintes operações:

a) submeter-se uma amostra de um paciente a ser diagnosticado relativamente à presença de cancro a um ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

b) escolher-se uma linha de ressonância do espectro de ressonância magnética nuclear de um componente diferente de água da citada amostra no mencionado espectro;

c) medir-se a largura total a meia altura da citada linha de ressonância;

d) classificar-se a largura total da linha assim medida ou numa categoria de larguras totais normais ou numa categoria de larguras totais anormais em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual as larguras anormais indicam a presença de cancro;

e) para as larguras totais medidas classificadas como larguras totais anormais, medirem-se os níveis de triglicêridos da amostra;

f) classificar-se o nível de triglicéridos assim medido ou na categoria dos níveis normais ou na categoria dos níveis acima do normal;

g) para as amostras que têm níveis de triglicéridos acima do normal, submeter-se a amostra a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

h) escolher-se uma linha de ressonância das lipoproteinas na correspondente região do referido espectro;

i) medir-se a intensidade da mencionada linha de ressonância

j) classificar-se o espectro de ressonância magnética nuclear ou numa categoria de espectro normal ou numa categoria de espectro anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual um espectro anormal indica a presença de cancro.
26- . Processo de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto de o componente diferente de água ser um lípido.
27- . Processo de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto de a amostra ser plasma sanguíneo, fluído de espinha dorsal ou plasma da medula dos ossos e a referida linha de ressonância escolhida ser dos grupos alílicos e/ou bis-alílicos dos lípidos de lipoproteínas.
28- . Processo de acordo com a reivindicação 25, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância a 2,0 ppm e a 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.
29^. Processo para o diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo, caracterizado pelo facto de compreender as seguintes operações:

a) submeter-se uma amostra de um paciente diagnosticado relativamente à presença de cancro a um ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de maneira a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

b) escolher-se uma pluralidade de linhas de ressonância do espectro de ressonância magnética nuclear de um componente diferente de água no mencionado espectro;

c) medir-se a largura total a meia altura de cada uma das citadas linhas;

d) a partir de todas as larguras totais assim medidas derivar-se uma largura compósita das linhas;

e) classificar-se a largura da linha compósita assim derivada ou numa categoria de larguras de linhas compósitas normais ou numa categoria de larguras de linhas compósitas anormais em comparaçao com um padrão pré-determinado de ensaio de protónica magnética acordo com o qual as larguras de linhas compósitas anormais indicam a presença de cancro;

f) para as larguras das linhas compósitas medidas classificadas como larguras de linhas compósitas anormais, medirem-se os níveis de triglicéridos da amostra;

g) classificar-se o nível de triglicéridos assim medido ou na categoria dos níveis normais ou na categoria dos níveis acima do normal;

h) para as amostras que têm níveis de triglicéridos acima do normal, submeter-se a amostra a um segundo espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância nuclear;

i) escolher-se uma linha de ressonância de lipoproteínas na correspondente região do referido espectro;

j) medir-se a área de cada uma das mencionadas linhas de ressonância; e

k) classificar-se o segundo espectro de ressonância magnética nuclear ou numa categoria de espectro normal ou categoria de espectro anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual o espectro anormal indica a presença de cancro;
30§. Processo de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância a 2,0 ppm e a 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.

31ã . Processo para o diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo, caracterizado pelo facto de compreender

as seguintes operações:

a) submeter-se uma amostra de um paciente a ser diagnosticado relativamente à presença de cancro a um ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de maneira a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

b) escolher-se uma pluralidade de linhas de ressonância do espectro de ressonância magnética nuclear de um componente diferente de água no mencionado espectro;

c) medir-se a largura total a meia altura de cada uma das citadas linhas de ressonância;

d) a partir de todas as larguras totais assim medidas derivar-se uma largura da linha compósita;

e) classificar-se a largura da linha compósita assim derivada ou numa categoria de larguras de linhas compósitas normais ou numa categoria de larguras de linhas compósitas anormais em comparaçao com um padrão pré-determinado de acordo com o qual as larguras de linhas compósitas anormais indicam a presença de cancro;

f) para as larguras de linhas compósitas medidas classificadas como larguras de linhas compósitas anormais, medirem-se os níveis de triglicéridos da amostra;

g) classificar-se o nível de triglicéridos assim medido ou na categoria dos níveis normais ou na categoria de níveis acima do normal;

h) para as amostras que têm níveis de triglicéridos acima do normal, submeter-se a amostra a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

i) escolher-se uma linha de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do referido espectro;

j) medir-se a intensidade de cada uma das mencionadas linhas de ressonância; e

k) classificar-se o segundo espectro de ressonância magnética nuclear ou numa categoria de espectro normal ou numa categoria de espectro normal ou numa categoria de espectro anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual um espectro anormal indica a presença de cancro.
32^a. Processo de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância a 2,0 ppm e a 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.
33-. Processo para o diagnóstico da presença num paciente vivo, caracterizado pelo facto de as seguintes operações:

de cancro, compreender

a) submeter-se uma amostra de plasma sanguíneo, plasma da medula dos ossos ou fluído da espinha dorsal de um paciente a um ensaio de espectroscopia de ressonância nuclear magnética de maneira a obter-se um espectro de ressonância megnética nuclear de que se suprimiu o sinal de água;

b) escolher-se as linhas de ressonância dos grupos metilo e metileno dos lípidos de lipoproteínas no mencionado espectro ;

c) medir-se a largura total a meia altura de cada uma das citadas linhas de ressonância;

d) calcular-se uma largura média a partir das larguras totais assim medidas;

e) classificar-se largura média assim calculada ou numa categoria de larguras médias normais ou numa categoria de larguras médias anormais em pré-determinado de acordo com o comparação com um padrão qual as larguras médias anormais indicam a presença de cancro;

f) para as larguras de linhas compósitas medidas classificadas como larguras de linhas compósitas anormais, medirem—se os níveis de triglicéridos da amostra do componente do sangue;

g) classificar-se o nível de triglicéridos assim medido ou na categoria dos níveis normais ou na categoria de níveis acima do normal;

h) para as amostras que têm níveis de triglicéridos acima do normal, submeter-se a amostra a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

i) escolher-se uma linha de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do referido espectro;

j) medir-se a área da mencionada linha de ressonância; e

k) classificar-se o segundo espectro de ressonância magnétic nuclear ou numa categoria de espectro normal ou numa categoria de espectro anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual um espectro anormal indica a presença de cancro.
34-. Processo de acordo com a reivindicação 33, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância a 2,0 ppm e a 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.
35^. Processo para o diagnóstico da presença de cancro num paciente vivo, caracterizado pelo facto de compreender as seguintes operações:

a) submeter-se uma amostra de plasma sanguíneo, uma amostra de plasma da medula dos ossos ou fluído da espinha dorsal a um ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de maneira a obter-se um espectro de ressonância com um padrão larguras médias magnética nuclear de que se suprimiram o sinal da água;

b) escolher-se as linhas de ressonância dos grupos metilo e metileno dos lípidos de lipoproteínas do mencionado espectro ;

c) medir-se a largura total a meia altura de cada uma das citadas linhas de ressonância;

d) a partir das larguras totais assim medidas, calcular-se uma largura média;

e) classificar-se a largura média assim calculada ou numa categoria de larguras médias normais ou numa categoria de larguras médias anormais em comparação pré-determinado de acordo com o qual as anormais indicam a presença de cancro;

f) para as larguras de linhas compósitas medidas classificadas como larguras de linhas compósitas anormais, medirem-se os níveis de triglicéridos da amostra do componente do sangue;

g) classificar-se o nível de triglicéridos assim medido ou na categoria de níveis normais ou na categoria de níveis acima do normal;

h) para as amostras que têm níveis de triglicéridos acima do normal, submeter-se a amostra a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

i) escolher-se uma linha de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do referido espectro;

j) medir-se a intensidade da mencionada linha de ressonância; e

k) classificar-se o segundo espectro de ressonância magnética nuclear ou numa categoria de espectro normal ou numa categoria de espectro anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com indica a presença de cancro.

qual um espectro anormal
36-. Processo de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância magnética nuclear a 2,0 e 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.
37^â. Processo para detectar a presença de cancro, caracterizado pelo facto de compreender:

a) estabelecer-se um valor para, pelo menos, um parâmetro do ensaio de ressonância magnética nuclear para núcleos de pelo menos um agrupamento associado com um constituinte diferente de água de um fluído corporal que contém lípidos de pacientes isentos de cancro;

b) expor-se o fluído corporal do mesmo tipo de um paciente que se pretende diagnosticar relativamente à presença de cancro a um campo magnético e energia de radiofrequência de maneira a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

c) processar-se o espectro de ressonância magnética nuclear para se obter um valor para o referido parâmetro dos núcleos do mencionado agrupamento;

d) comparar-se o valor estabelecido para o citado parâmetro na operação da alínea a) com o valor obtido em c);

e) classificar-se o valor assim estabelecido ou numa categoria de valores normais ou numa categoria de valores anormais em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual as larguras dos valores anormais indicam a presença de cancro;

f) para as larguras do valor medido classificadas como larguras de valores anormais, medirem-se os níveis de triglicêridos do fluído corporal;

g) classificar-se o nível de triglicêridos assim medido ou na categoria de níveis normais ou na categoria de níveis acima do normal;

h) para as amostras de fluídos corporais que têm níveis ti- ii- de triglicéridos acima do normal, submeter-se o fluído corporal a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

1) escolher-se uma linha de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do referido espectro;

j) medir-se a área por baixo da mencionada linha de ressonância; e

k) classificar-se o segundo espectro de ressonância magnética nuclear ou numa categoria de espectro normal ou numa categoria de espectro anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o indica a presença de cancro.

qual um espectro anormal
38^ã . Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo facto de o referido fluído corporal que contém lípidos ser sangue, soro ou plasma sanguíneo.
39^â. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo facto de se retirar uma amostra do mencionado fluído corporal do paciente em que se pretende diagnosticar a presença de cancro e se realizar as operações b) e c) in vitro.
40-. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo facto de os citados núcleos serem protões e o referido agrupamento na operação a) ser escolhido do grupo que consiste em metilo e metileno.
41^ã. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo facto de os mencionados metilo e metileno serem associados com lipoproteína.

* i

I)
42®. Processo de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo facto de o citado parâmetro de ressonância nuclear protónica ser um valor médio derivado das linhas de ressonância dos protões de metilo e metileno.
43^â. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo facto de o parâmetro na operação a) ser o valor médio das larguras totais a meia altura das ressonâncias protónicas de metilo e metileno.
44-. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo facto de o parâmetro na operação a) ser a largura total a meia altura da linha de ressonância do espectro de ressonância magnética nuclear dos núcleos dos referidos agrupamentos.
45-. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo facto de o parâmetro na operação a) ser o tempo de relaxação do spin-spin aparente T^.
46^â. Processo de acordo com a reivindicação 37, pelo facto de compreender adicionalmente a sinal de ressonância magnética nuclear da água.
47^. Processo de acordo com a reivindicação 38, pelo facto de compreender adicionalmente a sinal de ressonância magnética nuclear da água.

caracterizado supressão do caracterizado supressão do
48^â . Processo de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo facto de compreender adicionalmente a supressão total do sinal de ressonância magnética nuclear da água.
49^â. Processo de acordo com a reivindicação 37, caracterizado

- 40 pelo facto de o segundo espectro de ressonância magnética nuclear protónica a 2,0 e 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.
50². Processo para detectar a presença de cancro, caracterizado pelo facto de compreender as seguintes operações:

a) estabelecer-se um valor para pelo menos um parâmetro de ressonância magnética nuclear para os núcleos de pelo menos um agrupamento associado com um constituinte diferente de água de um fluído corporal que contém lípidos de pacientes que estão isentos de cancro;

b) expor-se o fluído corporal do mesmo tipo de um paciente em que se pretende diagnosticar a presença de um cancro a um campo magnético e à energia de radiofrequência de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

c) processar-se o espectro de ressonância magnética nuclear para se obter um valor do referido parâmetro dos núcleos do mencionado agrupamento;

d) comparar-se o valor estabelecido para o citado parâmetro na operação da alínea a) com o valor obtido na operação

c) ;

e) classificar-se o valor assim determinado ou numa categoria considerada como normal ou numa categoria considerada como anormal em comparação com um padrão pré-determinado de acordo com o qual os intervalos dos valores anormais indicam a presença de cancro;

f) para os intervalos de valores medidos classificados como valores anormais, medirem-se os níveis de triglicéridos do fluído corporal;

g) classificar-se o nível de triglicéridos assim medido ou na categoria de níveis normais ou na categoria de níveis acima do normal;

ft.

h) para as amostras de fluídos corporais que têm níveis de triglicéridos acima do normal, submeter-se o fluído corporal a um segundo ensaio de espectroscopia de ressonância magnética nuclear de modo a obter-se um espectro de ressonância magnética nuclear;

i) escolher-se 'uma linha de ressonância das lipoproteínas na correspondente região do referido espectro;

j) medir-se a intensidade da mencionada linha de ressonância; e

k) classificar-se o segundo espectro de ressonância magnética nuclear ou na categoria de espectro normal ou na categoria de espectro anormal em comparação com um padrão prê-determinado de acordo com o qual um espectro anormal indica a presença de cancro.
51^ã. Processo de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo facto de o referido fluído corporal que contêm lipidos ser sangue, soro sanguíneo ou plasma sanguíneo.
52^. Processo de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo facto de se retirar uma amostra do mencionado fluído corporal do paciente em que se pretende diagnosticar a presença de cancro e se realizar as operações b) e c) in •vitro.
53- . Processo de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo facto de os citados núcleos serem protões e o referido agrupamento na operação a) ser escolhido do grupo que consiste em metilo e metileno.
54- . Processo de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo facto de os mencionados metilo e metileno serem associados como lipoproteína.

β
55-. Processo de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo facto de o citado parâmetro de ressonância nuclear protónica ser um valor médio derivado das linhas de ressonância dos protões de metilo e de metileno.
56^â . Processo de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo facto de o parâmetro na operação a) ser o valor médio das larguras totais a meia altura das ressonâncias protónicas de metilo e de metileno.
57^â. Processo de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo facto de o parâmetro na operação a) ser a largura total a meia altura da linha de ressonância do espectro de ressonância magnética nuclear dos núcleos dos referidos agrupamentos.
58^ã. Processo de acordo com a reivindicação pelo facto de o parâmetro na operação aj relaxação do spin-spin aparente T^.

50, caracterizado ser o tempo de
59^â. Processo de acordo com a reivindicação 50, pelo facto de compreender adicionalmente a sinal de ressonância magnética da água.

602. Processo de acordo com a reivindicação 51, pelo facto de compreender adicionalmente a sinal de ressonância magnética nuclear da água.
61^â. Processo de acordo com a reivindicação 52, pelo facto de compreender adicionalmente a sinal de ressonância magnética nuclear da água.

caracterizado supressão do caracterizado supressão do caracterizado supressão do ο
62^ã. Processo de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo facto de o segundo espectro de ressonância magnética nuclear protónica a 2,0 e 2,8 ppm ser indicativo da presença de cancro.