PT702691E - Novo tiodespsipeptido isolado a partir de um actinomiceto marinho - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "NOVO TIODESPSIPÉPTIDO ISOLADO A PARTIR DE UM ACTINOMICETO MARINHO"

CAMPO DO INVENTO

Um novo despsipéptido foi isolado a partir de uma nova estirpe r marinha L-13-AMC2-092, pertencendo à família Micromonoesporaceae. E aqui descrita a sua produção por fermentação aeróbica em condições controladas da estirpe e o isolamento e purificação do PM-93135. O composto mostrou uma boa actividade contra várias bactérias gram positivas. O composto e o caldo de fermentação demonstram uma actividade significativa contra várias linhas de células cancerígenas.

ANTECEDENTES DO INVENTO

Muitas das bactérias comuns têm desenvolvido resistência a mais e mais antibióticos. De acordo com relatórios publicados, as infecções devidas a bactérias resistentes causaram a morte a 19.000 pacientes em hospitais dos U.S.A. (e contribuíram para a morte de mais 58.000), em 1992. Por exemplo, estirpes de Pneumococcus, que podem causar infecções de ouvidos, meningites, pneumonia e infecções do sangue, tomaram-se resistentes à penicilina e a quatro outros antibióticos, só nos últimos seis anos. À volta de 20% dos micróbios da TB resistem ao isoniazid, o medicamento padrão, e os micróbios da gonorreia -2- resistem à penicilina. Mais de metade das estirpes conhecidas do Staphylococcus aureus, o qual causa envenenamento do sangue, resistem a tudo com excepção da vancomicina. Declaradamente, a necessidade de um constante fornecimento de novos materiais antibióticos nunca acaba. Deste modo, um dos objectivos do presente invento é o fornecimento de um novo agente antibiótico designado arbitrariamente aqui como PM-93135.

Novos compostos anti-neoplásticos são também necessários para o tratamento contra vários carcinoma humanos. Deste modo, outro dos objectivos do presente invento é o fornecimento de um novo agente anti-tumoral, nomeadamente o composto PM-93135. Este composto é um tiòdespsipéptido com uma actividade inibitória significativa da síntese do ARN.

Ainda outro aspecto deste invento é o de providenciar composições farmacêuticas para administração a um paciente necessitando deste tratamento, utilizando o composto activo descrito aqui. Ainda um outro objectivo é dirigido para a produção do composto activo por fermentação aeróbica controlada, utilizando uma cultura biologicamente pura de um organismo capaz de produzir o composto activo num meio de cultura apropriado, e a métodos para a recuperação e concentração do caldo de cultura e de purificação do referido composto activo.

SUMÁRIO DO INVENTO

Este invento providencia um composto com a fórmula I a seguir proposta: -3-

Neste invento, o processo de obter o composto PM-93135 é também descrito, e o processo preferido compreende a cultura duma estirpe de microorganismos capaz de produzir o PM-93135 num meio nutriente aquoso com sais e fontes de carbono e azoto assimiláveis, em condições submersas e aeróbias controladas. O composto PM-93135 é recuperável e purificado do caldo da cultura. O caldo de cultura preferido é a estirpe L-13-ACM2-092 e pertence à família Micromonosporaceae sp., sendo taxonomicamente classificado como Micromonospora sp.

Como descrito acima, o composto PM-93135 mostrou ser eficaz contra várias estirpes de bactérias gram positivas e gram negativas e também mostrou ter uma boa actividade contra linhas de células tumorais murinas e humanas, incluindo a P-388, HT-29, A-549 e MEL-28. Este composto mostra uma actividade selectiva contra a síntese do ARN. -4-

BREVE DESCRIÇÃO DO INVENTO A Figura 1 é um espectro de Infravermelhos (IV) do composto PM-93135 purificado; A Figura 2 é um espectro de Ultravioletas (UV) do composto PM-93135 purificado; A Figura 3 é um espectro de RMN protónico (’H) do composto PM-93135 purificado; A Figura 4 é um espectro de RMN carbono-13 (13C) do composto PM-93135 purificado; e A Figura 5 é o Espectro de Massa do composto PM-93135 purificado. DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO O Organismo Produtor: O microorganismo utilizado para a produção do PM-93135 é preferivelmente uma estirpe de Micromonospora sp., L-13-ACM2-092, tendo sido depositado um exemplar desta cultura na “Colleccíon Espanola de Cultivos Tipo” da Universidade de Valência, Espanha sob o número de acesso de CECT-3326. Este depósito foi feito de acordo com as cláusulas do Tratado de Budapeste e todas as restrições a ele, da parte do público, serão irrevogavelmente revogadas aquando da atribuição de uma patente a esta aplicação. O organismo foi isolado de um coral marinho mole não -5- identifícado, recolhido no Oceano indico perto da costa de Moçambique. Os métodos taxonómicos descritos aqui são aqueles descritos na Tabela 1. TABELA 1 1. Morfologia das Colónias:

Meio ISP N° 2, 4, 5 e 6, E. B. Shirling & D. Gotlieb, Int. J. Syst. Bacteriol., 16:313,1966.

Meio ATCC N° 172, Catálogo ATCC.

Meio 172 e ISP com ASW a 50%.

Czapek Agar Difco.

Agar Bennet, Waksman, S.A., The Actinomycetes, Vol. II: 331,1961.

Agar de Agua a 1,5%, Luedreman , G. M., Comunicação Pessoal. 2. Características Fisiológicas:

Meio ISP N° 1, E.B. Shirling e D. Gotlieb. Ibid.

Resistência NaCl: ATCC 172 com 0, 2, 4, 7 e NaCl a 10%.

Utilização do Carbono: ISP-9, E.B. Sherling e D. Gotlieb. Ibid. 3. Análise dos ácidos gordos, Van der Auwera et al., J. Microbiol. Methods, 4:265, 1986. 4. Análise do açúcar da célula total, Guerrant e Moss, Anal. Chem., 56:633, 1984. Hasegawa et al.,/. Gen. Appl. Microbiol, 29:319, 1983. 5. Análise de Ácido Diaminopimélico, Hasegawa et al., J. Gen. Appl.

Microbiol, 29:319, 1983. __ -6- jMU-u0··"

Todas as culturas foram incubadas a 27 °C e os registos dos resultados foram feitos semanalmente, até aos 21 dias. É a seguinte a descrição do organismo:

Morfologia:

Depois de 21 dias a 28 °C foi observado um bom crescimento em ISP 2 e 172 com ASW. Vários tons de laranja foram observados nos diferentes meios estudados. Nenhum micélio aéreo foi formado. O micélio do substrato é ramificado. Os esporos são esféricos. Nenhuma outra formação foi observada excepto um pouco de superabundância da massa micelial em alguns meios e depois de pelo menos 14 dias.

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Tabela II (continuação) o m 00 00 m ι/Ί ^H <r—n ^H ,r r- * V I> ^ 7 V V V - r-- co oo SO <N co m , , r»m in OO V0 t"~ CS ^H θ' V C\" 00 1—1 CN CN so o uo^ CN CP O 00 ^H Cs n Cs O CO Γ- i (N V i' CN rH V P i ri ui o r^ oo «n o so^ oo m ^t sq_ oo <o ^t- uo r^ Τ—"N 1 cd ri oo" V V cs" ui ri o r- 00 rn o so^ cs ro oo CS C\ <N ro^ ψ-Η 1 V cn V ri V ri ri ri oo oo G\ CN o 'rt i^H r‘ ^H ^H T“^ ^H • ^ V V V V V V CN CS 00 X O ω Ω Ε Κ w o P H Ω oá N O 2 < 1 CN 2 o CQ J C H PJ 2 < pL, 2 M > Pu H MH U á CQ Ph Ω Ph 2 o 2 X O £ < 00 Xfl O) < < < < 2

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Características Fisiológicas: Não foi observada a formação de qualquer pigmento difusível, quer no ISP-1, quer em meio sólido. A gama de temperaturas para o crescimento óptimo foi de entre 25° a 35°, mas o organismo cresce bem a 45 °C. O organismo pode crescer em glucose, sacarose, ramose e D-xilose como fonte única de carbono, sendo contudo, o crescimento negativo em raflnose, inositol e a-melibiose e duvidoso em manitol, frutose e arabinose. - 10-

Composição química da célula: DAP: O ácido meso-2,6-diaminopimélico está presente no hidrolisado da célula inteira da estirpe CECT-3326. Ácidos gordos: a comparação com outras estirpes semelhantes é descrita na Tabela 2. Açucares: os padrões de açúcar da célula inteira revelaram a presença de xilose, ribose e glucose quando analisados por TLC em placas de celulose. A arabinose não foi detectada por esta técnica e seguindo o procedimento de Hasegawa, et al. (1983). Quando a análise dos açúcares da célula inteira é realizada por cromatografia de gás, são detectados vestígios de arabinose, de tal maneira que o padrão de açúcar pertencendo ao grupo D de Lechevalier, et al. (1971) (xilose + arabinose contendo actinomicetos que correspondem a membros da família de Micromonosporaceae) pode ser inferido. Outros açucares importantes detectados por cromatografia de gás são a ribose, manose, galactose, glucose, m-inositol, glucosamina e mannosamina. Não é detectada a madurose como componente celular.

Baseado nas característicos precedentes, foi determinado que a cultura pertencia ao género Micromonospora, sem qualquer semelhança com qualquer das estirpes deste género existentes nas colecções internacionais.

Embora o organismo depositado seja claramente o preferido, o presente invento não está restringido ou limitado a esta estirpe ou organismo específicos. É intenção dos presentes inventores incluir outros PM-93135 organismos produtores, estirpes ou mutantes, no âmbito do presente invento. - 11 -

Fermentação:

Micromonospora sp. CECT-3326, quando feita crescer em condições controladas num meio nutriente adequado, produz o composto PM-93135. Esta estirpe é feita crescer, de preferência, num meio nutriente aquoso, em condições aeróbias e mesofílicas, preferivelmente de entre 24 °C e 35 °C , a um pH numa gama de 6,0 a 8,0. Uma grande variedade de meios de cultura líquidos podem ser utilizados para o crescimento deste organismo. Os meios apropriados são aqueles que incluem uma fonte de carbono assimilável, tal como amido, dextrinas, melaço de açúcar, glicerol, glucose, e semelhantes, uma fonte de azoto assimilável, tal como proteínas, hidrolizado de proteínas, farinhas sem gorduras, infusão de milho, e semelhantes, e aniões e catiões inorgânicos úteis, tais como sódio, potássio magnésio, amónio, sulfato cloreto, fosfato, carbonato e semelhantes. Podem ser acrescentados também, oligoelementos. O arejamento é conseguido preferivelmente pelo fornecimento de ar ao meio de fermentação.A agitação é providenciada preferivelmente por rotor mecânico. Os tanques de fermentação convencionais foram considerados bem adaptados para levarem a cabo o crescimento deste organismo. A adição de nutrientes e o controle do pH, assim como de agentes anti-espuma, durante os diversos estágios da fermentação pode ser necessário para aumentar a produção e impedir a formação de espuma.

Os passos necessários para a produção de PM-93135 pelo organismo preferido são:

Começar com um micélio congelado ou liofílizado. Obter a massa de micélio, pela cultura das células iniciais em frascos de agitação, com um meio de cultura contendo alguns dos ingredientes descritos acima, a temperaturas acima das temperaturas mesofílicas e em condições aeróbias. Este passo pode ser repetido tantas vezes quantas as necessárias, e o material recolhido será usado como inoculo para sementeira de um ou vários tanques de fermentação contendo -12- o meio de cultura apropriado. Se desejado, estes tanques podem ser utilizados como inoculo, e este passo pode ser repetido várias vezes se necessário, dependendo do volume do caldo necessário. Algumas vezes, o meio de produção pode ser diferente do meio utilizado no inoculo.

Na Tabela 3, são descritos os meios típicos que podem ser utilizados no desenvolvimento do inoculo e produção do PM-93135:

Tabela 3

Meio do Inoculo Meio de Produção Glucose 5g Glucose 5g Amido 20 g Amido 20 g Extracto de Carne 3g Extracto de Soja 15 g Extracto de Fermento 5g Extracto de Fermento 5 g Triptona 5 g Triptona 2g CaC03 4g CaC03 4 g NaCl 4g NaCl 4 g Na2S04 1 g Na2S04 1 g KC1 0,5 g KC1 0,5 g MgCl2 2 g MgCl2 2g k2hpo4 0,5 g k2hpo4 0,5 g Água da Torneira 1000 ml Água da Torneira 1000 ml A produção de PM-93135 pode ser monitorizado pelo teste do caldo completo contra a leucemia murina P-388 ou por HPLC.

Isolamento do PM-93135: O antibiótico PM-93135 é isolado do bolo micelial através dum solvente orgânico apropriado, tal como o acetato de etilo. Os extractos de uma ou - 13-

várias extracções repetidas são combinados e evaporados à secura in vácuo. A separação e purificação do PM-93135 do extracto activo cru pode ser realizadas por combinações adequadas de técnicas conhecidas, como por exemplo, cromatografia em coluna, cromatografia de camada fina (TLC), cromatografia de camada fina preparativa, cromatografia líquida de alta pressão (HPLC), etc. O fraccionamento pode ser monitorizado pela actividade anti-tumoral, ou TLC com vizualização por luz de UV a 366 nm, ou por HPLC analítico com detecção por rede de díodos. As análises de HPLC são feitas à temperatura ambiente (Waters RCM8xlO, cartuchos 8C18 10, utilizando como fase móvel metanol / água 9:1 e uma velocidade de fluxo de 2 ml/min e registado a 250 nm. Nestas condições, o tempo de retenção do PM-93135 é de 2,25 min.

Com base nas análises detalhadas das suas várias características espectrais, os compostos puros podem ser identificados como PM-93135 (vejam-se os dados reproduzidos na figuras 1 a 5). O espectro de Infra-Vermelhos de absorpção em KBr é mostrado na Fig. 1 dos desenhos anexos. São os seguintes os máximos de absorpção (cm'1) observados: 3370, 1650, 1515, 1095. O espectro de Ultra-Violetas mostra absorções a cerca de 220, 230, 300 e 360 nm em MeOH / H20,9:1, como é mostrado na Fig. 2. O JH e 13C R.M.N. são relatados na Fig. 3 e Fig. 4, respectivamente, e mostram os máximos listados na Tabela 4. - 14- TABELA 4 C/H 13C 1 199,6 s 2 5,80 m, 1H (J = 4,3, 11,7) 60, 8 d 3 170,0 s 4 6,43 m, 1H (J = 5,6, 9,0) 56,3 s 5 168,2 s 6 3,70 m, 1H (J =2,9, 16,6) 4,56 m, 1H (J = 7,5,16,8) 40,3 t 7-NH 6,82 m, 1H (J = 3,1, 7,3) 8 169,2 s 9 4,89 m, 1H (J = 4,9, 8,8) 53,9 d 10-NH 8,80 d, 1H (J= 6,1) 11 169,2 s 12 2,85 m, 1H(J= 11,7, 14,4) 3,22 m, 1H (J = 4,3, 14,14) 32,01 13 2,13 s, 3H 15,1 q 14 3,05 s, 3H 30,7 q 15 2,85 m, 1H (J = 5,6, 14,4) 3,50 m, 1H (J = 9,2, 13,9) 41,2 t 16 3,00 s, 3H 30,5 q 17 3,50 m, 1H (J = 9,2, 13,9) 3,70 m, 1H (J = 4,9, 14,1) 30,2 t 2’ 133,6 s 3' 153,5 s 3'-0H 11,26 s, 1H 4' 7,58 s, 1H 120,8 d 4a' 132,1 s 5' 7,73 m, 1H 128,9 d 6’ 7,48 m, 1H (J = 5,8) 127,7 d 7' 7,48 m, 1H (J = 5,8) 128,7 d 8' 7,66 m, 1H (J = 4,3, 5,1) 126,6 d 8a' 141,2 s - 15- O espectro de massa é mostrado na Fig. 5. Os picos principais são os seguintes (o primeiro número é a razão entre m/z e o segundo, entre parêntesis, é a percentagem da abundância relativa): 104 (100); 246,9 (51); 415 (43); 449 (31); 546 (10); 580 (7); 611 (7); 694 (8); 1026(11); 1095 (20); 1109(16); 1157(22).

Actividade Biológica do PM-93135: A actividade antimicrobiana do composto PM-931335 foi estudada pela incubação do microorganismo testado com PM-931335 em meio Mueller-Hinton líquido, a 37 °C. A concentração inibitória mínima (MIC) foi determinada pelo aparecimento de turvação no meio de incubação depois de 24 horas de incubação com PM-931335. Estes resultados são mostrados na Tabela 5. O PM-931335 mostra actividade bactericida contra bactérias gram positivas. TABELA 5

Microorganismo MIC (g/ml)

Escherichia coli >100 Klebsiella pneumoniae >100 Pseudomonas aeruginosa >100 Staphilococcus aureus 0,05 Bacilus subtilis 0,05 Micrococcus luteus 0,03

As actividades anti-tumorais do PM-93135 foram determinadas “in vitro” em culturas celulares de leucémia de rato P-388, em carcinoma de pulmão humano A-549, carcinoma do cólon humano HT-29 e melanoma humano MEL- 28. O procedimento foi levado a cabo utilizando a metodologia descrita por Bergeron et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 121:848, 1984 e por Schroe-der et al., J. Med. Chem., 24:1078, 1981. O IC50 encontrado foi de 0,002, 0,002, 0,01 e 0,0025 g/ml, respectivamente. O PM-93135 revelou inibir a síntese de RNA, com um IC50 de 0,008 g/ml. A concentração necessária para atingir o mesmo nível de inibição para o ADN foi 50 vezes maior (0,4). Estes estudos foram levados a cabo utilizando células P-388 e a inibição foi monitorizada pela avaliação da incorporação de ( H)-timidina no ADN e ( H)-uridina no RNA. O composto do presente invento exibe uma actividade anti-tumoral contra tumores de mamíferos, tais como a leucemia murina P-388, carcinoma de pulmão humano A-549, carcinoma do cólon humano HT-29 e melanoma humano MEL-28. Também é proporcionado um método de tratamento de qualquer mamífero afectado por um tumor maligno sensível ao PM-93135, e que compreende a administração ao indivíduo afectado de uma quantidade terapeuticamente eficaz do PM-93135, ou uma sua composição farmacêutica. O presente invento também compreende preparações farmacêuticas que contenham o PM-93135 como o ingrediente activo, ou um seu sal de um ácido de adição farmaceuticamente aceitável, assim como os processos para a sua preparação. São exemplos de composições farmacêuticas quaisquer sólidos - 17- (comprimido, pílula, cápsulas grânulos, etc.) ou líquidos (soluções, suspensões, ou emulsões) com composição adequada para administração oral, tópica ou parenteral, podendo elas conter o composto puro ou em combinação com qualquer veículo ou outros compostos farmaceuticamente aceitáveis. Estas composições podem ter que ser estéreis quando administradas parenteralmente. A dosagem correcta de uma composição farmacêutica compreendendo o PM-93135 variará de acordo com a formulação específica, o modo de aplicação, e o situs específico, hospedeiro e bactéria, ou tumor que é tratado. São tomados em consideração outros factores como, idade, peso do corpo, sexo, dieta, tempo de administração, velocidade de excreção, condição do hospedeiro, combinações de fármacos, reacções de sensibilidade e gravidade da doença. A administração pode ser levada a cabo continuamente ou periodicamente, dentro dos limites da dose máxima tolerada. O presente invento será ainda mais ilustrado com as referências aos exemplos seguintes, os quais contribuem para ajudar a compreensão do invento presente, mas que não estão aqui com intenção de o limitarem. Todas as percentagens aqui registadas, anão ser que outra coisa seja especificada, exprimem-se por peso. Todas as temperaturas são expressas em graus Césio. Todas as incubações são levadas a cabo a 28 °C e os frascos são agitados num agitador orbital a 250 rpm. Todos os meios e recipientes são estéreis e todos os processos de cultura, assépticos. EXEMPLO 1

Cultura de Fornecimento: o caldo total de uma cultura pura de Micromonosora sp., da estirpe L-13-ACM2-092 (CECT-3326) é mantido gelado em glicerol a 20%. - 18-

Inóculo: uma cultura gelada de uma cultura inclinada (5% em vol.) é utilizada para sementeira de 100 ml do meio de sementeira, descrito acima num frasco em agitação, de 250 cc. O frasco é incubado durante 48 horas. 500 ml do mesmo meio, num frasco Erlenmeyer de 2 L, são semeados com 10% do inoculo\ do primeiro estádio. O frasco é incubado durante 48 horas.

Fermentação: Com 2,5 1 do inoculo do segundo estádio, são semeados 50 1 do meio de produção já descrito, contido num tanque de fermentação de 75 1. A fermentação é levada a cabo durante 96 horas, com agitação a 400 rpm e um fluxo de ar de 0,5 V/M.V. A monitorização da produção do metabolito secundário é feita por análise do caldo total contra P-388 ou por HPLC.

Isolamento: O caldo total recolhido (45 1) é filtrado para sua separação da biomassa e outros sólidos e o concentrado micelial é extraído três vezes com 7 1 de acetato de etilo de cada vez. Os extractos são combinados, dessecados com sulfato de sódio e evaporados à secura no vácuo para originar 4 g de sólido cru.

Este sólido é submetido a cromatografia em coluna de gel de sílica, utilizando uma mistura de clorofórmio / metanol como solvente eluente. A actividade anti-tumoral é detectada nas fracções 3-4 (1,3 g) e eluída com clorofórmio / metanol de 90:10 a 85:15. Uma alíquota deste material (400 mg) é ainda purificada por cromatografia em camada fina preparativa, que é feita correr com clorofórmio / metanol (95:5 - v/v) para originar 150 mg de PM-93135 puro. -19-

Referências Citadas

Os seguintes estudos foram aqui citados, e são assim aqui incorporados como referência: (1) American Type Culture Catalogue, 17th edition, 1989. Rockeville, Mary-land. U.S.A. (2) Bergeron et al., Biochem. Biophys. Res. Comm., 121: 848 (1984); (3) Guerrant G. O. e Moss C.W., Anal. Chem., 56-663 (1984); (4) Hasegawa et al., J.Gen. Appl. Microbiol, 29: 319 (1983); (5) Lechevalier et al., J. Bacteriol., 105: 313 (1971); (6) Schroeder et al., J. Med.Chem., 24: 1078 (1981); (7) Shirling B.E. e Gottlieb D., Int. J. Syst. Bacteriol, 16: 313 (1966); (8) Van der Auwera et al., J. Microbiol. Methods, 4: 265 (1986); (9) Waksman s. A., The Actinomycetes, Vol II: 331 (1961) O presente invento foi descrito em detalhe, com a inclusão dos seus modelos de realização. Contudo, deve ser tomado em conta que os especialistas na arte, depois do estudo da presente descrição, poderão fazer modificações e/ou melhoramentos deste invento os quais permanecerão ainda no âmbito deste invento, conforme é disposto nas reivindicações seguintes.

Lisboa, 30 de Agosto de 2000

JORGE CRUZ

Agente Oficial da Propriedade Industrial RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA

Claims (9)

1. REIVINDICAÇÕES 1. O composto referido aqui como PM-93135, e tendo a seguinte fórmula:

   e os seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
2. 2. O processo de obter o composto PM-93135 , que compreende a cultura duma estirpe de microorganismos capaz de produzir o PM-93135 num meio nutriente aquoso com fontes de carbono e azoto assimiláveis, em condições submersas e aeróbias controladas.
3. 3. O processo da Reivindicação 2, que compreende ainda o isolamento e purificação do composto PM-93135 do caldo de cultura.
4. 4. O processo da Reivindicação 2, em que o microorganismo produtor do PM-93135 é a estirpe de cultura L-13-ACM2-092, substancialmente pura e existente na “Colleccíon Espanola de Cultivos Tipo” da Universidade de Valência, Espanha sob o número de acesso de CECT-3326.
5. 5. A estirpe de cultura L-13-ACM2-092, substancialmente pura como isolada do coral marinho mole, que pertence à família Micromonosporaceae, e foi taxonomicamente classificada como Micromonospora sp.
6. 6. Uma composição farmacêutica antibiótica, comprendendo o composto PM-93135, numa quantidade eficaz contra uma ou mais estirpes gram positivas, seleccionadas de um grupo consistindo de Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Micrococcus luteus.
7. 7. Um meio de tratamento de infecções bacterianas gram positivas, em mamíferos incluindo humanos, compreendendo a administração a pacientes necessitando de tal tratamento, de uma quantidade eficaz contra bactérias gram positivas, do composto PM-93135, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, num veículo opcional, diluente ou excipiente.
8. 8. Uma composição farmacêutica anti-tumoral, compreendendo o composto PM-93135, numa quantidade eficaz contra um ou mais linhas de células tumorais humanas e/ou murinas, seleccionadas de um grupo consistindo de P-388, HT-29, A-549 e MEL-28.
9. 9. A utilização do composto PM-93135, na preparação de um medicamento para utilização num método de inibição da síntese do ARN in vitro e/ou in vivo, compreendendo fazer contactar células vivas que estão a proceder à síntese -3- doARN, com uma quantidade efectivamente inibitória do composto PM-93135. Lisboa, 30 de Agosto de 2000 JORGE CRUZ Agente Oficial da Propriedade Industriai RUA VICTOR CORDON, 14 1200 LISBOA